caracterización de lacasas producidas por un hongo termofílico ...

Resumen
Los hongos termofílicos en la actualidad son de gran importancia debido a que
por lo general producen enzimas con propiedades interesantes como son la
termoestabilidad y la resistencia a disolventes orgánicos. Estas enzimas tienen un
gran potencial biotecnológico. Por ejemplo: en las industrias del papel para el
bioblanqueo de la pulpa, que se lleva a cabo a altas temperaturas, y en la síntesis
orgánica industrial que se lleva a cabo en sistemas de reacción no acuosos. Por tal
motivo, en este trabajo se aisló una cepa de hongo termofílico ligninolítico (cepa
EUM1) en el trópico mexicano. De esta cepa se obtuvieron lacasas a partir de un
medio de cereal Bran Flakes al 3 % a 40ºC. En este medio se obtuvieron 650 U/L de
lacasas, que representó 35 veces más actividad cuando se comparó con el medio de
extracto de malta al 2 %. Posteriormente, las lacasas del extracto se purificaron
parcialmente con sulfato de amonio, intercambio aniónico (Q sepharosa),
ultrafiltración y filtración en gel (10 a 200 KDa), para obtener un grado de
purificación de 19.8 veces. El zimograma del extracto purificado reveló que se trataba
de dos isoenzimas, con características moleculares muy parecidas, con un pIap de
aproximadamente 4, peso molecular aparente de 77.37 KDa estimado por
electroforesis con SDS. Las condiciones óptimas de actividad catalítica fueron pH 4 y
temperatura de 60°C. Lo relevante de la caracterización fue que las dos isoenzimas
fueron estables durante una hora en un amplio rango de pH entre 4-10 y a la
temperatura de 50 y 60°C, conservando aproximadamente el 100 % de su actividad.
Se determinaron las constantes cinéticas aparentes, debido a que esta preparación
contenía ambas isoformas. De manera que su kcatap con ABTS como sustrato fue de
3402 min -1 , 8 veces mayor comparada con la lacasa recombinante producida
industrialmente por Novo Nordisk a partir de Aspergillus oryzae. Esta preparación
conservó durante 5 minutos el 80 y 65 % de su actividad con 20 % de etanol y
acetonitrilo, respectivamente. Y mantuvo el 52 y 30 % de actividad en etanol y
acetonitrilo al 10 % durante una hora. Estos resultados abren la posibilidad de probar
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