QUANTA Lite® β2 GPI IgG ELISA 708665 - inova

QUANTA Lite® β 2 GPI IgG ELISA 708665Para Diagnóstico In VitroComplejidad de CLIA: AltoAplicaciónQUANTA Lite® β 2 GPI IgG es un ensayo basado en la técnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para ladetección semi cuantitativa de autoanticuerpos de clase IgG antiglicoproteína β 2 I (β 2 GPI). Los anticuerpos anti-β 2 GPIse utilizan como ayuda para el diagnóstico de ciertos trastornos trombóticos autoinmunes, como los que se derivan dellupus eritematoso sistémico (LES) u otras afecciones similares al lupus.Sumario y Explicación de la pruebaLos anticuerpos anticardiolipina (ACA) se han asociado estrechamente con las trombosis venosas y arteriales. 1-5 Estehecho se observó por primera vez durante los estudios realizados sobre el lupus eritematoso, una enfermedad cuyossíntomas principales incluyen las trombosis. 6,7 Los estudios realizados recientemente 8-12 han demostrado que senecesita un cofactor de suero 50kD para que los anticuerpos anticardiolipina, incluyendo el caso de los pacientes conLES, se enlacen con la cardiolipina recubierta en placas de plástico. Este cofactor se ha identificado con la β 2 -glicoproteína I, también denominada apolipoproteína H. 8,12,13,14 Pero, aunque que la β 2 GPI se conoce como inhibidor invitro del mecanismo intrínseco de la coagulación de la sangre, 15 de la agregación plaquetaria inducida por ADP, 16 y dela actividad de la protrombinasa en presencia de plaquetas activadas, 17 su función fisiológica sigue sin estar clara.Se ha observado que el anticuerpo anticardiolipina de pacientes con síndrome antifosfolípidos (SAFL) reconoce lasestructuras β 2 GPI modificadas pero no la cardiolipina, la β 2 GPI nativa o los epítopes estructuralmente definidos tantopor la cardiolipina como por la β 2 GPI. 8-12Galli et al. 9 y Viard, et al. 18 observaron, cada uno por su cuenta, que el anticuerpo anticardiolipina derivado de lospacientes autoinmunes (por ejemplo, pacientes con LES y/o SAFL) se dirigía a la molécula de β 2 GPI recubierta en lasplacas de plástico. Koike 11 y Matsuura 12 mostraron de manera concluyente que la β 2 GPI es, en efecto, el antígeno alcual los anticuerpos anticardiolipina de muchos pacientes se unen. Asimismo, también demostraron que el fosfolípidosirve simplemente para unir la β 2 GPI a la fase sólida.Es bien conocido en los test tradicionales de anticuerpos anticardiolipina el hecho de que pueden proporcionar falsospositivos debido a la interacción de los fosfolípidos con ciertas muestras de enfermedades infecciosas, muyespecialmente la sífilis, y también otros autoanticuerpos como el ADN de doble cadena. 2,3 Si se eliminan los fosfolípidosde la fase sólida y se utiliza únicamente β 2 GPI, el test se hace aún más específico para detectar problemas potencialesde coagulación. Este aumento de la especificidad ha sido demostrado de forma concluyente por varios grupos deinvestigadores. 11,12,16,17,19,20,21,22 El test de autoanticuerpos β 2 GPI resulta un ensayo útil y más específico y, cuando seusa junto con los tests tradicionales de anticuerpos anticardiolipina y de anticoagulación de lupus, ayuda a diagnosticarlas trombosis en pacientes de riesgo.Se detectaron anticuerpos anti-β 2 GPI de clase IgG en 17 de 47 pacientes con LES (36%). 18 Nueve de estos 47pacientes con LES mostraban trombosis, y 8 de ellos (89%) tenían anticuerpos anti-β 2 GPI. Hisham, et al. 20descubrieron anticuerpos anti-β 2 GPI de clase IgG en los 5 pacientes (100%) con al menos 2 manifestaciones cínicasdocumentadas de SAFL. A todos se les clasificó como pacientes con niveles elevados de anticuerpos anti-β 2 GPI. Ochode 14 pacientes (57%) con altos niveles de anticuerpos anti-β 2 GPI habían sufrido al menos 1 trombosis.Tsutsumi, et al. 22 descubrieron anticuerpos anti-β 2 GPI de tipo IgG y IgM en un 10.1% y un 5.8% respectivamente de las308 muestras aleatorias obtenidas de pacientes japoneses con LES. Los anticuerpos anti-β 2 GPI de tipo IgG eran másfrecuentes en pacientes con antecedentes trombóticos. Estos investigadores también observaron que de 15 pacientescon pérdidas fetales recurrentes, el 20% dieron positivo para β 2 GPI de tipo IgG. También encontraron que los pacientescon antecedentes trombóticos tenían más probabilidades de dar positivo en los controles de β 2 GPI de tipo IgM y quelos niveles de β 2 GPI de tipo IgM eran más altos en el grupo con antecedentes trombóticos que en el que no los tenía.De 15 