Técnicas Cromatográficas - UNAM

Cromatografía de líquidos de alta resolución
A) Los recipientes que se utilicen para almacenar la fase móvil tienen que ser inertes, es decir, el
disolvente no deberá extraer especie alguna del material con el que estén construidos. Suelen ser
botellas de vidrio y tubos de teflón. Están provistos de unos filtros, indispensables para eliminar los gases
disueltos y partículas que pueda contener la fase móvil (Harris, . 2001).
B) Debido a las elevadas presiones de trabajo y al pequeño tamaño de las partículas de la fase
estacionaria, se utiliza una bomba que es la encargada de introducir la fase móvil o disolvente a través
de la columna.
Los sistemas de bombeo deberán reunir las siguientes características: (Hernández, L. 2002).
Generar presiones superiores a 6000 psi.
Capaces de cubrir un amplio rango de flujo entre 0,1 y 10 ml/min con una precisión del 0,5 % y
que esté libre de pulsaciones.
Construidos con materiales inertes respecto a los disolventes empleados.
Las bombas empleadas en HPLC son de tres tipos:
Bombas recíprocas o de vaivén, son las más utilizadas. Están formadas por una pequeña cámara
cilíndrica que se llena y luego se vacía por oscilación de un pistón de zafiro. El bombeo produce un flujo
pulsado que después debe amortiguarse. Sus principales ventajas son que se consiguen presiones
elevadas y se suministra un caudal constante, pudiéndose adaptar a la técnica de elución con gradiente,
debido a su pequeño volumen interno (Skoog, D. A. et al. 2001).
Bombas neumáticas o de presión constante, hacen uso de la presión de un gas aplicado al
recipiente conteniendo la fase móvil. Son sencillas, no provocan pulsaciones pero están limitadas a
presiones relativamente bajas. (Hernández, L. 2002).
Bombas de desplazamiento o tipo jeringa, consisten en una cámara equipada con un
mecanismo de tornillo. Suministran un flujo libre de pulsaciones pero con una capacidad limitada a unos
250 ml. (Harris,D.C. 2001)
C) Los volúmenes que se inyectan de muestra deberán ser pequeños para evitar la sobrecarga de la
columna. Hay varios tipos:
El método más simple es la utilización de una jeringa de alta presión con un diafragma (“septum”) a la
entrada de la columna. Está limitado a una presión máxima de operación de 1500 psi.
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