caracterización de lacasas producidas por un hongo termofílico ...

10 veces con 90 µL de amortiguador 50 mM a diferentes valores de pH,
mencionados arriba (Sección 5.13), incubándose a temperatura ambiente durante 1
hora. Al tiempo cero y después de 1 hora, se tomaron alícuotas de 50 µL del extracto
incubado a cada pH, para diluirlas 10 veces con 450 µL de agua destilada. Se
tomaron 100 µL del extracto diluido 100 veces en agua destilada para determinar la
actividad de lacasa con ABTS 0.5 mM, en un amortiguador de citratos pH 4, 50 mM,
a 60ºC (temperatura óptima).
5.15. Efecto de la temperatura sobre la actividad de lacasa
La actividad de lacasa se determinó con ABTS 0.5 mM, en un amortiguador de
citratos pH 4, 50 mM a 40, 50, 60, 70 y 80ºC. El sistema de reacción sin el sustrato
se preincubó durante 1 minuto a las diferentes temperaturas mencionadas.
5.16. Estabilidad a la temperatura
El extracto de lacasa 2 se diluyó 100 veces con agua destilada, se incubó a 50,
60, 70 y 80ºC durante 1 hora, y cada 10 minutos se tomaron alícuotas de 100 µL,
para determinar la actividad de lacasa con ABTS 0.5 mM, en un amortiguador de
citratos pH 4, 50 mM, a 60ºC (temperatura óptima).
5.17. Efecto de disolventes sobre la actividad de lacasa
En este experimento se modificó la cantidad de 700 µL de agua destilada del
sistema de reacción, para adicionarle 50, 100, 150, 200, 300, 350 y 400 µL de
33