DNA Extraction & Inhibition Control Real-Time PCR - Diagenode ...
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DIA-EIC/<strong>DNA</strong>-050<br />
Protocole<br />
I. <strong>DNA</strong> extraction & inhibition control<br />
Le contrôle ADN d’extraction & d’inhibition de <strong>Diagenode</strong> est une culture virale contenant une<br />
charge virale de 1.000 TCID50/ml.<br />
Les résultats suivants sont obtenus avec l’utilisation du Nuclisens EASYMAG System<br />
(Biomerieux).<br />
Procédure:<br />
• 10 µl de chaque dilution extrait dans 500µl d’eau.<br />
• Nuclisens EASYMAG System on board extraction.<br />
• Elution dans 60 µl.<br />
• 5 µl utilisé for <strong>PCR</strong>.<br />
• TaqMan® Universal <strong>PCR</strong> mastermix (Applied Biosystems).<br />
• Les tests ont été réalisés sur un ABI Prism® 7000 instruments (Applied<br />
Biosystems).<br />
La valeur du Ct pour 1.000 TCID50/ml est +/-28,5. Le<br />
graphique montre également les résultats pour d’autres<br />
dilutions.<br />
(10.000 TCID50/ml est +/-24,8, 100 TCID50/ml est +/-<br />
31,5 et 10 TCID50/ml est +/-35)<br />
Pour l’extraction et l’isolation d’ADN d’un<br />
échantillon, ajouter 10µl de la culture virale<br />
contrôle dans l’échantillon juste avant le<br />
démarrage de la procédure d’extraction.<br />
(La concentration peut être modifiée afin d’adapter les<br />
<strong>PCR</strong> multiplexs avec la méthode d’extraction utilisée)<br />
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