Photosynthese - pdf - Helmholtz Zentrum München
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<strong>Photosynthese</strong><br />
Versuch 3 – Blattfarbstoffe<br />
D, Identifikation durch Bestimmung der einzelnen Absorptionsspektren<br />
1. Alle klar unterscheidbaren Fraktionen einzeln mit einem Skalpell<br />
vollständig von der DC-Platte kratzen und in je ein beschriftetes<br />
Eppendorfgefäß überführen. Sauber arbeiten!´<br />
2. Mit je 200 µl Aceton versetzen, gründlich mischen und kurz<br />
zentrifugieren.<br />
Blattfarbstoffe lösen sich gut, auch<br />
wenn die Lösung nicht sichtbar<br />
gefärbt ist!<br />
3. „Basislinie“ mit einer Acetongefüllten Küvette messen. Aceton greift die Küvette nicht an,<br />
verdunstet aber recht schnell.<br />
4. Bestimmen Sie die Spektren aller Einzelfarbstoffe. Entnehmen<br />
Sie dazu immer 150µl vom Überstand der zentrifugierten<br />
Farbstofflösung.<br />
5. Bestücken Sie die Halterungen 1 bis 5 und führen Sie die<br />
Messungen durch: „Messen“ klicken und Namen für alle Proben<br />
vergeben. Vorgang mit restlichen Proben wiederholen.<br />
5. Ggf weitere Spektren laden. Maxima bestimmen und ausdrucken.<br />
Auswertung:<br />
1. Messen Sie die Fliessmittelfront aus!<br />
2. Berechnen Sie die R f -Werte nach folgender Formel:<br />
R f<br />
Wegstrecke _ Farbstoff<br />
=<br />
Wegstrecke _ Fließmittelfront<br />
R etensi onsf a ktor R f - Wert:<br />
Der R f -Wert gibt das Verhältnis der Subst anzlaufstrec ke zur Laufstrec ke des Fliess mittels an. Wenn ei n St off nur halb so sc hnell läuft wi e das<br />
Fliessmittel hat er ei nen Rf von 0,5.<br />
3. Skizzieren Sie möglichst schnell das Ergebnis der Dünnschichtchromatographie und benennen Sie die<br />
einzelnen Blattfarbstoffe!<br />
4. Interpretieren Sie das Gesamt-Absorptionsspektrum hinsichtlich aufgenommenem und durchgelassenem<br />
Licht, sowie der Blattfarbe grün!<br />
5. Vergleichen Sie das Gesamt-Absorptionsspektrum mit den Absorptionsspektren der einzelnen Blattfarbstoffe!<br />
6. Identifizieren Sie die einzelnen Blattfarbstoffe anhand der Lage ihrer Absorptionsmaxima! (Die genaue Lage<br />
der Maxima ist vom Lösungsmi tel abhängig!) Benutzen sie dazu die folgende T abelle<br />
Blattfarbstoff Farbe R f -Wert auf<br />
Kieselgelplatten<br />
Absorptionsmaxima λ in<br />
nm<br />
Carotinoide:<br />
α-Carotin goldgelb 0,953 446, 476<br />
β-Carotin goldgelb 0,9375 454, 480<br />
Pheophytin olivgrün 0,325 408, 664<br />
Chlorophyll a blaugrün 0,25 432, 664<br />
Chlorophyll b dunkelgrün 0,2125 464, 648<br />
Lutein gelb 0,175 447, 476<br />
Violaxanthin (Xanthophyll) gelb 0,1375 442, 472, (416)<br />
Neoxanthin (Xanthophyll) gelb 0,0875 412, 439, 467<br />
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