Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
П.Ф. Забродский, В. Г. ЛимИММУНОПАТОЛОГИЯ ПРИ ОСТРЫХОТРАВЛЕНИЯХ СПИРТАМИ ИХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ.ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯМОНОГРАФИЯ© П.Ф. Забродский, 2012© В. Лим, 2012УДК 612.014.46:617–055ББК 52.84+52.54+52.8 Я 15З–121ISBN 978–5 –91272-254-97САРАТОВ – 2012
2ОГЛАВЛЕНИЕПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ…………………………………………….. 6ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………….. 9ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОНАРУШЕНИЯХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИОРГАНИЗМА И ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ ОСТРОЙИНТОКСИКАЦИИ СПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИУГЛЕВОДОРОДАМИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)……………………… 231.1. Общая характеристика нарушения неспецифическойрезистентности организма и иммунного гомеостаза под влияниемразличных ксенобиотиков…………………………………………………... 231.2. Токсикологическая и иммунотоксикологическая характеристикаспиртов……………………………………………………………………….. 291.3. Токсикологическая и иммунотоксикологическая характеристикахлорированных углеводородов…………………………………………….. 47Резюме…………………………………………………………………........... 62ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ…………… 642.1. Объекты исследования и применяемые препараты…………………... 642.2. Исследование состояния неспецифической резистентностиорганизма…………………………………………………………………….. 652.3. Оценка влияния токсикантов на миграцию колониеобразующихединиц в селезенку…………………………………………………………... 672.4. Оценка лимфоидных индексов тимуса и селезенки, содержанияпопуляций лимфоцитов в органах системы иммунитета ициркулирующей крови………………………………………………………. 672.5. Исследование кооперации Т- и В- лимфоцитов in vitro……………… 682.6. Изучение гуморального звена иммунного ответа……………………. 792.7. Оценка клеточного звена иммунного ответа………………………….. 702.8. Определение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов и α-нафтил-АS-ацетатэстеразы и α-нафтил-бутиратэстеразы спленоцитов…. 742.9. Оценка массового индекса надпочечников после остроговоздействия токсикантов …………………………………………………… 742.10. Исследование функции коры надпочечников, симпатикоадреналовойсистемы и перекисного окисления липидов………………. 752.11. Методы статистической обработки результатов исследований……. 75ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХстр.
УГЛЕВОДОРОДОВ НА НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА…………………………………….. 773.1. Нарушение интегральной антиинфекционной неспецифическойрезистентности организма………….………………………………………. 773.2. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов набактерицидную активность сыворотки крови………..…...……………….. 813.3. Сывороточная активность лизоцима при остром действииспиртов и хлорированных углеводородов…………………………………. 833.4. Активность тромбоцитарного катионного белка в сывороткекрови………………………………………………………………………….. 873.5. Комплементарная активность сыворотки крови……………………… 903.6. Фагоцитарная активность нейтрофилов………………………………. 93Резюме………………………………………………………………………... 983ГЛАВА 4. ДЕЙСТВИЕ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХУГЛЕВОДОРОДОВ НА СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОЦИТОВ ВЛИМФОИДНЫХ ОРГАНАХ……………………………………………... 1004.1. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на миграциюколониеобразующих единиц в селезенку…………………………………. 1004.2. Определение лимфоидного индекса тимуса и селезенки…………….. 1044.3. Оценка числа Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенке…. 1084.4. Содержание лимфоцитов в лимфатических узлах, костном мозге икрови при действии спиртов и хлорированных углеводородов………….. 113Резюме………………………………………………………………………... 122ГЛАВА 5. ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ СПИРТОВ ИХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА ГУМОРАЛЬНЫЕИММУННЫЕ РЕАКЦИИ………………………………………………… 1245.1. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на Т-зависимыйгуморальный иммунный ответ….………………………………………….. 1245.1.1. Оценка воздействия токсичных химических веществ наантителообразование к Т-зависимому антигену в динамике по титруантител в крови………………………………………………………………. 1245.1.2. Исследование действия острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами на число антителообразующих клетокв селезенке, синтезирующих IgM…………………………………………... 1275.1.3. Оценка влияния острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами на число антителообразующих клеток в селезенке,синтезирующих IgG…………………………………………………………. 1315.1.4. Изучение действия острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами на число розеткообразующих клетокв селезенке……………………………………………………………………. 1335.1.5. Нарушение кооперации Т- и В-клеток под влиянием спиртов,хлорированных углеводородов и их метаболитов in vitro………………... 135
45.2. Исследование эффекта спиртов и хлорированных углеводородов наТ-независимый гуморальный иммунный ответ…………………………… 1465.2.1. Оценка воздействия на антителопродукцию к Т-независимомуантигену в динамике по титру антител в крови…………………………… 1465.2.2. Исследование действия острого отравления токсикантами начисло антителообразующих клеток в селезенке к Т-независимомуантигену………………………………………………………………………. 149Резюме…………………………………………………………………........... 153ГЛАВА 6. ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ СПИРТОВ ИХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА КЛЕТОЧНЫЕИММУННЫЕ РЕАКЦИИ………………………………………………… 1576.1. Оценка функции Т-лимфоцитов……………………………………….. 1576.2. Исследование реакции гиперчувствительности замедленного типа… 1596.3. Изучение антителозависимой клеточной цитотоксичности…………. 1636.4. Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами на активность естественных клеток-киллеров………….. 1666.4.1. Действие токсикантов на активность естественных клетоккиллеровin vivo……………………………………………………………... 1666.4.2. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на активностьестественных клеток-киллеров селезенки in vitro…………………………. 1716.5.Определение взаимосвязи концентрации продуктовбиотрансформации дихлорэтана с показателями клеточного звенаиммунитета in vivo…………………………………………………………... 175Резюме…………………………………………………………………........... 177ГЛАВА 7. РОЛЬ ФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ,СИМПАТИКО-АДРЕНАЛОВОЙ СИСТЕМЫ, ПЕРЕКИСНОГООКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И АКТИВНОСТИ ЭСТЕРАЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ФОРМИРОВАНИИ ИММУНОДЕФИЦИТАПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ СПИРТАМИ ИХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ………………………... 1797.1. Влияние токсикантов на функциональное состояние корынадпочечников и симпатико-адреналовой системы………………………. 1797.1.1. Изменение массового индекса надпочечников после остроговоздействия токсикантов……………………………………………………. 1797.1.2. Оценка содержания кортикостерона в плазме крови………………. 1817.1.3. Исследование влияния кортикостерона на основные показателисистемы иммунитета………………………………………………………… 1847.1.4. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов нафункциональное состояние симпатико-адреналовой системы…………… 1867.1.5. Влияние катехоламинов на показатели системы иммунитета……... 1897.2. Изменение активности эстераз Т-клеток и спленоцитов подвлиянием спиртов и хлорированных углеводородов……………………… 192
57.3. Изменение показателей перекисного окисления липидовпосле острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами 197Резюме…………………………………………………………………........... 202ГЛАВА 8. КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУННОГОГОМЕОСТАЗА ПРИ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ СПИРТАМИ ИХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ………………………... 2058.1. Обоснование патогенетически обоснованного примененияиммуностимуляторов и других препаратов для коррекции нарушенийиммунного гомеостаза после острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами………………………………………….. 2058.2. Сравнительная оценка эффективности иммуностимуляторовпосле острого действия спиртов и хлорированных углеводородов……… 2178.2.1. Влияние иммуностимуляторов на показатели неспецифическойрезистентности организма…………………………………………………... 2178.2.2. Оценка действия иммуностимуляторов на основныепоказатели гуморального звена иммунитета……………………………… 2218.2.3. Исследование действия иммуностимуляторов на основныепоказатели клеточного звена иммунитета…………………………………. 2318.3. Влияние имунофана на перекисное окисление липидов послеострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами……... 241Резюме…………………………………………………………………........... 243ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………….. 246ВЫВОДЫ……………………………………………………………………. 289ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ…………………………………. 294
6ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙА – адреналинАДГ – ацетальдегидАЗКЦ – антителозависимая клеточная цитотоксичностьАКТГ – адрено-кортикотропный гормонАОК – антителообразующие клеткиАХЭ – ацетилхолинэстеразаБАСК – бактерицидная активность сыворотки кровиГА – гликолевый альдегидГГАС – гипоталамо-гипофизарно-адреналовая системаГЗТ – гиперчувствительность замедленного типаГК – гликолевая кислотаГЛ – гликолипидыГМ-КСФ – гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующийфакторГОК – глиоксиловая кислотаДНК – дезоксирибонуклеиновая кислотаДХЭ – 1,2-дихлорэтанЕКК – естественные клетки-киллерыЕЦ – естественная цитотоксичностьИКК – иммунокомпетентные клеткиИЛ-1 (2 и т.д.) – интерлейкин-1 (2 и т.д.)ИЦ – индекс цитотоксичностиК-клетки – клетки-киллеры (лимфоциты, определяющие АЗКЦ)КА – катехоламиныКМ – костный мозгКОЕ – колониеобразующая единицаКОЕс – колониеобразующая единица селезенки
КонА – конканавалин АКС – кортикостеронЛИ – лимфоидный индексЛПС – липополисахаридЛУп – паховые лимфоузлыМ – метанолМДА – малоновый диальдегидМК – муравьиная кислотаММС – моноцитарно-макрофагальная системаМЭОС – микросомальная этанолокисляющая системаНА – норадреналинНРО – неспецифическая резистентность организмаНСТ – нитросиний тетразолийНСТинд – тест с нитросиним тетразолием индуцированныйНСТсп – тест с нитросиним тетразолием спонтанныйОДЛТА – отрицательный двоичный логарифм титра антителП-СКК – примитивная стволовая кроветворная клеткаПОЛ – перекисное окисление липидовПЯЛ – полиморфноядерные лейкоцитыРОК – розеткообразующие клеткиРТМЛ – реакция торможения миграции лейкоцитовСАС – симпатико-адреналовая системаСКК – стволовая кроветворная клеткаСПР – суммарная продукция радикаловТКБ – тромбоцитарный катионный белок - (β-лизин)ТХВ – токсичные химические веществаТХМ – тетрахлорметанТХЭ – трихлорэтиленФГА – фитогемагглютинин7
ФИ – фагоцитарный индексФК – фолинат кальцияФЛ – фосфолипидыФМА – форболмиристатацетатФМАН – фагоцитарно-метаболическая активность нейтрофиловФНОα - α-фактор некроза опухолиФЧ – фагоцитарное числоФОИ – фосфорорганические инсектицидыФОС – фосфорорганические соединенияХУ – хлорированные углеводородыХУА – хлоруксусный альдегидХУК – хлоруксусная кислотаХЭ – 2-хлорэтанолЦНС – центральная нервная системаЭ – этанолЭБ – эритроциты баранаЭГ – этиленгликольЭК – эритроциты курIg – иммуноглобулинLD 50 - средняя смертельная доза, вызывающая смертельный исход у 50%отравленныхТh1 – Т-лимфоциты- хелперы типа 1Тh2 – Т-лимфоциты- хелперы типа 2Тh3 – Т-лимфоциты- хелперы типа 3Vi-антиген (Vi-Ag) – Т-независимый Vi-антиген брюшнотифознойвакцины8
