DIAGNOSTIC ANTIGENIQUE DE CRYPTOSPORIDIUM ... - Idexx
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N<br />
LECTURE AU SPECTROPHOTOMETRE<br />
MO<strong>DE</strong> OPERATOIRE<br />
1) <strong>DE</strong>PÔT <strong>DE</strong>S ECHANTILLONS<br />
a) Distribuer (cf figure 1):<br />
- Echantillon de contrôle :<br />
- 100 µl d’échantillon de contrôle négatif pur dans le puits A1<br />
- 100 µl d’échantillon de contrôle positif pur dans les puits B1 et C1<br />
- Echantillon à tester :<br />
- 50 µl de "Tampon de dilution 8"par puits<br />
- 50 µl de matières fécales dans chaque puits contenant le "Tampon de dilution 8" (cf note).<br />
b) Couvrir la plaque (couvercle, papier aluminium ou adhésif)<br />
c) Incuber la plaque pendant 30 minutes (± 3 mn) à +21°C (± 5°C).<br />
Note :<br />
Si la consistance de l'échantillon rend l'homogénéisation difficile, ajouter des billes de verre dans le récipient et déliter les<br />
fèces en agitant vigoureusement l'ensemble. Ne pas centrifuger. Dans ce cas, il est aussi possible de diluer l’échantillon au<br />
1/4 voire au 1/10 dans le "Tampon de dilution 8" tout en utilisant les échantillons de contrôle négatif et positif pur.<br />
A N 6 14<br />
B P 7 15<br />
N = Echantillon de contrôle<br />
négatif<br />
P = Echantillon de contrôle<br />
positif<br />
2) LAVAGE<br />
C P 8 1 = Echantillon à tester n°1<br />
D 1 9 2 = Echantillon à tester n° 2<br />
E 2 10 …<br />
F 3 11 …<br />
G 4 12<br />
H 5 13 Figure 1 : dépôt des échantillons<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12<br />
a) Diluer au 1/20 la "Solution de lavage concentrée 20X" dans de l'eau distillée ou déminéralisée. Cette<br />
solution est désignée par la suite "Solution de lavage".<br />
Cette dilution peut être réalisée avant la disparition des cristaux apparus à + 5°C (± 3°C) à condition<br />
d'utiliser la totalité des 100 ml du flacon.<br />
b) Vider le contenu de la plaque par retournement ou préférentiellement par un dispositif manuel ou<br />
automatique.<br />
c) Remplir la totalité des puits de la plaque avec la "Solution de lavage" puis les vider à nouveau.<br />
d) Renouveler deux fois l'opération c) (soit 3 lavages au total) en évitant tout particulièrement la formation de<br />
bulles dans les cupules.<br />
3) <strong>DE</strong>PÔT DU CONJUGUE<br />
a) Diluer au 1/10 le conjugué dans le "Tampon de dilution 8".<br />
b) Distribuer la solution de conjugué dilué à raison de 100 µl par puits<br />
c) Incuber la plaque à + 21°C (± 5°C) durant 30 minutes (± 3 mn) de préférence sous agitation.<br />
Institut POURQUIER<br />
POURQUIER ® Elisa Cryptosporidium Antigène monocupule- Version P00605/03 du 12/07/2006 - Page 5/6