Lab. Hematología I - Facultad de Ciencias Químicas - Benemérita ...
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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA<br />
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS<br />
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO<br />
ÁREA ESPECÍFICA DE ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO<br />
ASIGNATURA DE: HEMATOLOGÍA I<br />
CÓDIGO: LQFB 406L<br />
FECHA DE ELABORACIÓ: MARZO 2006<br />
NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO<br />
TIPO DE ASIGNATURA: CB<br />
PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIÓN:<br />
M. C.. SILVIA GARCÍA GONZÁLEZ<br />
M. C.. MIGUEL ANGEL VILLEGAS GONZÁLEZ<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
HORAS PRÁCTICA. 2 TOTAL DE CRÉDITOS: 0
PRÁCTICA 1<br />
ÍNDICE<br />
PRESENTACIÓN E INTRODUCCIÓN<br />
TOMA DE MUESTRAS SANGUÍNEAS<br />
2<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA 2 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGÍA 7<br />
PRÁCTICA 3<br />
PRÁCTIC 4<br />
PRÁCTICA 5<br />
PRÁCTICA 6<br />
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO,<br />
VSG, CUENTA DE ERITROCITOS E ÍNDICES<br />
ERITROCITARIOS<br />
CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIÓN DE<br />
EXTENDIDO SANGUÍNEO (TINCIÓN DE WRIGHT Y<br />
GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS.<br />
CUENTA DE RETICULOCITOS Y FRAGILIDAD<br />
ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTÓNICAS<br />
CITOMETRÍA HEMÁTICA COMPLETA DE FORMA<br />
MANUAL<br />
PRÁCTICA 7 CITOMETRÍA HEMÁTICA AUTOMATIZADA 38<br />
PRÁCTICA 8<br />
PRÁCTICA 9<br />
PRÁCTICA 10<br />
PRÁCTICA 11<br />
SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIÓN DE<br />
HISTOGRAMAS<br />
CITOMETRÍA HEMÁTICA Y SU INTERPRETACIÓN EN<br />
DIVERSAS PATOLOGÍAS<br />
OBSERVACIÓN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS<br />
MICROCÍTICAS, NORMOCÍTICAS Y MACROCÍTICAS.<br />
OBSERVACIÓN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS<br />
HEMOLÍTICAS<br />
PRÁCTICA 12 OBSERVACION DE MEDULA OSEA NORMAL. 48<br />
PRÁCTICA 13 RESOLUCIÓN DE CUADROS CLÍNICOS 51<br />
PRÁCTICA 13 EVALUACIÓN FINAL 51<br />
PREPARACIÓN DE REACTIVOS 52<br />
CUESTIONARIO 54<br />
BIBLIOGRAFÍA 57<br />
3<br />
4<br />
10<br />
22<br />
31<br />
36<br />
41<br />
42<br />
43<br />
45
INTRODUCCIÓN<br />
3<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Siglos atrás la sangre fue consi<strong>de</strong>rada como el líquido esencial para la vida y se le<br />
atribuía ser la fuente que mantenía el equilibrio en el organismo, sin embargo la<br />
composición celular <strong>de</strong> la sangre no se reconoció hasta la invención <strong>de</strong>l microscopio,<br />
siendo Leeuwenhoek el primero en observar los glóbulos rojos, no fue hasta años <strong>de</strong>spués<br />
cuando se logró realizar exploraciones <strong>de</strong> los elementos que constituyen a la sangre,<br />
<strong>de</strong>finiéndose ésta como un órgano polisistemático constituido por eritrocitos, leucocitos,<br />
plaquetas y plasma.<br />
La complicada composición <strong>de</strong> la sangre provocó el interés para realizar estudios<br />
sobre las células que la constituían, siendo K. Vierordt quién realizó los primeros análisis<br />
cuantitativos <strong>de</strong> éstas, pero fue hasta los años treinta que se intentó relacionar el número <strong>de</strong><br />
células sanguíneas con algunas patologías, métodos cada vez mejores y conocimientos más<br />
profundos sobre la fisiología sanguínea permitió una relación estrecha con el cuadro clínico<br />
presentado por diferentes pacientes.<br />
En la actualidad se han <strong>de</strong>sarrollado técnicas cualitativas y cuantitativas <strong>de</strong> los<br />
componentes celulares, que en conjunto constituyen la CITOMETRÍA HEMÁTICA:<br />
Determinación <strong>de</strong> hemoglobina y hematocrito, cuenta <strong>de</strong> eritrocitos, leucocitos, plaquetas,<br />
observación <strong>de</strong>l frotis sanguíneo y cálculos <strong>de</strong> los índices eritrocitarios.<br />
La Citometría hemática es sin lugar a dudas el primer paso para el diagnóstico,<br />
dado que numerosos trastornos se acompañan <strong>de</strong> alteraciones en las células por lo cual es<br />
importante hacer la diferenciación.<br />
Las células pue<strong>de</strong>n sufrir alteraciones no sólo en su forma sino también en su<br />
cantidad y su función, que pue<strong>de</strong>n ser secundarias a algunas alteraciones fisiopatológicas,<br />
enfermeda<strong>de</strong>s crónicas, terapias con medicamentos, déficit <strong>de</strong> algún componente,<br />
neoplasias, etc., lo cual lleva a alterar las funciones que <strong>de</strong>sempeñan como es: <strong>de</strong>fensa<br />
contra infecciones, aporte <strong>de</strong> oxígeno. etc.<br />
Actualmente se cuenta con aparatos automatizados para la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> la<br />
citometría hemática, día a día han sustituido a la forma manual, ya que los valores son más<br />
precisos; sin embargo el Químico Farmacobiólogo <strong>de</strong>be estar preparado para realizar esta<br />
prueba por ambos métodos.<br />
OBJETIVOS.<br />
1. El alumno conocerá el funcionamiento <strong>de</strong> un laboratorio <strong>de</strong> hematología, así como<br />
las medidas <strong>de</strong> precaución para su protección personal en cuanto al manejo <strong>de</strong> las<br />
muestras <strong>de</strong> sangre, al ser consi<strong>de</strong>rarlas potencialmente infecto-contagiosas.<br />
2. El alumno conocerá y apren<strong>de</strong>rá a manejar el material y equipo más común que se<br />
utiliza en la realización <strong>de</strong> la citometría hemática.<br />
3. El alumno apren<strong>de</strong>rá a analizar y correlacionar el resultado <strong>de</strong> la citometría<br />
hemática con las manifestaciones clínicas que presente el paciente.<br />
4. El alumno conocerá las alteraciones morfológicas más frecuentes que se presentan<br />
en las anemias.
PRÁCTICA No. 1 TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA<br />
4<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
OBJETIVO: El alumno conocerá y apren<strong>de</strong>rá a realizar una punción venosa para obtener<br />
muestra <strong>de</strong> sangre.<br />
1. MÉTODOS DE EXTRACCIÓN SANGUÍNEA.<br />
Las <strong>de</strong>terminaciones <strong>de</strong> la Citometría Hemática, <strong>de</strong> preferencia se realizan con<br />
sangre venosa, ya que la extracción es más fácil, se obtiene una cantidad a<strong>de</strong>cuada como<br />
para repetir cuantas veces sea necesario, la manipulación y el pipeteo es mucho más fácil,<br />
sin embargo también se pue<strong>de</strong> utilizar sangre capilar o arterial.<br />
1.1. OBTENCIÓN DE SANGRE CON JERINGA.<br />
La extracción se realiza con jeringa <strong>de</strong> plástico y aguja <strong>de</strong>sechable. En las tomas <strong>de</strong><br />
muestra el operador <strong>de</strong>be adoptar una actitud <strong>de</strong> confianza y seguridad para que el paciente<br />
pueda ser tranquilizado y colabore <strong>de</strong> forma eficaz.<br />
1.1.1 MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO.<br />
1 Torniquete por equipo<br />
1 Frasco con torundas con alcohol etílico al 70 %, como antiséptico.<br />
2 Tubos <strong>de</strong> ensayo <strong>de</strong> 13x75 mm con tapón <strong>de</strong> color lila.<br />
1 Frasco con 10 ml con solución <strong>de</strong> etilen-diamino-tetra-acetato <strong>de</strong> sodio al 10 %<br />
(EDTA).<br />
1.1.2 PROCEDIMIENTO.<br />
1) En un tubo <strong>de</strong> ensayo <strong>de</strong> 13x75 mm se coloca una gota <strong>de</strong>l anticoagulante, en la<br />
etiqueta se escribe en el nombre <strong>de</strong>l paciente, fecha y análisis <strong>de</strong>seado.<br />
2) El paciente cómodamente sentado, coloca el brazo en posición horizontal, se palpan<br />
las venas, (venas cefálica media y basílica) al mismo tiempo se le solicita que abra y<br />
cierre el puño con la finalidad <strong>de</strong> hacerlas más evi<strong>de</strong>ntes.<br />
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuará la punción, se sujeta el brazo<br />
<strong>de</strong>l paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y <strong>de</strong> <strong>de</strong>ntro hacia<br />
afuera, con el antiséptico, se <strong>de</strong>ja secar, sin soplar.<br />
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba <strong>de</strong>l pliegue <strong>de</strong>l codo, no<br />
apretándolo <strong>de</strong>masiado y sólo el tiempo necesario, para evitar la<br />
hemoconcentración.<br />
5) Se toma la jeringa <strong>de</strong> manera que el bisel <strong>de</strong> la aguja se encuentre hacia arriba, se<br />
coloca paralela al trayecto <strong>de</strong> la vena, se introduce a la piel y vena con una punción<br />
directa y única.<br />
6) Cuando la aguja ha penetrado en la vena, se ve el flujo <strong>de</strong> la sangre en la jeringa.<br />
7) Jalar suavemente el émbolo <strong>de</strong> la jeringa para obtener la cantidad <strong>de</strong> sangre <strong>de</strong>seada,<br />
hacer esta operación <strong>de</strong>spacio para evitar la hemólisis.<br />
8) Se suelta el torniquete y se retira la aguja suavemente aplicando la torunda sobre el<br />
sitio <strong>de</strong> la punción, indicándole al paciente que flexione el codo suavemente con el<br />
puño abierto, con la finalidad <strong>de</strong> evitar hemorragias o hematomas.<br />
9) Se quita con mucho cuidado la aguja <strong>de</strong> la jeringa con la ayuda <strong>de</strong> su funda, con<br />
movimiento <strong>de</strong> torsión, y la sangre se vacía lentamente por las pare<strong>de</strong>s <strong>de</strong>l tubo que<br />
contiene el anticoagulante, se tapa y se mezcla suavemente, durante un minuto.
1.2 OBTENCIÓN DE SANGRE CON SISTEMA VACUTAINER.<br />
5<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
El fundamento es la aspiración directa <strong>de</strong> la sangre en tubos al vacío que contienen el tipo y<br />
cantidad apropiada <strong>de</strong> anticoagulante.<br />
1.2.1 MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO.<br />
1 Torniquete<br />
1 Soporte Vacuntainer<br />
2 Agujas Vacuntainer <strong>de</strong> calibre 20x25mm (Bisel corto) y/o 20x32mm (bisel largo)<br />
2 Tubos al vacío con EDTA (Tapón color lila)<br />
1 frasco con Torundas con alcohol al 70 % por sección<br />
1 par <strong>de</strong> guantes <strong>de</strong> látex <strong>de</strong>sechables por persona<br />
1.2.2 PROCEDIMIENTO (Presentación <strong>de</strong> vi<strong>de</strong>o)<br />
1) Preparar el sistema: La aguja se gira para romper el sello <strong>de</strong> esterilidad, se atornilla<br />
al soporte, se quita la capucha, quedando lista para la punción, el tubo <strong>de</strong>be estar<br />
rotulado con el nombre <strong>de</strong>l paciente, estudio y fecha <strong>de</strong> realización.<br />
2) El paciente cómodamente sentado coloca el brazo en posición horizontal, se palpan<br />
las venas, (venas cefálica media y basílica) al mismo tiempo se le solicita que abra y<br />
cierre el puño con la finalidad <strong>de</strong> hacerlas más evi<strong>de</strong>ntes.<br />
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuará la punción, se sujeta el brazo<br />
<strong>de</strong>l paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y <strong>de</strong> <strong>de</strong>ntro hacia<br />
afuera, con el antiséptico, se <strong>de</strong>ja secar, sin soplar.<br />
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba <strong>de</strong>l pliegue <strong>de</strong>l codo, no<br />
apretándolo <strong>de</strong>masiado y sólo el tiempo necesario, para evitar la<br />
hemoconcentración.<br />
5) Sujetar firmemente el soporte con la mano <strong>de</strong>recha e introducir la aguja con el bisel<br />
hacia arriba en la vena elegida, se sujetará el brazo <strong>de</strong>l paciente con la mano<br />
izquierda, y con el pulgar se sostendrá el soporte vacuntainer para evitar que se<br />
mueva la aguja.<br />
6) Empuje el tubo vacutainer hasta el final <strong>de</strong>l soporte, perforando completamente el<br />
tapón.<br />
7) Dejar fluir libremente la sangre hasta que se acabe el vacío.<br />
8) Retire el torniquete suavemente.<br />
9) Jalar el tubo vacuntainer hacia afuera <strong>de</strong>l soporte y sin quitar el tapón mezcle<br />
suavemente la sangre con el anticoagulante lentamente sin sacudir. (aprox. 60<br />
veces)<br />
10) A continuación retire la aguja colocando la torunda en el sitio <strong>de</strong> la punción,<br />
indicándole al paciente que flexione el brazo suavemente.<br />
1.2.3 PRECAUCIONES:<br />
1. Verificar que el material sea estéril, para evitar la transmisión <strong>de</strong> VIH y<br />
HEPATITIS, entre otras, se <strong>de</strong>be utilizar guantes durante la extracción sanguínea<br />
para protección personal.<br />
2. Debe evitarse una mala punción o exceso <strong>de</strong> presión ya que pue<strong>de</strong> provocar<br />
hemorragias, hematomas y dolor en la zona <strong>de</strong> punción.
6<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
3. Evitar la permanencia prolongada <strong>de</strong> agujas <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> las venas, ya que en<br />
ocasiones pue<strong>de</strong> provocar “flebitis”.<br />
4. En el momento <strong>de</strong> la punción asegurarse que la aguja penetre en la luz <strong>de</strong>l vaso,<br />
para evitar la formación <strong>de</strong> hematomas.<br />
5. Si por algún motivo la extracción <strong>de</strong> sangre se realiza en vena femoral, se <strong>de</strong>be tener<br />
la precaución que la aguja no penetre <strong>de</strong>masiado para evitar lesión vascular.<br />
1.2.4 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE AMBOS MÉTODOS.<br />
El método <strong>de</strong> extracción por sistema Vacutainer no requiere tanta preparación.<br />
Se pue<strong>de</strong>n obtener varias muestras en una sola punción, en cambio con jeringa sólo<br />
se obtiene el volumen indicando en ésta.<br />
En el sistema Vacutainer existe una gran variedad <strong>de</strong> tubos tanto en volumen como<br />
en el tipo <strong>de</strong> anticoagulante que contienen, a<strong>de</strong>más sólo se extrae la cantidad exacta<br />
<strong>de</strong> sangre con relación a la cantidad <strong>de</strong> anticoagulante.<br />
TIPO DE TUBO<br />
ANTICUAGULANTE<br />
Tapón morado EDTA<br />
Tapón ver<strong>de</strong> Heparina<br />
Tapón gris Oxalato <strong>de</strong> litio, <strong>de</strong> potasio y sodio.<br />
Tapón azul Citrato <strong>de</strong> sodio.<br />
Tapón rojo Sin anticoagulante.