9ВВЕДЕНИЕИзучение действия токсичных химических веществ (ТХВ) нанеспецифическую резистентность организма (НРО) и иммунный статус испособов коррекции их нарушений при помощи иммуностимуляторовявляется одним из наиболее актуальных направлений токсикологии. Этоопределяется многими обстоятельствами: использованием в промышленностии быту разнообразных ксенобиотиков, загрязнением окружающей средыразличными соединениями, увеличением аварий на химических объектах,возможностью массовых поражений при транспортировке и хранениитоксикантов, террористических актах, уничтожении запасов боевыхотравляющих веществ (БОВ), ростом острых и хронических интоксикацийядами, снижающих показатели системы иммунитета и вызывающихсвязанные с вторичными иммунодефицитными состояниями различныезаболевания [Саватеев Н.В., Куценко С.А., 1982, 1993; Смирнов В.С. исоавт., 2000; Агапов В.И. и соавт., 2004; Забродский П.Ф. и соавт., 1993,2001, 2002, 2004а; Vos J.G. et al., 1984; Loose L.D., 1986; Miller K., 1985;Descotes J ., 1986, Descotes J., Mazue G., 1987; Luster M. J. et al., 1987; SullivanJ. B., 1989; Kimber I., 1996; Kimber I. et al., 2001; Friedman H. et al., 2003].Особую актуальность в настоящее время имеет проблема изученияиммунотоксичности спиртов и хлорированных углеводородов (ХУ), так какчастота отравлений данными соединениями в последнее десятилетиесущественно увеличилась [Алиев Н.А., 1991а; Алиев Н.А., Мустафаев М.А.,1992; Лукомская М.И., 1992; Бонитенко Е.Ю., 1995; Немцов А.В., 1995;Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000; Забродский П.Ф. и соавт., 2004б;Sepulveda R.T. et al., 2002; Zhang P. et al., 2002].Область применения спиртов и хлорированных углеводородов (1,2-дихлорэтана - ДХЭ, тетрахлорметана - ТХМ, трихлорэтилена - ТХЭ) весьмаобширна. Спирты и хлорированные углеводороды широко используются вкачестве компонентов для тормозных жидкостей, антифризов,
10антиобледенителей, горючего [Бонитенко Е.Ю., 1995; Лужников Е.А.,Костомарова Л.Г., 2000; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004], ворганическом синтезе, как растворители, дезинфицирующие средства,пестициды, в военной практике - для экстракции отравляющих веществ приих индикации (ДХЭ) [Нацюк М.В., 1979; Гембицкий Е.В., Бонитенко Ю.Ю.,1983; Тиунов Л.А., 1990а, 1990б; Забродский П.Ф. и соавт., 2004б]. Следуетотметить, что дихлорэтан является растворителем для боевого примененияипритно-люизитной смеси, а также для создания хлорсодержащих рецептур -дегазаторов вещества VX и сернистого иприта.В последние годы наибольшие темпы роста уровня острых отравленийхарактерны в отношении этанола (Э), этиленгликоля (ЭГ) и метанола (М)[Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000; Mokhlesi B. et al., 2003а], которыепо числу летальных исходов занимают первое место среди интоксикацийдругими химическими соединениями [Нужный В.П., Прихожан Л.М., 1996;Нужный В.П., 2001].Алкогольные отравления в течение многих лет занимают ведущее местосреди бытовых отравлений по абсолютному числу смертельных исходов (вРоссии более 60% всех смертельных отравлений обусловлены алкоголем)[Лужников Е.А., Костомарова Л.А., 2000; Бонитенко Ю.Ю., Куценко С.А.,2004]. Уровень отравлений спиртами высок и в зарубежных странах. Так, поданным Европейской ассоциации центров отравлений и клиническихтоксикологов в странах Европейского Содружества в 2000 году 37451человек были госпитализированы после острых отравлений спиртами, а ихчастота среди отравлений другими веществами составила 5,4% [Mokhlesi B.et al., 2003а].Постоянно увеличивающееся потребление этилового спирта [ЛивановГ.А., 2000; Бонитенко Ю.Ю., Куценко С.А., 2004] может сопровождатьсяиспользованием вместо него с целью опьянения ядовитых спиртов ихлорированных углеводородов, при этом возможны групповые острые
11отравления [Кожемякин Л.А. и соавт., 1991; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001,2004]. По данным литературы летальность при отравлении этиленгликолем иметанолом колеблется от 10 до 50% [Бонитенко Е.Ю., 1995; Лужников Е.А.и соавт., 1989, 2000]. Исследования Нужного В.П. и соавт. (2004) показали,что образцы нелегальной алкогольной продукции содержат метанол (от 1 до7 мг/л) и этиленгликоль (до 380 мг/л).Одним из ведущих факторов демографического кризиса в Россииявляется рост потребления алкоголя. При этом смертность от случайныхотравлений этанолом за последние годы неуклонно увеличивается[Кожемякин Л.А. и соавт., 1991; Нужный В.П. и соавт., 1996, 2001, 2004].За 1999-2005 гг. в наркологическое отделение больницы №3 и другиелечебные учреждения г. Саратова поступление больных вследствие острыхотравлений этанолом и его суррогатами возросло в 3,2 раза, это относится и кгоспиталям Вооруженных Сил РФ в Саратовской области, где более 25%острых отравлений относятся к интоксикациям алкоголем и его суррогатами.Аналогичные данные характерны для Санкт-Петербургского центра леченияострых отравлений [Бонитенко Е.Ю., 1995; Ливанов Г.А. и соавт., 2001;Фридман К.Б. и соавт., 2003; Бонитенко Ю.Ю., Куценко С.А., 2004].В последнее десятилетие частота смертельных исходов после острыхинтоксикаций дихлорэтаном и тетрахлорметаном составляет от 20 до 96%[Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000; Елькин А.И. и соавт., 2004].Пациенты с отравлениями тетрахлорметаном составляют до 60% всехбольных с токсическим поражением печени [Голиков С.Н. и соавт., 1986;Венгеровский А.И., Седых И.М., Саратиков А.С., 1993]. Особую опасностьдихлорэтан и тетрахлорметан могут представлять при аварийных ситуацияхна химических объектах, когда в силу их высокой летучести, ингаляционнымотравлениям может подвергаться большое количество людей.Общим в токсикокинетике спиртов и хлорированных углеводородовявляется их способность метаболизироваться с образованием более
12токсичных соединений («летальный синтез») [Лужников Е.А., КостомароваЛ.А., 2000; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Не вызывает сомнения, что одной из причин танатогенеза при острыхотравлениях спиртами и хлорированными углеводородами являютсяинфекционные заболевания и осложнения (постинтоксикационныепневмонии), обусловленные снижением НРО и показателей иммуннойсистемы [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000; Забродский П.Ф. и соавт.,1998, 2002, 2004а, 2004б; Friedman H. et al., 2003]. При этом механизм ихарактер изменений НРО и иммунной защиты в условиях остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами в настоящеевремя изучен недостаточно, не исследована взаимосвязь нарушенийиммунного гомеостаза с перекисным окислением липидов (ПОЛ) иизменением функции гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (ГГАС)[Алиев Н.А., 1991б; Быкова А.А., Сединина Н.С., 2002; Забродский П. Ф.,1998, 1999б, 2002; Descotes J., 1986; Luster M. I. et al., 1987; Friedman H. et al.,2003].Изучение патогенетически обоснованной коррекции нарушений НРО исистемы иммунитета при остром действии спиртов и хлорированныхуглеводородов имеет как теоретическое значение, раскрывая неизвестныемеханизмы регуляции иммуногенеза, так и практическое, позволяяобеспечить профилактику и лечение возникающих при острых и хроническихинтоксикациях спиртами и хлорированными углеводородамимногочисленных инфекционных заболеваний в результате дисфункцийсистемы иммунитета [Хаитов Р. М. и соавт., 1995; Агапов В.И. и соавт., 2004;Забродский П. Ф., 1998, 2002, 2004а; Descotes J., 1986; Luster M. I. et al., 1987;Georgiev V. S., Yamaguchi H., 1993; Sepulveda R.T. et al., 2002; Zhang P. et al.,2002].Таким образом, учитывая достаточно широкое распространение ииспользование в промышленности, технике и быту спиртов и хлорированных
13углеводородов, а также ядовитых технических жидкостей, содержащих этисоединения, высокую летальность при отравлении ими (возможностьиспользования метанола, этиленгликоля и хлорированных углеводородов вкачестве суррогатов алкоголя), недостаточно изученные особенности ихдействия на механизмы регуляции системы иммунитета следует заключить,что проблема изучения механизмов и характера нарушений неспецифическойрезистентности организма и иммунного статуса при острых отравленияхспиртами и хлорированными углеводородами, исследование возможностикоррекции данных нарушений в постинтоксикационный период важна как втеоретическом, так и в практическом отношении.Целью исследования являлось изучение механизмов измененийнеспецифической резистентности организма и иммунного статуса при остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами и разработатьпатогенетически обоснованные направления фармакологической коррекциивыявленных нарушений.
14ГЛАВА 1.СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О НАРУШЕНИЯХНЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ИИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ ОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИСПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)1.1. Общая характеристика нарушения неспецифическойрезистентности организма и иммунного гомеостаза под влияниемразличных ксенобиотиковДанные о влиянии различных токсикантов на неспецифическуюрезистентность организма и иммунный статус в настоящее время весьмаобширны и противоречивы [Шубик В. М., 1976; Лазарева Д. Н., Алехин Е. К.,1985; Смирнов В.С. и соавт., 2000; Забродский П.Ф., 1998, 2002, 2004а;Descotes J., 1986; Descotes J. et al., 1987; Luster M.J. еt аl., 1987; Zhang P. et al.,2002]. Важность исследования иммунотоксических эффектов токсичныххимических веществ обусловлена в первую очередь необходимостьювыявления наиболее чувствительных параметров НРО и системы иммунитетак тем или иным ядам в целях патогенетического обоснования примененияадекватных характеру нарушений иммунного гомеостаза различнымитоксикантами иммуностимуляторов и разработки новых фармакологическихсредств.За несколько последних десятилетий данные, полученные о влияниитоксичных химических веществ на НРО, в целом определенносвидетельствуют о возможности снижения неспецифических факторовзащиты организма при их остром действии [Смирнов В.С. и соавт., 2000;Забродский П.Ф., 2002; Василенко О.А., 2004; Петрусенко Г.П., ТумиловичМ.К., 2004]. Так, доказано уменьшение бактерицидной активности сывороткикрови (БАСК), лизоцимной, комплементарной и фагоцитарной активности, атакже других неспецифических факторов резистентности организма при
15хроническом воздействии сернистого ангидрида и фенола [КосмодамианскаяД. М., 1968], акролеина, окиси углерода [Стрельникова Л. А., Раткина В.Г.,1983], неорганических соединений фтора [Андронова М. Н. и соавт.,1988], севина, хлорофоса и ДДТ [Фридман Г.И., 1970], дихлорэтана[Забродский П.Ф. и соавт., 1997]. Исследователи вполне закономерносвязывают снижение НРО с повышением уровня заболеваемости различнымиинфекциями [Luster M.J. еt аl., 1987; Лужников Е.А., Костомарова Л.А.,2000]. Не исключено, что острое действие некоторых ТХВ можетувеличивать НРО. Так, подобный эффект обнаружен при длительнойинтоксикации крыс малыми дозами гербицида симазана [Барштейн Ю. А. исоавт., 1991].Имеющая исключительно важное значение в реализации НРО имногочисленных иммунных реакций моноцитарно-макрофагальная система(ММС), подвержена отрицательному действию большого числа ТХВ. К нимотносятся полигалогенизированные ароматические углеводороды [BleavinsM. R., Aulerich R. J.,1983], метилизоцианат [Dwivedi P. D. et al.,1988],инсектицид токсафен [Allen A. L. еt al.,1983], сероводород, аммиак [ДьячукИ. А., 1979], различные инсектициды [Золотникова Г. П.,1980], анилин[Саноцкий И. В. ,1969], гербицид 2,4-Д [Жамсаранова С. Д. и соавт., 1988],свинец [Bagiuski B., 1985], двуокись кремния [Gennari M. et al., 1987],трихлорэтан [Sauders V.M. et at., 1985], трихлорэтилен, хлор, хлорфенол[Descotes J., 1986], оксид бутилолова [Vos J.G. et al., 1984], роданистыйаммоний и тиомочевина [Савченко М.В., 1987], ацетонитрил [ЗабродскийП.Ф., Киричук В.Ф., 1999] и другие вещества. Нарушение функциимакрофагов легких вызывают оксиды свинца, никеля, ванадия, диоксидыртути, марганца, азота, хлориды кадмия и никеля [Sullivan J. B.,1989].Активность нейтрофилов при хронической интоксикации снижают многиепестициды, ароматические, хлорированные и фторсодержащиеуглеводороды, бензин, свинец, ртуть, бериллий, сероуглерод, формальдегид