pacientes sin antecedentes de pérdidas fetales, ninguno dio positivo en los tests de β 2 GPI de clase IgM.Cabiedes, et al. 23 estudiaron 94 pacientes con LES, 39 de los cuales habían presentado manifestaciones clínicas deSAFL. La relación entre las manifestaciones clínicas del SAFL era más estrecha con los anticuerpos anti-β 2 GPI que conel hecho de dar positivo en los tests de ACA convencionales. Se detectaron anticuerpos anti-β 2 GPI de clase IgG en elsuero de 16 de 18 pacientes (89%) con SAFL. De 22 pacientes que habían dado positivo en los tests de ACA pero queno presentaban manifestaciones clínicas de SAFL, ninguno de ellos dio positivo en las pruebas de β 2 GPI.Cerrato, et al. 24 observaron anticuerpos anti-β 2 GPI de clase IgG en el 87.5% de un grupo de 32 pacientes conantecedentes trombóticos (SAFL). En este mismo grupo se encontró un 71.9% de pacientes con anticuerpos anti-β 2 GPIde clase IgM.Sebastiani, et al. 25 detectaron anticuerpos anti-β 2 GPI de tipo IgG en 110 pacientes (20.3%) y de tipo IgM en 109 deellos (20.1%), en un estudio que incluía muestras de 542 pacientes con LES. La presencia de anticuerpos anti-β 2 GPIestaba estrechamente asociada con el ACA (p < 10 -5 ). Además, demostraron que los anticuerpos anti-β 2 GPI de lostipos IgG y IgM estaban asociados con las trombosis, tanto venosas como arteriales.Procedimiento de trabajoEl antígeno β 2 GPI purificado se ha unido en condiciones que mantienen su estado nativo. Se añaden controles ymuestras convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la incubación los anticuerpos anti β 2 GPIal antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se elimina mediante lavado y se añade conjugado antiIgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite que el conjugado se una a los anticuerpospresentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se añade un sustrato cromógenico y tras incubación laactividad enzimática presente en el pocillo es proporcional a la intensidad de color desarrollado. Después de detener laproducción enzimática de producto coloreado, la presencia o ausencia de anticuerpos anti-β 2 GPI se determinacomparando la densidad óptica de la muestra con una curva de calibración de cinco puntos. El estándar utilizado pararealizar esta curva se basa en los calibradores de referencia de glicoproteína β 2 I de tipo IgG que facilita el Laboratoriode Reumatología de la Universidad de Seton Hall, St. Joseph's Hospital and Medical Center. 26 Los resultados sepublican cada mes y medio en unidades estándar de anti-β 2 GPI de inmunoglobulina G (SGU).1

Reactivos1. Microplaca ELISA de poliestireno con pocillos recubiertos con antígeno β 2 GPI purificado (12-1 x 8 pocillos),envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con desecante2. Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de IgGanticuerpos humanos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml3. Control β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano con anticuerposanti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml4. Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano conanticuerpos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml5. Calibrador B β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano conanticuerpos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml6. Calibrador C β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano conanticuerpos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml7. Calibrador D β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano conanticuerpos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml8. Calibrador E β 2 GPI IgG ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero IgG humano conanticuerpos anti β 2 GPI, prediluido, 1.2 ml9. Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y conservante, 50 ml10. Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón con Tris yTween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución.11. Conjugado β 2 HRP IgG Conjugate, con anti- IgG humana de cabra, 1 frasco – de color azul conteniendotampón, estabilizante de proteína y conservante, 10ml12. Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml13. Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 mlAdvertencias1. Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y conjugadoconsiderado en el estado de California como causante de cáncer.2. Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha examinadoresultando negativo para anticuerpos contra HIV, HBsAg, y HCV por métodos aprobados por la FDA. Ningúnmétodo puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o otros agentes contagiosos esténausentes. Por lo tanto, los controles Control β 2 GPI IgG ELISA, Calibradores A,B,C,D E para β 2 GPI IgG ELISAy ELISA negativo deben manejarse como si fueran material potencialmente contagioso. 273. Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o absorción através de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las tuberías para formarazidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la eliminación de reactivos serecomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de dichas azidas metálicas.4. El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico si seingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.5. El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por la piel.Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos.6. La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a bases,metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es venenoso y corrosivo,puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con piel y ojos.7. Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.8. Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su laboratorio acercade la eliminación de residuos.Precauciones1. Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro.2. La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultadosinconsistentes.3. Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar lugar auna pérdida de precisión y/o un fondo elevado.4. La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos, totalmente o enparte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el procedimiento manual. Esresponsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento automatizado y comprobar que produceresultados dentro de los límites aceptables.5. Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la temperatura inicial delos reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de técnica de pipeteo, la calidad de latécnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los resultados, y los tiempos de incubación durante elensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un trabajo consistente para obtener resultados exactos yreproducibles.6. Se recomienda seguir estrictamente el protocolo.7. El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la degradacióndel antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados.8. Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un conjugadoHRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para este producto paraevitar que esto ocurra.9. La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o secadoinadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el laboratorio comoformalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con el tiempo. Enjuague bientodo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.2

Condiciones de Almacenaje1. Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta la fechade caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.2. Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes cerrándolaherméticamente y almacenándola a 2-8ºC.3. La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.Recolección de MuestrasEste kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede afectaradversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que contenganpartículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas. Tras la recolección de las muestrasde sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento CLSI (Anteriormente NCCLS) H18-A2 recomienda lassiguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las muestras a temperatura ambiente no más de 8horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas, refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completarentre 48 horas, o para enviar las muestras, congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas lasmuestras deben agitarse bien antes de utilizarse.ProcedimientoMateriales Suministrados1 Microplaca β 2 GPI IgG ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte1 1.2 ml control negativo ELISA prediluido1 1.2ml control prediluido Control β 2 GPI IgG ELISA1 1.2ml control prediluido Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA1 1.2ml control prediluido Calibrador B β 2 GPI IgG ELISA1 1.2ml control prediluido Calibrador C β 2 GPI IgG ELISA1 1.2ml control prediluido Calibrador D β 2 GPI IgG ELISA1 1.2ml control prediluido Calibrador E β 2 GPI IgG ELISA1 50ml Diluyente de muestra HRP1 25ml Solución de lavado concentrada 40X1 10ml Conjugado β 2 HRP IgG Conjugate (cabra) anti IgG humana1 10ml Cromógeno TMB1 10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)Material necesario no incluidoMicropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µlPuntas desechables para micropipetaTubos para dilución de muestras, 4mlAgua destiladaRecipiente de 1L para la solución de lavado reconstituidaLector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble longitud de onda)MetodologíaAntes de empezar1. Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar.2. Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml de aguadestilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de solución de lavado añadiendo2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16 pocillos que vayan a utilizarse. El tampón diluidoes estable 1 semana a 2-8°C.3. Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de diluyente. Lasmuestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO DILUIR los Control β 2 GPIIgG ELISA, Calibradores A a E β 2 GPI IgG ELISA y ELISA negativo.4. La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti β 2 GPI IgG usando unidades arbitrariasrequiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para cada muestra. Serecomienda que las muestras se hagan por duplicado.5. Preparación de la curva estándar: Para los puntos A a E de la curva estándar de cinco puntos, use una soluciónPREDILUIDA de los Calibradores A a E para β 2 GPI IgG ELISA A directamente del vial. La curva estándar decinco puntos consta de los siguientes valores:PuntoUnidades estándar de β 2 GPI IgG (SGU)A Solución prediluida Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA 150.0B Solución prediluida Calibrador B β 2 GPI IgG ELISA 75.0C Solución prediluida Calibrador C β 2 GPI IgG ELISA 37.5D Solución prediluida Calibrador D β 2 GPI IgG ELISA 18.8 o 18.75E Solución prediluida Calibrador E β 2 GPI IgG ELISA 9.4 o 9.375Procedimiento de Ensayo1. TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE EMPEZAR ELENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver inmediatamente las tiras sin utilizar ala bolsa de aluminio y sellarla firmemente para minimizar la exposición a la humedad.2. Añada 100µL de los calibradores, las muestras diluidas de los pacientes, el control negativo de ELISA y elcontrol de β 2 GPI IgG ELISA a los pocillos.NOTA: El Control β 2 GPI IgG ELISA y el Control ELISA Negativo están ya prediluidos y listos para su uso. Elvalor y el intervalo aceptable del control β 2 GPI IgG ELISA figura impreso en la etiqueta del vial. Si el Control nose encuentra entre los valores aceptables indicados, repita la prueba.3

3. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana . El tiempo deincubación empieza después de la adición de la última muestra.4. Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos pocillos yaspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la placa y golpearlasuavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el último lavado. Es importanteque cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de lavado. Mantener la misma secuenciapara la aspiración que la usada para la adición de muestras.5. Agregar 100µl de Conjugado IgG β 2 HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las condiciones másasépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la cantidad de conjugadonecesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN POTENCIAL MICROBIANA Y/OQUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar lospocillos 30 minutos como en el paso 3.6. Lavado: Repetir el paso 4.7. Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente.8. Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y temporalización que laefectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para mezclar bien los pocillos.9. Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea seguir elmétodo de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de referencia.Control de Calidad1. Los controles Control β 2 GPI IgG ELISA, Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA y Control Negativo ELISA debenprocesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y procedimientos funcionancorrectamente.2. El usuario debe notar que debido a que los controles Control β 2 GPI IgG ELISA, Calibrador A β 2 GPI IgG ELISAy ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados con dilución de especímenes.3. Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden prepararsecontroles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe almacenarse a < -20°C.4. Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios especificados acontinuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y repetirse.a. La absorbancia del control Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA debe ser superior a la del Control β 2 GPI IgGELISA y la de este debe ser superior a la del control negativo.b. El control Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras que ladel control negativo no debe exceder de 0.2.c. La absorbancia del Control β 2 GPI IgG ELISA debe ser superior al doble del control negativo, u oscilarentre 0.25.d. La concentración del Control β 2 GPI IgG ELISA debe estar dentro del rango especificado en la etiqueta.e. El usuario puede referirse al documento CLSI (Anteriormente NCCLS) C24-A2 para una guía adicionalacerca de buenas prácticas de laboratorio.Cálculo de Resultados1. Determinar el promedio de todos los resultados duplicados.2. Marque la absorbancia media de la curva del Calibrador para los ensayos de IgG sobre sus gráficas deconcentraciones. Utilice papel de registro de curva de mejor ajuste. Como alternativa, también puede utilizarpapel log/log. Las unidades SGU asignadas a los calibradores figuran impresas en los viales.3. Determine la concentración desconocida de β 2 GPI IgG en unidades estándar de β 2 GPI IgG (SGU) a partir deleje "X" leyendo la absorbancia correspondiente en el eje "Y". El Calibrador y el Control para este kit se basanen los estándares de referencia de β 2 -Glicoproteína I de tipo IgG.4. Los valores negativos van desde 0 a 20 unidades. Los valores se consideran positivos a partir de 20 SGU.Interpretación de los ResultadosLa técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de pacientes. Losvalores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe establecer su propio rangonormal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de pacientes.1. Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti-β 2 GPI IgG y sugiere la posibilidad de lupuseritematoso sistémico (LES) u otras afecciones similares al lupus.2. Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti-β 2 GPI IgG o niveles inferiores al punto de cortedel ensayo.3. Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes resultados seobtuvieron con el kit INOVA QUANTA Lite® β 2 GPI IgG ELISA. Los valores obtenidos con kits de diferentesfabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La magnitud de los niveles informados de IgGno puede correlacionarse con un punto final”.Limitaciones del Procedimiento1. Actualmente, se está estudiando la relevancia clínica de los anticuerpos anti-β 2 GPI en lo que se refiere a otrasenfermedades distintas del LES.2. Cuando los resultados de los tests de anticuerpos anti-β 2 GPI resultan negativos en presencia de evidenciasclínicas, se aconseja la realización de tests de anticoagulante lúpico, de anticardiolipina o de cualquier otro tipoque se considere conveniente.3. El diagnóstico no debería basarse únicamente en los resultados del test de anticuerpos anti-β 2 GPI. Losresultados deben interpretarse en combinación con pruebas físicas.4. El tratamiento no debería basarse únicamente en un resultado positivo del test de anticuerpos anti-β 2 GPI.Debe contarse también con otras evidencias clínicas.5. Existe la posibilidad de que algunas muestras den positivo para los tests de anticardiolipina pero negativo paralos de anticuerpos anti-β 2 GPI. El test de anticuerpos anti-β 2 GPI resulta más específico para determinar laexistencia de un riesgo de trombosis. El test de anticardiolipina puede proporcionar resultados positivos falsosdebido a la interacción con el ADN de doble cadena o los anticuerpos de ciertas enfermedades infecciosas.6. La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.4