PRÁCTICA No. 2 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGÍA<br />
7<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
OBJETIVO: El alumno conocerá los sistemas <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad interno y externo<br />
que se utilizan en el laboratorio hematológico para garantizar al paciente resultados<br />
precisos y exactos.<br />
La citometría hemática, es sin duda uno <strong>de</strong> los estudios <strong>de</strong> laboratorio más solicitados y la<br />
interpretación correcta supone el análisis exacto, preciso y confiable <strong>de</strong> cada uno <strong>de</strong> los<br />
parámetros que se informan. Sin embargo, a pesar <strong>de</strong> realizar cuidadosamente las<br />
<strong>de</strong>terminaciones analíticas, es habitual que se produzcan pequeños errores durante el<br />
<strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> las técnicas, siendo imposible reproducir exactamente mediciones sucesivas<br />
<strong>de</strong> una misma muestra aún contando con tecnología <strong>de</strong> punta. De ahí que sea necesario<br />
contar con sistemas <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad interno y externo que garantice a su vez el<br />
control <strong>de</strong> las variables que pue<strong>de</strong>n ser causa <strong>de</strong> error durante el trabajo diario <strong>de</strong><br />
laboratorio.<br />
Si consi<strong>de</strong>ramos el trabajo <strong>de</strong> laboratorio como un proceso continuo <strong>de</strong>s<strong>de</strong> la recepción <strong>de</strong>l<br />
paciente hasta la emisión <strong>de</strong> resultados, po<strong>de</strong>mos dividir el trabajo <strong>de</strong> laboratorio en tres<br />
gran<strong>de</strong>s fases: 1. Pre-analítica, 2.Analítica y 3. Post-analítica, en las cuales se pue<strong>de</strong>n estar<br />
introduciendo errores que <strong>de</strong>ben ser <strong>de</strong>tectados por nuestro sistema <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad<br />
para realizar las acciones correctivas necesarias.<br />
Los errores que se pue<strong>de</strong>n presentar en el trabajo diario <strong>de</strong> laboratorio son:<br />
Burdos.- este tipo <strong>de</strong> error solo se presenta por <strong>de</strong>scuido <strong>de</strong>l personal <strong>de</strong> laboratorio, ya que<br />
como su nombre lo dice son errores muy graves que no se pue<strong>de</strong>n <strong>de</strong>tectar por ningún<br />
sistema <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad. Por ejemplo cambio <strong>de</strong> una muestra por otra, <strong>de</strong>un reactivo<br />
por otro, <strong>de</strong> una cantidad por otra, etc.<br />
Sistemáticos.- este tipo <strong>de</strong> error es el que produce <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l sistema o método <strong>de</strong> prueba,<br />
afectando gravemente la precisión <strong>de</strong> nuestros resultados y se presentan como consecuencia<br />
<strong>de</strong> procedimientos <strong>de</strong> calibración incorrecta, funcionamiento <strong>de</strong>fectuoso o falta <strong>de</strong> precisión<br />
<strong>de</strong> alguna parte <strong>de</strong>l proceso. Éstos a su vez pue<strong>de</strong>n ser constantes o proporcionales.<br />
Aleatorios.- este tipo <strong>de</strong> error se produce como su nombre lo indica sin predicción ni<br />
regularidad, afectando gravemente la exactitud <strong>de</strong> nuestros resultados<br />
Así pues, el control estadístico <strong>de</strong> calidad tiene como finalidad monitorear en forma<br />
continua mediante técnicas estadísticas, la estabilidad <strong>de</strong>l proceso, y mediante los gráficos<br />
<strong>de</strong> control <strong>de</strong> este análisis <strong>de</strong>tectar en forma visual la variabilidad <strong>de</strong> nuestras mediciones,<br />
las cuales probablemente se pue<strong>de</strong>n atribuir a alguna causa específica que se podrá<br />
investigar y corregir.<br />
CONTROL DE CALIDAD INTERNO<br />
Los programas <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad interno compren<strong>de</strong> el análisis <strong>de</strong> muestras <strong>de</strong> control<br />
junto con las muestras <strong>de</strong> pacientes y la evaluación estadística <strong>de</strong> los resultados para<br />
<strong>de</strong>terminar la aceptabilidad <strong>de</strong> la corrida analítica. Con éste trabajo se evalúa y controlan la
8<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
precisión y el sesgo <strong>de</strong>bido al análisis <strong>de</strong> un método <strong>de</strong> prueba, pero no la exactitud. Una<br />
muestra control es una muestra especial insertada en el proceso <strong>de</strong> comprobación y tratada<br />
como si fuera la <strong>de</strong> un paciente. Debe tener concentraciones apropiadas en niveles<br />
significativos, para que el médico pueda utilizarlos para tomar <strong>de</strong>cisiones acerca <strong>de</strong>l<br />
tratamiento. Debe hacerse una distinción entre los controles y los calibradores o los<br />
estándares, los dos últimos se utilizan para ajustar la instrumentación o <strong>de</strong>finir una curva<br />
estándar para el análisis. A<strong>de</strong>más <strong>de</strong> tener un valor asignado con precisión que ya se probó<br />
según un método <strong>de</strong> referencia, el calibrador <strong>de</strong>be tener las mismas características que el<br />
método control. Los materiales <strong>de</strong> calibración y control no son intercambiables. El<br />
control <strong>de</strong>be ser in<strong>de</strong>pendiente por completo <strong>de</strong>l proceso <strong>de</strong> calibración para po<strong>de</strong>r <strong>de</strong>tectar<br />
errores sistemáticos causados por el <strong>de</strong>terioro <strong>de</strong>l calibrador o un cambio en el proceso<br />
analítico.<br />
Las propieda<strong>de</strong>s <strong>de</strong> un material <strong>de</strong> control i<strong>de</strong>al para hematología, según Bachner son las<br />
siguientes:<br />
Económica<br />
Estabilidad prolongada<br />
Probados directamente<br />
Que se suspenda con facilidad y no se aglutine<br />
Características <strong>de</strong> flujo similar a la <strong>de</strong> la sangre<br />
Proporciones ópticas y eléctricas similares a las <strong>de</strong> la sangre<br />
Tamaño y forma <strong>de</strong> las partículas similares a los <strong>de</strong> la sangre<br />
Evaluable por métodos in<strong>de</strong>pendientes<br />
Sin embargo, la mayoría <strong>de</strong> los productos <strong>de</strong> control para hematología disponibles en el<br />
comercio no son muy buenos, pero tienen varias ventajas sobre las muestras <strong>de</strong> pacientes<br />
conservadas.<br />
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO.<br />
Con un programa <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad externo pue<strong>de</strong> evaluarse la exactitud <strong>de</strong> un<br />
procedimiento, así como el rendimiento <strong>de</strong> cada laboratorio o participante sobre una<br />
muestra idéntica o compararlo con el rendimiento <strong>de</strong> laboratorios con métodos iguales o<br />
similares. Estos programas <strong>de</strong> control obligatorios pue<strong>de</strong>n ser inspecciones estatales o<br />
nacionales. Se consi<strong>de</strong>ra que la media <strong>de</strong>l grupo o el resultado consensuado <strong>de</strong>l grupo es el<br />
“valor verda<strong>de</strong>ro” o exacto. Así, el rendimiento <strong>de</strong>l laboratorio se evalúa por la proximidad<br />
<strong>de</strong> sus resultados en comparación con los <strong>de</strong> la opinión promedio <strong>de</strong>l grupo.
CAPACITACIÓN CONTINUA.<br />
9<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Un laboratorio <strong>de</strong> hematología que pretenda tener un nivel elevado constante, <strong>de</strong>berá contar<br />
con un programa activo <strong>de</strong> capacitación continua para su personal. Es <strong>de</strong> suma importancia<br />
programar talleres sobre i<strong>de</strong>ntificación celular en sangre periférica, lecturas y seminarios <strong>de</strong><br />
citogramas e histogramas <strong>de</strong> recuento diferencial automatizado y su correlación con las<br />
anormalida<strong>de</strong>s que puedan hallarse en los extendidos <strong>de</strong> sangre periférica, solo así podrá<br />
<strong>de</strong>tectarse variables espurias relacionadas con la muestra que pue<strong>de</strong>n producir resultados<br />
inexactos en los valores obtenidos en hematología automatizada.<br />
“El contar con profesionales clínicos bien capacitados y concientes son la mejor forma <strong>de</strong><br />
prevenir errores en el laboratorio <strong>de</strong> hematología.”<br />
Debe diseñarse un plan que i<strong>de</strong>ntifique los aspectos necesarios para garantizar la calidad,<br />
junto con los mecanismos y las personas que los evalúen e informen. Las características<br />
generales <strong>de</strong> cualquier plan <strong>de</strong>ben incluir las metas, los objetivos, las fuentes <strong>de</strong> autoridad,<br />
la <strong>de</strong>finición <strong>de</strong>l alcance <strong>de</strong> servicios, la selección <strong>de</strong> temas, un calendario <strong>de</strong> activida<strong>de</strong>s<br />
supervisado, las acciones correctivas, la evaluación periódica y los métodos <strong>de</strong><br />
comunicación.<br />
El objetivo <strong>de</strong> la garantía <strong>de</strong> calidad <strong>de</strong>l laboratorio es verificar que la calidad <strong>de</strong> los<br />
servicios contribuya con resultados confiables, exactos y precisos que coadyuven a la<br />
prestación global <strong>de</strong> atención médica <strong>de</strong> excelencia. Esto implica, que el laboratorio <strong>de</strong>berá<br />
supervisar todos los aspectos <strong>de</strong> la atención, <strong>de</strong>s<strong>de</strong> la solicitud <strong>de</strong> las pruebas hasta el uso<br />
<strong>de</strong> los resultados <strong>de</strong> la prueba
10<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 3 DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO,<br />
VSG, CUENTA DE ERITROCITOS E ÍNDICES ERITROCITARIOS<br />
OBJETIVO: El alumno conocerá y realizará los métodos básicos <strong>de</strong> la fórmula roja<br />
para apren<strong>de</strong>r a calcular los índices eritrocitarios.<br />
1. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA<br />
1.1 EL MÉTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.<br />
En la Citometría hemática una <strong>de</strong> las <strong>de</strong>terminaciones es la hemoglobina la cual se expresa<br />
en g/dl.<br />
El método <strong>de</strong> la Cianometahemoglobina es el más empleado, <strong>de</strong>bido a que es<br />
colorimétrico, es barato y permite medir todas las hemoglobinas presentes en la sangre (Hb-<br />
O2, Hb-CO2, Hb-H a excepción <strong>de</strong> la Hb-S).<br />
FUNDAMENTO.<br />
Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo <strong>de</strong> Drabkin, el cual contiene<br />
ferricianuro <strong>de</strong> potasio K3Fe(CN)6 que convierte el Fe ++ en Fe +++ convirtiéndose en<br />
metahemoglobina. Luego el KCN <strong>de</strong>l mismo reactivo se combina para formar la<br />
Cianometahemoglobina, cuyo pico máximo <strong>de</strong> absorción es <strong>de</strong> 540nm con un rango <strong>de</strong> 530<br />
a 550 nm.<br />
MATERIAL<br />
2 Tubos <strong>de</strong> ensayo <strong>de</strong> 13x100 mm por equipo<br />
1 Pipeta <strong>de</strong> Salhí por equipo<br />
2 Pipeta <strong>de</strong> 5 ml por equipo<br />
1 Micropipeteador o boquilla por equipo.<br />
1 Perilla por equipo.<br />
1 Espectrofotómetro por sección.<br />
REACTIVOS:<br />
10ml <strong>de</strong> reactivo <strong>de</strong> Drabkin por equipo<br />
PROCEDIMIENTO:<br />
1) Se marcan 2 tubos <strong>de</strong> ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y<br />
se colocan 5 ml. <strong>de</strong>l Reactivo <strong>de</strong> Drabkin en cada uno.<br />
2) Con la pipeta <strong>de</strong> Shali, se toma 0.02 ml (20µl) <strong>de</strong> sangre limpiando<br />
perfectamente la pipeta por fuera con un segmento <strong>de</strong> papel <strong>de</strong>sechable hume<strong>de</strong>cido con<br />
solución salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiración y expulsión<br />
<strong>de</strong>l reactivo <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la misma.<br />
3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos.<br />
Pasar a las celdas.<br />
4) Ajustar el espectrofotómetro a cero <strong>de</strong> absorbancia con el blanco <strong>de</strong> reactivo (B)<br />
a 540 nm. y se lee la absorbancia <strong>de</strong>l tubo problema.<br />
5) Calcular la concentración <strong>de</strong> la Hemoglobina, a partir <strong>de</strong> la Ley <strong>de</strong> Beer o bien<br />
extrapolando en la Curva <strong>de</strong> calibración.
Ley <strong>de</strong> Beer A= a.b.c.<br />
11<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
[m] = Abs m [St] [m] = concentración <strong>de</strong> la muestra<br />
Abs St Abs m = Absorbancia <strong>de</strong> la muestra<br />
c St = concentración <strong>de</strong>l estandard<br />
Abs St = Absorbancia <strong>de</strong>l estándar<br />
CURVA DE CALIBRACIÓN.<br />
La curva <strong>de</strong> calibración se realiza <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />
a) Marca 5 tubos <strong>de</strong> ensaye <strong>de</strong> 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl<br />
b) Pipetear con precisión, <strong>de</strong> la solución valorada <strong>de</strong> cianometahemoglobina (St)<br />
<strong>de</strong> concentración <strong>de</strong> 20 g/dl y <strong>de</strong>l Reactivo <strong>de</strong> Drabkin, en cada uno <strong>de</strong> los tubos<br />
correspondientes y mezclar bien.<br />
CONCENTRACIÓN<br />
HEMOGLOBINA<br />
Estándar <strong>de</strong><br />
Cianometahemoglobina<br />
Reactivo <strong>de</strong> Drabkin<br />
B<br />
0.0 ml<br />
5.0 ml<br />
5<br />
1.25 ml<br />
3.75 ml<br />
10<br />
2.5 ml<br />
2,5 ml<br />
15<br />
3.75 ml<br />
1.25 ml<br />
20 g/dl<br />
5.0 ml<br />
0.0 ml<br />
c) Medir la absorbancia <strong>de</strong> cada dilución en el espectrofotómetro a 540 nm, contra<br />
el blanco (B).<br />
d) Graficar en papel milimétrico, en las or<strong>de</strong>nadas (Y) las absorbancias y en las<br />
abscisas (X) las concentraciones.<br />
e) Trazar una línea perpendicular que parta <strong>de</strong>l vértice (O) y toque el mayor número<br />
<strong>de</strong> puntos.<br />
f) Extrapola las absorbancias <strong>de</strong> las muestras problema.<br />
PRECAUCIONES.<br />
1. Se <strong>de</strong>be <strong>de</strong> utilizar guantes para la protección <strong>de</strong>l estudiante.<br />
2. El reactivo <strong>de</strong> Drabkin contiene cianuro, es necesario emplear la perilla auxiliar,<br />
prohibido pipetear con la boca.<br />
3. Es muy importante que las mediciones <strong>de</strong> las soluciones sean exactas, eso<br />
favorecerá que la línea perpendicular pase por todos los puntos <strong>de</strong> intersección.<br />
4. Verificar antes <strong>de</strong> iniciar, que el espectrofotómetro esté prendido, se encuentre<br />
ajustado a CERO <strong>de</strong> absorbancia en la longitud <strong>de</strong> onda <strong>de</strong> 540 nm.
VENTAJAS.<br />
12<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
1. El método <strong>de</strong> Cianometahemoglobina posee ciertas ventajas, ya que la<br />
mayoría <strong>de</strong> las formas <strong>de</strong> hemoglobina que se puedan encontrar en la<br />
sangre (a excepción <strong>de</strong> Hb S) se convierten a cianometahemoglobina con<br />
la adición <strong>de</strong>l reactivo <strong>de</strong> Drabkin.<br />
2. La máxima absorción <strong>de</strong> la cianometahemoglobina a 540 nm, permite la<br />
utilización <strong>de</strong> fotómetros con rangos <strong>de</strong> lectura cortos.<br />
DESVENTAJAS.<br />
1. La única <strong>de</strong>sventaja es que se trabaja con pequeños volúmenes <strong>de</strong> sangre<br />
(20 µl) por lo que aumenta la probabilidad <strong>de</strong> error.<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
HOMBRES 15 a 20 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l<br />
MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 7.5 a 10.33 mmol/l<br />
2. MÉTODO DE WINTROBE PARA SEDIMENTACIÓN GLOBULAR<br />
Esta sencilla prueba se emplea universalmente como un indicador <strong>de</strong> la presencia <strong>de</strong><br />
enfermeda<strong>de</strong>s activas, “ya que permite conocer las características físicas <strong>de</strong>l ambiente en el<br />
que se encuentran los eritrocitos”.<br />
FUNDAMENTO:<br />
Consiste en <strong>de</strong>jar que la sangre sedimente por la acción <strong>de</strong> la gravedad formando un<br />
paquete más o menos compacto separado <strong>de</strong>l plasma, ello <strong>de</strong>pen<strong>de</strong> <strong>de</strong> varios factores como<br />
son:<br />
a. Factores plasmáticos: En don<strong>de</strong> los niveles elevados en la concentración <strong>de</strong><br />
fibrinógeno y/o <strong>de</strong> globulinas originan la disminución <strong>de</strong>l potencial Z <strong>de</strong> los<br />
eritrocitos, favoreciendo la formación <strong>de</strong>l fenómeno <strong>de</strong> “Rouleaux”.<br />
b. Factores eritrocitarios: Cuando aumenta tamaño <strong>de</strong> los eritrocitos (macrocitos), se<br />
sedimentan más rápido que los <strong>de</strong> tamaño normal (normocitos) o los <strong>de</strong> menor<br />
tamaño (microcitos).<br />
c. En los pacientes con anemia se disminuye la relación “eritrocitos/plasma”, lo que<br />
favorece el apilamiento <strong>de</strong> los eritrocitos y el aumento <strong>de</strong> la VSG.<br />
MATERIAL.<br />
1 Pipeta Pasteur por equipo<br />
1 Tubo <strong>de</strong> Wintrobe por equipo<br />
1 Soporte para tubos <strong>de</strong> Wintrobe por sección<br />
PROCEDIMIENTO.<br />
1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre.<br />
2. Llenar la pipeta Pasteur <strong>de</strong> sangre, <strong>de</strong>spués introducir la punta hasta el fondo <strong>de</strong>l<br />
tubo <strong>de</strong> Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formación <strong>de</strong> burbujas, hasta<br />
llegar a la marca <strong>de</strong> “0”.