16[Шубик В. М., 1976]. Как правило, угнетение функции моноцитарномакрофагальнойсистемы сопровождается Т- и В-иммунодефицитнымисостояниями. Нарушение фагоцитоза может происходить вследствиедействия ТХВ, в том числе и спиртов, на процессы хемотаксиса, адгезии,активации мембраны фагоцита, образования фагосомы, слияниялизосомальных гранул с фагосомой, уничтожения чужеродных клеток припомощи кислородзависимых или кислороднезависимых механизмов.Снижение НРО под влиянием фосфорорганических инсектицидов (ФОИ)описано в многочисленных работах [Чугунихина Н.В., Хасанова М.И. , 1994;Woodin A.M., Wieneke A.A., 1969; Woodin A.M., Harris A., 1973; HermanowiczA., Kossman S., 1984; Kossman S. et al., 1985; Забродский П.Ф., 2002]. Рядхимических соединений способен активировать фагоцитоз в определенныепериоды хронической интоксикации или при действии относительнонебольших доз (концентраций). Такими свойствами обладают хлоридмарганца [Smialowicz R.J. et al., 1984], некоторые пестициды в начальномпериоде интоксикации, метилмеркаптан и нитроаминосоединения [Шубик В.М., 1976]. В отношении действия кадмия, данные литературыпротиворечивы. Исследователи описывают и стимуляцию фагоцитоза подвлиянием этого металла [Thomas P. T. et al., 1985], и его супрессию [BagiuskiB., 1985]. Дильдрин оказывает активирующее влияние на нейтрофилы крыс[Hewett J. A., Roth R. A., 1988], севин и метафос увеличивают миграционнуюактивность макрофагов [Долинская С. И. и соавт., 1989]. Установленоувеличение фагоцитарной активности под влиянием ДДТ и севина споследующим снижением данного показателя через 2-3 месяца с моментаначала хронической интоксикации [Miller K., 1985]. Активацию макрофаговвызывает у мышей бенз(а)пирен в дозе 40 мг/кг [Blanton R. H. et al., 1986].Большое значение в нарушении иммунного гомеостаза имеет поражениеТХВ естественных клеток-киллеров (ЕКК), так как именно данныелимфоциты осуществляют защиту от различных микроорганизмов до
17включения основных иммунных реакций. Известно, что нетоксичныеконцентрации цинка снижают активность ЕКК в 6-20 раз [Ferry F., Donner M.,1984]. Аналогичным свойством обладают хлорид никеля [Smialowicz R. J. etal., 1984], растворители пропиленгликоль [Denning D. W. et al., 1987] иэтиленгликоль [Забродский П. Ф., Германчук В.Г., 2000], оксид бутилолова[Vos J.G. et al., 1984]. В то же время, некоторые химические веществаувеличивают активность ЕКК. Так, хлорид марганца повышает естественнуюцитотоксичность у мышей при однократном введении в дозах 10-160 мг/кгвследствие возрастания уровня сывороточного интерферона [Smialowicz R. J.et al., 1984].Ароматические углеводороды [Moszczynsky P., Lisiewicz J., 1984],полихлорированные дибензфураны [Hideaki K. et al., 1987], метилизоцианат[Johnson K. W. et al., 1986; Saxena A. K. et al., 1988], гексахлорбензол [VanLoveren. H. et al., 1990], гербицид толуин [Николаев А. И. и соавт., 1988],соли никеля [Smialowicz R. J. et al., 1984], акрилаты и нитрилы [Шустов В. Я.и соавт., 1987; Забродский П. Ф., Киричук В. Ф., 1999; Германчук В.Г., 2000],атропиноподобные соединения [Адо А.Д. и соавт., 1985а; 1985б, 1985в, 1995;MacManus J.P. et al., 1975] и большинство пестицидов [Павлов А.В. и соавт.,1991] поражают преимущественно зависимое от Т-клеток звено иммуннойсистемы. Фосфорорганические соединения в основном вследствиеблокирования эстераз, локализованных в Т-лимфоцитах, поражают вбольшей степени Т-зависимое антителообразование, функциюцитотоксических Т-лимфоцитов и иммунные реакции, связанные с функциейТ-хелперов первого и второго типов - Тh1 и Тh2 [Забродский П.Ф.и соавт.,1993, 2001; Хейхоу Ф.Г.Дж, Кваглино Д., 1983; Fergula J. et al., 1972;Newcombe D.S., 1991].К ксенобиотикам, подавляющим преимущественно В-системуиммунитета, относятся: хлорорганический инсектицид токсафен [Allen A. L.et al., 1983], трихлорэтан [Sauders V. M. et al., 1985], свинец [Jaremin B.,
181983], трихлорэтилен, монохлорамин, бромхлорметан, трибромметан [KollerL. D., 1987], хлорид бериллия [Yoshiyuki M. et al., 1984], перхлорат натрия[Weetman A. P. et al., 1984], диметилнитрозамин [Luster M. J. et al., 1987].В ряде случаев установлено, что действие фосфорорганическихсоединений (ФОС), особенно в малых дозах, может не вызывать сниженияантителообразования [Tiefenbach B ., Wichner S., 1985; Desi I. еt al., 1986;Koller L.D., 1987], и даже увеличивать антителопродукцию кбрюшнотифозному О- и Vi-антигену [Шафеев М.Ш., 1976], повышать синтезIgМ и IgG [Kossman S. et al., 1985], IgG и IgА [Ананченко В.Г. и соавт., 1987;Решетова Н.В. и соавт., 1987]. Противоречивость данных в отношениивлияния ФОС на В-систему иммунитета у людей и животных может бытьобусловлена особенностями токсикодинамики и токсикокинетики,определяющих иммунотоксичность этих соединений [Lee T.P. et al., 1979;Audre F. et al., 1983], проведением экспериментов в различное время суток,характеризующееся различной концентрацией в плазме кровикортикостероидов [Иванова А.С., 1998; Dhabhar F.S. et al., 1996] и другимипричинами, в частности, характером изменения внутриклеточногосодержания цГМФ под влиянием ацетилхолина [Денисенко П.П., 1980;Абрамов В.В. и соавт., 1986; Калинкович А.Г. и соавт., 1988; Garoroy M.R. etal., 1975; MacManus J.P. et al., 1975].К группе токсикантов, вызывающих комбинированные нарушенияфункции Т- и В-систем иммунитета, относится большое числоксенобиотиков, нарушающих как гуморальные, так и клеточные иммунныереакции: хлорорганические пестициды и карбаматы, фосфорорганическиесоединения, диоксид азота и озон, полигалогенизированные ароматическиеуглеводороды, в частности, диоксин, полихлорированные дифенилы идругие соединения. Пожалуй, нет ТХВ способного поражать только факторыНРО, Т- или В-систему иммунитета вследствие их тесной взаимосвязи[Забродский П.Ф., 2002]. Токсичные вещества оказывают
19разнонаправленное воздействие неодинаковой интенсивности на разныезвенья иммунной системы [Luster M.I. et al., 1987]. Следует принимать вовнимание, что данные различных авторов в отношении иммунотропныхсвойств ТХВ весьма противоречивы.Анализ данных литературы свидетельствуют о том, чтоиммунотоксичность химических ксенобиотиков (в том числе различныхспиртов) на субклеточном уровне определяется их способностью оказыватьвлияние на систему иммунитета путем инициации токсикантом перекисногоокисления липидов мембран клеток. В частности, вследствие инактивацииантиоксидантных ферментов и витаминов (супероксиддисмутазы, каталазы,глютатионтрансферазы, глютатионпероксидазы, α-токоферола, β-каротина,витаминов А, С). Соединением с Ah-рецептором цитозоля мембраныиммунокомпетентной клетки (ИКК) и поступлением в ядро клетки ивзаимодействием с ДНК (дибензо-пара-диоксины, дибензфураны).Действием ТХВ на ЦНС и эндокринную систему с последующейреализацией эффектов медиаторов и гормонов, к большинству из которых намембране ИКК имеются соответствующие рецепторы [Корнева Е.А., 1990;Забродский П.Ф., 1993; 2002; Szot R.J., Murphy S.D., 1970]. ИнактивациейТХВ ферментов цитозоля и мембраны ИКК, а также энзимов системытканевого дыхания в митохондриях иммуноцитов [Забродский П.Ф. и соавт.,2001; Becker E.L. et al., 1976; Хейхоу Ф.Г.Дж, Кваглино Д., 1983]. Индукциейили ингибированием синтеза Р-450-зависимых монооксигеназ,локализованных преимущественно в естественных клетках-киллерах и Т-лимфоцитах. Действием ТХВ на мембрану ИКК, ее повреждением споследующим образованием аутоантител, взаимодействующих симмуноцитом [Забродский П.Ф., 1998, 2002; Смирнов В.С., Петленко С.В.,Сосюкин А.Е., 2000; Descotes J., 1986; Van Loveren. H. et al., 1990].Изменением углеводно-энергетического и нуклеинового обмена [ПетрусенкоГ.П., Тумилович М.К., 2004], разобщением тканевого дыхания и
20окислительного фосфорилирования, повреждением мебран ИКК и ихорганелл и другими механизмами [Алимова М. Т. и соавт., 1991; Гущин Н.В.и соавт., 1991, Хусинов А.А. и соавт., 1991; Смирнов В.С. и соавт., 2000;Rodica G., Srefania M.,1973; Street J.C., Sharma R.P., 1975; Trinchievi G., deMarchi М., 1976; Wiltrout R.W. et al., 1978; Casale G.P. et al., 1984; DevensB.H. et al., 1985; Thomas I.K., Imamura T., 1986; Rodgers K.E. et al., 1987;Zhang P. et al., 2002].Таким образом, в настоящее время условно по своим основнымиммунотропным свойствам выделяют следующие ТХВ: поражающиепреимущественно Т- или В-систему иммунитета; снижающие активностьЕКК; подавляющие функцию ММС; снижающие НРО; разнонаправленновлияющие на Т- и В-звено иммунитета. Большинство ТХВ в той или инойстепени действуют как на Т- и (или) В-систему иммунитета, так и на ММС идругие факторы, определяющие НРО. В зависимости от характерадисфункции системы иммунитета при действии ТХВ для профилактики илечения инфекционных, онкологических и других связанных симмунодефицитными состояниями заболеваний могут использоватьсясоответствующие иммуностимуляторы.1.2. Токсикологическая и иммунотоксикологическаяхарактеристика спиртовМетанол (М, метиловый спирт, карбинол, древесный спирт) –бесцветная, прозрачная, малолетучая огнеопасная жидкость, обладающаязапахом и вкусом, напоминающим этиловый спирт. Неочищенный метанолобладает неприятным запахом, который обусловлен содержанием примесей.Применяется в качестве топлива для двигателей, в лабораторной практикекак растворитель в производстве лаков, органических красок, мастик, олиф,политур и т.п., для денатурирования этилового спирта, входит в состав рядаантифризов. Отравления чаще всего связаны с использованием его ошибочно
21вместо этилового спирта с целью опьянения. Реже встречаютсяпроизводственные отравления парами [Бонитенко Е.Ю., 1995; Немцов А.В.,1995; Забродский П.Ф., 1999а; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000].Смертельная доза М для человека при его пероральном употреблениисоставляет от 50 до 500 мл [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000;Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004]. Летальный уровень в крови Мсоставляет 0,8 г/л [Фридман Л.С. и соавт., 1998].Отравления метанолом характеризуются значительной тяжестью,высокой летальностью, в ряде случаев имеют групповой или массовыйхарактер, а также сопровождаются серьезной инвалидизацией лиц,перенесших интоксикацию [Кожемякин Л.А. и соавт., 1991]. Одной изпричин, приводящих к смертельным исходам, являются инфекционныеосложнения, связанные со снижением НРО и показателей иммунного статуса[Забродский П.Ф., 1998].Метанол быстро всасывается и уже через 1-1,5 ч концентрация его вкрови достигает максимума. Выделяется из организма медленно,обнаруживается в биосредах значительно больший период времени посравнению с ЭГ (до 3-7 сут) [Sejersted O.M., 1981; Mokhlesi B. et al., 2003б].В соответствии с современными представлениями токсичность метанолав основном обусловлена действием продуктов его метаболизма в организме –формиатов (формальдегида и муравьиной кислоты). Дальнейшаябиотрансформация метаболитов М осуществяется до двуокиси углерода иводы и формила-S-КоА. Окисление спиртов в организме происходит сучастием трех ферментных систем – АДГ, каталазы и микросомальнойэтанолокисляющей системы (МЭОС). Трудности изучения патогенезаотравлений М связаны с тем, что у человека, приматов и другихэкспериментальных животных (кроме крыс, мышей и других грызунов)окисление М происходит неодинаково – в первом случае основным энзимомявляется АДГ, во втором – каталаза [Kini M.M., Cooper J.R., 1962; Tephly
