Nº 28 - PDF - Instituto Politécnico de Castelo Branco

Atividade Científica
Caraterização molecular de Listeria
Monocytogenes Ser. 4b por Amplified
Fragment Length Polymorphism “AFPLP”
Maria Manuela Martins
Francisco Goulão
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Resumo
O serotipo maioritariamente associado às estirpes de Listeria monocytogenes isoladas
de queijos Portugueses pertence ao serotipo 4b, o qual está referido na literatura como
o responsável pelo maior número de casos de listeriose humana. Tendo em conta a importância
de que se revestem estas estirpes, a sua caraterização usando métodos mais
discriminatórios do que a serotipagem é de crucial importância. Assim, o presente estudo
teve por finalidade a caraterização molecular de estirpes de L. monocytogenes ser. 4b,
isoladas de queijos de diferentes zonas do país, e uma primeira avaliação da distribuição
geográfica dos tipos moleculares encontrados. Foi usado o método Amplified Fragment
Length Polymorphism (AFLP) com base no protocolo que se encontra em funcionamento
no Health Protection Agency Department of Gastrointestinal Infections / Centre for Infections,
em Londres. Para a análise da similaridade entre estirpes recorreu-se ao programa
Bionumerics. O poder discriminatório do método AFLP foi calculado através do índice
de diversidade de Simpson. Das 47 estirpes de L. monocytogenes ser. 4b tipadas neste
trabalho resultaram 6 perfis diferentes com um número de bandas compreendido entre 5
a 7 no intervalo entre 500 bp e 1500 bp. Todos os perfis AFLP apresentaram uma banda
comum de aproximadamente 850 bp. O poder discriminatório do método AFLP foi avaliado
em 0,70. Pela análise do dendrograma observou-se a existência de 6 clusters para
uma percentagem de similaridade de 98%, os quais foram agrupados de acordo com o tipo
AFLP previamente atribuído. A relação de similaridade mais afastada encontrada entre os
47 isolados foi de 67%. Considerando a totalidade dos isolados provenientes da região da
Serra da Estrela, foi possível identificar 5 tipos AFLP, quatro dos quais identificados apenas
naquela zona e um quinto tipo AFLP com uma distribuição geográfica alargada (Serra
da Estrela, Serpa e São Jorge), o que contraria a sua utilização como marcador geográfico.
Comparando estes 47 perfis com os obtidos anteriormente pelo mesmo método usando
isolados provenientes das zonas produtoras de queijo de Castelo Branco e Tolosa (n=61),
conclui-se que os tipos AFLP obtidos são diferentes, não havendo tipos AFLP comuns
entre as zonas de Tolosa, Castelo Branco e Serra da Estrela, indicando uma associação
entre um determinado tipo AFLP de L. monocytogenes ser. 4b e cada uma destas regiões.
Dissertação do Mestrado
em Engenharia Zootécnica
ministrado, em colaboração,
pela Universidade dos Açores
e pela Escola Superior Agrária
do Instituto Politécnico
de Castelo Branco
Agroforum | n.º 28 Ano 20, 2012