13<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que este nivelada) durante una<br />
hora.<br />
4. Leer la altura <strong>de</strong> la columna <strong>de</strong> plasma que aparece en la parte superior, en la escala<br />
que va <strong>de</strong>l 0 al 10 cada raya equivale a un mm y se reporta en mm/hora.<br />
PRECAUCIONES.<br />
a) El tubo <strong>de</strong> Wintrobe <strong>de</strong>berá llenarse <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el fondo hasta la marca cero, evitando la<br />
formación <strong>de</strong> burbujas.<br />
b) Durante el proceso <strong>de</strong> reposo <strong>de</strong>berá verificarse que se encuentre exactamente vertical,<br />
<strong>de</strong> lo contrario el valor <strong>de</strong>terminado será erróneo.<br />
c) Verificar que el reposo <strong>de</strong>l tubo <strong>de</strong> Wintrobe este exento <strong>de</strong> vibraciones.<br />
d) La sangre <strong>de</strong>be <strong>de</strong> estar perfectamente mezclada para evitar un cambio en la relación,<br />
eritrocitos-plasma.<br />
VENTAJAS.<br />
a) Pequeña cantidad <strong>de</strong> muestra.<br />
b) Es sencillo.<br />
c) Pue<strong>de</strong> calcularse el valor <strong>de</strong>l hematocrito con la misma preparación <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber<br />
<strong>de</strong>terminado la velocidad <strong>de</strong> sedimentación globular. (VSG).<br />
DESVENTAJAS.<br />
Se altera fácilmente con movimientos, vibraciones y sangres hemolizadas.<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
HOMBRES 0 a 7 mm/hr.<br />
MUJERES 0 a 15 mm/hr.<br />
3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO.<br />
El hematocrito es un parámetro indispensable para po<strong>de</strong>r calcular los índices eritrocitarios y<br />
se <strong>de</strong>fine como “el volumen que representa el paquete globular en el total <strong>de</strong>l volumen<br />
sanguíneo”.<br />
El hematocrito en porcentaje (%) representa aproximadamente tres veces el valor <strong>de</strong> la<br />
concentración <strong>de</strong> hemoglobina y su valor será siempre fraccionario, es <strong>de</strong>cir menor a uno<br />
(en el sistema internacional <strong>de</strong> unida<strong>de</strong>s).<br />
Para reportar dicho valor se hará como porcentaje o como fracción celular, para su<br />
<strong>de</strong>terminación se utiliza el método Wintrobe (macro método) o bien el micro método (en un<br />
tubo capilar) que posee menos errores inherentes.<br />
3.1 MACROHEMATOCRITO.<br />
MATERIAL.<br />
1 Pipeta Pasteur por equipo<br />
1 Tubo <strong>de</strong> Wintrobe por equipo<br />
1 Centrifuga por sección<br />
PROCEDIMIENTO.
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Después <strong>de</strong> haber <strong>de</strong>terminado la VSG con el tubo Wintrobe.<br />
a) Calcule el hematocrito, centrifugando el tubo a 3500 r.p.m. durante 30 minutos.<br />
En caso <strong>de</strong> no contar con esta preparación efectuar el procedimiento (2).<br />
Procedimiento (2).<br />
a) Con una pipeta Pasteur llénese <strong>de</strong> sangre el tubo Wintrobe hasta la marca <strong>de</strong> “0”<br />
cero.<br />
b) Centrifúguese el tubo A 3500 r.p.m. durante 30 minutos.<br />
LECTURA:<br />
En la graduación en la que el “0” cero está en el fondo <strong>de</strong>l tubo, léase a que nivel está el<br />
límite superior <strong>de</strong> la columna roja (la sangre se ha separado en cuatro capas: roja formada<br />
por los eritrocitos, blanca grisácea por leucocitos, amarillenta cremoso por plaquetas y la<br />
última líquida formada por plasma habitualmente <strong>de</strong> color amarillento.).<br />
3.1 MICROHEMATOCRITO.<br />
MATERIAL.<br />
2 Capilares por equipo<br />
1 Mechero <strong>de</strong> Buncen por sección<br />
1 Lector para hematocrito por sección<br />
1 Micro centrífuga por sección<br />
PROCEDIMIENTO.<br />
a) Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas partes<br />
<strong>de</strong>l total <strong>de</strong> su longitud.<br />
b) Cierre el extremo <strong>de</strong>l tubo capilar distante <strong>de</strong> la sangre acercándolo a la flama <strong>de</strong>l<br />
mechero y rotándolo, también se pue<strong>de</strong> sellar con plastilina (cerciórese <strong>de</strong> que el cierre <strong>de</strong><br />
dicho extremo haya sido completo).<br />
c) Centrifúguese en la centrífuga para microhematocrito durante 5 min.<br />
d) Leer en el lector <strong>de</strong>l microhematocrito.<br />
PRECAUCIONES.<br />
a) En ambos métodos se <strong>de</strong>be <strong>de</strong> evitar la hemoconcentración <strong>de</strong> la muestra durante la<br />
obtención. Si el hematocrito exce<strong>de</strong> <strong>de</strong> 50 % centrifugar nuevamente el capilar o tubo<br />
utilizado Para la <strong>de</strong>terminación, durante 5 minutos.<br />
b) En el caso <strong>de</strong>l micro método si el sellado es con mechero cuí<strong>de</strong>se que la sangre no llegue<br />
al extremo calentado <strong>de</strong>l tubo ni que<strong>de</strong> al nivel <strong>de</strong> la flama.<br />
c) En el caso <strong>de</strong>l macro método el tubo <strong>de</strong> Wintrobe se <strong>de</strong>be aforar exactamente a cero y no<br />
<strong>de</strong>ben <strong>de</strong> quedar burbujas <strong>de</strong> aire entre columna <strong>de</strong> sangre o en el fondo.<br />
e) se <strong>de</strong>be <strong>de</strong> mezclar la sangre perfectamente antes <strong>de</strong> llenar los tubos <strong>de</strong> Wintrobe o<br />
capilares.<br />
VENTAJAS Y DESVENTAJAS.<br />
a) El micro método es el más empleado <strong>de</strong>bido a que requiere menos tiempo <strong>de</strong><br />
centrifugación, y cantidad <strong>de</strong> muestra, se pue<strong>de</strong> utilizar sangre capilar o venosa en<br />
comparación con el macro método.
15<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
b) Se prefiere el micro método <strong>de</strong>bido a que existen diferentes marcar comerciales <strong>de</strong> tubos<br />
<strong>de</strong> Wintrobe para el macro método con lo que se obtienen diferentes resultados <strong>de</strong>l<br />
hematocrito.<br />
c) La cantidad <strong>de</strong> plasma atrapado es mayor en el macro método dando valores más<br />
elevados.<br />
VALOR DE REFERENCIA.<br />
HOMBRES 46 a 56 %<br />
MUJERES 39 a 50 %<br />
0%<br />
100%<br />
Lector <strong>de</strong> microhematocrito<br />
4. RECUENTO CELULAR ERITROCITARIO<br />
INTRODUCCIÓN.<br />
El recuento <strong>de</strong> glóbulos en la sangre es una práctica habitual en el laboratorio clínico,<br />
en el cual se <strong>de</strong>termina el número <strong>de</strong> eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm 3 <strong>de</strong> sangre,<br />
con la ayuda <strong>de</strong> la cámara <strong>de</strong> Neubauer o hemocitómetro.<br />
La cámara <strong>de</strong> Neubauer o hemocitómetro es un grueso portaobjetos <strong>de</strong> vidrio, en el<br />
centro <strong>de</strong> su superficie se encuentra un cuadrado <strong>de</strong> 3 mm <strong>de</strong> lado dividido en 9 cuadros<br />
gran<strong>de</strong>s cada uno <strong>de</strong> 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el<br />
recuento <strong>de</strong> leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros más pequeños. El cuadro<br />
central esta dividido en 25 cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el<br />
recuento <strong>de</strong> eritrocitos y los marcados con P para plaquetas. Fig. (1)<br />
Cada uno <strong>de</strong> estos cuadros se divi<strong>de</strong> en 16 cuadros más pequeños dando un total <strong>de</strong> 400<br />
en el cuadro central. Fig.(2)<br />
Área total = 9 mm 2.<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadro marcado como L = 1 mm 2 .<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm 2<br />
Área total <strong>de</strong> los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm 2 .<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadrito marcado como “e” 0 0.0025 mm 2 .
L L 1<br />
E E<br />
P P<br />
8 mm E<br />
P P P<br />
2mm<br />
E E<br />
L L<br />
16<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
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Q.F.B<br />
e 0.05mm.<br />
Fig. (2) Amplificación <strong>de</strong> un cuadro <strong>de</strong> eritrocitos.<br />
mm
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
CUIDADOS DE LA CÁMARA.<br />
a. Deberán utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen<br />
superficie irregular.<br />
a. Se <strong>de</strong>be lavar la cámara con agua tibia o un paño suave empapado en alcohol.<br />
b. No se <strong>de</strong>berá tocar el rayado <strong>de</strong> la cámara con los <strong>de</strong>dos ya que manchan la cámara<br />
y pue<strong>de</strong> provocar errores <strong>de</strong> apreciación<br />
c. Evitar usar lienzos rígidos que puedan arañar el rayado sensible <strong>de</strong> la cámara.<br />
Tomarla únicamente por sus bor<strong>de</strong>s<br />
MÉTODO DE CONTEO.<br />
El conteo se inicia por la parte superior <strong>de</strong> izquierda a <strong>de</strong>recha y luego <strong>de</strong> <strong>de</strong>recha a<br />
izquierda sucesivamente, teniendo la precaución <strong>de</strong> contar las células que tocan una <strong>de</strong><br />
cualquiera <strong>de</strong> las tres líneas como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaución <strong>de</strong><br />
no contar una célula dos veces. Figura (3)<br />
.2 mm<br />
Fig. (3) Método <strong>de</strong> conteo, amplificación <strong>de</strong> un cuadro <strong>de</strong> eritrocitos.<br />
0.05 mm<br />
MATERIAL.<br />
1 Pipeta <strong>de</strong> Thoma para glóbulos rojos por equipo<br />
1 Cámara <strong>de</strong> Neubauer o Hemacitómetro por equipo<br />
1 Boquilla o micropipeteador por equipo<br />
Reactivos:<br />
1 frasco con 100ml. <strong>de</strong> Líquido diluyente <strong>de</strong> Gower para eritrocitos por sección<br />
PROCEDIMIENTO.<br />
a) Con la ayuda <strong>de</strong> la boquilla o el micropipeteador, se aspira sangre homogeneizada<br />
con la pipeta <strong>de</strong> Thoma para eritrocitos hasta la marca <strong>de</strong> 0.5<br />
b) Aspirar luego el líquido diluyente <strong>de</strong> eritrocitos hasta la marca 101.
18<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
c) Se <strong>de</strong>be <strong>de</strong> evitar la formación <strong>de</strong> burbujas. Agitar la pipeta suavemente para<br />
mezclar o bien mezcle por medio <strong>de</strong> agitador electrónico si es que cuenta con él.<br />
d) Eliminar <strong>de</strong> 4-5 gotas <strong>de</strong> la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la<br />
cámara <strong>de</strong> Neubauer previamente preparada.<br />
e) Dejarla reposar por dos minutos, colocarla bajo el objetivo seco fuerte (40x) y<br />
contar los eritrocitos presentes en los cinco cuadros marcados con la letra E, utilizando el<br />
método señalado.<br />
f) Una vez concluido el conteo, lavar la cámara con el agua <strong>de</strong> la llave, agua<br />
<strong>de</strong>stilada y finalmente con alcohol. Secar con un paño limpio, suavemente y utilizar jabón<br />
si es necesario.<br />
NOTA: Llenar ambos lados <strong>de</strong> la cámara <strong>de</strong> Neubauer, sacar un promedio <strong>de</strong> los<br />
conteos y calcular el número <strong>de</strong> eritrocitos 7 mm 3 multiplicando por el factor <strong>de</strong> 10000<br />
mm 3 Reportar el número <strong>de</strong> eritrocitos por milímetro cúbico <strong>de</strong> sangre.<br />
CÁLCULOS:<br />
El factor 10,000 esta dado por:<br />
- 1.5 que correspon<strong>de</strong> a la fracción <strong>de</strong> la cámara en la que se cuentan los eritrocitos (los 25<br />
cuadros centrales).<br />
- 1/10 es la profundidad <strong>de</strong> la cámara <strong>de</strong> Neubauer. 1/200 es la dilución realizada a la<br />
sangre con la pipeta <strong>de</strong> Thoma.<br />
( 1/5 ) ( 1/10 ) ! 1/200 ) = ( 1/19,000 mm 3 )<br />
Esto será valido en el caso <strong>de</strong> que la dilución inicial haya sido 1:200 y se cuenten los cinco<br />
cuadros marcados con la letra E.<br />
CONCENTRACIONES.<br />
El líquido diluyente <strong>de</strong> Gower para eritrocitos es isotónico y actúa como fijador para<br />
preservar la forma celular.<br />
VALORES DE REFERENCIA<br />
HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones / mm<br />
EN EL S.I<br />
3 o µl 5.5 a 6.3 x 10 12 /1<br />
MUJERES: 4.1 a 5.7 Millones / mm 3 o µl 4.1 a 5.7 x 10 12 1 mm<br />
/1<br />
3 = 1 µl<br />
5. VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO.<br />
Este parámetro nos indica el tamaño promedio <strong>de</strong> los eritrocitos en un paciente y se<br />
calcula <strong>de</strong> la siguiente manera.<br />
Hematocrito (Hto)<br />
VCM = ________________________________ x 10 = u 3<br />
# <strong>de</strong> eritrocitos / ul
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
La obtención <strong>de</strong> un VCM inferior a los valores <strong>de</strong> referencia, indicará la presencia<br />
<strong>de</strong> eritrocitos pequeños o microcíticos.<br />
La obtención <strong>de</strong> un VCM que cae entre los valores <strong>de</strong> referencia, indicará que se<br />
tienen eritrocitos <strong>de</strong> tamaño normal o normocitos.<br />
La obtención <strong>de</strong> un VCM mayor a los valores <strong>de</strong> referencia, indicará la presencia <strong>de</strong><br />
eritrocitos gran<strong>de</strong>s o macrocitos.<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
HOMBRES 84 a 95 u<br />
En el S. I.<br />
3 84 a 95 f1<br />
MUJERES 79 a 103 u 3 78 a 103 f1<br />
6. CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR.<br />
Este índice eritrocitario da una i<strong>de</strong>a <strong>de</strong> la coloración <strong>de</strong> los eritrocitos en base a su<br />
contenido <strong>de</strong> hemoglobina, ya que <strong>de</strong>termina la concentración promedio <strong>de</strong> hemoglobina en<br />
todos lo eritrocitos. Su <strong>de</strong>terminación se realiza <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />
Hemoglobina ( g/100 ml)<br />
CMHC = ___________________________________________ x 100 = g/dl<br />
Hematocrito (%)<br />
La obtención <strong>de</strong> una concentración media <strong>de</strong> hemoglobina corpuscular (CMHC)<br />
menor a los valores <strong>de</strong> referencia indicará la presencia <strong>de</strong> eritrocitos con un bajo contenido<br />
<strong>de</strong> hemoglobina o hipocrómicos.<br />
La obtención <strong>de</strong> un valor mayor o menor a los valores <strong>de</strong> referencia, indicará la<br />
presencia <strong>de</strong> eritrocitos hipercrómicos. Sin embargo <strong>de</strong>be <strong>de</strong> usarse rara vez este término,<br />
ya que el único eritrocito hipercrómico es el esferocito.<br />
Un valor <strong>de</strong> CMHC que cae entre los valores <strong>de</strong> referencia indicará la presencia <strong>de</strong><br />
eritrocitos con contenido normal <strong>de</strong> hemoglobina o normocrómicos.<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
HOMBRES. 32 a 34 g/dl<br />
En el S. I.<br />
9.85 a 21.10 m mol/1<br />
MUJERES. 30 a 32 g/dl 18.61 a 21.10 m mol/1<br />
7. HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA ( CMH ).<br />
Este último índice eritrocitario nos indica el promedio <strong>de</strong> hemoglobina en cada<br />
eritrocito y se calcula <strong>de</strong> la manera siguiente.<br />
Hemoglobina ( g/dl )<br />
CMH = _______________________________________ x 10 = pg<br />
# <strong>de</strong> eritrocitos / ul<br />
Es importante compren<strong>de</strong>r que las células microcíticas “no” son hipocrómicas en<br />
forma obligada, y los macrocitos “no” son por lo general hipercrómicos, esto hace que la
20<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
hemoglobina corpuscular media (CMH) sea <strong>de</strong>masiado inútil, ya que no toma en cuenta el<br />
tamaño <strong>de</strong> la célula-<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
EN HOMBRES Y MUJERES 27 a 31 pg (también en el S.I)<br />
8. FORMA DE REPORTAR LOS RESULTADOS.<br />
El diagnóstico <strong>de</strong> una anemia está basado en el historial clínico <strong>de</strong>l paciente, el examen<br />
físico y la investigación por parte <strong>de</strong>l laboratorio. El médico examinará el informe <strong>de</strong> los<br />
resultados proporcionados por el laboratorio, aquí el Químico toma una gran importancia,<br />
ya que en él cae la responsabilidad <strong>de</strong> ayudar a diagnosticar trastornos hematológicos en un<br />
paciente.<br />
Los datos más importantes que <strong>de</strong>be reportar el laboratorio en la biometría hemática son los<br />
siguientes:<br />
