馮資惠 - 黃慶璨研究室

HFFF 細胞中降低 dystonin 的表現,並觀察其分布狀況
作者在 HFFF2 細胞中透過 shRNA 靜默技術抑制 dystonin 的產生,並以 RT-PCR 偵
測 dystonin 的 mRNA 含量,以免疫螢光法觀察 dystonin 的分布。結果可發現 dystonin
多沿著微管分布,且位置與微管正端的蛋白質 EB3 吻合,證實 dystonin 確實為分布於微
管的正端。另一方面,作者也證實,在 HSV-1 感染 16 小時的細胞中,微管的分布較不
具有組織性。
Dystonin 參與 HSV-1 的病毒顆粒釋出
為了確認 dystonin 是否會參與病毒顆粒釋出,作者對比抑制 dystonin 與否的組別,
在不同時間點(6,12,24,48 小時),收取上清偵測病毒數量,繪成病毒顆粒釋出的趨
勢圖,結果可發現,在 24 小時之內,dystonin 受到抑制的組別其病毒顆粒的釋出也顯著
的低於不受到抑制的組別。且另一方面,作者在同樣條件下,外送一類微管抑制藥物,
Nocodazole,結果發現,病毒顆粒的釋出也有下降,且病毒顆粒生成趨勢與 dystonin 受
到抑制時的趨勢相似。綜合以上結果,dystonin 會參與 HSV-1 的病毒釋出,且可能與微
管有關。
Dystonin 透過 UL37 而能與病毒的外鞘蛋白共同分布
為了探討 dystonin 是如何參與 HSV-1 egress 時的運輸,作者首先將探討 dystonin 與病毒
外鞘蛋白質之間的關聯性。作者在外送 HSV-1 的外鞘蛋白質 VP26 的 HFFF2 細胞中,
對比在 UL37 表現與否的細胞中,觀察內生的 dystonin 的分布。結果可見,僅有在表現
UL37 的細胞中,dystonin 才會與病毒的外鞘蛋白質共同分布,且時間極為短暫。表示
dystonin 需要藉由 UL37 才能辨識病毒外鞘蛋白質的位置,並與之共同分布,然而,這
樣的結合可能是過渡性瞬時的。
Dystonin 在病毒 egress 時扮演著關鍵的角色
藉由前述發現,作者認為 dystonin 可能是藉由參與外鞘蛋白質的運輸,協助病毒顆
粒的 egress。為了測試該假設,作者利用可表現病毒外鞘的的細胞,偵測 dystonin 受到
抑制時,其外鞘的運輸是否受到影響。結果可發現,在 dystonin 受到抑制的細胞中,外
鞘參與 anterograde 運輸的比例從原先的 50%下降至 0%,且外鞘最長移動距離由原先的
5.6μm 下降為 0.54μm,速度則由 0.95μm/s 降為 0.19μm/s,且在外加微管抑制藥物,
nocodazole 時,也有相似的結果,此外,在不表現鞘間蛋白質 UL37 時,也觀察到如
dystonin 被抑制時的結果。
由本處結果可知,dystonin 在病毒 egress 時,在外鞘的運輸上,扮演著主要的角色。
Dystonin 並非透過協助微管穩定而參與至病毒外鞘的 egress
由於 HSV-1 已被報導會在感染末期引發微管系統的重組,而在正常情形下,dystonin
則具有將微管帶往與肌動蛋白組成的細胞骨架結合,穩定微管的結構的功能。作者擔心
是否在實驗過程中,在 HSV-1 感染的條件下,又抑制了 dystonin 的合成,而令細胞骨架
不穩定,因此造成先前實驗所見,在抑制 dystonin 時病毒運輸受到抑制的現象。為排除
此因素,作者在正常細胞中,對比外加微管干擾藥物與 dystonin 抑制條件下,觀察微管
以及 F-actin 的分布。結果發現,對比外加微管干擾藥物,nocodazole,會令微管解構的
現象,dystonin 的抑制並不會影響微管的結構組成,僅會於核內造成微管較為密集的分