Ciclo reproductivo, cultivo en criadero y en el medio natural de la ...

6. Cultivo en el medio natural
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Se calculó el peso seco de la vianda liofilizando una muestra de tejido durante 24
horas y para el peso seco de la concha se mantuvieron en estufa a 100ºC durante 24
horas.
El estudio de composición bioquímica se realizó según los siguientes métodos. La
determinación de proteínas se realizó a partir del método de Lowry et al. (1951), la
cuantificación de los lípidos según el método de Marsh y Weinstein (1966) y los
carbohidratos se utilizó el método de la Antrona (Fraga, 1956).
Los métodos utilizados para la determinación de proteínas y carbohidratos son
los mismos que los utilizados para el análisis de los progenitores, descritos
ampliamente en los apartados 3.2.6.2 (proteínas) y 5.2.7 (carbohidratos).
Los lípidos totales se hallaron por el método de Marsh y Weinstein (1966),
utilizando como estándar la tripalmitina en un rango de concentraciones de 5‐50 μg
para hacer la recta de calibración.
Se partió de una muestra de tejido liofilizado (entre 1‐2 mg), a la cual se le
añadió 400 μl de agua Milli‐Q y se sonicó durante 30 segundos. Posteriormente, se
añadió 1 ml de metanol y 500 μl de cloroformo, manteniéndola durante 10 minutos en
baño de hielo y agitándola a continuación durante 2 minutos. Se centrifugó y se
recogió el sobrenadante en otro tubo, al que se le añadió 500 μl de cloroformo y 500
μl de agua Milli‐Q; se mantuvieron en baño de hielo durante 5 minutos y a
continuación se agitaron.
Tras centrifugar, se eliminó el sobrenadante y la parte inferior se evaporó a
60ºC, para seguidamente redisolverla en 2 ml de cloroformo. Se tomaron 3 alícuotas
de 100 μl en tubos de reacción y se evaporaron a 60ºC. Se añadió 500 μl de ácido
sulfúrico a los tubos de reacción y se prepararon 3 blancos de ácido sulfúrico. Los
tubos se agitaron y se mantuvieron a 200ºC durante 30 minutos para luego enfriarlos
en hielo, añadir 1,5 ml de agua Milli‐Q y leer la absorbancia a 375 nm en
espectrofotómetro.