FECHA:___________________<br />
PACIENTE:_______________________________________________________________<br />
DOCTOR(A):______________________________________________________________<br />
EXAMEN:________________________________________________________________<br />
VALORES DE REFERENCIA<br />
RESULTADO HOMBRES MUJERES.<br />
ERITROCITOS (millones) m/ml 5.5 - 6.3 4.1 - 5.7<br />
HEMOGLOBINA (g/dL) 15 - 20 12.5 - 16.5<br />
HEMATOCRITO (%) 46 - 56 39 - 50<br />
HCM (pg) 27 - 34 27 - 34<br />
CmHb (%) 32- 34 30 - 34<br />
VCM mm 3 VGM (fl) 84- 95 78 - 103<br />
VSG (mm/hr) 0 - 7 0 - 13<br />
VALORES DE REFERENCIA<br />
RESULTADO HOMBRES MUJERES.<br />
RETICULOCITOS (%) 0.5 - 1.5 0.5- 1.5<br />
PLAQUETAS (x mm 3 ) ml 150,000 - 450,000<br />
LEUCOCITOS (x mm 3 ) ml 4,000 - 12000
21<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
FORMULA DIFERENCIAL CIFRAS RELATIVAS CIFRAS ABSOLUTAS<br />
(%) (Células/ µL)<br />
MIELOCITOS 0 0<br />
METAMIELOCITOS 0 – 2 10-500<br />
EN BAMDA 0 – 11 100-800<br />
SEGMENTADOS 40 – 74 2 000-6 000<br />
NEUTROFILLOS 40 – 85 1 500-7 000<br />
EOSINOFILOS 0 – 7 100 -200<br />
BASOFILOS 0 – 3 10-20<br />
LINFOCITOS 12 – 46 1 000 -4 200<br />
MONOCITOS 1 – 13 100-800<br />
OBSERVACIONES:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> eritrocitos:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> leucocitos:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> plaquetas:<br />
A T E N T A M E N T E<br />
_________________________________
22<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 4 CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIÓN DE<br />
EXTENDIDO SANGUÍNEO (TINCIÓN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES<br />
ABSOLUTOS Y RELATIVOS.<br />
OBJETIVO: El alumno realizará la cuenta <strong>de</strong> leucocitos y un extendido <strong>de</strong> sangre<br />
periférica para i<strong>de</strong>ntificar la morfología <strong>de</strong> cada una <strong>de</strong> las células y apren<strong>de</strong>rá los<br />
fundamentos <strong>de</strong> las tinciones y a obtener valores absolutos <strong>de</strong> cada uno d los<br />
leucocitos.<br />
1. CUENTA DE LEUCOCITOS<br />
INTRODUCCIÓN.<br />
El recuento <strong>de</strong> glóbulos en la sangre es una práctica habitual en el laboratorio clínico, en el<br />
cual se <strong>de</strong>termina el número <strong>de</strong> eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm 3 <strong>de</strong> sangre, con<br />
la ayuda <strong>de</strong> la cámara <strong>de</strong> Neubauer o hemacitómetro.<br />
La cámara <strong>de</strong> Neubauer o hemacitómetro es un grueso portaobjetos <strong>de</strong> vidrio, en el centro<br />
<strong>de</strong> su superficie se encuentra un cuadrado <strong>de</strong> 3 mm <strong>de</strong> lado dividido en 9 cuadros gran<strong>de</strong>s<br />
cada uno <strong>de</strong> 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento <strong>de</strong><br />
leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros más pequeños. El cuadro central esta<br />
dividido en 25 cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el recuento <strong>de</strong><br />
eritrocitos y los marcados con P para plaquetas. Fig. (1)<br />
Cada uno <strong>de</strong> estos cuadros se divi<strong>de</strong> en 16 cuadros más pequeños dando un total <strong>de</strong> 400 en<br />
el cuadro central. Fig.(2)<br />
Área total = 9 mm 2.<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadro marcado como L = 1 mm 2 .<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm 2<br />
Área total <strong>de</strong> los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm 2 .<br />
Área <strong>de</strong> cada cuadrito marcado como “e” 0 0.0025 mm 2 .<br />
CUIDADOS DE LA CÁMARA.<br />
2.1. Deberán utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen superficie<br />
irregular.<br />
2.2 Se <strong>de</strong>be lavar la cámara con agua tibia o un paño suave empapado en alcohol.<br />
2.3 No se <strong>de</strong>berá tocar el rayado <strong>de</strong> la cámara con los <strong>de</strong>dos ya que manchan la cámara y<br />
pue<strong>de</strong> provocar errores <strong>de</strong> apreciación<br />
2.4 Evitar usar lienzos rígidos que puedan arañar el rayado sensible <strong>de</strong> la cámara. Tomarla<br />
únicamente por sus bor<strong>de</strong>s<br />
MÉTODO DE CONTEO.<br />
El conteo se inicia por la parte superior <strong>de</strong> izquierda a <strong>de</strong>recha y luego <strong>de</strong> <strong>de</strong>recha a<br />
izquierda sucesivamente, teniendo la precaución <strong>de</strong> contar las células que tocan una <strong>de</strong><br />
cualquiera <strong>de</strong> las tres línea como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaución <strong>de</strong> no<br />
contar una célula dos veces. Figura (3)
L L 1<br />
E E<br />
P P<br />
8 mm E<br />
P P P<br />
.2 mm<br />
E E<br />
L L<br />
Fig. (3) Método <strong>de</strong> conteo, amplificación <strong>de</strong> un cuadro <strong>de</strong> leucocitos<br />
23<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
mm<br />
0.05 mm
MATERIAL:<br />
1 Pipeta <strong>de</strong> Thoma para glóbulos blancos por equipo<br />
1 Cámara <strong>de</strong> Neubauer o hemacitómetro por equipo<br />
1 Boquilla o micropipeteador por equipo<br />
1 Microscopio por equipo<br />
Reactivos:<br />
Diluyente para leucocitos (TURK)<br />
24<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PROCEDIMIENTO.<br />
a) Llenar <strong>de</strong> sangre homogenizada la pipeta <strong>de</strong> leucocitos hasta la marca 0.5<br />
aforando exactamente.<br />
b) Limpiar con papel absorbente el exterior <strong>de</strong> la pipeta.<br />
c) Aspirar líquido diluyente <strong>de</strong> leucocitos hasta la marca 11.<br />
d) Tapar los extremos <strong>de</strong> la pipeta y agitar manualmente. La agitación podrá hacerse<br />
con el agitador mecánico <strong>de</strong> pipetas si se cuenta con el.<br />
e) Limpiar la cámara, el cubreobjetos y colocar éste sobre aquella.<br />
f) Eliminar las cinco gotas <strong>de</strong> la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la<br />
cámara.<br />
g) Después <strong>de</strong> dos minutos observar a seco débil, 1/10x) localizar el área<br />
correspondiente para contar leucocitos (cuadros L ) , y proce<strong>de</strong>r a contarlos.<br />
h) El número <strong>de</strong> leucocitos contados en los cuadros gran<strong>de</strong>s se multiplican por el<br />
factor 50, don<strong>de</strong> el número <strong>de</strong> leucocitos por milímetro cúbico <strong>de</strong> sangre.<br />
i) Si existe leucopenia es <strong>de</strong>cir un número <strong>de</strong> leucocitos inferior a 2000, repetir la<br />
cuenta <strong>de</strong> acuerdo con las siguientes indicaciones.<br />
Llenar la pipeta con sangre hasta la marca 1 y aforar hasta 11 con el diluyente,<br />
llenar la cámara y contar nueve cuadros, el resultado se multiplica por 11.1; si las cifras<br />
son <strong>de</strong> 2000 a 4000 se hace una dilución 1:20, se cuentan nueve cuadros y se multiplica por<br />
22.2<br />
Si hay leucocitosis (más <strong>de</strong> 50000 leucocitos/ mm 3 ) se emplean pipetas <strong>de</strong> Thoma<br />
para eritrocitos, las diluciones son <strong>de</strong> 1/100 a 1:200.<br />
Con dilución 1:100, los factores <strong>de</strong> multiplicación serían 1000, 500, 333, 250 y 111,<br />
si se cuentan 1,2,3,4,y 9 cuadros <strong>de</strong> la cámara.<br />
Con dilución 1:200, los factores <strong>de</strong> multiplicación serán 2000, 1000,500, 222 si se<br />
cuentan 1,2,4, y 9 cuadros.<br />
CÁLCULOS.<br />
Para conocer el número <strong>de</strong> leucocitos por mm 3 <strong>de</strong> sangre se aplica la siguiente<br />
fórmula.<br />
Número <strong>de</strong> células contadas.<br />
Número <strong>de</strong> leucocitos / mm 3 = ______________________________________________<br />
Volumen<br />
Volumen = Dilución x profundidad <strong>de</strong> la cámara x el área contada.<br />
Las diluciones para leucocitos son 1:10, 1:20
La profundidad <strong>de</strong> la cámara es <strong>de</strong> 1/10 mm<br />
El área contada en leucocitos es: 4 mm 2 ( 4 cuadrados contados )<br />
Por ejemplo:<br />
Leucocitos contados 500<br />
Cuadros L utilizados 4<br />
Dilución 1:20<br />
Sustituyendo la formula:<br />
V = ( 1/20 ) ( 1:10 ) ( 4 ) = 4/200 = 1/50 mm 3<br />
25<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Número <strong>de</strong> células contadas. 500<br />
Leucocitos / mm 3 = ___________________________________ = _______<br />
Volumen 1<br />
_______<br />
50 mm 3<br />
En leucocitosis:<br />
Dilución realizada 1/100<br />
Profundidad <strong>de</strong> la cámara 1/10<br />
Cuadros utilizados 2<br />
Leucocitos contados 80<br />
Volumen = Dilución x profundidad x área contada.<br />
Volumen = ( 1/100 ) ( 1/10) ( 2 ) = 2/1000<br />
= 500 x 50 mm 3<br />
= 25,000 / mm 3<br />
Número <strong>de</strong> células contadas<br />
Número <strong>de</strong> Leucocitos/mm 3 = _________________________________<br />
Volumen<br />
80 80 x 1000<br />
= ______ = _______________<br />
2 2<br />
____<br />
1000<br />
80000<br />
= ___________ = 40000/ mm 3<br />
2
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
CONSIDERACIONES.<br />
El líquido diluyente <strong>de</strong> leucocitos lisa eritrocitos y es isotónica para los leucocitos.<br />
VALORES DE REFERENCIA.<br />
EN HOMBRES Y MUJERES: 4000 - 12000 Leucocitos/ mm 3<br />
EN EL SISTEMA INTERNACIONAL: 4 - 12 X 10 9 leucocitos/L.<br />
2. TINCIONES HEMATOLÓGICAS<br />
2.1. TINCION DE WRIGHT.<br />
El recuento diferencial es una parte importante <strong>de</strong> la valoración hematológica y<br />
consiste en reconocer las distintas varieda<strong>de</strong>s <strong>de</strong> glóbulos blancos y las posibles<br />
anormalida<strong>de</strong>s celulares en un frotis <strong>de</strong> sangre teñido con el colorante <strong>de</strong> Wright. Debido a<br />
que el colorante <strong>de</strong> Wright se trata <strong>de</strong> una solución <strong>de</strong> eosina y una mezcla <strong>de</strong> tiacinas que<br />
incluyen el azul <strong>de</strong> metileno, el citoplasma <strong>de</strong> las células se tiñen con el colorante ácido<br />
(eosina) ya que en él, se encuentran los componentes básicos <strong>de</strong> la célula, por otro lado, el<br />
núcleo <strong>de</strong> la célula se tiñe con los colorantes básicos (azul <strong>de</strong> metileno) ya que en el se<br />
encuentran los componentes ácidos <strong>de</strong> la célula.<br />
MATERIAL.<br />
1Puente <strong>de</strong> tinción por sección<br />
2 Portaobjetos por equipo<br />
1 Microscopio por equipo<br />
1 Contador <strong>de</strong> células por sección<br />
Agua <strong>de</strong>stilada.<br />
Aceite <strong>de</strong> inmersión.<br />
REACTIVOS.<br />
Colorante <strong>de</strong> Wright<br />
Buffer pH = 7.0<br />
Para el recuento diferencial el frotis no <strong>de</strong>berá ser tan fino no tan grueso <strong>de</strong> tal<br />
manera que las células estén juntas pero no apiladas. La extensión que se prepare <strong>de</strong>berá<br />
secarse inmediatamente.<br />
MÉTODOS PARA PREPARAR EXTENDIONES SANGUINEAS.<br />
1.- Método <strong>de</strong> los dos portaobjetos o <strong>de</strong> la cuña.<br />
a) Colocar la gota <strong>de</strong> sangre <strong>de</strong> un tamaño regular (2 a 3 mm <strong>de</strong> diámetro)<br />
aproximadamente a un centímetro <strong>de</strong>l extremo <strong>de</strong> un portaobjetos.<br />
b) Tomar otro portaobjetos con el <strong>de</strong>do índice y pulgar <strong>de</strong> la mano <strong>de</strong>recha.<br />
c) Colocar el bor<strong>de</strong> libre sobre la gota <strong>de</strong> sangre y <strong>de</strong>jar que esta se extienda a lo<br />
largo <strong>de</strong>l bor<strong>de</strong> libre. El segundo portaobjetos <strong>de</strong>berá hacer un ángulo <strong>de</strong> 30 a 45<br />
º con el primer portaobjetos.<br />
Con movimiento suave pero firme y a velocidad constante <strong>de</strong>splazar el segundo<br />
portaobjetos a lo largo <strong>de</strong>l primer portaobjetos.
27<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Es una buena extensión, los leucocitos no están <strong>de</strong>masiado juntos y los eritrocitos<br />
no están apilados. El secado <strong>de</strong> la extensión <strong>de</strong>be <strong>de</strong> hacerse con movimientos laterales y<br />
verticales repetidos al aire o con un ventilador. Marcar los frotis con lápiz graso o <strong>de</strong><br />
plomo para su correcta i<strong>de</strong>ntificación.<br />
2.- Método <strong>de</strong> los dos cubreobjetos. Es un método que requiere mayor práctica y no<br />
es tan usual.<br />
3.- Método <strong>de</strong> centrifugación. Es un método casi automatizado, brinda mejores<br />
resultados pero <strong>de</strong>bido a lo anterior no es tan utilizado comúnmente.<br />
4.- Método transversal. Es el más empleado en la actualidad y su técnica es la<br />
siguiente:<br />
1 2<br />
3 4
28<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Se coloca una gota <strong>de</strong> sangre en el bor<strong>de</strong> <strong>de</strong>l portaobjetos colocado horizontalmente, y se<br />
llena por capilaridad en su bor<strong>de</strong> inferior el otro portaobjetos colocado a 45 º, la sangre se<br />
extien<strong>de</strong> en forma transversal hacia el otro extremo <strong>de</strong>l portaobjetos, en el paso siguiente se<br />
unen ambos para que la sangre se extienda homogéneamente a lo ancho <strong>de</strong> la superficie <strong>de</strong>l<br />
fondo, <strong>de</strong>spués se <strong>de</strong>sliza el portaobjetos <strong>de</strong> arriba para retirar el exceso <strong>de</strong> sangre,<br />
quedando una película <strong>de</strong>lgada que se secará con movimientos vigorosos <strong>de</strong> arriba hacia<br />
abajo quedando la preparación lista para ser teñida; se contarán <strong>de</strong> 100 a 200 células si el<br />
número <strong>de</strong> leucocitos es <strong>de</strong> 2 000 - 10 000 leucocitos/mm 3 , y <strong>de</strong> 200 - 400 células si la<br />
cifra <strong>de</strong> leucocitos/ mm 3 es superior a 10 000.<br />
La lectura se hará con un microscopio <strong>de</strong> luz, realizando una observación primera a 40x<br />
para tener una panorámica <strong>de</strong> la distribución <strong>de</strong> las células, <strong>de</strong>spués a 100x para estudiara<br />
fondo la morfología <strong>de</strong> las células.<br />
FIJACIÓN.<br />
Es necesaria una fijación <strong>de</strong> la extensión sanguínea para evitar la pérdida <strong>de</strong><br />
muestra en el portaobjetos. Existen dos tipos <strong>de</strong> fijación.<br />
Química.- Ésta se hace cubriendo la extensión sanguínea por uno a dos minutos con<br />
metanol puro o alcohol absoluto, o bien, quince minutos en alcohol absoluto-éter<br />
1:1, también se pue<strong>de</strong> usar una solución <strong>de</strong> HgCl2 al 1 % o solución al 1 % <strong>de</strong><br />
formalina en alcohol.<br />
Calor.- Casi no se usa <strong>de</strong>bido a las alteraciones que causa en la muestra.<br />
Algunos colorantes fijan y tiñen a la vez como por ejemplo el colorante <strong>de</strong> Wright<br />
que contiene metanol como fijador, y existen así mismo otras soluciones fijadoras<br />
especiales.<br />
PROCEDIMIENTO<br />
a) Realice un frotis sanguíneo por el método transversal y se <strong>de</strong>ja secar al aire sobre<br />
el puente <strong>de</strong> tinción.<br />
b) Cubra la extensión con un exceso <strong>de</strong> colorante <strong>de</strong> Wright durante 2 minutos, esto<br />
tiene como finalidad evitar la evaporación <strong>de</strong>l colorante y la formación <strong>de</strong> precipitados.<br />
c) Transcurrido el tiempo, añada una cantidad igual <strong>de</strong> solución amortiguadora.<br />
d) Soplar suavemente sobre la superficie <strong>de</strong> la mezcla con la finalidad <strong>de</strong><br />
homogenizar.<br />
e) Se <strong>de</strong>ja reposar exactamente 4 minutos.<br />
f) Sin tirar la mezcla, lave con agua <strong>de</strong>stilada hasta que el agua que escurra no lleve<br />
colorante.<br />
g) Secar al aire y añadir una gota <strong>de</strong> aceite <strong>de</strong> inmersión para observar en el<br />
microscopio a inmersión.<br />
h) Para la fórmula diferencial <strong>de</strong>be <strong>de</strong> contarse 100 células y <strong>de</strong>berá hacerse la<br />
diferenciación entre monocitos, linfocitos, basófilos, eosinófilos, neutrófilos, y<br />
simultáneamente, ver el número <strong>de</strong> mielocitos, bandas, metamielocitos, y segmentados que<br />
existen entre neutrófilos, si hay otro tipo <strong>de</strong> células como por ejemplo blastos, <strong>de</strong>berán<br />
incluirse en el total.