22T.R., 1983]. До недавнего времени считалось, что поражение нервной ткани, втом числе зрительного нерва, вызывает формальдегид. Известно, что онспособен подавлять метаболизм в нейронах, активно вмешиваться в обменнейромедиаторов [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Однако К.E. McMartin et al.(1980) показали, что у приматов при отравлении метанолом периодполураспада формальдегида составляет 1,5 мин. Кроме того, ими необнаружено накопления этого метаболита в печени, почках, мозге. Этосвязано, вероятно, с быстрым расщеплением формальдегида мощнымиферментными системами – НАД-зависимой формальдегиддегидрогеназой(К.Ф.1.2.1.1.) и альдегиддегидрогеназой (К.Ф.1.2.1.3.).В отличие от формальдегида муравьиная кислота, образующаяся приокислении метанола, является достаточно стойким соединением иаккумулируется в биосредах. Существуют два основных пути метаболизмаформиата – каталазно-пероксидазный и фолатзависимый [Румянцев А.П. исоавт., 1981; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001]. Второй путь потенциально болеемощный, однако в связи с низким содержанием в организме человекафолиевой кислоты метаболизм формиата протекает с малой скоростью изадействована бывает преимущественно пероксидазно-каталазная система.Очевидно, именно формиат (муравьиная кислота) играет ведущую роль впатогенезе отравлений метанолом [Iоkobsen D., 1984; Mokhlesi B. et al.,2003б]. Существуют две основные стадии метаболизма метанола,лимитирующие его токсичность. Это расщепление метанола АДГ,определяющее по существу образование формиата, и биотрансформациясамого формиата, влияющая на темпы его накопления в тканях [РумянцевА.П. и соавт., 1981; Кожемякин Л.А. и соавт., 1991].Максимум смертельных исходов при тяжелой степени отравления Мнаблюдается в течение 1-3 сут, при этом смертность может составлять 60-70% [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001]. Причинами смертельных исходов могутявляться нарушения иммунного гомеостаза. Поэтому актуальность и
23важность изучения влияния острого отравления М на факторы НРО ииммунный статус несомненна с целью применения наиболее адекватныххарактеру выявленных нарушений иммуностимуляторов для снижениячастоты смертельных исходов и сроков выздоровления.Механизм супрессии гуморальных и клеточных иммунных реакций приотравлении М мало исследован. Вероятно, исходя из особенностей еготоксикодинамики, он может быть обусловлен нарушением функциииммуноцитов в результате взаимодействия с сульфгидрильными иаминогруппами ферментов высокотоксичных продуктов биотрансформацииМ (формальдегида и муравьиной кислоты), ингибированием тканевогодыхания и окислительного фосфорилирования [Iokobsen D., 1984; Gabon P.A.,1986]. Нельзя исключить влияние на реализацию иммунных реакций послеострой интоксикации М изменения состояния нейроэндокринной системы[Claman H.N., 1983; Dhabhar F. S. et al., 1996], а также действие на ИККнеметаболизированной молекулы М [Забродский П.Ф., 1998].Известно, что биотрансформация метанола в организме происходит приучастии алкогольдегидрогеназы, каталазы и этанолокисляющей системыпечени [Кожемякин Л. А. и соавт., 1991]. При этом, несмотря на видовыеособенности метаболизма спиртов, связанные с участием в ихбиотрансформации у грызунов преимущественно каталазы, существующие внастоящее время представления о механизме токсического действияметилового спирта позволяют считать, что решающую роль в реализации егоиммунотропных эффектов у человека и различных видов животных, повидимому,играет продукт биотрансформации метанола - муравьинаякислота. Данное соединение обладает эффектом иммунодепрессантаметотрексата, который является антиметаболитом фолиевой кислоты [Ройт А.и соавт., 2000]. Муравьиная кислота метаболизируется преимущественнофолатзависимым путем [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. При этоммуравьиная кислота может являться своего рода антагонистом фолиевой
24кислоты в связи с ее практически полным потреблением. Снижая ресурсыдигидрофолатредуктазы, формиат уменьшает образованиететрагидрофолиевой кислоты, вследствие чего ингибируется переносметиловых групп, снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах[Ройт А. и соавт., 2000].Таким образом, исследованные в настоящее время иммунотоксическиесвойства метанола свидетельствуют о том, что метанол способен изменятьфункцию ЕКК, некоторые показатели НРО и системы иммунитета. Анализимеющихся данных показывает, что в танатогенезе после острогоотравления метанолом существенную роль играют нарушения регуляциииммунного гомеостаза. Уточнение информационных материалов иполучение принципиально новых сведений о влиянии метанола наиммунный гомеостаз позволит разработать и патогенетически обосноватьоптимальную иммуномодуляцию нарушений механизмов его регуляции дляпрофилактики постинтоксикационных инфекционных осложнений изаболеваний.Этиленгликоль (ЭГ, гликоль, этандиол-1,2) - двухатомный спирт,представляющий собой бесцветную или слабо окрашенную в желтый цветнелетучую сиропообразную жидкость, сладковатого вкуса, без запаха.Удельный вес при 20 0 С составляет 1,100-1,116. Кипит при температуре +194 0С. Замерзает – при -12 0 С. Водные растворы ЭГ замерзают при значительноболее низких температурах. Этиленгликоль смешивается в любыхсоотношениях с водой и спиртом. В качестве компонентовпротивокоррозийных присадок в состав ЭГ входят динатрийфосфат идекстрин. Применяется для приготовления охлаждающих низкозамерзающихжидкостей - антифризов и в качестве жидкого диэлектрика. В зависимости отмарки антифриза ЭГ составляет 30-60% общего объема. Антифризы обладаютнизкой температурой замерзания (от минус 40 до минус 60 0 С). Охлаждающиенизкозамерзающие жидкости марок 40, 65, 40м (слабомутные нелетучие
25жидкости, окрашенные в светложелтый или фиолетовый цвет, с удельнымвесом при 20 0 С 1,063-1,095) представляют собой водные растворы ЭГ.Используются для заполнения системы охлаждения двигателей внутреннегосгорания в зимнее время. Противообледенительная жидкость «Арктика»(удельный вес при 20 0 С 1,071-1,079) представляет собой водный раствор ЭГс антикоррозионой присадкой. Применяется для удаления льда споверхностей летательных аппаратов и предотвращения их обледенения вназемных условиях. Этилцеллозольв – моноэтиловый эфир ЭГ (удельный веспри 20 0 С 0,930-0,935) применяется в качестве присадки к авиационномугорючему, а также как растворитель лаков и красок. ЭГ и этилцеллозольввходят в состав низкозамерзающих жидкостей ОЖК-50 мц (эц), ВТЖ-Н итормозных жидкостей «Нева» и ГТЖ-22 [Золотухин А.Н. и соавт., 1982]. ЭГвходит в состав растворителей Р-189, Р-1101, РЛ-277 (марки А, Б, В). Всеуказанные ЯТЖ широко применяются в военном деле.Смертельная доза этиленгликоля для человека при его пероральномупотреблении составляет от 50 до 500 мл [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г.,1989, 2000; Маркова И.В. и соавт., 1998; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Летальный уровень в крови этиленгиколя составляет 2,0 г/л [Фридман Л.С. исоавт., 1998].Клиника острой интоксикации ЭГ характеризуется умеренновыраженным начальным опьянением, скрытым периодом, развитием комы,метаболического ацидоза, а в дальнейшем токсическим поражением почек ипечени (до 4-6 недель), периодом обратного развития и исходов [МарковаИ.В. и соавт., 1998]. Скрытый период по данным Е.Ю.Бонитенко (1995)составляет 4,50+0,56 ч.Патогенез интоксикации ЭГ характеризуется действием на организм егопродуктов биотрансформации [Бережной Р.В., 1977; Румянцев А.П. и соавт.,1981; Сахаров Г.Ю., 1983; Маркова И.В. и соавт., 1998].Алкогольдегидрогеназа служит пусковым ферментом метаболизма ЭГ,
26который осуществляется преимущественно в печени и почках. Продуктомреакции является гликолевый альдегид, который быстро окисляетсяальдегидоксидазой в гликолевую кислоту, а последняя превращается затем вглиоксиловую кислоту посредством лактатдегидрогеназы (ЛДГ, К.Ф.1.1.1.27.) и оксидазы гидроксикислот (К.Ф.1.1.3.1.). Метаболизмглиоксиловой кислоты происходит в нескольких направлениях: необратимоепревращение в щавелевую кислоту; образование муравьиной кислоты и далеечерез угольную кислоту расщепление на двуокись углерода и воду;обратимое трасаминирование в глицин (при участии витамина В 6 );конъюгация с образованием оксаламалата, формил-КоА и др. [Parry M.F.,Wallach M.D.,1974]. ЭГ метаболизируется и выводится из организмазначительно быстрее метанола, в тканях он обнаруживается в течение 24-36часов [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Основными и наиболее опасными метаболитами ЭГ являютсягликолевый альдегид, гликолевая, глиоксиловая и щавелевая (оксалат)кислоты. До недавнего времени наиболее токсичным метаболитом ЭГсчитался оксалат, способный связывать кальций и выпадать в видекристаллов в канальцах почек, вызывая острую почечную недостаточность[Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004]. Наряду с этим установлено, что вщавелевую кислоту превращается лишь незначительная часть введенного ворганизм ЭГ – около 3%. Поэтому в последние годы более существеннуюроль отводят другим метаболитам ЭГ, которые по степени токсичности вэквимолярных концентрациях можно расположить в следующем порядке:глиоксилат, гликолевый альдегид, гликолат. Указанные метаболиты ЭГ,благодаря наличию активных групп, являются потециальными ингибиторамитканевого дыхания, сопряженного с ним окислительного фосфорилирования,синтеза белков, способны реагировать с сульфгидрильными группамиферментов, коллагеном, аминогруппами белков [Iokobsen D., 1984].Максимальной токсичностью из указанных метаболитов обладает глиоксалат,
27который в очень низких концентрациях способен разобщать тканевоедыхание и окислительное фосфорилирование [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004;Gabon P.A., 1986]. Однако имеются данные, согласно которым токсичностьЭГ определяется в основном другим метаболитом – гликолатом. Хотя егоядовитость в несколько раз ниже, чем у глиоксалата, концентрация же вбиосредах приблизительно в 1300 раз выше [Chou S.Y., Richardson K.E.,1978]. Это позволило авторам считать именно гликолевую кислоту причинойвыраженных обменных нарушений, развивающихся у отравленных ЭГ.Существует мнение, что именно гликолат, наряду с лактатом, формирует приотравлениях ЭГ метаболический ацидоз.Таким образом, в метаболизме ЭГ также можно выделить два основных,лимитирующих его токсичность, звена – окисление ЭГ посредством АДГ иглиоксиловой кислоты при участии ЛДГ и оксидазы гидроксикислот. Анализприведенных материалов свидетельствует о том, что метаболизм ЭГ ворганизме человека протекает по типу «летального синтеза» (токсификации).Особенностями острого отравления ЭГ являются быстрое всасывание ипопадание в кровь всей массы токсиканта через 15-30 мин, поражение печении почек в первые часы после отравления, выраженные нарушения со стороныцентральной нервной системы (ЦНС), запоздалое появление первыхпризнаков отравления (через 18-20 ч при средней степени тяжестиинтоксикации), когда проведение неотложных мероприятий оказываетсямалоэффективным. В развитии интоксикации ЭГ выделяют два периода:период неспецифического наркотического действия неметаболизированноймолекулы ЭГ на ЦНС и период морфологических деструктивных измененийвнутренних органов (действие токсичных метаболитов). Различают легкую,среднюю и тяжелую формы отравлений. Отравления средней тяжести даютдо 15% смертельных исходов. Если отравленный не погибает в начальномпериоде, то все явления стихают, наступает мнимое выздоровление. Через 2сут возникают симптомы почечно-печеночной недостаточности. Развивается
