Estudi en mostres humanes i en cultius neuronals d'indicadors del ...
Estudi en mostres humanes i en cultius neuronals d'indicadors del ...
Estudi en mostres humanes i en cultius neuronals d'indicadors del ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Objectius concrets ......................................................................................................... 67<br />
3. MATERIALS I MÈTODES ............................................................................... 69<br />
Part 1. <strong>Estudi</strong> d’indicadors <strong>del</strong> sistema glutamatèrgic <strong>en</strong> <strong>mostres</strong> <strong>humanes</strong> <strong>en</strong> relació<br />
als seus nivells de mercuri i contaminants organoclorats ........................................ 71<br />
Població ................................................................................................................................................. 71<br />
Mostres de sang de cordó umbilical i plac<strong>en</strong>ta ...................................................................................... 72<br />
Compostos químics ................................................................................................................................ 73<br />
Preparació d’homog<strong>en</strong>ats de membrana plasmàtica de plac<strong>en</strong>ta......................................................... 73<br />
Expressió <strong>del</strong> transportador de glutamat <strong>en</strong> plac<strong>en</strong>ta .......................................................................... 74<br />
Unió al transportador de glutamat <strong>en</strong> plac<strong>en</strong>ta ..................................................................................... 74<br />
Determinació <strong>del</strong>s aminoàcids glutamat i aspartat <strong>en</strong> plasma de cordó umbilical................................ 74<br />
Expressió <strong>del</strong> transportador de glutamat <strong>en</strong> plac<strong>en</strong>ta .......................................................................... 75<br />
Activitat <strong>del</strong> <strong>en</strong>zim glutamat deshidrog<strong>en</strong>asa ........................................................................................ 76<br />
Anàlisi estadístic de les dades ................................................................................................................ 76<br />
Part 2. <strong>Estudi</strong> in vitro <strong>del</strong>s efectes de l’exposició prolongada (> 96h) i a<br />
conc<strong>en</strong>tracions subtòxiques de PCB 138 i HCH (γ/β) <strong>en</strong> els transportadors i receptors<br />
glutamatèrgics de <strong>cultius</strong> primaris de neurones corticals. ........................................ 77<br />
Materials ............................................................................................................................................... 77<br />
Cultius primaris de neurones corticals ................................................................................................... 77<br />
Tractam<strong>en</strong>t amb β-HCH,γ-HCH I PCB 138 .............................................................................................. 78<br />
Assaig de viabilitat cel·lular pel mètode d’MTT ..................................................................................... 78<br />
Captació d’[H 3 ]-aspartat ........................................................................................................................ 78<br />
Funció <strong>del</strong>s receptors glutamatèrgics per determinació <strong>del</strong> [Ca 2+ ] intracel·lular .................................. 79<br />
Expressió proteica de NR1 per western blot .......................................................................................... 79<br />
Anàlisi estadístic de les dades ............................................................................................................... 80<br />
Part 3. <strong>Estudi</strong> in vitro <strong>del</strong>s efectes de l’exposició prolongada (>96h) i a conc<strong>en</strong>tracions<br />
subtòxiques de PCB 138 i γ-HCH a transportadors i receptors dopaminèrgics <strong>en</strong><br />
cèl·lules <strong>humanes</strong> de neuroblastoma SH-SY5Y ........................................................ 82<br />
Materials ............................................................................................................................................... 82<br />
Cultius d’SH-SY5Y ................................................................................................................................... 82<br />
Tractam<strong>en</strong>t amb γ-HCH i PCB 138 .......................................................................................................... 83<br />
Assaig de viabilitat cel·lular pel mètode d’MTT ..................................................................................... 83