CONCLUSIONES:<br />
29<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Se <strong>de</strong>ben obtener extensiones <strong>de</strong> sangre bien niveladas para un trabajo exacto.<br />
Los portaobjetos <strong>de</strong>ben estar perfectamente limpios y sin grasa para que no se<br />
<strong>de</strong>formen las células.<br />
Si el frotis se realiza <strong>de</strong>l pulpejo <strong>de</strong>l <strong>de</strong>do, su elaboración <strong>de</strong>be ser rápida antes <strong>de</strong><br />
que inicie la coagulación y sin exprimir el <strong>de</strong>do para evitar la hemodilución.<br />
En casos graves <strong>de</strong> anemia hay que preparar extensiones <strong>de</strong>lgadas y secarlas al<br />
momento.<br />
El bor<strong>de</strong> <strong>de</strong>l portaobjetos extensor <strong>de</strong>be <strong>de</strong> ser liso para evitar zonas con abundantes<br />
leucocitos.<br />
METODO DE CONTEO:<br />
El recuento diferencial se realiza recorriendo el largo <strong>de</strong> la preparación <strong>de</strong> izquierda a<br />
<strong>de</strong>recha hasta contar 100 células, i<strong>de</strong>ntificando cada una <strong>de</strong> ellas, si no basta un solo<br />
recorrido, se elige un nuevo campo y se hace completar el número <strong>de</strong> células. (Fig. 12)<br />
Fig. ( 12 )<br />
2.2 TINCION MAY GRÜNWALD-GIEMSA:<br />
Es una tinción que también se usa <strong>de</strong> rutina en muchos laboratorios, pero es un poco más<br />
tardada, sin embargo mediante esta tinción se pue<strong>de</strong>n diferenciar mucho mejor las<br />
estructuras intercelulares. Contiene azur II-eosina y eosinato azul <strong>de</strong> metileno aunque<br />
actualmente el colorante se ven<strong>de</strong> por separado el mercado por lo que seguiremos la<br />
siguiente técnica.<br />
PROCEDIMIENTO:<br />
a) Cubrir la extensión con 10 gotas a 15 gotas <strong>de</strong> May Grünwald tres minutos.<br />
b) Añadir la misma cantidad <strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada procurando que se mezclen por un<br />
minuto.<br />
c) Escurrir el líquido y " sin previo lavado " añadir la solución diluida <strong>de</strong> Giemsa<br />
recién preparada <strong>de</strong>jándola actuar por 30 min.<br />
d) Lavar, secar y observar a inmersión.
2.4 TINCION DE AZUL DE PRUSIA:<br />
30<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Se utiliza para la i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> gránulos <strong>de</strong> hierro (Fe) en el citoplasma <strong>de</strong> los eritrocitos<br />
que se presentan en casos <strong>de</strong> ciertas anemias refractarias, <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> una esplenectomía u<br />
otros casos.<br />
Los gránulos <strong>de</strong> hierro no están unidos al grupo heme sino a la apoferritina (proteína)<br />
constituyendo a la ferritina (en forma <strong>de</strong> gránulos). En médula ósea se presentan con mayor<br />
frecuencia en el caso <strong>de</strong> los normoblastos aunque recor<strong>de</strong>mos que su presencia es normal<br />
<strong>de</strong>bido a la síntesis <strong>de</strong> la hemoglobina. Estos gránulos no se observan en casos <strong>de</strong> anemias<br />
por <strong>de</strong>ficiencia <strong>de</strong> hierro. Los gránulos aparecen <strong>de</strong> color azul.<br />
PROCEDIMIENTO PARA EXTENSIONES DE SANGRE PERIFÉRICA:<br />
a ) Preparar una extensión sanguínea fina, secarla al aire.<br />
b) Fijar por 5 a 10 min. en metanol absoluto, secar.<br />
c) Introducir la extensión en una mezcla <strong>de</strong> K3 Fe (CN)6 -HCl 1:1 por 10<br />
minutos.<br />
d) Lavar con agua <strong>de</strong>stilada.<br />
e) Contrastar con eosina acuosa al 0.1 % por uno a dos minutos o solución <strong>de</strong><br />
safranina,<br />
f) Lavar, secar al aire y observar a inmersión.<br />
PROCEDIMIENTO PARA EXTENSIONES DE MÉDULA ÓSEA:<br />
1. Aspirar 3.0 ml <strong>de</strong> una solución e EDTA (1 mg/ml) en una jeringa <strong>de</strong> plástico, tomar<br />
<strong>de</strong> 20 ml junto con 3.0 ml <strong>de</strong> sangre y médula ósea aspirados.<br />
2. Depositar el contenido <strong>de</strong> la jeringa en un vidrio e reloj gran<strong>de</strong> e i<strong>de</strong>ntificar las<br />
partículas <strong>de</strong> médula ósea.<br />
3. Exten<strong>de</strong>r las partículas <strong>de</strong> médula ósea.<br />
4. Fijar la extensión en metanol por 10 min.<br />
5. Lavar en agua <strong>de</strong>stilada.<br />
6. Contrastar con eosina acuosa al 0.1 % o solución <strong>de</strong> safranina por uno o dos<br />
minutos.<br />
7. Lavar con agua <strong>de</strong>stilada, secar y observar a inmersión.<br />
2. 5 FORMA DE REPORTAR.<br />
VALOR OBTENIDO * VALOR DEW REF. (%)<br />
MIELOCITOS ________________ 0<br />
METAMIELOCITOS. ________________ 0<br />
EN BANDA. ________________ 0 - 11<br />
SEGEMTNADO. ________________ 40 - 74<br />
NEUTROFILOS. ________________ 40 85<br />
EOSINOFILOS ________________ 0 - 7<br />
BASOFILOS. ________________ 0 - 3<br />
LINFOCITOS. ________________ 12 - 46<br />
MONOCITOS. ________________ 1 - 13
31<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 5 CUENTA DE RETICULOCITOS Y FRAGILIDAD<br />
ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTÓNICAS<br />
OBJETIVO: El alumno apren<strong>de</strong>rá a realizar la cuenta <strong>de</strong> reticulocitos y su<br />
importancia en la valoración <strong>de</strong> la eritropoyesis en la médula ósea.<br />
1. CUENTA DE RETICULOCITOS.<br />
INTRODUCCIÓN:<br />
Los eritrocitos anucleados que contienen organelos y un sistema ribosómico extenso para<br />
sintetizar hemoglobina, se conocen como reticulocitos, los cuales son retenidos <strong>de</strong> dos a<br />
tres días en médula ósea y <strong>de</strong>spués permanecen otro día en la circulación periférica,<br />
indicando la actividad eficaz <strong>de</strong> la médula ósea para producir eritrocitos.<br />
MATERIAL.<br />
2 Tubos <strong>de</strong> ensayo por equipo<br />
1 Baño maría por equipo<br />
1 Termómetro por equipo<br />
Aceite <strong>de</strong> inmersión.<br />
1 Microscopio por equipo<br />
REACTIVOS:<br />
Azul cresil brillante<br />
PROCEDIMIENTO:<br />
1. En el tubo <strong>de</strong> ensaye colocar 2 gotas <strong>de</strong> azul <strong>de</strong> cresil brillante con dos gotas <strong>de</strong><br />
sangre homogenizada y mezclar nuevamente.<br />
2. Incubar la mezcla por 10 min. en el baño María a 37 º C<br />
3. Transcurrido el tiempo preparar una extensión por el método transversal <strong>de</strong> la<br />
siguiente manera:<br />
Coloque una gota <strong>de</strong> la siguiente preparación <strong>de</strong> 2 a 3 mm <strong>de</strong> diámetro en el<br />
bor<strong>de</strong> <strong>de</strong> un portaobjetos.<br />
Coloque el otro portaobjetos sobre la gota en un ángulo <strong>de</strong> 45ª y <strong>de</strong>je que se<br />
distribuya por capilaridad.<br />
Extienda la sangre en forma transversal hacia el otro extremo <strong>de</strong> portaobjetos.<br />
Una ambos portaobjetos para que la sangre se extienda homogéneamente a lo<br />
ancho <strong>de</strong> la superficie.<br />
Deslice el portaobjetos <strong>de</strong> arriba para retirar el exceso <strong>de</strong> sangre quedando una<br />
película <strong>de</strong>lgada.<br />
Secar y observar a inmersión.<br />
4. Los reticulocitos s observarán <strong>de</strong> color azul, con material reticular citoplasmático <strong>de</strong><br />
color azul intenso.<br />
5. Contar 1000 eritrocitos y los reticulocitos que se encuentran entre ellos, o bien,<br />
contar el número <strong>de</strong> reticulocitos que hay en 10 campos
CALCULOS.<br />
32<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Número <strong>de</strong> reticulocitos contados<br />
% <strong>de</strong> reticulocitos = ________________________________________________ x 100<br />
Número <strong>de</strong> células contadas.<br />
Número <strong>de</strong> reticulocitos contados<br />
% <strong>de</strong> reticulocitos = _________________________________________________<br />
Número <strong>de</strong> campos recorridos (10)<br />
% <strong>de</strong> reticulocitos.<br />
No. absoluto <strong>de</strong> restis. = ________________________ ( Número <strong>de</strong> eritrocitos / mm 3 ).<br />
100<br />
PRECAUCIONES:<br />
Agregar la cantidad <strong>de</strong> sangre y colorante indicadas para evitar dificultad al<br />
examinar las preparaciones.<br />
Asegurarse que las células en el frotis se encuentran distribuidas homogéneamente<br />
para evitar que los campos tengan un número confuso <strong>de</strong> eritrocitos.<br />
No se <strong>de</strong>be <strong>de</strong> contar dos veces la misma célula.<br />
La sangre a utilizar <strong>de</strong>be mezclarse perfectamente para no alterar el resultado.<br />
VENTAJAS:<br />
Es un método económico.<br />
La preparación <strong>de</strong>l complejo RNA-colorante no requiere temperatura estrictamente<br />
controlada.<br />
El método utilizado para la realización <strong>de</strong>l frotis asegura una distribución más<br />
uniforme que cualquier otro método.<br />
DESVENTAJAS:<br />
Debido a número <strong>de</strong> eritrocitos que se <strong>de</strong>ben <strong>de</strong> contar el error es relativamente<br />
gran<strong>de</strong>.<br />
Si no se eligen a<strong>de</strong>cuadamente los campos se pue<strong>de</strong>n contar un mayor o menor<br />
número <strong>de</strong> reticulocitos.<br />
VALOR DE REFERENCIA.<br />
VALOR RELATIVO. EN EL S.I.<br />
HOMBRES Y MUJERES 0.5 a 1.5 % 0.005 a 0.015
2. FRAGILIDAD A LAS SOLUCIONES HIPOTÓNICAS<br />
33<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
FUNDAMENTO: Al estar los eritrocitos a concentraciones cada vez menores <strong>de</strong> sal, estos<br />
se van llenando con agua y se lisan. Eritrocitos que tengan una estructura <strong>de</strong>fectuosa <strong>de</strong> su<br />
membrana, se lisaran primero o antes <strong>de</strong>l testigo que tiene una estructura normal. Éste<br />
análisis es parte <strong>de</strong> un estudio para anemias hemolíticas hereditarias.<br />
ESPECÍMEN.<br />
De 4 a 5ml <strong>de</strong> sangre con EDTA con anticoagulante al 7.5%. Debe tomarse un testigo para<br />
la buena interpretación <strong>de</strong> los resultados.<br />
REACTIVOS Y EQUIPO:<br />
Solución salina (cloruro <strong>de</strong> sodio) al 0.85% y 0.9%, espectrofotómetro, tubos y pipetas.<br />
TÉCNICA:<br />
1. En una gradilla poner 15 tubos <strong>de</strong> 15 x 100mm. En el primero pipetear 2ml <strong>de</strong><br />
solución salina, en el segundo 2.5ml, aumentar 0.5ml en cada tubo, en el tubo 14<br />
poner 8.5ml <strong>de</strong> solución salina solamente, en el tubo 15 poner 8.5ml <strong>de</strong> solución<br />
salina al 9.0%.<br />
2. Completar a 8.5ml. el volumen <strong>de</strong> cada tubo con agua <strong>de</strong>stilada <strong>de</strong>sionizada. La<br />
concentración final <strong>de</strong> NaCl y los volúmenes se ven en la siguiente tabla:<br />
TUBO SOL. SALINA (ml) H2O CONC. NaCl (%)<br />
1 2.0 6.5 0.20<br />
2 2.5 6.0 0.25<br />
3 3.0 5.5 0.30<br />
4 3.5 5.0 0.35<br />
5 4.0 4.5 0.40<br />
6 4.5 4.0 0.45<br />
7 5.0 3.5 0.50<br />
8 5.5 3.0 0.55<br />
9 6.0 2.5 0.60<br />
10 6.5 2.0 0.65<br />
11 7.0 1.5 0.70<br />
12 7.5 1.0 0.75<br />
13 8.0 0.5 0.80<br />
14 8.5 0.0 0.85<br />
15 8.5 0,0 0.90<br />
3. Colocar en la misma gradilla y por <strong>de</strong>lante <strong>de</strong> los tubos anteriores, dos series <strong>de</strong><br />
tubos <strong>de</strong> 15 x 100mm. Numerar los tubos <strong>de</strong>l 1 al 12 y marcar T para el testigo y P<br />
para el problema.