28токсическая нефропатия. В случаях с летальным исходом смерть наступает вконце 2-5 недели [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001; Mokhlesi B. et al., 2003б].Тяжелые отравления дают 100% смертельный исход в течение 15 дней.Среди умерших от смертельных отравлений ЭГ в 74% случаев людипогибали, не приходя в сознание, в течение первых и вторых суток[Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000; Маркова И.В. и соавт., 1998;Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004]. Несомненно, что в танатогенезе,особенно в соматогенной фазе интоксикации, существенную роль играютнарушения иммунного гомеостаза. Поэтому актуальность и важностьизучения влияния перспективных иммуностимуляторов на иммунныйгомеостаз при остром отравлении ЭГ очевидны. Применениеиммуностимуляторов после острой интоксикации этиленгликолем позволитснизить частоту постинтоксикационных осложнений и заболеваний,способных привести к смертельному исходу.Патогенез супрессии гуморальных и клеточных иммунных реакций приостром отравлении ЭГ исследован не достаточно. Видимо, исходя изособенностей его токсикодинамики, он может быть обусловлен нарушениемфункции иммуноцитов в результате взаимодействия с их сульфгидрильнымии аминогруппами ферментов высокотоксичных продуктов биотрансформацииЭГ (гликолевого альдегида, гликолевой, глиоксиловой, щавелевой кислот),ингибированием тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования[Iokobsen D., 1984; Gabon P.A., 1986]. Одной из возможных причиниммунотоксических эффектов ЭГ может являться связывание Са 2+ щавелевойкислотой в иммунокомпетентных клетках, что может приводить кнарушению обмена цАМФ и цГМФ и изменению их соотношения. Сданными биохимическими изменениями может быть связано нарушениепроцессов активации, пролиферации и дифференцировки Т- и В-лимфоцитов[Ройт А. и соавт., 2000]. Следует принимать во внимание, что роль щавелевойкислоты в реализации иммунотоксичности ЭГ в связи с крайне быстрым ее
29метаболизмом может быть весьма незначительной [Кожемякин Л. А. и соавт.,1991].Следует отметить, что в процессе метаболизма ЭГ, помимо глиоксилата,гликолевого альдегида и гликолата образуется и формиат, вследствиеметаболизма глиокcиловой кислоты [Parry M. F. et al., 1974], которыйспособен поражать преимущественно В-клетки вследствие использования длясвоей биотрансформации большого количества фолиевой кислоты [Ройт А. исоавт, 2000] .Определенное влияние на иммунный статус после острой интоксикацииЭГ может оказывать изменение состояния нейроэндокринной системы[Claman H.N., 1983; Dhabhar F. S. et al., 1996], а также действие на ИККнеметаболизированной молекулы ЭГ [Забродский П.Ф., 1998].Для оценки возможных нарушений иммунной системы под влиянием ЭГпредставляют интерес данные в отношении иммунотоксических свойствэфиров этиленгликоля и прoпиленгликоля, обладающих выраженнымиммуносупрессивным действием [Гудзь О.В.,1988; House R.V. et al., 1985;Denning D. W. et al., 1987; Welch L.S., Cullen M.R., 1988]. Так, в опытах намышах установлено, что моноэтиловый эфир этиленгликоля в дозах 500 и1000 мкг/кг (внутрь, ежедневно, 5 дней в неделю в течение 2 недель) снижалмассу тимуса соответственно на 22 и 28% (масса селезенки не изменялась). Вотношении Т-зависимого иммунного ответа, функции В-лимфоцитов(пролиферация, индуцированная мукополисахаридом), функции Т-клеток(пролиферация под влиянием ФГА и КонА), активности естественныхклеток-киллеров влияние данного соединения (дозы и экспозиция те же)выявлено не было [House R.V. et al., 1985].Результаты сравнительного изучения влияния эфиров этиленгликоля наморфологический состав периферической крови крыс свидетельствуют о том,что токсичность этих соединений возрастает по мере увеличения углероднойцепи алкильного радикала от этилгликольацетата к бутилцеллозольву [Гудзь
30О.В., 1988]. У лиц, связанных с использованием красителей, содержащихэфиры этиленгликоля, отмечались анемия (10%) и гранулоцитопения (5%)[Welch L.S., Cullen M.R., 1988]. Пропиленгликоль, используемый впарфюмерной промышленности в качестве растворителя, существенноснижает функцию ЕКК и моноцитов человека [Denning D. W. et al., 1987].Таким образом, исследованные в настоящее время иммунотоксическиесвойства этиленгликоля и эфиров этиленгликоля позволяют заключить, чтоданные соединения изменяют неспецифическую резистентность организма,функцию Т- и В-систем иммунитета.Этанол (Э, этиловый спирт, винный спирт, алкоголь) – небольшаяамфифильная органическая молекула без изомерных атомов углерода.Бесцветная жидкость с характерным запахом. Получается сбраживаниемпищевого сырья, гидролизом растительных материалов и синтетически(гидратацией этилена). Спирт-ректификат имеет температуру кипения78,4 0 С. Содержит приблизительно 4,5% воды. Может быть обезвожен(превращен в спирт абсолютный). Хорошо растворяется в воде, умеренно – внейтральных жирах. Применяется для получения синтетического каучука,этилового эфира, как растворитель, для приготовления спиртных напитков. Стехническими целями используется как антиобледенитель в авиации,растворитель для морилок, политур, клея и т.п. Этанол широко используетсяв медицинской практике, прежде всего, как антисептик и консервант. В бытурастворы этанола (водка, столовые вина, пиво, кумыс) используются с цельюповышения аппетита, а также для получения опьянения.Смертельная доза этанола при однократном приеме внутрь составляет300-800 мл (5-13 г/кг) [Фридман Л.С. и соавт., 1998; Лужников Е.А.,Костомарова Л.Г., 2000]. 250 мл этанола соответствуют 600 мл водки исоздают концентрацию в крови, составляющую приблизительно 6,0 г/л[Виноградов В.М. и соавт., 1985]. Летальный уровень в крови Э составляет3,5-5,0 г/л [Фридман Л.С. и соавт., 1998].
31Этанол относится к веществам, вызывающим злоупотребление(наркотикам) [Фридман Л.С. и соавт., 1998]. Смертность от причин,связанных с употреблением алкоголя, за последние годы неуклонно растет[Нужный В.П. и соавт., 1996; Нужный В.П., 2001; Mokhlesi B. et al., 2003б].Не вызывает сомнения, что в возникновении летальных исходов при остромотравлении этанолом и его постоянном потреблении не последнюю рольиграет развитие постинтоксикационного иммунодефицитного состояния[Забродский П.Ф., 2002].Этиловый спирт всасывается через слизистые оболочки полости рта ипищевода (небольшое количество), примерно 20% его резорбируется вжелудке и до 80% - в тонком кишечнике (значительная часть – вдвенадцатиперстной кишке). Распределение его прямо пропорциональногидратации тканей и обратно пропорционально содержанию жира (в жировойткани концентрация его не превышает 30% от уровня в крови).Распределение по тканям после всасывания продолжается 1-1,5 ч. В этойфазе содержание этанола в крови выше, чем в органах, в фазе элиминации –наоборот [Виноградов В.М. и соавт., 1985; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001;Mokhlesi B. et al., 2003б].Этиловый спирт окисляется тремя ферментными системами: системойалкогольдегидрогеназы (70-80%), микросомальной этанол-оксидирующейсистемой (10-15%) и системой каталазы, а также системой оксидаз ипероксидаз тканей (10-15%). В патогенезе интоксикации главный метаболитэтанола ацетальдегид, образующийся с участием АДГ. Несмотря на то, чтоего концентрация в крови на 2-3 порядка меньше, чем алкоголя, он играетрешающую роль в интоксикации. Ацетальдегид окисляется при помощиацетальдегидрогеназы в ацетат, который при участии ацетил-КоА окисляетсядо углекислого газа и воды с образованием энергии (100 г этанола образует700 ккал энергии) [Виноградов В.М. и соавт., 1985; Маркизова Н.Ф. и соавт.,2001; Mokhlesi B. et al., 2003б]. Ацетальдегид увеличивает высвобождение из
32адренергических нервных окончаний катехоламинов, которые повышаюттонус резистивных сосудов (артерий мышечного типа, артериол), вызываюттахикардию, повышают потребность миокарда и других тканей в кислороде.Показано, что ацетальдегид способен конденсироваться с некоторымикатехоламинами, в частности, с дофамином, с образованиемтетрагидроизохинолинов, которые способны вызывать галлюцинации ипровоцировать абстиненцию [Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю., 1998; Blum K.et al., 1988].После острого тяжелого отравления часто возникают (особенно уалкоголиков) инфекционные осложнения и заболевания, которые могутприводить к смерти. В танатогенезе существенную роль может игратьснижение показателей системы иммунитета.Данные в отношении иммунотоксических свойств этаноласвидетельствуют, что этиловый спирт in vitro (10-50 мM, инкубация 3 сут)уменьшал пролиферацию Т-лимфоцитов человека, индуцированную ФГА иКонА на 25-85% [Roselle G.A., Mendenhall C.L., 1982]. У крыс Wistar этанол(12 г/кг ежедневно, перорально в течение 6 недель) на 30 % снижал функциюперитонеальных макрофагов [Morland B., Morland I., 1982]. Аналогичныеданные получены при однократном внутрижелудочном введении крысам 0,5мл этилового спирта [Ali M.V., Nolan J.P., 1967]. Внутриклеточноепереваривание полиморфноядерными лейкоцитами (ПЯЛ) Е.соli у крысснижалось при потреблении ими 20% этанола в течение 3 недель [Galante P.et al., 1982]. In vitro этанол (64 мкг/мл, экспозиция 30 мин) на 80% снижалданный показатель при использовании S.augeus [Hallengren B., Forsgren A.,1978]. При концентрации этанола, составлявшей 0,8 и 1,6 мкг/мл, in vitro(экспозиция 30 мин) хемотаксис ПЯЛ человека увеличивался на 10% ,концентрации 3,2 и 6,4 мкг/мл не изменяли данный показатель, а увеличениесодержания этанола до 64 мкг/мл снижало хемотаксис ПЯЛ на 99%[Hallengren B., Forsgren A., 1978]. Аналогичные результаты получены при
33использовании этанола в концентрациях 8-20 мг/кг (экспозиция 1 ч)[Spagnuolo P.J., McGregor R.R. , 1975].Показано, что активность ЕКК и К-клеток, определяющихантителозависимую клеточную цитотоксичность, у человека снижается впрямой зависимости от концентрации этанола (но не его метаболитауксусного альдегида), что не связано с блокированием спиртом интерферона[Stasey N.H., 1985]. При иммунизации мышей эритроцитами баранаоднократная доза этанола, составляющая 7 г/кг, ослабляла продукциюантител классов IgM и IgG 1 , но не влияла на синтез антител IgG 2 [Carson E.J.,Pruett S.B., 1996]. Однократное введение здоровым испытуемым этанолавнутривенно или внутрь в дозе 0,5 г/кг не оказывало влияния на активностьестественных киллеров. В то же время 4-часовая инкубация лимфоцитовчеловека в присутствии этанола при концентрации, равной или более 80мг/дл, оказывала дозозависимый эффект, подавляя естественную киллернуюактивность [Meadows G.G. et al., 1989]. Предполагается, что в основеснижения резистентности у больных алкоголизмом к вирусам и опухолямлежит прямое воздействие этанола на ЕКК [Oschshorn-Adelson M. et al.,1994].Установлено, что ингибирование функциональной активностимакрофагов этанолом опосредовано изменением обмена циклическихнуклеотидов, в частности, внутриклеточного цАМФ [Токмаков А.А.,Денисенко В.Ю., 1989].Описаны данные, позволяющие полагать, что у потомстваалкоголизированных крыс инфекционный процесс может изменять своетечение и будет протекать в хронической рецидивирующей форме врезультате нарушения реактивности тимуса [Куркин А.В. и соавт., 1990].Этанол в концентрациях, сходных с таковыми в сыворотке крови людей,при умеренном употреблении алкоголя подавляет пролиферацию Т-лимфоцитов, индуцированную митогенами, форболмиристатацетатом и
34моноклоцитов, индуцированную митогенами, форболмиристатацетатом имоноклональными антителами к антигену CD3. Этанол не влиял напродукцию ИЛ-2 и экспрессию рецепторов к ИЛ-2, но обладал способностьюблокировать активность экзогенного ИЛ-2 [Kaplan D.R. , 1986].При введении крысам этанола в дозе 1 мл/кг в течение 15 сут внутрьустановлено, что спленоциты выделяют как иммуностимулирующие (2фактора с молекулярной массой 10-25 и более 100 кД), так ииммуносупрессирующие факторы (2 фактора с молекулярной массой более100 кД). Отмену иммунодефицитного состояния можно вызвать кроличьейантисывороткой к супрессирующим факторам при ее 5-кратномвнутривенном введении [Смахтин М.Ю. и соавт., 1994].Этиловый спирт in vitro снижал активность ЕКК мышей приконцентрациях 0,5; 1 и 2% (экспозиция 4 ч) соответственно на 30, 60 и 90 %[Saxena A. K., Adler W.H., 1982]. При введении крысам этанола внутривенно(первичная доза 1,75 г/кг, затем в течение 7 дней в дозе 0,3 г/кг) или внутрь(12-14 нед, 36% от общей калорийности рациона) установлено, что остроевведение спирта подавляет вызванную липополисахаридом (ЛПС) секрециюмакрофагами α-фактора некроза опухоли (ФНОα), усиливая продукцию О - 2,индуцированную форболмиристатацетатом (ФМА) и опсонизированнымзимозаном. Хроническое воздействие этанола подавляло как спонтанное, таки продуцированное ЛПС выделение ФНОα. При этом также отмечалиослабление секреции О - 2 клетками, стимулированными ФМА [D'Souza N.B. etal., 1996].Установлено, что сыворотка больных алкоголизмом подавляет ответнормальных лимфоцитов на митогены. В циркулирующей крови больныхснижено количество Т-лимфоцитов, но не В-клеток. ЕКК у больных частолизируют аутологичные гепатоциты, у алкоголиков и животных, получавшихсистематически 2-16% раствор алкоголя в питьевой воде, повышаласьактивность ЕКК. Однако спирт, добавленный в раствор ЕКК с клетками-
