NOVA Lite™ HEp-2 ANA Kits/Substrate Slides - inova

3. Lavagem de Lâminas: Após a incubação, use um frasco de pressão de plástico ou uma pipeta paralavar suavemente o soro com o tampão PBS II diluído. Oriente a lâmina e o fluxo do tampão PBS IIde modo a minimizar o transbordo das amostras entre os poços. Evite direccionar o fluxodirectamente para os poços para impedir danos nos substratos. Coloque as lâminas na tina delavagem com PBS II diluído durante mais 5 minutos. Se desejado, coloque as lâminas em um frascode Coplin do amortecedor diluído de PBS II por até 5 minutos.4. Adição de Conjugado Fluorescente: Deite fora o excedente do tampão PBS II. Coloque novamentea lâmina na câmara húmida e cubra imediatamente cada poço com uma gota de conjugadofluorescente. Incube as lâminas durante mais 30 + 5 minutos.5. Lavagem de Lâminas: Repita o Passo 3.6. Lamela: O procedimento para colocar a lamela varia de laboratório para laboratório; no entanto, sãorecomendados os seguintes procedimentos:a. Coloque uma lamela numa toalha de papel.b. Aplique meio de montagem numa linha contínua na extremidade da lamela.c. Deite fora o excesso de tampão PBS II e toque com a extremidade inferior da lâmina naextremidade da lamela. Baixe a lâmina suavemente no sentido da lamela de tal modo que omeio de montagem flua para a extremidade superior da lâmina sem a formação de bolhas dear ou artefactos.Controlo de QualidadeO Controlo Padrão de Ponto Final de Titulagem ANA e o Controlo Negativo IFA deverão ser colocados emtodas as lâminas para assegurar que todos os reagentes e procedimentos foram efectuados correctamente.Outros controlos adequados podem ser preparados alíquotando amostras de soro humano e armazenando a< -70 ° C. De forma a que os resultados dos testes sejam considerados válidos, todos os critérios defenidosdevem ser satisfeitos. Se algum destes critérios não for satisfeito, os resultados do teste deverão serconsiderados inválidos e o ensaio deverá ser repetido.1. O Controlo Padrão de Ponto Final de Titulagem ANA não diluído deve ser > 3+.2. O Controlo Negativo IFA deve ser negativo.Interpretação dos ResultadosReacção Negativa. Uma amostra é considerada negativa se a fluorescência nuclear específica for igual ouinferior ao Controlo Negativo IFA. As amostras podem exibir vários graus de fluorescência de fundo devido aanticorpos heterófilos ou auto-anticorpos de baixo nível de fluorescência para constituintes citoplasmáticostais como proteínas contrácteis.Reacção Positiva. Uma amostra é considerada positiva se a fluorescência nuclear específica for superior aoControlo Negativo IFA.Determine o grau ou intensidade de fluorescência usando estes critérios:4+ Fluorescência verde maçã brilhante3+ Fluorescência verde maçã clara2+ Fluorescência positiva claramente distinguível1+ Fluorescência específica mais baixa que permite que a fluorescência nuclear oucitoplasmática seja claramente diferenciada da fluorescência de fundo.Interpretação do Padrão. Uma diversidade de padrões de fluorescência nuclear e citoplasmática podem serexibidos dependendo dos tipos e das quantidades relativas de auto-anticorpos presentes na amostra.Podem ser observados os seguintes tipos de padrões de fluorescência:Homogéneo: Uma fluorescência sólida do núcleo com ou sem ocultação aparente dos nucléolos.Antigénios nucleares presentes: dsDNA, ssDNA, histonasAssociação de doença: Os títulos elevados são sugestivos de SLE; os títulos mais baixos sãosugestivos de SLE ou de outras doenças do tecido conjuntivo.Periférico: Uma fluorescência sólida, inicialmente em volta da região exterior do núcleo, com fluorescênciamais fraca na direcção do centro do núcleo.Antigénios nucleares presentes: dsDNA, ssDNA, RNP, histonasAssociação de doença: Os títulos elevados são sugestivos de SLE; os títulos mais baixos sãosugestivos de SLE ou de outras doenças do tecido conjuntivo.Mosqueado: Uma fluorescência de aspecto fino ou granulado do núcleo, geralmente sem coloraçãofluorescente dos nucléolos.Antigénios nucleares presentes: Sm, RNP, Scl-70, SS-A, SS-B, e outros sistemasantigénio/anticorpo ainda não caracterizados.Associação de doença: Títulos elevados sugestivos de SLE (anticorpo Sm), doença mista do tecidoconjuntivo (anticorpo RNP), escleroderme (anticorpo Scl-70), ou complexo de síndroma-sicca deSjogren (anticorpo SS-B); títulos mais baixos podem ser sugestivos de outras doenças do tecidoconjuntivo.Nucleolar: Fluorescência granulada grosseira dentro do núcleo, geralmente em número inferior a 6 porcélula, com ou sem granulados finos ocasionais.Antigénios nucleares presentes: 4-6S RNA e outros antigénios nucleares desconhecidos.Associação de doença: Os títulos elevados são prevalentes na escleroderme e no síndroma deSjogren.Centrómero: Um padrão de fluorescência discreto, granulado. Os grânulos nucleares são muito discretos enormalmente em número múltiplo de 46.Antigénios nucleares presentes: Centrómero cromossómico (cinetócoro).4