DIAGNOSTIC ANTIGENIQUE DE CRYPTOSPORIDIUM ... - Idexx

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INTRODUCTION
Les diarrhées néonatales sont une des causes majeures de mortalité chez les jeunes veaux de moins d'un mois.
Elles sont souvent poly-factorielles. Elles peuvent être la conséquence d'une infection par des virus
(Coronavirus et Rotavirus), des bactéries (Colibacille entérotoxinogène le plus souvent, Salmonella) ou des
protozoaires (Cryptosporidium parvum). Le diagnostic étiologique des diarrhées néonatales passe
obligatoirement par des tests de laboratoire car il n'est pas possible d'identifier l'agent causal sur la base de
symptômes cliniques.
Le test proposé dans cette trousse permet le diagnostic du Cryptosporidium parvum par la mise en évidence des
antigènes par la méthode ELISA. Cette méthode est de mise en œuvre facile, rapide et fiable et se prête
particulièrement bien à l'analyse d'un grand nombre d'échantillons. Les résultats peuvent être évalués
directement "à l'œil nu" ou à l’aide d’un spectrophotomètre.
PRINCIPE DU TEST
Le principe du test proposé est le suivant :
1) Tous les puits de la microplaque ont été sensibilisés par des anticorps polyclonaux dirigés contre les
oocystes de cryptosporidium parvum. Ces anticorps assurent la capture de l’agent à partir des fèces.
2) Les matières fécales sont diluées dans le "Tampon de dilution" et incubées sur la microplaque.
3) Après lavage de la microplaque, le conjugué est ajouté. Celui-ci est un anticorps monoclonal
anti - C. parvum couplé à la peroxydase, spécifique de l’agent pathogène.
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4) Après lavage de la microplaque, le substrat de l'enzyme (TMB) est mis dans les cupules. En cas de présence
du cryptosporidium parvum dans l'échantillon, le conjugué reste fixé sur les cupules et l'enzyme catalyse la
transformation du chromogène incolore en un produit bleu (lecture à l’œil). La réaction peut être bloquée
avec la solution d’arrêt qui transforme la coloration en jaune et permet la lecture au spectrophotomètre.
L’intensité de la coloration est une mesure du taux d’antigène présent dans l’échantillon à tester.
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Des échantillons de contrôle positif et négatif sont fournis avec la trousse afin de pouvoir valider les résultats
obtenus
PRECAUTIONS D'EMPLOI
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1) Ne pas pipeter les réactifs à la bouche.
2) Ne pas utiliser de réactifs provenant d'autres trousses.
3) Bien que le matériel livré avec le coffret ne contienne aucun élément contaminant et que l’échantillon de
contrôle positif soit théoriquement non infectieux, il est toutefois conseillé de décontaminer l’ensemble des
éléments à usage unique utilisé au cours des manipulations. Cette décontamination peut se faire soit par
immersion pendant 1 heure minimum dans l’hypochlorite de sodium à 5% fraîchement préparé avant de
les éliminer, soit par autoclavage à 120°C pendant 1 heure minimum ou par toute autre méthode conforme
à la réglementation en vigueur
4) La "Solution d'arrêt" contenant du H 2 SO 4 * 0,5 M peut causer de graves brûlures en cas de contact
avec la peau, les muqueuses et les yeux.
* L'Institut POURQUIER tient à votre disposition la fiche de toxicité de ce produit.
Institut POURQUIER
POURQUIER ® Elisa Cryptosporidium Antigène monocupule- Version P00605/03 du 12/07/2006 - Page 1/6