Epidemiología de Plum pox virus y Citrus tristeza virus en bloques ...

6. Validación de “Spot” y “Tissue-print” RT-PCR a tiempo real. Comparación con técnicas
serológicas y cálculo de parámetros de diagnóstico
A su vez, en la parcela situada en Llíria, al analizar las plantas en varios años
consecutivos, se pudo comprobar el estado sanitario de las plantas que
proporcionaron resultados discrepantes en los análisis mediante las dos técnicas. Los
resultados obtenidos se presentan en la Tabla 6.7.
Tabla 6.7: Estado sanitario en un segundo análisis de diferentes plantas
de vivero de la parcela de Llíria con resultados discrepantes en un primer
análisis
Muestreo a
Análisis
1
Análisis
2
Plantas únicamente positivas por ELISA-DASI
No ELISA PCRc
b
muestreadas (+)
122
d ELISA PCRe
ELISA (-) PCR (+)
(-)
1 8 8 0 1 0 7
2 1 1 0 1 0 0
Total 9 9 0 2 0 7
Muestreo
Análisis
1
Análisis
2
Plantas únicamente positivas "Spot" RT-PCR a tiempo real
No
muestreadas
ELISA PCR
(+)
ELISA (-) PCR (+)
ELISA PCR
(-)
1 31 30 1 15 3 12
2 65 61 4 38 5 18
Total 96 91 5 53 8 30
a
Muestro 1: Análisis 1 (octubre 2006); Análisis 2 (mayo 2007)
Muestreo 2: Análisis 1 (mayo 2007); Análisis 2 (abril 2008)
b
Plantas que no se pudieron muestrear por estar muertas o no disponer de material para
recoger
c
Plantas con resultado positivo mediante ELISA-DASI y “Spor” RT-PCR a tiempo real
d
Plantas con resultado negativo mediante ELISA-DASI y positivo mediante “Spot” RT-PCR
a tiempo real
e
Plantas con resultado negativo mediante ELISA-DASI y “Spor” RT-PCR a tiempo real
Así, de nueve plantas discrepantes por ELISA-DASI con respecto a la técnica
molecular, al analizarse al año siguiente, dos plantas resultaron positivas por ambas
técnicas, por tanto, se consideran como verdaderos positivos. Sin embargo siete
resultaron negativas por ambas técnicas considerándose como falsos positivos de la
técnica serológica. Por el contrario, en el caso de “Spot” RT-PCR a tiempo real de 91
plantas discrepantes que se analizaron, 53 resultaron positivas por ambas técnicas,
por tanto se considerarían como verdaderos positivos. Ocho únicamente fueron
positivas mediante “Spot” RT-PCR a tiempo real y 30 fueron negativas por ambas
técnicas, por tanto, estas últimas 38 plantas se considerarían como falsos positivos de
la técnica molecular.