Enterisches virenpanel Echtzeit-PCR Kit - Diagenode Diagnostics

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Page | 3 Die Polymerase Kettenreaktion (PCR), auch quantitative Polymerase Kettenreaktion (qPCR) genannt, ist eine Nukleinsäureamplifikationstechnik, welche verwendet wird, um bestimmte DNA-Sequenzierungen aufzufinden und zu quantifizieren. Diese Quantifizierung kann in absoluter oder relativer Anzahl von Kopien gemessen werden. Diese Echtzeit-PCR-Technologie ermöglicht eine schnelle, genaue und quantitative Messung der Gene, welche von ansteckenden Krankheiten, Krebs oder genetischen Anormalitäten betroffen sind. Diese beeindruckende Technologie wird in Kits der Firma Diagenode für eine genaue Erkennung von Krankheitserregern genutzt. Eine der markanten Eigenschaften der qPCR Technologie ist, dass die amplifizierte DNA während der Vermehrung in der Echtzeit-Reaktion für jeden PCR Zyklus quantifiziert wird, was wiederum weitaus genauere Messungen als mit herkömmlichen Endpunkt-PCR erlaubt. Die Quantifizierung von Signalen, die von fluoriszierenden Farbstoffen abgegeben werden, welche mit der je Zyklus entstehenden Doppelstrang-DANN interkalieren, ermöglichen diese Echtzeitmessungen. Alternativ kann man doppelt mit fluoriszierenden Farbstoffen (z.B. TaqMan ® Sonde) markierte DNA (Oligonukleotide) als Sonden verwenden, welche sich dann mit der komplementären DNA kreuzen, um die Echtzeitmessung während der qPCR zu ermöglichen. Die dann folgenden fluoriszierenden Signale können mit einem Instrument, wie etwa einem für die qPCR programmierten Thermalzykler, genau beobachtet und gemessen werden. Figure 1: Technology using dual-labeled hydrolysis probes Figure 2: Specific hybridization of primers and probes to the target gene. Figure 3: Elongation and release of reporter dye by Taq polymerase. Diagenode sa / CHU - Tour GIGA - B34 – 3.Stock // Avenue de l’Hôpital, 1 // 4000 Liège (Sart Tilman) // Belgien // Telefon: (+32) 4 364 20 50 // E -Mail: info@diagenodediagnostics.com
DIAGENODE Enterisches Virenpanel Echtzeit-PCR GEBRAUCHSANWEISUNG 2.1 Verwendungszweck Das Diagenode Enterisches Virenpanel Echtzeit-PCR Kit wie es im BD MAX System implementiert ist, ist ein automatisiertes in-vitro Diagnostikprodukt für die qualitative Erkennung der Norovirus (Genogruppen I und II) und Rotavirus Spezies in Stuhlproben von Patienten mit Anzeichen und Symptomen von Gastroenteritis. Die Erkennung von Noroviren- und Rotaviren-Nukleinsäure von symptomatischen Patienten hilft bei der Diagnose von vermuteten Margen-Darm-Infektionen. Dieser Test ist nicht zur Unterscheidung von Genogruppen von Noroviren bestimmt. 2.2 Informationen zum Krankheitserreger Rotaviren sind die häufigste Ursache für schwere Durchfallerkrankungen bei Neugeborenen und jungen Kindern (1), und zählt zu jenen Viren, die oft als „Magengrippe” bezeichnete Infektionen, die allerdings nichts mit der Influenza-Grippe zu tun haben, auslösen können. Es ist eine Gattung von doppelsträngigem RNA-Virus und zählt zur Familie der Reoviridae. Mit einem Alter von 5 Jahren war weltweit bereits fast jedes Kind zumindest einmal mit einem Rotavirus infiziert. (2). Allerdings entwickelt sich mit jeder Infektion eine Immunität wodurch folgende Infektionen weniger stark ausfallen (3), und Erwachsene kaum mehr betroffen sind (4). Es gibt 5 Spezies dieses Virus welche mit A,B,C,D und E bezeichnet werden. Rotavirus A, welcher am häufigsten auftritt, verursacht mehr als 90% aller Infektionen an Menschen. Norovirus ist ein RNA Virus welcher in etwa 90% aller epidemischen nicht-bakteriellen Ausbrüche von Gastroenteritis weltweit verursacht (5), und außerdem für vermutlich 50% aller lebensmittelbedingten Ausbrüche von Gastroenteritis in den USA verantwortlich ist. (6). Norovirus I und II sind die beiden wichtigsten Genogruppen beim Menschen und betreffen Leute aller Altersschichten. Die Viren werden über mit Fäkalien verseuchtes Wasser oder Nahrung, von Mensch zu Mensch oder durch Aerosolbildung des Virus und daraus folgende Kontamination von Gebieten, übertragen. 2.3 Inhalt des Kits Das Kit wird mit dem BD MAX TM System verwendet. Diagenode Enterisches Virenpanel Echtzeit-PCR Kit für 96 PCR Reaktionen (12,5 µL PCR Volumen), eine Box : I. Enteric Viral Panel and internal control RNA double-dye probe & primers (4 Röhrchen): Enterisches Virenpanel mit doppelgefärbten Sonden & Primern mit Noro I (FAM, 520 nm), Noro II (YD, 549 nm), Rota (TR, 603 nm), und RNA Extraktions- und Inhibitionskontrolle mit doppelt gefärbte Sonden & Primer (Cy5, 662 nm): 65 µL je rotem Röhrchen. II. Enteric Viral Panel positive control (positivkontrolle): 120 µL, grünes Röhrchen. III. Enteric Viral Panel negative control (H2O PCR grade)(Negativkontrolle): 120 µL, himmelblaues Röhrchen. IV. H2O (PCR grade): 500 µL, himmelblaues Röhrchen. V. Optima PLUS Master Mix: 720 µL, weißes Röhrchen VI. RNA virus culture inactivated (interne Kontrolle): 1000 µL, gelbes Röhrchen
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