Direktor: Prof. Dr. med. habil. H. von Schwanewede

5.4 „Nested“- PCR
Das Prinzip der hier angewandten „nested“-PCR (nPCR) beruht darauf, zunächst
eine PCR mit entsprechenden Primern (pAZ102-H und pAZ102-E) durchzuführen
und die Amplifikationsprodukte dieser ersten PCR als Grundlage für eine zweite PCR
mit anderen Primern zu verwenden. Das zweite Primerpaar lag zwischen dem
ersten, so dass falsche Amplifikationsprodukte der ersten PCR ausselektiert wurden.
Bei der in dieser Arbeit durchgeführten nPCR wurde als zweites Primerpaar P1 und
P2 verwendet. Mit der nPCR lassen sich sehr geringe Mengen der gesuchten DNA
nachweisen (Totet et al., 2003). Die Methode der nPCR führt zur Erhöhung der
Sensitivität und der Spezifität im Vergleich zur einfachen PCR.
Die Amplifikationsprodukte der nPCR wurden wiederum durch eine
Gelelektrophorese aufgetrennt, unter der UV-Bank sichtbar gemacht und fotografisch
dokumentiert.
Abb. 5. Schematische Darstellung: Prinzip der nPCR (nach Riebold 2007)
28