35мишенями in vitro, снижает активность ЕКК. У животных и людей послеприема алкоголя снижается накопление ПЯЛ в ранах, что связано соснижением их миграционной способности [Watson R.R. et al., 1984].В опытах на мышах установлено, что этанол при остром и хроническомдействии снижает продукцию IgA и IgG, реакцию ГЗТ [Waltenbaugh C. et al.,1997, 1998] и увеличивает апоптоз ИКК [Ewald S.J., Shao H., 1993]. Опыты накрысах показали, что этиловый спирт вызывает редукцию секреции факторанекроза опухоли-α (ФНОα) [Nelson S.G. et al., 1989; Kolls J.K. et al., 1995],хемокинов клетками Купффера и ИКК [Bautista A. P., 2001; Zhang P. et al.,2002]. In vitro в опытах на клетках мышей и человека алкоголь снижалцитотоксическую функцию макрофагов [Bagasra O., Pomerantz R. J., 1993],продукцию цитокинов ИКК [Wagner F. et al., 1992; Szabo G. et al., 1992, 1993;Chen G.J. et al., 1993; Wang Y. et al., 1994а, 1994б], экспрессию рецептора кФНОα [Bermudez L.E. et al., 1991а, 1991б] и пролиферацию Т-клеток [SzaboG. et al., 2001]. У мышей прием алкоголя снижал резистентность кэкспериментальной инфекции, вызванной листериями [Saad A.J. et al., 1993;Jerrells T.R., Sibley D., 1995], салмонеллами [Jerrells T.R., Sibley D., 1995;Sibley D., Jerrells T.R., 2000], стрептококками [Shahbazian L. M. et al., 1992],ретровирусами [Wang Y. et al., 1993; Wang Y., Watson R. R., 1994б; SepulvedaR.T. et al. 2002].Результаты исследования Быковой А.А. и Седининой Н.С. (2002)показали способность этанола вызывать иммунные и аутоиммунныеэффекты, возможность иммунного ответа на низкомолекулярные соединения(этанол, дофамин) в условиях in vivo и ex vivo. Авторы рассматриваютактивацию иммунной системы при поступлении этанола как защитнуюреакцию, направленную на восстановление нарушенного химическогогомеостаза организма. Евсеевым В.А. и соавт. (1983) описаныиммунодепрессивноее противовоспалительное действие этанола и развитие
36повышенной чувствительности к нему лейкоцитов крови и тучных клетоккрыс.При введении крысам метоксиэтанола внутрибрюшинно ежедневно напротяжении 10 сут в дозах 50-200 мг/кг наблюдали снижение массы тимуса,подавление бласттрансформации Т-лимфоцитов (индуцированной ФГА иКонА) и продукции ИЛ-2. Продукция АОК к эритроцитам баранаувеличилась при дозе метоксиэтанола 50 мг/кг. 2-метоксиуксусная кислота(метаболит метоксиэтанола) подавляла гуморальный иммунный ответ.Ингибитор алкогольдегидрогеназы 4-метилпиразол снижалиммунодепрессивные свойства метоксиэтанола [Smialowicz R.J. et al., 1991].Мыши в отличие от крыс не чувствительны к иммуносупрессивномудействию метоксиэтанола и 2-метоксиуксусной кислоты. Это обусловленоиммунологическими, фармакокинетическими или метаболическимиразличиями между двумя видами грызунов [Smialowicz R.J. et al. , 1992].Существующие в настоящее время данные в отношениииммунотоксичности этанола (а также других спиртов) позволяютпредполагать, что его супрессируюшее влияние на систему иммунитетаобусловлено, по-видимому, реализацией следующих механизмов:мебранотоксическим эффектом, приводящим к изменению характерабелково-пептидных взаимодействий и связанному с этим нарушениюактивности ферментов, проницаемости ионных каналов Т-, В-лимфоцитов иЕКК; поражением мозговых центров неокортекса, оказывающих влияние наиммуногенез; изменением функции нейромедиаторов; нарушением секрециицитокинов, гормонов и биологически активных аминов (ИЛ-1, ИЛ-2,интерферонов, гистамина, серотонина и др.); нарушением обмена цАМФ ицГМФ в ИКК [Алиев Н.А., 1991а, 1991б; Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю.,1998].При остром отравлении этанолом имеет место патология нервнойрегуляции иммунной системы. Эти механизмы играют существенную роль в
37формировании постинтоксикационного имммунодефицита. Для алкоголяхарактерно двойственное воздействие на иммунную систему: с однойстороны, он выступает в качестве мембранотоксического соединения,непосредственно повреждающего структуру и функцию ИКК, а с другой -этанол является дестабилизатором центральных нейроэндокринныхрегуляторных механизмов иммуногенеза [Крыжановский Е.Н., Евсеев В.А.,1986]. Несомненно, что в формировании иммунодефицита после острогоотравления этанолом играет функция ГГАС. Учитывая увеличениеактивности парасимпатической системы после острой интоксикации Э[Надариешвили К.Ш. и соавт., 2004], весьма интересным и неизученнымвопросом является возможность ингибирования метаболитом алкоголяацетальдегидом ацетилхолинэстеры, в частности, в Т-клетках.Существуют основания полагать, что при остром действии этанолавозникающий дисбаланс между тормозными и стимулирующимимедиаторными системами, в первую очередь, ГАМК-, глутамат-, серотониниопиатергических систем мозга [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004] можетоказывать влияние на функцию ИКК.Исследованные в настоящее время иммунотоксические свойства спиртови их метаболитов, эфиров этиленгликоля позволяют заключить, что данныесоединения снижают показатели неспецифической резистентностиорганизма, функцию Т- и В-систем иммунитета. Одним из возможныхмеханизмов иммунотоксичности спиртов, вероятно, является снижение имипродукции ИЛ-2 Т-клетками.В настоящее время влияние иммуностимуляторов на иммунныйгомеостаз после острой интоксикации М, ЭГ и Э изучено недостаточно.Таким образом, коррекция нарушений системы иммунитета после острогодействия М, ЭГ и Э в постинтоксикационном периоде нуждается вдальнейшей разработке. Патогенетическое обоснование примененияперспективных иммунокорректоров на НРО и основные звенья системы
38иммунитета при острых отравлениях М, ЭГ и Э позволит проводитьэффективную профилактику и лечение постинтоксикационныхинфекционных осложнений и заболеваний.1.3. Токсикологическая и иммунотоксикологическая характеристикахлорированных углеводородовДихлорэтан (ДХЭ, 1,2- дихлорэтан, 1,2- этандихлорид, этилендихлорид,1,2-этилендихлорид, симметричный дихлорэтан). Относится ко второмуклассу опасности. ДХЭ - бесцветная или слегка желтоватого цвета жидкостьсо своеобразным запахом, напоминающим хлороформ или этиловый спирт. Вводе растворимость низкая (8,69 г/л при 20 0 С), хорошо растворяется ворганических растворителях, жирах. В пламени и на горячих поверхностяхДХЭ разлагается с образованием хлористого водорода, фосгена и другиххлорсодержащих соединений.В промышленности и быту дихлорэтан применяется как растворительлаков и красок, в военном деле – в качестве средства для растворенияхлорсодержащих дегазаторов и экстракции отравляющих веществ при ихиндикации [Нацюк М.В., 1979], в качестве растворителя БОВ – иприта илюизита. Интоксикации ДХЭ возможны при поступлении яда ингаляционнымпутем, через кожные покровы и желудочно-кишечный тракт. Острыеотравления ДХЭ возникают, как правило, в результате нарушения техникибезопасности при работе с ним или при ошибочном употреблении яда внутрьв качестве суррогата алкоголя или суицидальными целями.Смертельные дозы ДХЭ для человека при пероральном приеменаходятся в пределах от 20 до 50 мл [Нацюк М.В. и соавт., 1974; Нацюк М.В.,1979; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000]. Описаны случаисмертельного отравления при приеме внутрь даже 5,0 мл токсиканта[Бережной Р.В., 1977]. Среди всех случаев острых отравлений органическимирастворителями на долю ДХЭ приходится 44% [Тиунов А.Л., 1990а].
39Несмотря на относительно небольшую частоту острых интоксикаций даннымсоединением (до 5%), отравления ДХЭ характеризуются высокойсмертностью (32-96%) [Кокаровцева М.Г., 1982; Курашов О.В., ТроцевичВ.А., 1992], одной из причин которой может являться постинтоксикационноеиммунодефицитное состояние, приводящее к инфекционным осложнениям[Забродский П.Ф., 1998, 2002].По нашим данным, в конце 90-х годов в ВС РФ по сравнению спредшествовавшими пятью годами частота отравлений ДХЭ возросла в 3раза, а показатель смертельных исходов от отравлений превысил 30%.Данный показатель превосходит частоту смертельных исходов при всехвидах отравлений в 2 раза.Среднелетальные дозы ДХЭ по данным различных авторов припероральном введении составляют для собак, крыс и мышей (различныхлиний) соответственно 2500, 680 –850 и 413 - 489 мг/кг [Ларионов В.Г.,Кокаровцева М.Г., 1976; Barsoum G.S., Saad K., 1934; McColister D.D. et al.,1956; Munson A.E. et al., 1982]. При ингаляционном поступлении в течение 6ч CL 50 для крыс и мышей соответственно составляет 5100 – 6660 и 1060 мг/м 3[Bonnet P. et al., 1980; Spencer H.C. et al., 1951; Gradiski D. et al., 1978].Гибель животных наступает при воздействии относительно узкогодиапазона концентраций. Так, для крыс разница между LC 10 (6 ч) и LC 90 (6 ч)составляет 2800 мг/м 3 [Bonnet P. et al., 1980]. После воздействия ДХЭ на крысв концентрации 2000 мг/м 3 на протяжении 6 ч гибели животных ненаблюдается [Spencer H.C. et al., 1951]. В опытах на мышах также отмеченанезначительная разница между LC 10 (6 ч) и LC 90 (6 ч), которая составляет 500мг/м³ [Gradiski D. et al., 1978]. Попадая во внутренние органы организма,ДХЭ как гидрофобное вещество быстро исчезает из крови, накапливаясь втканях, богатых липидами: ЦНС, печени, сальнике, надпочечниках, откуда втечение нескольких дней выводится [Гембицкий Е.В., Бонитенко Ю.Ю.,1983; Dorndorf W., 1975; Yodaiken R.E., Babcock J.R., 1973]. Метаболизм ДХЭ
40происходит в печени, корковом и мозговом слоях почек, легких, селезенке,эпителии желудочно-кишечного тракта, коже. Биотрансформация ДХЭ ворганизме протекает весьма интенсивно [Кокаровцева М.Г. , 1982; КурашовО.В., Троцевич В.А., 1992; Gradiski D. et al., 1978]. Так, привнутрибрюшинном введении мышам ДХЭ в дозах 50 и 170 мг/кг через 2 чнаблюдается превращение в метаболиты соответственно 88 и 55% яда[Лужников Е.А. и соавт., 1989; Yllner S., 1977а]. Основными метаболитамиДХЭ являются: хлорэтанол, хлоруксусный альдегид, монохлоруксуснаякислота. Данные соединения значительно токсичнее ДХЭ [Лужников Е.А. исоавт., 1985; Yllner S., 1977б].Начальный этап биотрансформации ДХЭ - дехлорирование - происходитпри участии цитохром Р-450-зависимых оксидаз [Козлов В.А. и соавт., 1991].Под воздействием оксидаз смешанной функции (в частности, цитохрома Р-450) происходит биологическое окисление ДХЭ с образованием стабильногоэлектрофильного радикала СlСН 2 -СН 2 -, способного алкилироватьбиосубстраты и активировать процессы пероксидации. Затем подвоздействием глютатион-S-трансфераз проходит реакция конъюгацииметаболитов ДХЭ с глютатионом, в результате этого образуютсямеркаптуровые кислоты, которые и выводятся из организма [Козлов В.А. исоавт., 1991; Inskeep P.B., Guengerich F.P., 1984; Rannug U., 1980; SundheimerD.W. et al., 1984]. В процессе интоксикации имеют значение не толькопродукты биотрансформации, но и действие молекулы ДХЭ в целом,которая блокирует активные центры многих ферментов и рецепторов илиобразует соединения, по структуре напоминающие иприты [Гембицкий Е.В.,Бонитенко Ю.Ю., 1983; Foureman G.L., Reed D.J. , 1985; Schasteen C.S., ReedD.J., 1983]. Достаточно полные данные о токсикодинимике итоксикокинетике ДХЭ приведены в монографии [Гигиенические критерииокружающей среды. Вып. 62. 1,2-дихлорэтан, Женева, ВОЗ, 1990].