34<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
4. Pasar <strong>de</strong> la serie <strong>de</strong> tubos <strong>de</strong> la mezcla con agua y solución salina, 3ml al tubo<br />
correspondiente.<br />
5. Con una pipeta Pasteur, poner una gota <strong>de</strong> sangre en cada tubo, la sangre <strong>de</strong>berá<br />
estar mezclándose continuamente antes <strong>de</strong> agregar la gota (T para testigo, P para<br />
problema).<br />
6. Agitar cada tubo con las manos, con golpes laterales. Dejar los tubos en reposo a<br />
temperatura ambiente durante 30-60min.<br />
7. Centrifugar los tubos a 1500rpm, durante 3 minutos, cuidando <strong>de</strong> no darle a los<br />
tubos movimientos bruscos <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> centrifugar.<br />
8. Leer tanto en la serie testigo y en la problema, en que tubo se inicia la hemólisis<br />
(hemólisis inicial) y en cual ya no existe el botón <strong>de</strong> eritrocitos (hemólisis<br />
completa). Ver en el cuadro anterior a que concentración <strong>de</strong> NaCl pertenece, tanto<br />
la hemólisis inicial como la completa.<br />
Ejemplo:<br />
HEMÓLISIS INICIAL HEMÓLISIS FINAL<br />
TESTIGO 0.50% 0.30%<br />
PROBLEMA 0.60% 0.45%<br />
VALORES DE REFERENCIA: 0.45% - 0.50% 0.30% - 0.40%<br />
Si se requiere ser más preciso, pue<strong>de</strong> leerse en el espectrofotómetro a 420nm. La<br />
absorbancia y graficar la hemólisis como en las graficas anexas. Usar solución salina como<br />
blanco. Gráfica <strong>de</strong> preferencia el porcentaje <strong>de</strong> hemólisis contra la concentración en gramos<br />
(% <strong>de</strong> NaCl).<br />
120<br />
100<br />
80<br />
60<br />
40<br />
20<br />
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
35<br />
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 6 CITOMETRÍA HEMÁTICA COMPLETA DE FORMA<br />
MANUAL<br />
OBJETIVO: El alumno realizará una citometría hemática completa en forma manual<br />
e interpretará los resultados obtenidos, <strong>de</strong>tectando posibles causas <strong>de</strong> error en sus<br />
resultados.<br />
REPORTE DE RESULTADOS:<br />
FECHA: ___________________<br />
PACIENTE: ______________________________________________________________<br />
DOCTOR(A): _____________________________________________________________<br />
EXAMEN: _______________________________________________________________<br />
VALORES DE REFERENCIA<br />
RESULTADO HOMBRES MUJERES.<br />
Eritrocitos (millones) m/ml 5.5 - 6.3 4.1 - 5.7<br />
Hemoglobina (g/dL) 15 - 20 12.5 - 16.5<br />
Hematócrito (%) 46 - 56 39 - 50<br />
HCM (pg) 27 - 34 27 - 34<br />
CmHb (%) 32- 34 30 - 34<br />
VCM mm 3 VGM (fl) 84- 95 78 - 103<br />
VSG (mm/hr) 0 - 7 0 - 13<br />
VALORES DE REFERENCIA<br />
RESULTADO HOMBRES MUJERES<br />
Reticulocitos (%) 0.5 - 1.5 0.5- 1.5<br />
Plaquetas (x mm 3 ) ml 150,000 - 450,000<br />
Leucocitos (x mm 3 ) ml 4,000 - 12000
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
FORMULA DIFERENCIAL RESULTADOS CIFRAS RELATIVAS<br />
(%) ( % )<br />
MIELOCITOS 0<br />
METAMIELOCITOS 0 – 2<br />
EN BAMDA 0 – 11<br />
SEGMENTADOS 40 – 74<br />
NEUTROFILLOS 40 – 85<br />
EOSINOFILOS 0 – 7<br />
BASOFILOS 0 – 3<br />
LINFOCITOS 12 – 46<br />
MONOCITOS 1 – 13<br />
FORMULA DIFERENCIAL RESULTADOS CIFRAS ABSOLUTAS<br />
(Células/ µL) (Células/ µL)<br />
MIELOCITOS 0<br />
METAMIELOCITOS 10-500<br />
EN BAMDA 100-800<br />
SEGMENTADOS 2 000-6 000<br />
NEUTROFILLOS 1 500-7 000<br />
EOSINOFILOS 100 -200<br />
BASOFILOS 10-20<br />
LINFOCITOS 1 000 -4 200<br />
MONOCITOS 100-800<br />
OBSERVACIONES:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> eritrocitos:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> leucocitos:<br />
Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> plaquetas:<br />
A T E N T A M E N T E<br />
_________________________________
PRÁCTICA No. 7 CITOMETRÍA HEMÁTICA AUTOMATIZADA.<br />
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
OBJETIVO: El alumno realizará una citometría hemática por métodos<br />
automatizados y hará la interpretación <strong>de</strong> sus resultados<br />
W. Coulter <strong>de</strong>scribió su método "El instrumento emplea un sistema <strong>de</strong> medición no óptico<br />
que provee un rango <strong>de</strong> medición que exce<strong>de</strong> las 6.000 células individuales por segundo<br />
con un intervalo <strong>de</strong> conteo <strong>de</strong> 15 segundos. Una suspensión <strong>de</strong> células sanguíneas es pasada<br />
a través <strong>de</strong> un pequeño orificio simultáneamente con una corriente eléctrica. Las células<br />
sanguíneas individuales pasando a través <strong>de</strong>l orificio producen un cambio <strong>de</strong> impedancia<br />
(resistencia) en el orificio el cual está <strong>de</strong>terminado por el tamaño <strong>de</strong> la célula. El sistema<br />
cuenta las células individuales y provee distribución <strong>de</strong> tamaños. El número <strong>de</strong> células<br />
contadas por muestra es aproximadamente 100 veces mayor que los recuentos<br />
microscópicos, reduciendo el error estadístico aproximadamente 10 veces"(1)<br />
• El Coulter Counter Mo<strong>de</strong>l S fue el primer instrumento que <strong>de</strong> manera automática<br />
procesó datos multiparamétricos en sangre.<br />
• El número <strong>de</strong> pulsos eléctricos indica la cantidad <strong>de</strong> partículas que pasan a través<br />
<strong>de</strong> la apertura y el tamaño <strong>de</strong> los pulsos es proporcional al volumen <strong>de</strong> las<br />
partículas(2,3,4,5)<br />
• Los contadores mo<strong>de</strong>rnos aún siguen usando este método, el cual es el método <strong>de</strong><br />
referencia para recuentos <strong>de</strong> células
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
• Los contadores COULTER realizan este recuento por triplicado para eritrocitos,<br />
leucocitos y plaquetas<br />
• Este sistema es actualmente el método <strong>de</strong> referencia para el recuento <strong>de</strong> células y es<br />
usado por todos los fabricantes <strong>de</strong> contadores celulares<br />
Algunas limitaciones <strong>de</strong>l Método<br />
Las limitaciones <strong>de</strong> este método están relacionadas con los tipos <strong>de</strong> partículas a medir,<br />
como condición básica las partículas en estudio <strong>de</strong>ben ser menos conductoras <strong>de</strong><br />
electricidad que el medio en que están disueltas, el tamaño <strong>de</strong> las partículas a medir <strong>de</strong>be<br />
estar entre el 2 y el 60 % <strong>de</strong> el diámetro <strong>de</strong> la apertura<br />
¿Como se diferencian los Eritrocitos, Leucocitos y Plaquetas?<br />
Los sistemas COULTER poseen 2 baños, uno <strong>de</strong> eritrocitos y otro <strong>de</strong> leucocitos, en el baño<br />
<strong>de</strong> eritrocitos se encuentra una apertura <strong>de</strong> 50µm y en el <strong>de</strong> los leucocitos otra <strong>de</strong> 100µm<br />
En cada apertura se realizan 3 recuentos <strong>de</strong> 4 segundos y se obtiene el promedio (en el caso<br />
<strong>de</strong> STKS y GEN-S, estos poseen 3 aperturas <strong>de</strong> eritrocitos y 3 <strong>de</strong> leucocitos por lo que la<br />
lectura sólo dura 4 segundos y se obtiene el promedio <strong>de</strong> las 3 aperturas)<br />
En el baño <strong>de</strong> los eritrocitos el sistema i<strong>de</strong>ntifica los eritrocitos como aquellas partículas<br />
que poseen un volumen igual o mayor que 36 fL (femtolitro), en este mismo baño se realiza<br />
el recuento <strong>de</strong> plaquetas las cuales tienen un volumen entre 2 y 20 fL, en los contadores<br />
COULTER si existe un recuento pequeño <strong>de</strong> plaquetas, el tiempo <strong>de</strong> recuento se extien<strong>de</strong><br />
por 4 segundos más, a fin <strong>de</strong> tener un mayor valor estadístico.<br />
En el baño <strong>de</strong> leucocitos posterior a la dilución con diluyente isotónico, se aplica agente<br />
lisante, el cual <strong>de</strong>struye la membrana citoplasmática <strong>de</strong> eritrocitos y leucocitos,<br />
permaneciendo los núcleos intactos. Es así que las partículas que midan 35 fL o más son<br />
contadas como leucocitos. Hay que hacer notar que los núcleos <strong>de</strong> eritroblastos si existiesen<br />
también son contados, por lo que si el instrumento señala sospecha <strong>de</strong> su presencia se <strong>de</strong>ben<br />
buscar en el frotis y <strong>de</strong> tener un número consi<strong>de</strong>rable, se <strong>de</strong>be corregir el recuento <strong>de</strong><br />
leucocitos.<br />
Posterior al recuento <strong>de</strong> leucocitos y utilizando la reacción química <strong>de</strong>l lisante con la<br />
hemoglobina libre en la mezcla, se mi<strong>de</strong> un complejo químico estable a 525 nm, el cual<br />
<strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong>l instrumento, pue<strong>de</strong> ser realizado en el mismo baño o en una cubeta <strong>de</strong><br />
flujo especialmente diseñada.<br />
Consecuentemente los parámetros medidos son: Eritrocitos (RBC), Leucocitos (WBC),<br />
Plaquetas (PLT) y Hemoglobina (Hgb)<br />
Los parámetros <strong>de</strong>rivados <strong>de</strong> las mediciones <strong>de</strong> volumen: Volumen corpuscular medio<br />
(VCM), Ancho <strong>de</strong> distribución eritrocitaria (ADE) y Volumen plaquetario medio (VPM)<br />
Los parámetros calculados son: Hematocrito (Hct), Hemoglobina corpuscular media<br />
(HCM) y concentración corpuscular media (CHCM<br />
¿Como se obtienen los histogramas <strong>de</strong> leucocitos, eritrocitos y plaquetas?<br />
Como se mencionaba anteriormente el analizador mantiene una estadística <strong>de</strong> los<br />
volúmenes celulares, y luego realiza una distribución <strong>de</strong> cantidad relativa versus volumen<br />
<strong>de</strong> estas tres poblaciones, la separación <strong>de</strong> volúmenes se hace con una resolución <strong>de</strong> 256<br />
canales para cada parámetro
40<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No, 8 SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIÓN DE HISTOGRAMAS<br />
OBJETIVO: El alumno conocerá las diferentes distribuciones <strong>de</strong> células en los<br />
histogramas para apren<strong>de</strong>r a interpretarlos correctamente.
42<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 9 CITOMETRÍA HEMÁTICA Y SU INTERPRETACIÓN EN<br />
DIVERSAS PATOLOGÍAS<br />
OBJETIVO: El alumno apren<strong>de</strong>rá a interpretar y correlacionar la alteración <strong>de</strong> los<br />
parámetros <strong>de</strong> la citometría hemática con diversas patologías.<br />
INTRODUCCIÓN<br />
La anemia es una alteración causada por disminución <strong>de</strong>l número <strong>de</strong> glóbulos rojos y<br />
disminución <strong>de</strong> la hemoglobina bajo los parámetros estándares. Rara vez se registra en<br />
forma in<strong>de</strong>pendiente una <strong>de</strong>ficiencia <strong>de</strong> uno solo <strong>de</strong> estos factores. Los rangos <strong>de</strong><br />
normalidad son muy variables en cada población, <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong> factores ambientales<br />
(nivel sobre el mar) y geográficas. A nivel <strong>de</strong>l mar encontraremos valores mínimos, y a<br />
gran altura los valores <strong>de</strong>berán ser más altos (la menor presión parcial <strong>de</strong> O2 obliga al<br />
organismo a optimizar su transporte). A<strong>de</strong>más, vemos variaciones <strong>de</strong> sexo, observando<br />
valores menores en mujeres (posiblemente por la pérdida <strong>de</strong> eritrocitos y contenido<br />
sanguíneo en cada ciclo menstrual). En general pue<strong>de</strong> establecerse como normal para un<br />
hombre un hematocrito entre 40 y 50%, hemoglobina entre 13 y 18 g%, y para una mujer:<br />
hematocrito entre 37 y 40%, y hemoglobina entre 12 y 16 g%. Los síntomas y signos <strong>de</strong> la<br />
anemia se correlacionan con su intensidad, su rapi<strong>de</strong>z <strong>de</strong> instalación y el sitio don<strong>de</strong> se<br />
produce. En cuanto a su rapi<strong>de</strong>z <strong>de</strong> instalación pue<strong>de</strong> ser aguda o crónica, siendo la primera<br />
más dramática, ya que la crónica permite una paulatina adaptación. Otros factores<br />
influyentes en el cuadro sintomático son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y<br />
respiratorio.<br />
Los síntomas que se observan en la anemia aguda se <strong>de</strong>nominan síndrome<br />
anémico, e incluyen: pali<strong>de</strong>z, astenia, adinamia, palpitaciones y disnea <strong>de</strong> esfuerzo.<br />
Frecuentemente y sobre todo en las anemias severas se observa esplenomegalia,<br />
hepatomegalia, petequias, equimosis, ictericia. También pue<strong>de</strong> incluir síntomas propios <strong>de</strong><br />
otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia, disnea <strong>de</strong> esfuerzo marcada, angor,<br />
claudicación intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia, anorexia, diarrea) o<br />
neuropsiquiátrico (parestesias, mareos, <strong>de</strong>presión, cambios <strong>de</strong> carácter como irritabilidad,<br />
mal humor). Para ser capaz <strong>de</strong> tratar exitosamente un síndrome anémico, <strong>de</strong>be<br />
caracterizarse, y establecerse su etiología, y para ellos se be<strong>de</strong> estudiar a fondo las<br />
características <strong>de</strong> los glóbulos rojos, <strong>de</strong> los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan<br />
en la sangre mediante un hemograma, y las características <strong>de</strong> las series hematopoyéticas<br />
mediante un mielograma. Éste no es indispensable, generalmente un médico capacitado<br />
logra clasificar una anemia sólo con el cuadro sindromático y el hemograma. De acuerdo a<br />
todos los factores mencionados, las anemias pue<strong>de</strong>n clasificarse en diferentes grupos.
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 10 OBSERVACIÓN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS<br />
MICROCÍTICAS, NORMOCÍTICAS Y MACROCÍTICAS.<br />
OBJETIVO: El alumno revisará las alteraciones morfológicas que se presentan en los<br />
eritrocitos en las anemias microcíticas, normocíticas y macrocíticas.<br />
INTRODUCCIÓN:<br />
La anemia pue<strong>de</strong> <strong>de</strong>finirse como una disminución <strong>de</strong> los eritrocitos, hemoglobina y<br />
hematocrito, sin embargo no se consi<strong>de</strong>ra como una enfermedad, sino más bien como la<br />
expresión <strong>de</strong> un trastorno o enfermedad subyacente. Las primeras manifestaciones<br />
muestran algunos síntomas como <strong>de</strong>bilidad, hipoxia, fatiga, cefalea, vértigo, todo esto<br />
<strong>de</strong>bido a la falta <strong>de</strong> oxigeno. Existen varias formas <strong>de</strong> clasificar a las anemias, una <strong>de</strong> ellas<br />
es, utilizando los índices eritrocitarios, entre éstas tenemos a la anemia microcítica<br />
hipocrómica, normocítica normocrómica y las macrociticas.<br />
1. ANEMIA MICROCITICA HIPOCROMICA.<br />
Es una <strong>de</strong> las más comunes en la actualidad, se caracteriza porque el volumen corpuscular<br />
medio (VCM) y la concentración media <strong>de</strong> hemoglobina (CMHC) son menores a los<br />
valores <strong>de</strong> referencia, por tanto en un frotis <strong>de</strong> sangre periférica el eritrocito es menor en<br />
tamaño, presenta un halo central <strong>de</strong> gran tamaño y el grado <strong>de</strong> poiquilocitosis (cambios <strong>de</strong><br />
la forma) <strong>de</strong>pen<strong>de</strong> <strong>de</strong> la gravedad <strong>de</strong>l paciente.<br />
Las causas que dan origen a este pa<strong>de</strong>cimiento son:<br />
Deficiencia en la ingestión <strong>de</strong> hierro.<br />
Una pérdida excesiva <strong>de</strong> sangre.<br />
Mala absorción <strong>de</strong>l hierro.<br />
Defectos <strong>de</strong> maduración citoplasmática.<br />
2. ANEMIA NORMOCITICA NORMOCROMICA.<br />
Esta se caracteriza porque el número <strong>de</strong> eritrocitos, la hemoglobina y el hematocrito<br />
disminuyen proporcionalmente, por lo tanto, el frotis <strong>de</strong> sangre periférica se observa<br />
normal ya que el VCM y CMHC se encuentran <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> los valores <strong>de</strong> referencia.<br />
Este tipo <strong>de</strong> anemia pue<strong>de</strong> aparecer en las siguientes condiciones:<br />
Poco <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> una hemorragia masiva.<br />
En el <strong>de</strong>scenso <strong>de</strong> la producción <strong>de</strong> sangre, por ejemplo en las anemias aplásticas<br />
(por agentes químicos, uremia, radiaciones, causas <strong>de</strong>sconocidas, tejido maligno en<br />
médula ósea.<br />
Anemias hemolíticas (ya que por lo general son normocíticas normocrómicas).<br />
En el aumento <strong>de</strong>l volumen sanguíneo (principalmente en el embarazo).