Valores EsperadosMuestras de taller – 7º Simposio Internacional sobre Anticuerpos Antifosfolípidos – Nueva OrleansComo parte del 7º simposio sobre Antifosfolípidos celebrado del 9 al 13 de octubre de 1996, se realizó un taller deestandarización con el objetivo de evaluar el comportamiento de varios tests de anticardiolipina basados eninvestigaciones y otros tests de uso comercial. Con las muestras disponibles se probó el kit QUANTA Lite® β 2 GPI IgGELISA. Se incluyeron 10 muestras de pacientes con evidencias documentadas de síndrome antifosfolípidos (SAFL), 7muestras de pacientes con enfermedades infecciosas como la sífilis y la fiebre Q, 2 muestras de pacientes conenfermedades autoinmunes de carácter reumático y 11 muestras normales. Las muestras también se probaron con unensayo tradicional de anticardiolipina. Los resultados se muestran a continuación.Grupo Núm. Núm. + Núm. +Muestras β 2 GPI CardiolipinaSAFL 10 10 10Enfermedades infecciosas 7 0 4Enfermedades reumáticas 2 1 2Normales 11 0 1Los 10 pacientes con SAFL dieron positivo tanto para el test de β 2 GPI como para el de cardiolipina. De los otros tresgrupos de pacientes, todas las muestras dieron negativo para el test de β 2 GPI excepto las de 1 paciente conenfermedades reumáticas. Cuatro muestras del grupo de pacientes con enfermedades infecciosas, las dos de pacientescon enfermedades reumáticas y 1 de las muestras de pacientes normales dieron positivo con el test tradicional deanticuerpos anticardiolipina.Características específicas de rendimientoResumen de los estudios clínicosEl rendimiento del test QUANTA Lite® β 2 GPI IgG ELISA fue evaluado mediante 1 estudio clínico interno y 4 estudiosexternos. Los resultados se muestran en la siguiente tabla.Grupo de pacientes Número Núm. de positivos (%)SAFL* causada por LES 37 36 (97.2)SAFL primario 15 14 (93.3)LES 34 2 (5.8)Artritis reumatoide 17 0 (0)Polihipergammaglobulinemia 7 0 (0)Enfermedades infecciosas** 81 0 (0)Normales 256 1 (0.4)*SAFL = Síndrome antifosfolípidos** La mayoría de ellos dieron positivo en las pruebas serológicas para el diagnóstico de la sífilisTomando como base los resultados anteriores, el test de β 2 GPI tiene una sensibilidad clínica del 96.2% y unaespecificidad clínica del 99.6%.Sensibilidad y Especificidad RelativasConcordancia con el ensayo de anticardiolipinaDe entre las muestras de suero presentadas a un importante laboratorio de referencia para el diagnóstico deanticuerpos anticardiolipina, 40 fueron seleccionadas aleatoriamente y sometidas a tests de anticuerpos IgGanticardiolipina y anti-β 2 GPI. Los resultados se resumen a continuación.β 2 GPI+ -+ 5 19 Sensibilidad relativa 20.8%Cardiolipina Especificidad relativa 100.0%- 0 16 Eficiencia relativa 52.5%Cinco de las muestras dieron positivo con ambos métodos y 16 dieron negativo también con ambos métodos. No seencontró ninguna muestra que diera positivo en los tests de anticuerpos anti-β 2 GPI y negativo en los de anticuerposanticardiolipina. Diecinueve muestras dieron positivo en los tests de anticuerpos anticardiolipina y negativo en los deanticuerpos IgG anti-β 2 GPI. En este sencillo estudio comparativo, en el que se trataron muestras de pacientes sinantecedentes clínicos seleccionadas aleatoriamente, la sensibilidad relativa de los resultados de anticuerpos IgG anti-β 2GPI fueron menores en comparación con los del ensayo de anticuerpos IgG anticardiolipina. Sin embargo, estosresultados eran esperados. Los ensayos tradicionales de anticardiolipina detectan los anticuerpos anti-β 2 GPI, así comoaquellos anticuerpos que reaccionan con los propios fosfolípidos. Como se demostró en el citado taller realizado enNueva Orleans y en el Resumen de los Estudios Clínicos, el ensayo de β 2 GPI muestra una sensibilidad similar y unaespecificidad mayor en comparación con los resultados de anticardiolipina de pacientes con antecedentesdocumentados de SAFL.5

Precisión y ReproducibilidadLa precisión y reproducibilidad del ensayo se midió procesando seis replicados de muestras fuertemente positivas,moderadamente positivas y negativas seis veces en pruebas de mañana y tarde durante tres días consecutivos. Lareactividad media de los negativos fue de 18.9, positivos moderados 44.3 yde los positivos fuertes fue de 82.4 unidades.La desviación estándar (DE) y el coeficiente de variación (CV) para cada muestra se resume a continuación.Negativo Positivo Moderado Positivo FuerteDE CV DE CV DE CVGlobal 0.86 4.5% 2.48 5.6% 2.79 3.4%Intra ensayo 0.75 4.0% 2.34 5.3% 2.66 3.2%Inter ensayo 0.82 4.3% 2.41 5.4% 2.87 3.5%QUANTA Lite®es una marca registrada deINOVA Diagnostics, Inc.Referencias1. Harris, E.N., A.E. Gharavi, M.L. Boey, B.M. Patel, C.G. Mackworth-Young, S. Loizou and G.R.V. Hughes.Anticardiolipin antibodies: detection by radioimmunoassay and association with thrombosis in systemic lupuserythematosus. Lancet, 2: 1211-1214, 1983.2. Koike, T., M. 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