Corrigé exercice 5 - IBMC
Corrigé exercice 5 - IBMC
Corrigé exercice 5 - IBMC
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Exercice 8 : Clonage et cartographie de restriction :L’énoncé de l’<strong>exercice</strong> doit être simplifié :Renseignements donnés par l’énoncé : le gène est encadré par 2sites SmaI entre lesquels il y a AUG….UAA et possede un site KpnIproche du AUG initiateur.
1. Schéma du clonage :
2. Taille, orientation et carte de restrictionTaille :Le vecteur = plasmide pUC19= 2700 bp, SITES DANSCASSETTE = UNIQUES !!!!!Pour avoir taille vecteur + insert il faut une bande dans une piste cad unedigestion avec ER qui ne coupe qu’une fois dans le vecteur mais pasdans l’insert soit qui ne coupe qu’une fois dans l’insert et pas dans levecteur Exemple: HindIII et NdeI taille = 4800 bp ⇒ fragment cad insertcad gene bar = 4800-2700 = 2100 pdb.
Pas de site HindIII dans bar
Orientation :Comme le clonage s’effectue à l’aide d’un seul site de restriction, le gènepeut être cloné dans les 2 orientations.Pour résoudre le problème de l’orientation du gène on étudie la digestionavec l’enzyme de restriction dont on nous donne une indication quant àla localisation de son site dans le gène cad KpnI
Carte de restriction :
Change language