3. ANEMIAS MACROCITICAS.<br />
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Las anemias macrocíticas se caracterizan porque el VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO<br />
(VCM) es mayor al <strong>de</strong> referencia, dando origen a eritrocitos gran<strong>de</strong>s. Esta anemia se<br />
clasifica en dos grupos, las que se asocian con un tipo <strong>de</strong> megaloblasto <strong>de</strong> maduración <strong>de</strong><br />
eritrocitos en la médula ósea y las que no lo hacen.<br />
1).- En la anemia macrocitica megaloblástica existe una interrupción en la síntesis nuclear,<br />
que trae como consecuencia un <strong>de</strong>fecto en la maduración <strong>de</strong>l núcleo en el seguimiento <strong>de</strong> la<br />
megaloblastocis, la causa principal que origina esta anemia es la <strong>de</strong>ficiencia <strong>de</strong> vitamina B<br />
12 y ácido fólico que funcionan como coenzimas en la síntesis <strong>de</strong>l ácido nucleico.<br />
DEFICIENCIA DE ACIDO FOLICO.<br />
1) Ingestión dietética ina<strong>de</strong>cuada.<br />
2) Requerimiento mayor.<br />
3) Mala absorción en el intestino <strong>de</strong>lgado.<br />
4) Inhibición <strong>de</strong> medicamentos.<br />
DEFICIENCIA DE VITAMINA B 12<br />
1) Carencia <strong>de</strong>l factor intrínseco.<br />
2) Mala absorción.<br />
3) Ingestión dietética ina<strong>de</strong>cuada.<br />
Esta anemia se caracteriza porque el frotis sanguíneo presenta la siguiente triada:<br />
macrocitos ovales, neutrófilos hipersegmentados (con más <strong>de</strong> cinco lóbulos) y los cuerpos<br />
<strong>de</strong> Howell-Joly, la anisocitosis es mo<strong>de</strong>rada y la poiquilocitosis es más grave cuando la<br />
anemia es más intensa.<br />
2) Anemias macrocíticas no megaloblásticas aún no se <strong>de</strong>fine la causa <strong>de</strong> su origen, pero es<br />
posible que se relacione con un incremento <strong>de</strong> los lípidos membranales. Esta anemia se<br />
caracteriza porque se presenta acompañando las siguientes enfermeda<strong>de</strong>s:<br />
Alcoholismo.<br />
Reticulocitosis.<br />
Enfermedad hepática.<br />
Insuficiencia respiratoria.<br />
El frotis <strong>de</strong> sangre periférica presenta macrocitos no tan gran<strong>de</strong>s como la anemia<br />
megalobástica, los cuales son redondos con membranas <strong>de</strong>lgadas, no hay neotrófilos<br />
hipersegmentados, la cuenta <strong>de</strong> lecuocitos y plaquetas son normales generalmente.<br />
La poiquilocitosis es el término que se utiliza para <strong>de</strong>scubrir una variación en la forma <strong>de</strong><br />
los eritrocitos mientras que la anisocitosis <strong>de</strong>nota una variación <strong>de</strong>l tamaño celular, ambos<br />
se reportan como leve, mo<strong>de</strong>rada o acentuada.<br />
Los cuerpos <strong>de</strong> Howell-Jolly, son gránulos constituidos por fragmentos nucleares (DNA),<br />
en forma redonda y <strong>de</strong> color púrpura obscuro o violeta que se presentan por lo general solo<br />
en los eritrocitos.
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Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 11 OBSERVACIÓN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS<br />
HEMOLÍTICAS<br />
OBJETIVO: El alumno revisará las alteraciones morfológicas que se presentan en los<br />
eritrocitos en las anemias hemolíticas.<br />
INTRODUCCIÓN:<br />
Se <strong>de</strong>nomina hemólisis al proceso <strong>de</strong> <strong>de</strong>strucción <strong>de</strong> glóbulos rojos que <strong>de</strong>termina una<br />
disminución <strong>de</strong> la supervivencia <strong>de</strong> los mismos, acompañado <strong>de</strong> incapacidad <strong>de</strong> la médula<br />
ósea <strong>de</strong> realizar el aumento compensatorio. (Una médula ósea estimulada al máximo pue<strong>de</strong><br />
aumentar la eritropoyesis entre 6 a 8 veces su capacidad normal, y la vida media <strong>de</strong>l<br />
eritrocito pue<strong>de</strong> disminuir hasta 15 a 20 días sin llegar a anemia).<br />
Esta disminución <strong>de</strong> la vida eritrocitaria <strong>de</strong>termina:<br />
- un aumento <strong>de</strong> la formación <strong>de</strong> glóbulos rojos a nivel medular: aumento <strong>de</strong> eritropoyesis.<br />
- un aumento <strong>de</strong>l catabolismo <strong>de</strong> la hemoglobina. La hemoglobina liberada <strong>de</strong> los glóbulos<br />
rojos sufre metabolización y <strong>de</strong>termina un aumento <strong>de</strong> la bilirrubina indirecta, que<br />
<strong>de</strong>termina clínicamente la aparición <strong>de</strong> ictericia (coloración amarillenta <strong>de</strong> piel y mucosas).<br />
El lugar <strong>de</strong> máxima remoción por fagocitosis es el bazo.<br />
Nos encontramos frente a un caso <strong>de</strong> hemólisis crónica cuando este proceso <strong>de</strong><br />
<strong>de</strong>strucción acelerada <strong>de</strong> glóbulos rojos se mantiene en el tiempo, causando los síntomas y<br />
signos características <strong>de</strong>l síndrome hemolitico (véase más a<strong>de</strong>lante).<br />
1.1 Clasificación <strong>de</strong> las anemias hemolíticas:<br />
• De acuerdo al sitio <strong>de</strong> hemólisis: intra o extravascular.<br />
• Patogénica: corpusculares (intrínsecas) o extracorpusculares (extrínsecas).<br />
• Etiológica: heredadas o adquiridas.<br />
La mayor parte <strong>de</strong> las alteraciones intrínsecas son hereditarias, y la mayor parte <strong>de</strong><br />
las extrínsecas son adquiridas. Excepciones a esta regla son la hemoglobinuria paroxística<br />
nocturna*, el déficit <strong>de</strong> G6PD y el daño térmico. En investigación, el diagnóstico<br />
diferencial <strong>de</strong> estas patologías se hace por transfusiones cruzadas.<br />
1.1.1 Clasificación según su sitio:<br />
La hemólisis pue<strong>de</strong> ser extravascular o intravascular. Cuando ocurre un proceso <strong>de</strong><br />
hemólisis extravascular los eritrocitos fagocitados sufren ruptura <strong>de</strong> su membrana. La<br />
hemoglobina es <strong>de</strong>gradada por enzimas lisosomales y se recupera fierro y aminoácidos. El<br />
fierro es transportado a la médula ósea para nueva producción <strong>de</strong> hematíes. A su vez,<br />
cuando ocurre hemólisis intravascular la hemoglobina libre se disocia en dímeros alfa y<br />
beta, los que se unen haptoglobina u oxidan a metahemoglobina. Luego estas moléculas se
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
disocian y liberan el grupo Hemo para unirse a la albúmina y hemopexina, lo que permite la<br />
captación <strong>de</strong>l Hemo por los hepatocitos para recuperar el fierro y para producir bilirrubina.<br />
La hemólisis intravascular se manifiesta por: Hemoglobinuria, Metahemalbuminemia,<br />
Ictericia, Hemoglobinemia, Hemosi<strong>de</strong>rinuria, Hemosi<strong>de</strong>rinuria.<br />
El paso final <strong>de</strong> la hemólisis intra y extravascular será la conjugación <strong>de</strong> bilirrubina por el<br />
hepatocito, excreción <strong>de</strong> ella a la bilis, conversión <strong>de</strong> la bilis por parte <strong>de</strong> la flora intestinal<br />
en urobilinógeno y urobilina, y por último la excreción en la orina y heces.<br />
En la hemólisis extravascular, al exce<strong>de</strong>rse la capacidad <strong>de</strong>l sistema monocítico<br />
macrofágico aparecen alteraciones morfológicas <strong>de</strong> los hematíes como microesferocitosis,<br />
células mordidas, eritrocitos fragmentados y con inclusiones citoplasmáticas. A<strong>de</strong>más la<br />
regurgitación <strong>de</strong> hemoglobina libre al plasma provoca disminución <strong>de</strong> la haptoglobina. En<br />
tanto, en la hemólisis intravascular con <strong>de</strong>strucción <strong>de</strong> 20 a 40 ml <strong>de</strong> eritrocitos al día<br />
aparece una reducción <strong>de</strong> la haptoglobina a niveles <strong>de</strong>tectables y disminución <strong>de</strong> la<br />
hemopexina. La <strong>de</strong>pleción en ambos sistemas (intra y extravascular) provoca aparición <strong>de</strong><br />
hemoglobina libre en el suero y orina, y aumento <strong>de</strong> la metalbúmina.<br />
1.1.2 Clasificación patogénica:<br />
CORPUSCULARES: aquí el <strong>de</strong>fecto está en los glóbulos rojos, al ser <strong>de</strong>fectuosos son<br />
eliminados <strong>de</strong> la circulación. El <strong>de</strong>fecto pue<strong>de</strong> ser:<br />
1. Enzimático: alteración cuantitativa o cualitativa <strong>de</strong> enzimas que intervienen en el<br />
metabolismo <strong>de</strong>l glóbulo rojo; son poco frecuentes.<br />
Déficit <strong>de</strong> enzimas <strong>de</strong> la glicólisis: déficit <strong>de</strong> piruvato kinasa.<br />
Anomalías <strong>de</strong>l metabolismo <strong>de</strong> nucleótidos: déficit <strong>de</strong> pirimidin 5´nucleotidasa.<br />
Déficit <strong>de</strong> enzimas <strong>de</strong> shunt pentosas y metabolismo <strong>de</strong>l glutatión: G6PD, glutatión<br />
sintetasa, glutatión reductasa.<br />
2. Hemoglobina: hay una alteración en la molécula <strong>de</strong> la hemoglobina. Aquí entran las<br />
hemoglobinopatías y las talasemias.<br />
Existen varias hemoglobinopatías; la hemoglobinopatía más frecuente es la anemia <strong>de</strong><br />
células falciformes o hemoglobinopatías, también llamada Drepanocitosis. Aquí hay un<br />
aminoácido cambiado en la hemoglobina (hemoglobina S) que altera la estructura <strong>de</strong>l<br />
glóbulo rojo adoptando forma <strong>de</strong> hoz. Estos glóbulos rojos llamados falciformes<br />
aumentan la viscosidad sanguínea <strong>de</strong>terminando mayor <strong>de</strong> oclusión <strong>de</strong> vasos pequeños<br />
que <strong>de</strong>termina microinfartos. Se manifiesta clínicamente por anemia crónica con<br />
episodios <strong>de</strong> crisis hemolíticas, crisis vasoclusivas (las más graves son aquellas que<br />
ocluyen vasos cerebrales y óseos, pero pue<strong>de</strong> afectarse cualquier órgano).<br />
Existen dos formas clínicas: la homocigota, que presenta anemia hemolítica y<br />
fenómenos vasooclusivos, y la heterocigota (o rasgo drepanocítico), más frecuente,<br />
asintomática. En estos últimos sólo se pone <strong>de</strong> manifiesto la enfermedad en situaciones<br />
en que disminuye la presión parcial <strong>de</strong> oxígeno.
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
Las talasemias son alteraciones en la hemoglobina por falta total o parcial <strong>de</strong> las<br />
ca<strong>de</strong>nas <strong>de</strong> globina. El 90% <strong>de</strong> la hemoglobina está formada por el grupo y 4 ca<strong>de</strong>nas<br />
<strong>de</strong> globina (2 alfa y 2 beta). Cuando falta alguna ca<strong>de</strong>na entonces surgen las talasemias.<br />
Existen varias talasemias, se <strong>de</strong>ben a mutaciones genéticas según las ca<strong>de</strong>nas afectadas,<br />
las llamamos alfatalasemias, betatalasemias.<br />
3. Defectos <strong>de</strong> membrana: esferocitosis hereditaria, eliptocitosis, acantocitosis y<br />
estomatocitosis. Anomalías en la permeabilidad iónica: Hidrocitosis congénita y<br />
Xerocitosis congénita.<br />
La más frecuente <strong>de</strong> este grupo es la esferocitosis hereditaria. Es una anemia<br />
hemolítica crónica <strong>de</strong> herencia autosómica dominante con morfología eritrocítica<br />
característica (esferocito), en la cual la hemólisis es extravascular.<br />
B. EXTRACORPUSCULARES: aquí la <strong>de</strong>strucción <strong>de</strong>l glóbulo rojo es por presencia <strong>de</strong><br />
factores externos, <strong>de</strong>l medio en que están. Como causas <strong>de</strong> esta anemias se <strong>de</strong>be mencionar:<br />
1. Hiperesplenismo: la función <strong>de</strong>l bazo <strong>de</strong> retener los glóbulos rojos alterados o viejos se<br />
extien<strong>de</strong> también a los glóbulos rojos normales. En general se <strong>de</strong>be a otras enfermeda<strong>de</strong>s<br />
(hepatopatías, linfomas) que al tratarlas disminuye la hemólisis.<br />
2. Anemias hemolíticas inmunes: aquí el organismo produce anticuerpos que actúan<br />
contra los glóbulos rojos <strong>de</strong>terminando la hemólisis. Esto pue<strong>de</strong> ocurrir, por ejemplo, luego<br />
<strong>de</strong> una transfusión en que los glóbulos rojos transfundidos tienen algún antígeno (sustancia<br />
que es consi<strong>de</strong>rada extraña por el receptor y éste reacciona formando anticuerpos). Otro<br />
ejemplo es el <strong>de</strong> la enfermedad hemolítica <strong>de</strong>l recién nacido, cuando existe una<br />
incompatibilidad entre los glóbulos rojos <strong>de</strong> la madre y el feto.<br />
Pero a veces surgen anticuerpos formados por el propio organismo (auto-anticuerpos) por<br />
fallas en los mecanismos que regulan el sistema inmune. La formación <strong>de</strong> anticuerpos<br />
pue<strong>de</strong> ser secundaria a otras enfermeda<strong>de</strong>s.<br />
C. OTRAS CAUSAS DE LA ANEMIA HEMOLÍTICA EXTRACORPUSCULAR<br />
SON:<br />
- la causa mecánica - por ejemplo, los pacientes con válvulas protésicas cardíacas; éstas<br />
pue<strong>de</strong>n lesionar los glóbulos rojos circulantes.<br />
- por tóxicos directos: algunas infecciones, algunos agentes químicos (arsénico, cobre,<br />
plomo), toxinas <strong>de</strong> animales (arañas, ofidios).<br />
- Las drogas: asociadas a hemólisis por oxidantes (que causan déficit <strong>de</strong> G6PD).
