DIAGNOSTIC ANTIGENIQUE DE CRYPTOSPORIDIUM ... - Idexx

LECTURE A L’OEIL
MODE OPERATOIRE
1) DEPÔT DES ECHANTILLONS
N
a) Distribuer (cf figure 1):
- Echantillon de contrôle :
- 100 µl d’échantillon de contrôle négatif pur dans le puits A1
- 100 µl d’échantillon de contrôle positif pur dans les puits B1 et C1
- Echantillon à tester :
- 50 µl de "Tampon de dilution 8"par puits
- 50 µl de matières fécales dans chaque puits contenant le "Tampon de dilution 8" (cf note).
b) Couvrir la plaque (couvercle, papier aluminium ou adhésif)
c) Incuber la plaque pendant 30 minutes (± 3 mn) à +21°C (± 5°C).
Note :
Si la consistance de l'échantillon rend l'homogénéisation difficile, ajouter des billes de verre dans le récipient et déliter les
fèces en agitant vigoureusement l'ensemble. Ne pas centrifuger. Dans ce cas, il est aussi possible de diluer l’échantillon au
1/4 voire au 1/10 dans le "Tampon de dilution 8" tout en utilisant les échantillons de contrôle négatifs et positifs purs.
A N 6 14
B P 7 15
N = Echantillon de contrôle
négatif
P = Echantillon de contrôle
positif
C P 8 1 = Echantillon à tester n°1
D 1 9 2 = Echantillon à tester n° 2
E 2 10 …
F 3 11 …
G 4 12
H 5 13 Figure 1 : dépôt des échantillons
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
2) LAVAGE
a) Diluer au 1/20 la "Solution de lavage concentrée 20X" dans de l'eau distillée ou déminéralisée. Cette
solution est désignée par la suite "Solution de lavage".
Cette dilution peut être réalisée avant la disparition des cristaux apparus à + 5°C (± 3°C) à condition
d'utiliser la totalité des 100 ml du flacon.
b) Vider le contenu de la plaque par retournement ou préférentiellement par un dispositif manuel ou
automatique.
c) Remplir la totalité des puits de la plaque avec la "Solution de lavage" puis les vider à nouveau.
d) Renouveler deux fois l'opération c) (soit 3 lavages au total) en évitant tout particulièrement la formation de
bulles dans les cupules.
3) DEPÔT DU CONJUGUE
a) Diluer au 1/10 le conjugué dans le "Tampon de dilution 8".
b) Distribuer la solution de conjugué dilué à raison de 100 µl par puits
c) Incuber la plaque à + 21°C (± 5°C) durant 30 minutes (± 3 mn) de préférence sous agitation.
Institut POURQUIER
POURQUIER ® Elisa Cryptosporidium Antigène monocupule- Version P00605/03 du 12/07/2006 - Page 3/6