Antibiogramm - member

3H / BMb-Labor (Antibiotika) 3/5
30.08.08 © C.N.
Neben Antibiotika, die den Zellwandaufbau stören, gibt es Substanzen, die auf
verschiedene andere Stoffwechselleistungen der Bakterien wirken. So wird z.B. mit
Chloramphenicol die bakterielle Proteinsynthese gehemmt. Aufgrund der
unterschiedlichen Beschaffenheit der Bakterienribosomen (70S) im Gegensatz zu jener
der 80S-Ribosomen in Eukaryonten wird daher der eukaryotische Zellstoffwechsel durch
Chloramphenicol kaum beeinträchtigt.
2. mikrobiologische Untersuchungen:
2.1. Probennahme und Aufbewahrung:
Probenzubereitungen (z.B. von handelsüblichen Antibiotika) können in Tablettenform auch
über das Ablaufdatum hinaus für den Hemmhoftest verwendet werden, wenn sie
lichtgeschützt, trocken und kühl gelagert werden. Antibiotikasuspensionen sollten nicht
länger als einen Monat gelagert werden.
Sporensuspensionen (z.B. von Penicillium chrysogenum) sollten stets frisch zubereitet,
und auf den Platten in nur einem kleinen, klar begrenzten Bereich aufgebracht werden
(z.B. 20µL Suspension in markierten Bereich auftragen).
2.2. Materialien:
Übernachtkultur: Escherichia coli: JM 101 (in Nährbouillon)
Grundschicht: z.B. Plate Count Agar (1,5-2% Agar Agar)
Deckschicht: Nährbouillon-Agar (0,7%ig) + 200µL E.coli Vorkultur
Antibiotikum: Penicillin-G (Standardreihe Konzentrationen siehe Antibiogramm, 2.6.)
Testantibiotika: Chloramphenicol, Bacitracin, Gentamicin (vorgefertigte Testscheibchen)
Testscheibchen (Von Sensi-Disc)
Steriles Deionat, 30 Eprouvetten + Kapsenbergverschlüsse + Eprouvettengestell,
10 Eppendorfgefäße (steril), 10 Petrischalen, 2 Erlenmeyerkolben 500mL,
1 Erlenmeyerkolben 250mL, Abfüllbürette, 1 Kolbenhubpipette 20µL (verstellbar),
1 Kolbenhubpipette 1000µL (verstellbar), Tarawaage, Analysenwaage, Mirkowellenherd,
Brenner, Autoklav, Laminar Flow, Brutschrank: 37°C, Wasserbad, Pinzette, Spatel,
Impföse, Impfnadel, Geodreieck
2.3. Vorkultur (o/n-Kultur):
Für die Anzucht des Teststammes (z.B. E.coli JM101 oder E.coli HB101) wird von einer
Reinkultur in 5mL sterile Nährbouillon überimpft und über Nacht bei 37°C im
Schüttelbrutschrank bebrütet.
2.4. Platten mit Grundschicht (1,5%ig an Agar-Agar):
Zur Herstellung der Platten mit der Grundschicht werden für 200mL Nährboden (inklusive
Reserve ca.10 Platten) in einem 300mL Erlenmeyerkolben 1,6g Nährbouillon und 3g Agar-
Agar (1,5%) eingewogen und auf 200mL aufgefüllt. Es wird bei 121°C für 15min
autoklaviert und nach dem Abkühlen auf ca. 80°C im LF direkt aus dem Kolben in die
Petrischalen etwa 20mL Nährboden ausgegossen. Nach dem Erstarren lässt man das
Kondenswasser im Laminar-Flow (siehe Steriltechnik, 2.1.) abtrocknen und legt die Platten
vor dem Auftragen der Deckschicht (top-Agar) für ca. 15 min verkehrt in den Brutschrank,
damit die Deckschicht beim Ausgießen auf einen zu kalten Grundschichtagar nicht zu
schnell fest wird. Es ist auch möglich die Grundschicht früher zu gießen, allerdings muss
darauf geachtet werden, dass vor dem Aufbringen der Deckschicht das Kondenswasser
auch nach Lagerung im Kühlschrank getrocknet wird.