ÜBUNGSDURCHFÜHRUNG

LU – 164.254 Instrumentelles und Bioanalytischen Labor Stand 26.02.2013
Passivsammler- und Filterprobe
Details zur Probenahme mit Passivsammlern oder Filtern, sowie zur Auswertung entnehmen
sie bitte den jeweiligen Files (sind extra hochgeladen). Das genaue Prinzip der Probenahme
mit Passivsammler und Filtern ist nicht Prüfungsstoff, das Prinzip der Auswertung allerdings
schon (Nachbesprechung). Hier gehen wir nur auf die Arbeitsschritte ein, die während des
Praktikumstages erledigt werden müssen. Zur Auswertung ist es erforderlich das Datenblatt
zu berücksichtigen, das ihnen mit der Probe ausgegeben wird.
Probenvorbereitung Passivsammler
Die Sammler werden geöffnet und auf Mängel überprüft (z.B. fehlende oder beschädigte
Membran, starke Verschmutzungen, ......). Fixierring, Membran und Distanzring werden mit
einer gereinigten (dest. Wasser) Pinzette vorsichtig entfernt (Gitter nicht berühren!). Die
Gitter werden direkt in dem Sammler eluiert. Dafür werden 5 ml Wasser (dest. Wasser) und
100µl einer 1% Wasserstoffperoxidlösung (um Sulfit zu Sulfat zu oxidieren) zugegeben.
Blindwerte werden im Rahmen dieser Übung nicht analysiert. Sie können diese
vernachlässigen. Die Sammler werden wieder verschlossen und einige Male kurz
geschwenkt. Nach 20 Minuten (oder später) kann das Eluat mittels Spritze in die IC injiziert
werden.
Probenvorbereitung Filter
Die ausgegeben Filterstanze wird mit 5 ml dest.-Wasser in der Kunststoffeprouvette eluiert.
Nach der Wasserzugabe wird die Eprouvette wieder verschlossen und für 30 min in das
Ultraschallbad (gemeinsame Verwendung des Gerätes mit der Übung Elektrophorese)
gestellt, um eine vollständige Elution zu gewährleisten. Füllen Sie ein schlankes Becherglas
mit Wasser, geben Sie die Eprouvette hinein und stellen das Becherglas ins Ultraschallbad.
Die Eprouvette darf nicht im Wasser ’schwimmen‘ – der Verschluß muß trocken bleiben,
sonst besteht die Gefahr einer Verunreinigung. Da die Quarzfaserfilter im Ultraschallbad
teilweise zerfallen, ist es notwendig die Lösung zu zentrifugieren. Dazu ist ein Teil des Eluats
zu gleichen Teilen auf zwei 1,5 mL Reaktionsgefäße (Spitzröhrchen) aufzuteilen und diese
dann für ca. 10 min mit der Tischzentrifuge (gemeinsame Verwendung mit der Übung
Elektrophorese) zu zentrifugieren. Auf eine gleichmäßige Beladung der Zentrifuge ist zu
achten. Anschließend wird die partikelfreie Lösung mit einer Mikroliterpipette abgesaugt, in
ein kleines Becherglas überführt und von dort mittels Spritze in die IC injiziert. Sollte die
Lösung noch trüb erscheinen, kann unter Umständen ein Spritzenvorsatzfilter verwendet
werden – in diesem Fall besprechen sie sich bitte mit dem Saaldienstassistenten.
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