Jánosi - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István Egyetem ...

6.4.3 A vizsgálatok eredményei és értékelésük
Az inkubációs idő 16. és 24. órája között a MICROPLATE vájulataiban kialakult színelváltozás
meglétét vagy hiányát szemmel bíráltuk el, majd a BIOLOG rendszerhez tartozó MicroLog3
(4.20.05) szoftver adatlapjain törzsenként rögzítettük az eredményeket.
Az vizsgált H. somni törzsek anyagcsere-ujjlenyomatai alapján a MicroLog3 (4.20.05) szoftver
segítségével az összes törzs eredményét magában foglaló, valamint állatfajonkénti eredet szerint
csoportosított eredményeket tartalmazó törzsfákat készítettünk.
A törzsfán 1 egységnyi távolság a törzsek 1 szénforrás hasznosításában való eltérését jelezi, tíznél
több eltérő tulajdonság esetén a rendszer külön csoportba sorolta a vizsgált törzseket, az elemzés
során pedig az alcsoportokat 3 tulajdonság különítette el egymástól.
6.5 A H. somni törzsek vizsgálata pulzáló mezejű
gélelektroforézissel
6.5.1 A PFGE-vel vizsgált törzsek
A SmaI restrikciós enzimmel végzett emésztéses vizsgálatokba 1 juh ondó eredetű törzs kivételével,
ugyanazokat a törzseket vontuk be, mint a szénforrás-hasznosítási vizsgálatokba, azaz 40
szarvasmarha légzőszervi- és 20 hüvely eredetű, valamint 26 juh- és 11 kecske genitális eredetű H.
somni törzset vizsgáltunk.
A Cfr9I restrikciós enzimmel végzett vizsgálatokba a SmaI által nem emésztett törzsek közül 6
szarvasmarha légzőszervi eredetű törzset és az ATCC-43625 számú H. somni típustörzset vontuk
be. Ezenkívül 3 szarvasmarha légzőszervi- és 1 hüvely eredetű, valamint 7 juh ondó eredetű, az
SmaI restrikciós enzim által hasított H. somni törzset is vizsgáltunk.
A vizsgált törzsek adatait az 1., 2., 3., 4. és 5. függelék tartalmazza.
6.5.2 A H. somni törzsek emésztése SmaI és Cfr9I (XmaI) restrikciós
enzimekkel
A PFGE vizsgálathoz BHI levestáptalajban, 37°C-on, 24 órán át inkubált H. somni tenyészeteket
használtunk. A levestenyészetek csíraszámát, 600 nm-en spektrofotométerrel mértük, majd TE (100
mM Tris, 250 mM EDTA) pufferben (pH 8,0) milliliterenként 4×10 8 TFE-t tartalmazó (TFE/ml)
szuszpenziókat készítettünk belőlük. A szuszpenzióból 100 µl-t óvatosan összekevertünk 100 µl 2%
SeaPlaque agarózzal (Cambrex), az így kapott 200 µl keverék 1% nátrium-lauril-szarkozil-szulfátot,
valamint 1 mg/ml Proteináz K-t (Sigma) is tartalmazott. Az agaróz-baktérium szuszpenziót 2 mm ×
4 mm × 8 mm-es öntőformába („dugó”) pipettáztuk és 4°C-on 30-40 percig dermedni hagytuk.
46