Photosynthese - pdf - Helmholtz Zentrum München
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<strong>Photosynthese</strong><br />
Versuch 3 – Blattfarbstoffe<br />
Isolierung und Identifikation der Blattfarbstoffe<br />
In diesem Versuch werden die Blattfarbstoffe aus grünen Blättern extrahiert und anschließend chromatographisch<br />
getrennt. Sowohl von den einzelnen Blattfarbstoffen als auch von allen gemeinsam werden Absorptionsspektren<br />
aufgenommen.<br />
Zusätzlich kann die Frage untersucht werden, ob die im Sommer roten Blätter mancher Pflanzen oder Blütenblätter<br />
<strong>Photosynthese</strong> betreiben können. Jede Gruppe sollte mindestens zwei verschiedene Blattsorten untersuchen!<br />
Beim gesamten Versuch ist zu beachten, dass die Blattfarbstoffe ex vivo lichtempfindlich sind.<br />
Vorgehen:<br />
A, Extraktion der Blattfarbstoffe<br />
B, Bestimm ung des Gesamtab sorptionsspektrum s<br />
C, Dünnschichtchromatographische Trennung<br />
D, Identifikation durch Bestimm ung der einzelnen Ab sorptionsspektren<br />
Da die einzelne Arbeitsschritte längere Zeit in Anspruch nehmen, wird diese Reihung nicht strikt eingehalten.<br />
Geräte:<br />
Chromatographiekammer, Messz ylinder 50 ml, Waage, 2 Scheren, 2 x kleiner Mörser und Pistill, Ständer für<br />
Eppendorfgefäße, Mi kroliterpipett en, Glas pasteurpipett e, Eppendorfz entrifuge, Geodreiec k, 3B-Bleistift , V ortexer,<br />
Phot omet er mit Comput er, 2 S kal pelle, Abdunklungs karton für Chromatographi ekammer<br />
Verbrauchsmaterial:Petrischal en, Eppendorfgefäße, Pipettenspitzen, 0,5µl-Glaskapillaren<br />
Chemi kalien:<br />
Fließmittel mittel (P etrolbenzin(140): 2-Propanol:Wasser=100:10: 0,25), S eesand, Calciumcarbonat, Acet on,<br />
Petrolbenzin( 140), 10%NaCl-Lösung<br />
Versuchsablauf<br />
Bemerkungen<br />
Vorb ereitung für C)<br />
1. Bereiten Sie die Chromatographiekammer vor, indem Sie 15 ml<br />
Fließmittel in eine (!) Seite der Chromatographiekammer füllen<br />
und diese verschließen.<br />
Der Luftraum soll mit<br />
Lösungsmitteldämpfen gesättigt<br />
sein.<br />
2. Schneiden Sie eine Kieselgelplatte (im Folgenden: DC-Platte)<br />
von 13x10 cm zurecht. Dabei die Kieselgelschicht nicht<br />
beschädigen.<br />
3. Ziehen Sie am unteren Rand der DC-Platte in 1,5 cm Entfernung<br />
vorsichtig einen Bleistiftstrich: die „Startlinie“. Kieselgelplatte nicht<br />
beschädigen!<br />
A, Extraktion der Blattfarbstoffe<br />
1. 3 g grüne Blätter abwiegen und mit der Schere in feine Streifen<br />
schneiden.<br />
2. Blattstreifen mit einer Spatelspitze Seesand und einer kleinen<br />
Prise Calciumcarbonat in eine Reibschale geben und 4 ml Aceton<br />
zufügen. Mikroliterpipette vor der ersten Benutzung von einem<br />
Kursbetreuer erklären lassen!<br />
Für jedes Gruppenmitglied einzeln!<br />
Der Seesand unterstützt das<br />
Aufbrechen der Zellwände.<br />
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