Theorie zum Histidase- Versuch

Histidase Enzymkinetik
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Die Formel für die Berechnung der IU basiert auf dem Lambert- Beer- Gesetz:
I
log
I
* c
d
dt
0
=
Ε = ε
Ε = ε
mit c
=
dn
mit
dt
Ε
* l
*
n
V
d
dt
→
c * 1
d
dt
= IU →
Ε = ε *
d
dt
dn
Vdt
Ε = ε *
1*
* 1,
IU
V
wenn
V zeitlich kons
tan t
Weil die Änderung von E nicht nach unendlich kleinen Zeitabschnitten bestimmt wird, kann d
durch ∆ ersetzt werden. Wird außerdem nicht die gesamte Enzymlösung, sondern nur ein
kleiner Teil und der noch in Verdünnung für die Messung verwendet wurde, muß ein
Verdünnungsfaktor berücksichtigt werden.
Aus dem Lambert- Beer- Gesetz ergibt sich dann folgende Formel für die Berechnung der
enzymatischen Einheiten ( International Units):
IU
∆Ε*
Vk
* V
∆t
* ε * l * v
= Die Einheit der IU ist [ µmol/ min].
In diesen Formeln bedeuten die Variablen:
I0 = Lichtintensität bestimmter Wellenlänge nach 0cm
I = Lichtintensität bestimmter Wellenlänge nach 1cm
n = Molzahl [ mol ]
E = Adsorption oder optische Dichte
ε = molarer Extinktionskoeffizient [ml * µmol -1 * cm -1 ]
l = Lichtweg ( Küvettenbreite) [1cm]
c = Konzentration [mol* l -1 ]
V = gesamtes Volumen der Enzymlösung [ml]
Vk = Volumen in der Küvette befindlichen Lösung [ml]
v = zur Messung verwendetes Volumen der Enzymlösung [ml]
t = Zeit [min]