QUANTA Lite® β2 GPI IgG ELISA 708665 - inova

3. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana . El tiempo deincubación empieza después de la adición de la última muestra.4. Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos pocillos yaspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la placa y golpearlasuavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el último lavado. Es importanteque cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de lavado. Mantener la misma secuenciapara la aspiración que la usada para la adición de muestras.5. Agregar 100µl de Conjugado IgG β 2 HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las condiciones másasépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la cantidad de conjugadonecesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN POTENCIAL MICROBIANA Y/OQUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar lospocillos 30 minutos como en el paso 3.6. Lavado: Repetir el paso 4.7. Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente.8. Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y temporalización que laefectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para mezclar bien los pocillos.9. Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea seguir elmétodo de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de referencia.Control de Calidad1. Los controles Control β 2 GPI IgG ELISA, Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA y Control Negativo ELISA debenprocesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y procedimientos funcionancorrectamente.2. El usuario debe notar que debido a que los controles Control β 2 GPI IgG ELISA, Calibrador A β 2 GPI IgG ELISAy ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados con dilución de especímenes.3. Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden prepararsecontroles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe almacenarse a < -20°C.4. Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios especificados acontinuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y repetirse.a. La absorbancia del control Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA debe ser superior a la del Control β 2 GPI IgGELISA y la de este debe ser superior a la del control negativo.b. El control Calibrador A β 2 GPI IgG ELISA debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras que ladel control negativo no debe exceder de 0.2.c. La absorbancia del Control β 2 GPI IgG ELISA debe ser superior al doble del control negativo, u oscilarentre 0.25.d. La concentración del Control β 2 GPI IgG ELISA debe estar dentro del rango especificado en la etiqueta.e. El usuario puede referirse al documento CLSI (Anteriormente NCCLS) C24-A2 para una guía adicionalacerca de buenas prácticas de laboratorio.Cálculo de Resultados1. Determinar el promedio de todos los resultados duplicados.2. Marque la absorbancia media de la curva del Calibrador para los ensayos de IgG sobre sus gráficas deconcentraciones. Utilice papel de registro de curva de mejor ajuste. Como alternativa, también puede utilizarpapel log/log. Las unidades SGU asignadas a los calibradores figuran impresas en los viales.3. Determine la concentración desconocida de β 2 GPI IgG en unidades estándar de β 2 GPI IgG (SGU) a partir deleje "X" leyendo la absorbancia correspondiente en el eje "Y". El Calibrador y el Control para este kit se basanen los estándares de referencia de β 2 -Glicoproteína I de tipo IgG.4. Los valores negativos van desde 0 a 20 unidades. Los valores se consideran positivos a partir de 20 SGU.Interpretación de los ResultadosLa técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de pacientes. Losvalores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe establecer su propio rangonormal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de pacientes.1. Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti-β 2 GPI IgG y sugiere la posibilidad de lupuseritematoso sistémico (LES) u otras afecciones similares al lupus.2. Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti-β 2 GPI IgG o niveles inferiores al punto de cortedel ensayo.3. Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes resultados seobtuvieron con el kit INOVA QUANTA Lite® β 2 GPI IgG ELISA. Los valores obtenidos con kits de diferentesfabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La magnitud de los niveles informados de IgGno puede correlacionarse con un punto final”.Limitaciones del Procedimiento1. Actualmente, se está estudiando la relevancia clínica de los anticuerpos anti-β 2 GPI en lo que se refiere a otrasenfermedades distintas del LES.2. Cuando los resultados de los tests de anticuerpos anti-β 2 GPI resultan negativos en presencia de evidenciasclínicas, se aconseja la realización de tests de anticoagulante lúpico, de anticardiolipina o de cualquier otro tipoque se considere conveniente.3. El diagnóstico no debería basarse únicamente en los resultados del test de anticuerpos anti-β 2 GPI. Losresultados deben interpretarse en combinación con pruebas físicas.4. El tratamiento no debería basarse únicamente en un resultado positivo del test de anticuerpos anti-β 2 GPI.Debe contarse también con otras evidencias clínicas.5. Existe la posibilidad de que algunas muestras den positivo para los tests de anticardiolipina pero negativo paralos de anticuerpos anti-β 2 GPI. El test de anticuerpos anti-β 2 GPI resulta más específico para determinar laexistencia de un riesgo de trombosis. El test de anticardiolipina puede proporcionar resultados positivos falsosdebido a la interacción con el ADN de doble cadena o los anticuerpos de ciertas enfermedades infecciosas.6. La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.4