Adhäsions- und Spreitungsverhalten der Plasmatocyten ... - Sursee

Adhäsions- und Spreitungsverhalten der Plasmatocyten von Manduca sexta
2.2.2 Mikroskope
Olympus BX-60 mit Digitalkamera Altra 20
Leitz Dialux Inversmikroskop
2.2.3 Analysesoftware
Cell A , Soft Imaging System, 2006 von der Firma Olympus Europa Holding GmbH
2.3 Versuchsanordnung
In den Versuchsansätzen wurden die Blutausstriche auf Glasobjektträger der bereits genannten
Entwicklungsstadien wie folgt angefertigt:
Die Tiere wurden gereinigt, gewogen und dann auf Eis gelegt, um sie etwas zu sedieren. In
dieser Zeit wurden die Objektträger vorbereitet: Dazu wurden je zweimal ein Tropfen des
Grace Insekten Medium, das mit wenigen PTU-Kristallen versetzt wurde, auf die Objektträger
aufgetragen. PTU verhindert das Melanisieren der Hämolymphe. Nun wurde den sedierten
Tieren die Spitze des Hornes abgeschnitten und je ein Tropfen des austretenden Blutes
zum Medium hinzu gefügt. Die Objektträger befanden sich ab diesem Moment in einer feuchten
Kammer, um das Austrocknen der Präparate zu verhindern.
Nach der Ruhezeit von 60 min, in der sich die Zellen absetzten konnten, wurde die Flüssigkeit
vorsichtig abgenommen und das Präparat für 5 min mit neuem Medium und Fixans versehen,
um die Zellen zu fixieren. Nach den 5 min wurde das Präparat zuerst mit TBS und anschliessend
mit entmineralisiertem Wasser (A. entmin.) gewaschen und gefärbt.
Die Färbung der Zellen erfolgte wie folgt: Für 5 min. wurde jeweils ein Tropfen Kristallviolett-Lösung
aufgetragen und nach der Einwirkzeit mehrmals sanft mit A. entmin. gewaschen,
bis die Zellen gut zu sehen waren. Dies wurde mit dem Inversmikroskop geprüft. Zum
Schluss wurden die Präparate mit einem kleinen Tropfen Aquatex® versetzt und je ein Deckglas
über die Zellen gelegt. Die Präparate wurden über Nacht getrocknet.
2.4 Messtechnisches Verfahren
Die Zellen wurden mit dem Mikroskop Olympus BX-60 studiert und repräsentative Stellen
digitalisiert. Es wurden sowohl Übersichtsbilder mit 10-facher Objektiv-Vergrösserung, als
auch Detailbilder mit 20-facher Vergrösserung angefertigt. Dabei wurde darauf geachtet, dass
eine gleichmässige Verteilung der Hämocyten vorlag.
Die messtechnische Auswertung erfolgte mit dem in 2.2.3 erwähnten Programm und wurde
nur auf die Detailbilder angewendet. Dabei wurden zehn Zellen pro Bild ausgewählt und in
Länge und Breite vermessen. Nachträgliche Veränderungen an den Bildern wurden lediglich
in Helligkeit oder Kontrast und jeweils über das Gesamtbild vorgenommen.
Steinhoff Selma Seite 5