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
PRÁCTICA No. 12 OBSERVACION DE MÉDULA ÓSEA NORMAL.<br />
OBJETIVO: El alumno revisará extensiones <strong>de</strong> médula ósea <strong>de</strong> morfología normal<br />
para familiarizarse con los precursores <strong>de</strong> cada una <strong>de</strong> las células <strong>de</strong> la sangre.<br />
INTRODUCCIÓN:<br />
Solo por experiencia se consigue interpretar bien la citología <strong>de</strong> médula, que <strong>de</strong>be<br />
consi<strong>de</strong>rarse como un método. Por eso el examinador <strong>de</strong>be informarse con respecto a la<br />
naturaleza clínica <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong>l paciente.<br />
En general hay dos métodos <strong>de</strong> examinar una extensión <strong>de</strong> médula. El primero consistente<br />
en observar varios portaobjetos a poco aumento, luego a gran aumento en seco y,<br />
finalmente, con el objetivo <strong>de</strong> inmersión en aceite; y, a base <strong>de</strong> una experiencia previa, es<br />
posible lograr una impresión respecto al número y la distribución <strong>de</strong> las células, <strong>de</strong> modo<br />
muy similar a como el patólogo analiza sus cortes <strong>de</strong> tejido. El segundo consiste en efectuar<br />
un recuento diferencial <strong>de</strong> un gran número <strong>de</strong> células (300-1000) y calcular el porcentaje <strong>de</strong><br />
cada tipo <strong>de</strong> célula. Finalmente se pue<strong>de</strong> emplear una combinación <strong>de</strong> los dos métodos.<br />
El segundo método, un laborioso recuento diferencial, constituye una parte esencial <strong>de</strong>l<br />
adiestramiento en este trabajo, sin el cual no es posible llegar a realizar el primero con<br />
exactitud. El recuento diferencial proporciona, a<strong>de</strong>más, un registro objetivo y útil como<br />
referencia para medir ulteriores cambios. El reconocimiento <strong>de</strong> los tipos celulares, y en<br />
particular <strong>de</strong> la fase <strong>de</strong> maduración <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> cualquier serie dada, tien<strong>de</strong> a variar <strong>de</strong> un<br />
laboratorio en otro, a pesar <strong>de</strong> los numerosos esfuerzos realizados para unificar<br />
nomenclatura, con <strong>de</strong>scripciones, fotografías y dibujos. No pue<strong>de</strong>n aceptarse como<br />
universales ningún promedio ni márgenes normales. La línea <strong>de</strong> base más válida es la que<br />
<strong>de</strong>termina cada laboratorio particular y aun entonces, <strong>de</strong> no emplear un adiestramiento en<br />
grupo, pue<strong>de</strong> haber variaciones notables <strong>de</strong> un examinador a otro. Por fortuna estas<br />
limitaciones <strong>de</strong>l método sólo son graves cuando no se tienen en cuenta. Con práctica y<br />
experiencia, los investigadores <strong>de</strong> laboratorio pue<strong>de</strong>n obtener resultados provechosos y<br />
conseguir un alto grado <strong>de</strong> reproducibilidad en sus recuentos diferenciales <strong>de</strong> la médula. Es<br />
recomendable el siguiente procedimiento para examinar preparaciones <strong>de</strong> esta clase:<br />
1- Inspección a simple vista <strong>de</strong> los portaobjetos, para escoger la extensión que<br />
contenga partículas.<br />
2- Examen a poco aumento (16mm) <strong>de</strong> las partículas a fin <strong>de</strong> <strong>de</strong>terminar<br />
previamente si la médula es normoplásica, hipoplásica o hiperplásica.<br />
3- Seleccionar <strong>de</strong> una zona celular, generalmente en la porción caudal <strong>de</strong> la<br />
película, alre<strong>de</strong>dor <strong>de</strong> las partículas, a la que sigue un estudio minucioso <strong>de</strong><br />
los <strong>de</strong>talles citológicos a gran aumento y con objetivo <strong>de</strong> inmersión en aceite<br />
CELULARIDAD: El grado <strong>de</strong> celularidad, si el conjunto <strong>de</strong> la medula es hiperplásica o<br />
hipoplásica, es un aspecto difícil <strong>de</strong> <strong>de</strong>terminar por el examen <strong>de</strong> un material aspirado. Si<br />
este dato es esencial, solo po<strong>de</strong>mos asegurarnos estudiando cortes histológicos <strong>de</strong> partículas
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
aspiradas o <strong>de</strong>l material obtenido por biopsia por trocar o por biopsia quirúrgica. Si la<br />
aspiración se efectúa <strong>de</strong> una manera uniforme y si retiran solo cantida<strong>de</strong>s mínimas <strong>de</strong><br />
material, es posible po<strong>de</strong>r obtener estimaciones útiles, aunque solamente aproximadas, <strong>de</strong> la<br />
celularidad.<br />
La celularidad (expresada como relación entre el volumen <strong>de</strong> células hematopoyéticas en<br />
la medula y el volumen total <strong>de</strong> células más grasa) varia normalmente con la edad <strong>de</strong>l<br />
individuo y la zona medular examinada. Por ejemplo a la edad media <strong>de</strong> 50 años, la<br />
celularidad en las vértebras es <strong>de</strong> un 75%; en el esternón <strong>de</strong> un 60%; en la cresta iliaca <strong>de</strong><br />
un 50%, y en las costillas <strong>de</strong> un 30%. La celularidad normal <strong>de</strong>l hueso iliaco en diferentes<br />
eda<strong>de</strong>s ha sido muy bien <strong>de</strong>scrita por Hartsock y cols. en 1965.<br />
El informe <strong>de</strong>be compren<strong>de</strong>r los aspectos siguientes: <strong>de</strong>scripción <strong>de</strong> la celularidad en<br />
general, tipo <strong>de</strong> eritropoyesis, madurez general <strong>de</strong> las células eritropoyéticas, y cálculo <strong>de</strong><br />
los cocientes mieloi<strong>de</strong>-eritroi<strong>de</strong> o leucocito i<strong>de</strong>e-eritroi<strong>de</strong>, basados en un recuento <strong>de</strong> 500-<br />
1000 células.<br />
Un recuento diferencial es útil, especialmente en casos seleccionados, como, por ejemplo,<br />
en una leucemia para seguir el efecto <strong>de</strong> la terapéutica. Pero se suelen conseguir mejores<br />
resultados examinando un número mayor <strong>de</strong> preparaciones en el mismo tiempo que se<br />
invierte en los recuentos diferenciales.<br />
RELACIÓN MIELOIDE-ERITROIDE (M:E) En el adulto normal, la relación M:E<br />
viene a ser <strong>de</strong> 3:1 ó 4:1. Éste término muy, difundido, se refiere a los recuentos<br />
diferenciales en que no se han excluido, los granulocitos maduros.<br />
La relación M:E al nacer es <strong>de</strong> 1.85:1 aumenta con rapi<strong>de</strong>z poco <strong>de</strong>spués y alcanza el nivel<br />
normal máximo <strong>de</strong> 11:1 en las dos primeras semanas <strong>de</strong> vida, para <strong>de</strong>scen<strong>de</strong>r luego<br />
gradualmente hasta un promedio <strong>de</strong> 3:1 en los primeros 20 años.<br />
INTERPRETACIÓN: Una relación M:E aumentada, por ejemplo, <strong>de</strong> 6:1 pue<strong>de</strong> significar<br />
la respuesta a una infección o a una leucemia, una reacción leucemoi<strong>de</strong> o una hipoplasia<br />
eritroi<strong>de</strong>. Cuando esta disminuida, esto es, menor <strong>de</strong> 2:1 pue<strong>de</strong> significar una reducción <strong>de</strong><br />
leucopoyesis o una hiperplasia eritropoyética. La hiperplasia eritroi<strong>de</strong> normoblástica pue<strong>de</strong><br />
provenir <strong>de</strong> una <strong>de</strong> las muchas formas <strong>de</strong> anemia, <strong>de</strong> afecciones hepáticas o <strong>de</strong> una<br />
pilicitemia, mientras que la megaloblástica pue<strong>de</strong> ser causada por una <strong>de</strong>ficiencia <strong>de</strong> ácido<br />
fólico o <strong>de</strong> vitamina B12 como en la anemia perniciosa. Una relación M:E normal no<br />
significa necesariamente una medula normal.<br />
Por ser irregular la distribución <strong>de</strong> los diversos tipos <strong>de</strong> células, los recuentos diferenciales<br />
<strong>de</strong> las células nucleadas <strong>de</strong> la medula no son más que aproximaciones. Las irregularida<strong>de</strong>s<br />
se <strong>de</strong>ben en parte a que los normoblastos, los granulocitos neutrófilos maduros<br />
RECUENTO DIFERENCIAL DE LA MÉDULA: Los datos publicados respecto a los<br />
recuentos normales <strong>de</strong> las células medulares varían según los autores y se echan <strong>de</strong> menos<br />
las cifras normales generalmente aceptadas para la sangre periférica. Esta diversidad refleja<br />
la técnica <strong>de</strong> cada uno <strong>de</strong> los investigadores, tanto al realizar los recuentos como en la
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
Q.F.B<br />
interpretación. Por consiguiente, es mejor que cada uno <strong>de</strong> establezca sus propios valores<br />
normales; <strong>de</strong> las observaciones nuestras se relacionan en la tabla 1:<br />
RECUENTOS DIFERENCIALES DE LA MÉDULA ÓSEA EN PORCENTAJES<br />
DEL TOTAL DE CÉLULAS NUCLEADAS<br />
ROSSE<br />
(1977)<br />
TIPOS CELULARES ALNACER<br />
MEDIA, DE<br />
NORMOBLASTOS<br />
TOTALES<br />
1 MES<br />
MEDIA, DE<br />
18 MESE<br />
MEDIA, DE<br />
MAUER<br />
(1969)<br />
INFANCIA<br />
MEDIA,<br />
ÍMITES<br />
JANDI<br />
(1987)<br />
EDAD ADULTA<br />
MEDIA,<br />
LÍMITES<br />
14.48+-7.24 8.04+-5.00 8.21+-3.71 23.1 21.5(14.2-30.4)<br />
PRONORMOBLASTOS 0.02+-0.06 0.10+-0.14 0.08+-0.13 0.5(0.0-1.5) 0.6(0.2-1.4)<br />
BASÓFILOS n. 0.24+-0.25 0.34+-0.33 0.50+-0.34 1.7(0.2-4.8) 2.0)0.7-3.7)<br />
POLICROMÁTICOS n. 13.06+-6.78 6.90+-4.45 6.97+-3.56 18.2(4.8-34) 12.4(12.2-24.2)<br />
ORTOCROMÁTICOS n. 0.69+-0.73 0.54+-1.88 0.44+-0.49 2.7(0-7.8) 6.6(2-22.7)<br />
NEUTRÓFILOS TOTALES 60.37-+-8.66 32.35+-7.68 36.08+-7.40 57.1 56(45.1-66.5)<br />
MIELOBLASTOS 0.31+-0.31 0.62+-0.50 0.06+-0.08 1.2(0-3.2) 1.0(0.5-1.8)<br />
PROMIELOCITOS 0.79+-0.91 0.76+-0.65 0.64+-0.59 1.4(0-4.0) 3.4(2.6-4.6)<br />
MIELOCITOS 3.95+-2.93 2.50+-1.48 2.49+-1.39 18.3((8.5-<br />
29.7)<br />
11.9((8.1-16.9)<br />
METAMIELOCITOS 19.37+-4.84 11.30+-3.59 12.42+-4.15 23.3(14-34.2) 18(9.8-25.3)<br />
BANDA 28.89+-7.56 14.10+-4.63 14.20+-5.23 11(8.5-20.8)<br />
SEGMENTADOS 7.37+-4.64 3.64+-2.97 6.31+-3.91 12.9(4.5-<br />
29.0)<br />
10.7(8.0-16.0)<br />
EOSINÓFILOS 2.70+-1.27 2.61+-1.40 2.70+-2.16 3.6(1.0-9.0) 3.2(1.2-6.2)<br />
BASÓFILOS 0.12+-0.20 0.07+-0.16 0.10+-0.12 0.06(0-0.8)
PRÁCTICA No. 13 RESOLUCIÓN DE CUADROS CLÍNICOS<br />
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
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OBJETIVO: El alumno será capaz correlacionar la clínica <strong>de</strong>l paciente con los<br />
resultados <strong>de</strong> la Citometría hemática a través <strong>de</strong> la resolución <strong>de</strong> cuadros clínicos.<br />
PRÁCTICA No. 14 EVALUACION FINAL<br />
OBJETIVO: El alumno resolverá un problema hematológico correlacionando la<br />
morfología con los datos <strong>de</strong> la Citometría hemática.
PREPARACIÓN DE REACTIVOS.<br />
LIQUIDO DILUYENTE DE TURK. (LEUCOCITOS)<br />
Acido acético glacial 1 o 3 ml<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 100 ml<br />
Azul <strong>de</strong> metileno. 1 gota.<br />
LIQUIDO DILUYENTE DE ERITROOCITOS.<br />
Solución <strong>de</strong> formal<strong>de</strong>hído al 40 % (10 ml)<br />
Citrato trisódico al 3% (100 ml)<br />
OXALATO DE AMONIO AL 1 % (PLAQUETAS)<br />
Oxalato <strong>de</strong> amonio 1 ml.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 99 ml.<br />
Filtrar y conservar en refrigeración.<br />
COLORANTE DE WRIGHT.<br />
Colorante <strong>de</strong> wright. 2 gr.<br />
Glicerina. 30 ml.<br />
Metanol. 1000 ml.<br />
Dejar madurar 1 mes y filtrar antes <strong>de</strong> utilizar.<br />
BUFFER DE WRIGHT.<br />
Fosfato <strong>de</strong> potasio anhidro. 6.63 g.<br />
Difosfato <strong>de</strong> sodio anhidro. 2.56 g.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 1000 ml.<br />
AZUL DE CRESIL BRILLANTE (RETICULOCITOS).<br />
Azul <strong>de</strong> crwil brillante. 1 g.<br />
Citrato <strong>de</strong> sodio. 0.4 g.<br />
Cloruro <strong>de</strong> sodio al 0.85 %. 100 ml.<br />
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REACTIVO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA (DRABKIN).<br />
Bicarbonato <strong>de</strong> sodio. 1 g.<br />
Cianuro <strong>de</strong> potasio. 0.25 gr.<br />
Ferricianuro <strong>de</strong> potasio. 0.2 g.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 1000 ml<br />
Mantener en refrigeración.
SOLUCION ISOTONICA (0.85%).<br />
Cloruro <strong>de</strong> sodio. 0.85 g.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 100 ml.<br />
SOLUCION DE EDTA. AL 10 %.<br />
Dietilendamin-tetra-acético <strong>de</strong> sodio.<br />
(EDTA). 10 gr.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada. 100 ml.<br />
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CUESTIONARIO.<br />
1) Mencione los métodos que se utilizan para realizar la venopunción.<br />
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LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
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2) Las precauciones que se <strong>de</strong>ben <strong>de</strong> tener para realizar la venopunción son:<br />
a) Qué el material sea estéril .<br />
b) No es necesario la asepsia.<br />
c) Ninguna <strong>de</strong> las anteriores.<br />
3) Cuáles son las ventajas <strong>de</strong>l sistema vacutainer.<br />
4) El método <strong>de</strong> la cianometahemoglobina permite medir las siguientes hemoglobinas.<br />
a) Hb-F<br />
b) Hb-S<br />
c) Hb-O2 , Hb-CO2 , Hb-H<br />
5) La cantidad <strong>de</strong> muestra que se obtiene con la pipeta <strong>de</strong> Sahli es:<br />
a) 0.002 ml.<br />
b) 0.2 ml.<br />
c) 0.02 ml.<br />
6) Al agregar la muestra al reactivo <strong>de</strong> Drabkin se <strong>de</strong>be agitar vigorosamente con el fin<br />
<strong>de</strong>:<br />
a) Evitar la hemolisis.<br />
b) Para lisar los eritrocitos y ser transformada la hemoglobina.<br />
c) Para concentrar la muestra.<br />
d) Ninguna <strong>de</strong> las anteriores.<br />
7) Dibuje el tubo <strong>de</strong> Wintrobe.<br />
8) Haga un esquema <strong>de</strong> flojo <strong>de</strong> la VSG y mencione como se expresa el resultado.<br />
9) Indique el material empleado en:<br />
a) Macrohematocrito. ( ) Microcentrifuga.<br />
b) Microhematocrito. ( ) Tubo <strong>de</strong> Wintrobe.<br />
( ) Lector.<br />
( ) Capilares.<br />
( ) Mechero o plastilina.<br />
( ) Centrífuga.<br />
( ) Pipeta pasteur.<br />
10) Cuales son las capas obtenidas en el hematocrito.<br />
11) Los factores que aumentan el valor <strong>de</strong>l hematocrito son:
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
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12) Dibuje la cuadrícula <strong>de</strong> la cámara <strong>de</strong> Neubauer, la pipeta <strong>de</strong> Thoma para glóbulos<br />
rojos y blancos.<br />
13) Indique las diluciones que se obtienen con:<br />
a) La pipeta <strong>de</strong> Thoma para glóbulos rojos.<br />
b) La pipeta <strong>de</strong> Thoma para glóbulos blancos.<br />
( ) 1:20 ( ) 1:100 ( ) 1:50<br />
( ) 1:200 ( ) 1:25 ( ) 1:25<br />
14) Relacione las siguientes columnas.<br />
a) Leucocitosis. ( ) Leucocitos disminuidos.<br />
b) Trombocitemia. ( ) Plaquetas aumentadas.<br />
c) Oligocitemia. ( ) Plaquetas disminuidas.<br />
d) Policitemia. ( ) Leucocitos incrementados.<br />
( ) Eritrocitos disminuidos.<br />
( ) Eritrocitos aumentados.<br />
15) Calcule el factor que se emplea para conocer el número <strong>de</strong> plaquetas por mm 3 <strong>de</strong><br />
sangre.<br />
16) Si un paciente tiene un recuento <strong>de</strong> 500 eritrocitos en la cámara <strong>de</strong> Neubauer, ¿Cuntos<br />
eritrocitos por mm 3 <strong>de</strong> sangre tendrá ?.<br />
17) El recuento <strong>de</strong> reticulocitos nos indica:<br />
a) La eficacia <strong>de</strong> la hemostacia.<br />
b) La i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> eritrocitos jóvenes.<br />
c) La eficacia <strong>de</strong> la eritropoyesis.<br />
18) Dibuje un reticulocito.<br />
19) Dibuje las siguientes células: Neutrófilos segmentado, monocito, linfocito, eosinófilo,<br />
banda.<br />
20) ¿ Porqué es importante realizar una buena tinción hematológica.<br />
21) En el recuento diferencial a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> la morfología celular se pue<strong>de</strong> observar:<br />
a) Parásitos.<br />
b) Cristales.<br />
c) Bacterias.<br />
d) Poiquilocitosis y anisocitosis.<br />
e) Anormalida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> las plaquetas.<br />
f) Todas las anteriores.<br />
g) Ninguna <strong>de</strong> las anteiores.
22) ¿ Para qué sirven los índices eritrocitarios?.<br />
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23) Calcule el VCM y CMHC <strong>de</strong> la mujer que tiene una hemoglobina = 10 g/dl,<br />
Hematocrito = 33, eritrocitos = 4.2 millones por mm 3 e indique que alteración<br />
presenta si los valores <strong>de</strong> referencia son:<br />
VCM = 78 - 103 Um 3<br />
CMHC = 30 - 34 g/dl.<br />
24) El diagnostico <strong>de</strong> una anemia se basa en:<br />
a) Examen físico.<br />
b) Historia clínica <strong>de</strong>l paciente.<br />
c) Todas las anteriores.<br />
d) Ninguna <strong>de</strong> las anteriores.<br />
25) Mencione las pruebas que constituyen a la Ciometría Hemática.<br />
26) Dibuje: macrocito, microcito, eritrocito normal, eritrocito hipocrómico, un campo que<br />
muestre poiquilocitosis y anisocitosis.<br />
27) La anemia macrocítica megaloblástica es causada por la falta <strong>de</strong> Vitamina B12 y<br />
ácido fólico. F o V.<br />
28) Mencione las causas <strong>de</strong>l <strong>de</strong>ficid <strong>de</strong> ácido fólico y Vitamina B12 .<br />
29) Las anemias normocíticas se caracterizan por:<br />
a) El VCM, CMHC disminuyen proporcionalmente.<br />
b) Se presentan principalmente en anemias hemolíticas y en el embarazo.<br />
c) Ninguna <strong>de</strong> las anteriores.<br />
30) Mencione la importancia <strong>de</strong> los programas <strong>de</strong> Control <strong>de</strong> Calidad en el laboratorio.
BIBLIOGRAFÍA:<br />
57<br />
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS<br />
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I<br />
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