41Многочисленными исследованиями установлено, что способ введенияДХЭ в организм не оказывает существенного влияния на распределение егометаболитов по органам и системам. Выявлено, что токсические эффекты приостром пероральном отравлении ДХЭ сходны с теми, которые наблюдаютсяпри остром ингаляционном воздействии, но более выражены. К основнымсиндромам при отравлении ДХЭ относятся: угнетение ЦНС, гастроэнтерит,нарушение функции печени и почек, сердечно-сосудистой системы[Андрюкин А.А., 1979; Нацюк М.В., 1979; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г.,1989, 2000; Маркова И.В. и соавт., 1998; Савлуков А.И. и соавт., 2004;Shonborn H. et al., 1970; Yodaiken R.E., Babcock J.R., 1973]. Значительныеизменения претерпевают свертывающая и противосвертывающая системакрови. Отмечается возрастание времени содержания в крови факторовсвертывания тромбоцитов, уменьшение числа эритроцитов [Ларионов В.Г.,Кокаровцевa М.Г., 1976; Якушева Е.Н., 1994; Daniel F. et al., 1994; DorndorfW., 1975].При патологоанатомических исследованиях органов умерших в первыесутки интоксикации ДХЭ определяется резкое полнокровие головного мозгаи внутренних органов с периваскулярным отеком и кровоизлияниями.Дистрофические изменения в печени и почках мало выражены или неопределяются вообще. Во всех случаях, когда смерть наступала через 2 сут ипозже, наблюдались выраженные дистрофические изменения в почках,печени и сердечной мышце [Нацюк М.В., 1979; Тиунов А.Л., 1990а;Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000].При воздействии паров ДХЭ на кроликов на протяжении 7,5 - 8,0месяцев в концентрации 100 мг/м 3 (3 г/сут, 6 г/нед) наблюдалось снижениеобразования антител к брюшнотифозной вакцине на 80%. Отмечено такжедвукратное снижение титра антител к ЭБ [Шмутер Л.М., 1976]. Припероральном хроническом отравлении мышей получены аналогичныерезультаты [Munson A.E. et al., 1982]. Вместе с тем, при хроническом
42действии низких концентраций хлорированных углеводородов ряда этанаотмечено двукратное увеличение уровня антител к эритроцитам барана[Шмутер Л.М., 1977].Установлено уменьшение числа лейкоцитов на 30% у мышей,получавших ДХЭ в дозе 49 мг/кг в течение 14 сут. При этом не наблюдалосьизменений в относительной массе органов. При 90-дневном воздействииДХЭ выявлена тенденция к уменьшению антителообразующих клетокселезенки, уровня сывороточных антител после иммунизации ЭБ. Неотмечено изменений функции В-клеток, индуцированныхлипополисахаридом. После 14-суточного отравления у животных,получавших ДХЭ в дозах 4,9 и 49,0 мг/кг, наблюдалось уменьшение числаантителопродуцентов в селезенке соответственно на 25% и 40%. После 90-дневного воздействия ДХЭ не выявлено влияния яда на клеточныйиммунитет, который оценивали по выраженности реакциигиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на ЭБ и по ответу клетокселезенки на митоген Т-клеток конканавалин А. После 14-дневнойинтоксикации зарегистрировано слабовыраженное подавление ГЗТ, но этотэффект не зависел от дозы [Munson A.E., et al., 1982].Описано действие, свидетельствующие о том, что у потомства,полученного у самок крыс с хронической патологией гепатобилиарнойсистемы (именно данная система является одной из основных мишеней припоражении ДХЭ) наблюдается угнетение спонтанной макрофагальнойактивности перитонеальных фагоцитов и моноцитов периферической крови[Брюхин Г.В., Грачев А.Ю., 1991]. Отмечается также уменьшениеконцентрации макрофагов и их аффинности, снижение способности этихклеток поглощать сенсибилизированные ЭБ [Брюхин Г.В., Грачев А.Ю.,1993; Прокопенко Л.Г., Кедровская Н.Н., 1983].При изучении влияния острой интоксикации ДХЭ на НРО и основныеиммунные реакции установлено увеличение летальности крыс от
43экспериментальной инфекции, снижение гуморального иммунного ответа[Забродский П.Ф. и соавт., 1997]. По-видимому, одним из основныхмеханизмов угнетения иммунного ответа под влиянием ДХЭ являетсяингибирование ацетилхолинэстеразы и неспецифических эстераз,локализованных преимущественно в Т-клетках [Kutty K.M. et al., 1976;Kullenkampff J. et al., 1977].Описано нарушение снижения фагоцитарно-метаболической активностинейтрофилов при остром отравлении ДХЭ. Данные измененияхарактеризовались снижением содержания в клетках катионных белковчерез 1,3 и 9 сут после острой интоксикации ДХЭ (1,0 ЛД 50 ) соответственно в1,9; 1,44 и 1,32 раза [Гребенюк А.Н. и соавт., 1996]. Кромекислородзависимых антиинфекционных систем фагоцитоза спирты, ХУ ипродукты их биотрансформации, вероятно, поражают икислороднезависимые микробицидные системы фагоцитов [Гребенюк А.Н. исоавт., 1998]. В опытах Е.В. Давыдовой и соавт. (2004а, 2004б) показаноснижение внутриклеточного содержания катионных белков в нейтрофилахкрыс после острой интоксикации ДХЭ в дозе 1,0 ЛД 50, а такжезарегистрирован феномен аномального гранулогенеза.Полученные данные не позволяют в полной мере обосноватьиспользование наиболее эффективных, существующих в настоящее время,способов активации Т-звена или В-звена иммунитета, НРО [Плецитый К.Д.,Сухих Г.Г., 1984; Ершов Ф.И.,1995; Утешев Б.С. и соавт.,1995].Таким образом, систематизированные результаты большого объемалитературных данных о влиянии дихлорэтана на состояние иммунногогомеостаза не позволяют судить о характере развитияпостинтоксикационного иммунодефицитного состояния. Обзор литературы овлиянии острой интоксикации ДХЭ на состояние иммунного гомеостазасвидетельствует о том, что существует целый ряд не исследованныхвопросов в отношении действия данного яда на НРО, гуморальные и
44клеточные иммунные реакции. Следует подчеркнуть, что данные различныхисследователей в отношении иммунотоксических эффектов гепатотропныхядов противоречивы. Зачастую не вполне ясен характер вызываемого приостром отравлении ими постинтоксикационного иммунодефицитногосостояния. Авторами не определена роль неспецифических и специфическихмеханизмов (значения эстераз иммуноцитов) в нарушении иммунногогомеостаза при острой интоксикации ДХЭ. В настоящее время средиобширного информационного материала отсутствует систематизированныйанализ данных о характере и патогенезе нарушений иммунного гомеостазапри остром отравлении ДХЭ, необходимость проведения которого очевидна.Это крайне важно для создания современной концепции патогенезаотравлений ДХЭ, охватывающей все известные сведения обиммунотоксичности гепатотропных ядов, и в частности ДХЭ. На сегоднянеобходимы исследования ДХЭ, позволяющие определить характернарушения НРО, гуморальных иммунных реакций в индуктивную ипродуктивную фазу иммуногенеза, клеточного иммунитета, роль эстеразлимфоцитов, ПОЛ, ГГАС в реализации этих сдвигов. Это позволитобосновать возможность использования иммуномодуляторов для коррекциинаиболее значимых элементов звеньев НРО и иммуногенезапостинтоксикационного иммунодефицита.Четыреххлористый углерод (тетрахлорметан, ТХМ, перхлорметан,фреон–10, хладон–10) относится к хлорпроизводным метана. Это бесцветнаяжидкость с ароматическим запахом (сходным с хлороформом). Невоспламеняется. При соприкосновении с пламенем или накаленнымипредметами разлагается, образуя фосген. Молекулярная масса 153,84,температура кипения 76,8 0 С, температура плавления –23 0 С. Хорошорастворим в жирах. Коэффициент растворимости паров в воде 1,04 (20 0 С),0,73 (30 0 С). Химическая формула: ССl 4 [Лазарев Н.В., Гадаскина И.Д., 1977;Тиунов А.Л., 1990а]. Смешивается с большинством органических
45растворителей. ТХМ практически нерастворим в воде. Хорошо растворяетжиры и масла, канифоль, многие натуральные и синтетические смолы, атакже серу, желтый фосфор и галогены. В отсутствии влаги не действует наметаллы. При нагревании выше 1000 0 С образуется тетрахлорэтилен и хлор,при неполном гидролизе водяным паром – фосген: ССl 4 + Н 2 О = СОСl 2 +2НСl. [Лазарев Н.В., Гадаскина И.Д., 1977; Тиунов А.Л., 1990а].ТХМ широко используется в промышленности как растворитель масел,жиров, каучука, битумов и смол; для экстрагирования жиров и алкалоидов изкостей и семян; при производстве фреонов. Благодаря труднойвоспламеняемости и высокой плотности используется в огнетушителях в техслучаях, когда неприменимо тушение водой (при пожарах нефтепродуктов,на электроустановках и т.д.). Тушение огня ТХМ в закрытом помещениипредставляет опасность ввиду токсичности его паров и образующихся газов.Используется для чистки и обезжиривания одежды в быту ипроизводственных условиях. В медицине раньше применялся в качествепротивоглистного средства. Он эффективен при заражении анкилостомами,аскаридами, острицами, ленточными глистами [Курдыбайло Ф.В. и соавт.,1968; Тиунов А.Л., 1990а].В настоящее время ТХМ исключен из номенклатуры лекарственныхсредств в связи с тем, что появились более безопасные и обладающиебольшей противоглистной активностью препараты [Машковский М.Д., 2000].Первый случай ингаляционного отравления ТХМ отмечен во Франции в1938 году. Долгие годы наблюдались преимущественно производственныеингаляционные отравления. Описано много профессиональных отравлений,среди них немало смертельных. Часто наблюдаются отравления на мелкихпредприятиях, при дегельминтизации животных. Причиной пероральныхотравлений часто бывает употребление этого препарата с целью опьянения.Ингаляционные отравления возникают на производстве при несоблюденииправил техники безопасности, в быту при чистке одежды в небольших, плохо
46проветриваемых помещениях. Возможны отравления при длительномконтакте ТХМ с кожей. Случай массового отравления с 20 смертельнымиисходами описан при употреблении внутрь средства для мытья волос,содержащего 1,4% ТХМ (остальное спирт). ТХМ - один из самых сильныхгепатотропных ядов [Курдыбайло Ф.В.и соавт., 1968; Чиркова В.М., 1983;Тиунов Л.А., 1990а].В клинической токсикологии отравления ТХМ встречаются довольночасто. Пациенты с данной патологией составляют до 60% всех больных стоксическим поражением печени [Голиков С.Н. и соавт., 1986; ВенгеровскийА.И. и соавт., 1993]. Летальность при пероральных отравлениях составляет30%, при ингаляционных – от 15 до 20%. Летальная доза при пероральномпоступлении для человека составляет 20 – 40 мл. Вдыхание паров ТХМ вконцентрации 15 мг/л через 10 минут, а в концентрации 2 мг/л – через 30минут приводит к появлению головной боли, тошноты, рвоты, учащениюпульса. У рабочих при восьми часовом воздействии концентрации,составляющей 1,2 мг/л, наблюдается усталость, сонливость. Смертельнаяконцентрация ТХМ для человека равна 50 мг/л при вдыхании в течение 1 ч.Для появления симптомов отравления достаточно приема внутрь 2 – 4 млтоксиканта [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989].При остром отравлении ТХМ поражается ЦНС, желудочно-кишечныйтракт, печень и почки, свертывающая система крови, сердечно-сосудистая идыхательная системы. При действии на кожу ТХМ вызывает дерматиты,иногда экзему, крапивницу. Основная причина смерти больных - остраяпеченочно-почечная недостаточность и ее осложнения (массивныекровотечения, пневмония). Прием алкоголя способствует более тяжеломутечению ингаляционных отравлений [Лужников Е.А., 1999; Чиркова В.М.,1983; Тиунов Л.А., 1990а; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000;Маркова И.В. и соавт., 1998; Куценко С.А. и соавт., 2004].
47В виду выраженной липотропности ТХМ быстро всасывается в кровь. Вэкспериментах на животных наибольшая концентрация яда наблюдается вжировой ткани (примерно в 8 раз больше, чем в крови). Наиболее высокаяконцентрация ТХМ в крови достигается в течение 2 – 4 часов, а через 6 часовего большая часть переходит в жировую ткань, печень, мозг. Приингаляционных отравлениях токсикокинетические процессы протекают в 2 –3 раза быстрее. В организме ТХМ частично очень медленно разрушается.Выделяется в течение длительного времени (до 70 дней) через дыхательныепути. В неизмененном виде (до 50-60%) - через почки и кишечник. В почкахне концентрируется. ТХМ подвергается метаболическому разложению вмембранах эндоплазматического ретикулума печени при участии Р – 450-завимых монооксигеназ. В результате происходит образование свободныхрадикалов (ССl + 3; O-O-CCl; HO-OCCCl 3 ; HO-CCl 3 ), из которых высокуюактивность имеет ССl + 3. Свободные радикалы действуют на функциональныегруппы белков внутриклеточных мембран и ферментов, выполняют рольинициаторов реакции перекисного окисления ненасыщенных жирных кислотв мембранах, ингибируют биосинтез белка, вызывают диссоциацию полисом,рибосом, разрушение РНК. В процессе метаболизма возможно образованиехлороформа (СНСl 3 ) и фосгена, которые затем превращаются в оксидуглерода, хлористый водород и воду. Метаболизму подвергается 20% отвведенной дозы ТХМ [Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А., 1990а].При патоморфологическом исследовании обнаруживают тяжелыеповреждения печени в виде массивных центролобулярных некрозов ипигментного цирроза, при ингаляционном отравлении некротическиеизменения менее выражены. Считают, что изменения в печени максимальныв ранние сроки отравления. При более поздней гибели в ткани печенирегистрируются регенеративные процессы. Изменения в почках проявляютсякартиной выделительного нефроза, гидропической дистрофией эпителияизвитых канальцев. При ранней гибели эти изменения менее выражены.
