Técnicas Cromatográficas - UNAM

Procesamiento de datos cromatográficos
Anfotericina b: determinación en diversos fluidos biologicos por cromatografía
líquida. Aplicación a estudios farmacocinéticos y de estabilidad química.
La anfotericina B (AnB), comercializada en el año 1956, continúa siendo el fármaco de elección para el
tratamiento de las micosis sistémicas, aunque su utilización no está exenta de toxicidad.
Procedimiento. Se determinó analizando 10 veces dentro de la misma serie analítica, dos muestras, una
de concentración de AnB de 0.5 -g/mL y otra de 2.5 -glmL, preparadas a partir de un "pool'Lde sueros al
cual le fue adicionado el fármaco.
En este estudio se presenta un método de determinación de AnB en suero humano por
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en fase reversa y columna corta (30 mm). El desarrollo y
puesta a punto de la técnica se realizó en base a los métodos de determinación de AnB por HPLC
previamente descritos y resumidos en la siguiente tabla.
Fase móvil EI Procedimiento de extracción Tr
405 (1) Tampón Na2HPO4-KH2-PO4
382
(2)
1.6 mM, acetonitrilo
(63/37, v7v) pH=7
Flujo 1.5 mL/min
Na2EDTA 2.5 mM,
Acetonitrilo
(55/45, v/v)
Flujo 1 mL/min
405 (3) Acetonitrilo, 25mM
EDTA, metanol
(30:20:50 v/v/v)
Flujo 1.6 mL/min
405 (4) Metanolm tampón fosfato
(10 mM KH2PO4, 5mM
EDTANa2 pH=4)
(80:20, v/v)
Acetronitirilo, tampón
fosfato (10 mM KH2PO4, 5
mM EDTANa2 pH=4) (40:60,
v/v)
1-Amino-4-Nitro
naftaleno
Precipitación proteínas sétricas con
metanol (lleva incorporado el estándar
interno). Centrifugación inyección directa
sobrenadante.
NO Extracción proteínicas séricas con metanol
con acetronilo Na2EDTA 2.5 mM
(60/40/,v/v)
Inyección del eluido
NO Precipiatación proteínas séricas con
1-Amino-4
Nitronaftaleno
metanol. Centrifugación inyección directa
del sobre nadante
Precipitación proteninas séricas con
metanol (lleva incorporado el estándar
interno). Centrifugación Inyección directa
del sobresedante.
5.5 min
6-7 min
Capítulo 8 122
4 min
6.8 +-
0.5 min
8.4 +-
0.5 min