Jánosi - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István Egyetem ...

Morfológiai vizsgálatok
A baktériumok alakját és festődését 48 órás baktérium-színtenyészetekből készített Gram-szerint
festett kenetek 1000×-es nagyításának fénymikroszkópos vizsgálatával határoztuk meg.
Az izolátumok mozgásképességének elbírálása során 5 µl fiziológiás sóoldatban tűhegynyi
mennyiségű 48 órás baktériumtelepet szuszpendáltunk, fedőlemezzel fedtük majd a nedveskamra
készítményt fáziskontraszt mikroszkóppal vizsgáltuk.
Biokémiai tulajdonságok vizsgálata
A kataláz próbát zsírtalanított tárgylemezen végeztük, kacsnyi mennyiségű baktériumra 3%-os
hidrogén-peroxidot (H2O2) cseppentettünk, az elbírálást szabad szemmel végeztük a pezsgés
megindulása vagy hiánya alapján.
A citokróm-oxidáz C enzim vizsgálatát szűrőpapíron, steril üveg Petri-csészében végeztük.
Műanyag kaccsal 3-4 baktériumtelepet a szűrőpapír felületére kentünk, majd tetrametil-para-
fenilén-diamin (Sigma) frissen készített vizes oldatát öntöttük rá, a pozitív eredményt jelző kék
színelváltozás megjelenését vagy hiányát 30 másodperc elteltével vizsgáltuk.
Az izolált törzsek indoltermelő képességét 10% ló vérsavót és 1% L-triptofánt (Sigma) tartalmazó
levestáptalajba (100 ml: 1 g pepton, 1 g élesztőkivonat, 0,5 g glükóz, 0,4 g KHPO4, 0,4 g K2HPO4,
0,5 g NaCl; pH 7,5; Spektrum 3-D Kft., Magyarország) oltott kacsnyi mennyiségű baktérium
normál légköri körülmények között 37°C-on végzett 24 órás inkubálása után bíráltuk el. A
levestenyészetet először pár csepp (~10 µl) éterrel kiráztuk, majd 20 µl Kovács-reagenst (10 g 4-
dimetilamino-benzaldehid 150 ml 1-pentanolban feloldva, 50 ml tömény sósavval kiegészítve)
rétegeztünk az étergyűrű alá. A határfelületen létrejött piros gyűrű megléte vagy hiánya alapján
bíráltuk el a tesztet.
6.3.3 A törzsek azonosítása szénforrás-hasznosítás alapján
A BIOLOG MICROSTATION ID SYSTEM rendszere a mikroorganizmus 95-féle tulajdonságát
vizsgálja egyszerre, mely alapján a vizsgált baktérium fajszintű azonosítása lehetséges. A
vizsgálómódszer részletes ismertetése az 6.4 szakaszban található.
Az azonosítás során a szoftver összeveti az általunk betáplált adatokat az adatbázisában található
adatokkal és ez alapján, százalékos valószínűség szerint listába rendezve megad 10, a vizsgált
baktériumtörzshöz leginkább hasonló, a rendszer által ismert baktériumfajt. Abban az esetben, ha a
program fajszinten nem ismeri fel pontosan a vizsgált izolátumot, akkor jelzi, hogy csak genus-
szinten vagy egyáltalán nem tudta azonosítani, de ez esetben is valószínűségi sorrendben megadja a
10 leghasonlóbb fajt.
42