Técnicas Cromatográficas - UNAM

Cromatografía en fase líquida a columna abierta
el tamaño de las partículas y de los poros deben ser lo más uniforme posible. El procedimiento del
empaquetado es muy sencillo y se resume en los dos siguientes pasos:
1. Colocación de la fase estacionaria y/o compuestos de empaquetamiento de manera uniforme y
compacta en la columna (longitud y diámetro apropiados).
2. Verificación de ausencia de espacios vacíos en la columna (para evitar que los picos del
cromatograma sean más anchos y de menor eficiencia.
2.2 Aplicación de la muestra
Una vez que la columna se encuentra correctamente empaquetada, se procede a la aplicación de
la disolución de la muestra. Cuando se introduce en la columna cierta cantidad de muestra, ésta se
queda en una zona de cierta altura en la columna. Si entonces se introduce el disolvente, comienza el
desplazamiento de la zona a lo largo de la columna. La parte superior de la zona se disuelve poco a poco
y, empujado por la disolución que se forma, el frente de la zona avanza hacia la base de la columna. Si el
disolvente utilizado para la elusión es el mismo que la disolución problema, los platos teóricos
comprendidos en la parte central de la zona, reciben una fase móvil en equilibrio con ellos y las
concentraciones permanecen estacionarias. El movimiento de la zona sólo es aparente en sus extremos
por lo que su estudio se puede hacer sobre una zona que se supone no tiene más espesor de un plato
teórico.
2.3 Procedimientos de elución
La diferente capacidad de los distintos disolventes para eluir un determinado soluto es
prácticamente independiente de la naturaleza del soluto. Se puede describir la elución como el
desplazamiento de un soluto de la fase estacionaria por un disolvente.
Para el caso específico de cromatografía de adsorción, existe una ordenación de los disolventes de
acuerdo a su capacidad relativa para desplazar solutos de un determinado adsorbente, llamada serie
eluotrópica. La fuerza eluyente es una medida de energía de adsorción del disolvente, supuesto valor
cero para el sistema pentano/sílice pura. Cuanto más polar es el disolvente, mayor es su fuerza eluyente
respecto a la sílice en cromatografía de adsorción.
Cuanto mayor es la fuerza eluyente del disolvente, tanto más rápidamente se eluirán los solutos de la
columna.
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