Spezies-spezifische und Zelltyp-spezifische Regulation von Toll-like ...

Ziele2. ZieleEs gibt Hinweise aus der Literatur, dass die Empfindlichkeit einer TLR-abhängigenImmunantwort mit dem Expressionsspiegel des entsprechenden Rezeptors (TLR)korreliert. TLR Gene werden in Maus und Mensch z.T. unterschiedlich exprimiertund eine Spezies-spezifische Regulation dieser Rezeptoren könnteunterschiedliche Empfindlichkeiten gegenüber TLR-Agonisten (z.B. gegenüberLPS) erklären.Ziel dieser Arbeit war es, Mechanismen der Transkription von TLR Genen(hauptsächlich TLR4) auf der Ebene der Genpromotoren zu analysieren undmögliche Unterschiede zwischen Mensch und Maus zu charakterisieren, die fürdie angeborene Immunantwort in beiden Spezies wichtig sein könnten. Aufbauendauf bereits publizierten Arbeiten zum humanen TLR4 sollten die Genpromotoren inMensch und Maus durch in vitro und in vivo Studien detailliert charakterisiertwerden. Es sollten Transkriptionsstartpunkte und Promotoren definiert(RNA-Ligation Mediated RACE-PCR), für die Transkription wichtige cis-Elementeidentifiziert (in vivo DMS Footprinting, Reportergenassays) und die bindendenTranskriptionsfaktoren charakterisiert werden (EMSA, ChIP Analysen).Der Vergleich der TLR Expression in myeloischen und nicht-myeloischen Zellensollte zusätzlich Aufschluss über das Ausmaß Zelltyp-abhängiger TLR4Expression geben. Die Promotoranalysen sollten durch Experimente mitIcsbp-defizienten Makrophagen ergänzt werden, um die Notwendigkeit diesesTranskriptionsfaktors für die Transkription von TLR Genen in der Maus zuuntersuchen.Eine Dysregulation der TLR4 Expression kann bei einer Infektion verheerendeAuswirkungen auf den gesamten Organismus haben. Deswegen ist es wichtig dieRegulationsmechanismen dieses wichtigen Rezeptors zu kennen.16