Técnicas Cromatográficas - UNAM

Técnicas acopladas
nitrofuranos y cloranfenicol. El extracto se filtra por membrana e inyecta al cromatógrafo de líquidos de
alta resolución con detección de UV-visible y columna de fase reversa (C18).
Así mismo en la industria láctea el HPLC acoplado a UV se emplea para la determinación de
vitamina D3 en determinación de productos derivados de la leche y en premezclas vitamínicas. Esto
debido a que la vitamina D3 es una vitamina liposoluble normalmente presente en la leche y sus
derivados en cantidades muy bajas. Por esta razón, industrialmente se adiciona la misma a algunos
productos lácteos para mejorar sus propiedades nutritivas. Por ello la determinación del contenido de
vitamina D3 por HPLC acoplado a UV a 264nm constituye parte del control de calidad del producto lácteo
terminado.
Otra de las aplicaciones de esta técnica es la determinación de sulfonamidas, nitrofuranos y
cloranfenicol en leche. Esto debido a que los residuos de antibióticos y otros quimioterapéuticos
inhibidores del crecimiento bacteriano en la leche traen aparejadas serias dificultades al procesamiento
industrial de la misma, además de ser nocivos para la salud humana, entre otras causas, por la aparición
de cepas de microorganismos patógenos resistentes a los mismos.
El control de estas sustancias se basa en la extracción selectiva de los residuos de sulfonamidas,
nitrofuranos y cloranfenicol presentes en la leche con una mezcla cloroformo-acetona. El extracto se
evapora hasta sequedad a presión reducida y se redisuelve en buffer fosfato de potasio 0.1M
desgrasándose por partición con hexano. La fase acuosa (buffer) contendrá los residuos de sulfonamida,
nitrofuranos y cloranfenicol. El extracto se filtra por membrana e inyecta al cromatógrafo de líquidos de
alta resolución con detección de UV-visible y columna de fase reversa (C18).
6.3 Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) acoplada a RMN
El acoplamiento de HPLC y RMN requiere el ajuste de los sistemas de análisis. El flujo de la fase
móvil lleva a un período de exposición limitada (m) para los núcleos de células de la corriente. El tiempo
(m) es definido como la proporción del volumen de detección de la velocidad de flujo. Por otra parte, el
estado de equilibrio se alcance en un tiempo más corto permitiendo un rápido tiempo de la tasa de
repetición de la exposición de un espectro y, por tanto, un aumento en la sensibilidad.
En la técnica de HPLC la mayoría de las separaciones se realizan con materiales de fase invertido usando
mezclas binarias de disolventes como acetonitrilo / agua, acetona / agua o metanol / agua como móvil
fases. La elección de la fase móvil debe ser adaptada a la espectroscopía de RMN. Una ventaja evidente
es la de obtener un número pequeño de señales del disolvente en el espectro de RMN, ya que el
disolvente puede ocultar las señales de la muestra espectros. En general, las condiciones en
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