48Характерны множественные кровоизлияния под эпикардом, эндокардом,плеврой, слизистой оболочкой желудочно-кишечного тракта. В случаяхбыстрой смерти на вскрытии отмечаются только кровоизлияния и отек мозга.При гистологическом исследовании – признаки энцефаломиелита,дегенеративные изменения нервных клеток, периферические невриты, невритзрительного нерва, кровоизлияния, жировая эмболия мозга [КурдыбайлоФ.В.и соавт., 1968; Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А., 1990а; Лужников Е.А.,Костомарова Л.Г., 1989, 2000].Описано, что под влиянием острого отравления ТХМ in vitro приконцентрации 3 мМ происходит подавление гуморального иммунного ответана ЭБ, динитрофиколл и липополисахарид [Kaminski N. E., Stevens W.D.,1992]. Отмечается снижение активности В-лимфоцитов и угнетениесупрессорной функции Т-лимфоцитов [Брызгина Т.М. и соавт., 1990]. Подвлиянием ТХМ наблюдают угнетение функции В-клеток, особенно в ранниесроки после поражения, вследствие чего снижается их способность ккооперации с Т-клетками. Это приводит к снижению иммунного ответа натимусзависимый антиген ЭБ [Ильичевич Н.В. и соавт., 1984; Брызгина Т.М.,1989]. Аналогичные данные (снижение в несколько раз числа АОК вселезенке мышей) получены при остром токсическом гепатите, вызванномвведением животным ТХМ [Хабибуллаев Б.Б., 2005].Изменение гуморального иммунитета на тимусзависимый антиген ЭБ укроликов и мышей в условиях острого поражения печени ТХМ взначительной степени обусловлено активностью иммунорегуляторныхклеток - антигеннеспецифических хелперов и супрессоров. Активностьклеток-супрессоров проявляется вследствие того, что они вырабатываютсупрессорный фактор, который неспецифически подавляет тимусзависимыйиммунный ответ [Конопля А.И. и соавт., 1985; Прокопенко Л.Г., 1985;Борисов В.А., 1990; Смахтин М.Ю. и соавт., 1994, 1995].
49При остром отравлении ТХМ усиление хелперной активностихарактерно для периодов большего повреждения печени и менее выраженнойрегенерации, а усиление супрессорной - для периодов интенсивнойрегенерации и меньшего повреждения печени [Прокопенко Л.Г. и соавт.,1983; Мартынова Т.В. и соавт., 1991]. По всей вероятности, поражениепечени, с одной стороны, создает предпосылки для активации иммунногоответа на различные антигены, с другой - активация иммунного ответа можетсвидетельствовать о запуске аутоиммунных механизмов поврежденияпечени. У потомства крыс с хроническим аутоиммунным повреждениемпечени отмечалось повышение иммунологической реактивности, о чемсвидетельствовало увеличение в их селезенках Ig M, продуцирующихантителообразующие клетки [Прокопенко Л.Г. и соавт., 1982, 1983;Прокопенко Л.Г., Кедровская Н.Н., 1983; Брюхин Г.В., Михайлова Г.И.,1990].При хроническом действии ТХМ нарушение функции иммуннойсистемы связывают с изменениями содержания фосфолипидов (ФЛ) игликолипидов (ГЛ) в тканях печени и органах системы иммунитета. При этомрегистрировалось изменение фракций ФЛ и ГЛ на мембранах гепатоцитов,клеток селезенки, тимуса и костного мозга [Холмухамедова Н.М. и соавт.,1991]. Введение крысам ТХМ вызывало снижение функциональнойактивности Т-лимфоцитов крови в реакции бласттрансформации в ответ наФГА, особенно в ранние сроки исследования [Брызгина Т.М., МартыноваТ.В., 1985]. Аналогичные результаты получены в более позднихисследованиях, где показано, что содержание Т-лимфоцитов в селезенке илимфоузлах (после введения ТХМ крысам) уменьшалось, а содержание В-лимфоцитов не изменялось [Брызгина Т.М. и соавт., 1990]. Дальнейшиеисследования показали, что под влиянием ТХМ наблюдается увеличениеактивности как Т-хелперов, так Т-супрессоров, причем активность последнихбыла выше [Брызгина Т.М. и соавт., 1992]. Показано снижение ГЗТ под
50влиянием ТХМ [Брюхин Г.В., Михайлов Г.И., 1990]. Потомство крыс схроническим поражением печени ТХМ характеризовалось депрессиейклеточного иммунитета, проявлявшейся уменьшением количества Т-клетокГЗТ, а также редукцией антителообразования и снижением интенсивностиFc-зависимого фагоцитоза перитониальных макрофагов и моноцитов крови[Брюхин Г.В., Михайлова Г.И., 1990; Брюхин Г.В., Грачев А.Ю., 1991;Брызгина Т.М. и соавт., 1992].Кратковременное действие ТХМ оказывало стимулирующий эффект нафагоцитоз лейкоцитов и активацию естественных клеток-киллеров, тогда какпродолжительное введение обусловливало противоположное действие[Halaskova M. et al., 1993]. Влияние ТХМ на факторы НРО практически неизучено.Показано, что при действии ТХМ и высокой внешней температуры (40 о Спо 40 мин ежедневно в течение 3 сут) отмечается выраженное снижение Т-зависимого иммунного ответа [Конопля Е.Н., Прокопенко Л.Г., 1994].Комбинированное действие этанола и ТХМ вызывало суммациюиммуносупрессивных эффектов ядов [Смахтин М.Ю. и соавт., 1994].Интересно отметить, что витамин С предохраняет от действия ТХМ[Ademuyiva O. et al., 1994], а витамин А вызывает усиление его токсическогоэффекта. Однако имеются данные, вызывающие сомнение в таком выводе.Так, экстракт из моркови обладает гепатопротективными свойствами приокислительном стрессе, вызванном ТХМ [Bishayee A., Chatterjee M., 1993].Вероятно, у β-каротина и витамина А при поражении ТХМ реализуютсяпротивоположные эффекты. При острых интоксикациях ТХМ в опытах намышах показано иммуностимулирующее действие лейкинферона [КузнецовВ.П. и соавт., 1992].Существуют основания считать, что в супрессиии иммуногенеза приотравлении ТХМ определенную роль играет нарушение АКТГ-
51продуцирующей функции гипофиза, приводящее к увеличению массынадпочечников [Брюхин Г.В., Пивель Г.В., 1993].Данные, полученные А.И. Венгеровским и соавт. (2004),свидетельствуют о снижении числа лимфоцитов в тимусе, увеличению их вселезенке, активации гуморального иммунного ответа, оцениваемого почислу АОК в селезенке крыс и содержанию в крови IgM и IgG под влияниемТХМ, который вводили внутрижелудочно крысам в дозе 2 мг/кг(приблизительно 1/3 ЛД 50 ) 2 раза в неделю в течение 1 месяца. На нашвзгляд, активация антителообразования при столь высоких дозах ТХМ маловероятна и противоречит данным, полученным другими исследователями.Таким образом, описанные в литературе острые и хроническиеиммунотропные эффекты ТХМ противоречивы. Практически не исследованыроль Т- и В-клеток, состояния ПОЛ, ГГАС, эстеразной активности Т-лимфоцитов в формировании иммунодефицита после действия ТХМ, атакже действие токсиканта на показатели НРО.Трихлорэтилен (ТХЭ) применяется в промышленности в качестверастворителя жиров, смол, каучука, для очистки металлических деталей иизделий, для химической чистки одежды, как наркотическое средство длярауш-наркоза (в стоматологической практике). В последнее время за рубежомТХЭ стал популярным средством для достижения наркотического эффекта[Иванова В.А., 1990; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000].ТХЭ – бесцветная летучая жидкость с ароматическим запахом (запахомхлороформа) - может поступать в организм через пищеварительный тракт,дыхательные пути, оказывает психотропное наркотическое действие. В 100 гТХЭ при 25 0 С растворяется 22 мг воды. С водой образует азеотропнуюсмесь, температура кипения которой сосставляет 73,6 0 С, содержание воды всмеси – 5,4%. Токсикант не горюч. Температура самовоспламенениясоставляет 416 0 С [Тиунов Л.А., 1990б].Особую опасность ТХЭ может представлять на производстве при
52аварийных ситуациях, когда вследствие его высокой летучестиингаляционным отравлениям может подвергнуться большое число людей.Среднелетальные дозы по данным различных авторов при пероральномвведении составляют для собак, крыс и мышей соответственно 5680, 4920 и2400 - 2850 мг/кг. При ингаляционном поступлении CL 50 для крыс и мышейсоответственно составляет 140700 (1 ч) и 40000 - 45100 мг/м 3 (4 ч)[Trichloroethylene, 1985]. Смертельная доза для человека при пероральномпоступлении яда составляет 7 г/кг. Смертельные исходы наблюдалисьвследствие отравления фосгеном, образовавшимся из ТХЭ при тушениипожаров. Острые отравления ТХЭ сопровождаются нарушением функциицентральной нервной системы, сердечно-сосудистой, дыхательной систем,желудочно-кишечного тракта. Смертность при тяжелых отравлениях можетбыть связана с формированием вторичного иммунодефицитного состояния[Тиунов Л.А., 1990б; Забродский П.Ф., 1998, 2002].Метаболизируется ТХЭ преимущественно в печени при помощи Р-450-зависимых монооксигеназ с образованием более токсичных метаболитов,многие из которых токсичнее ТХЭ. Биотрансформация ТХЭ происходит собразованием дихлорацетилхлорида, дихлоруксусной кислоты,трихлорацетальдегида, трихлоруксусной кислоты, трихлорэтанола, N-(гидроксиацетил) этаноламина, трихлорэтандиола, щавелевой кислоты.Метаболиты преимущественно выводятся с мочой [Тиунов Л.А., 1990б].В отношении индукции монооксигеназных энзимов (Р-450- зависимыхмонооксигеназ) данные противоречивы, отмечали как их активацию [ТиуновЛ.А., 1990б], так и ингибирование (при оценке времени гексеналового сна укрыс) [Cидорин Г.И. и соавт., 2004].У животных при хроническом воздействии ТХЭ отмечается изменениебелковых фракций в крови, угнетается образование антител, снижаетсяфагоцитарная активность ПЯЛ [Тиунов Л.А., 1990б]. При трехкратномвведении ТХЭ в дозе 1,5 г/кг увеличивается содержание адреналина в крови и
53сердечной мышце, инициируется ПОЛ (увеличивается содержание в кровималонового диальдегида) [Сидорин Г.И. и соавт., 2004].Анализ большого объема информации позволяет заключить, что внастоящее время влияние острого отравления ТХЭ на факторы НРО,показатели системы иммунитета, ПОЛ, ГГАС, эстеразную активность Т-клеток практически не исследовано. Решение данных задач позволитобосновать выбор медикаментозных средств для последующейэкспериментальной оценки эффективности конкретных иммуностимуляторов,адекватных характеру нарушения иммунного гомеостаза с цельюпрофилактики и лечения постинтоксикационного иммунодефицита,вызванного ТХЭ.РезюмеОбзор литературы о действии острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами на неспецифическую резистентностьорганизма и иммунный статус свидетельствует о том, что существует целыйряд недостаточно изученных вопросов, сформулированных нами в задачахисследования. В целом в настоящее время отсутствует систематизированныйанализ патогенеза нарушения системы НРО и иммунного гомеостаза приострых отравлениях спиртами и хлорированными углеводородами.Необходимость проведения такого анализа очевидна, так как для созданиясовременной концепции, охватывающей все известные в настоящее времяданные, необходимы исследования, дополняющие их и позволяющие связатьв единое целое значение сдвигов со стороны активности ГГАС, САС, ПОЛ,эстераз лимфоцитов, процессов миграции и кооперации Т- и В-клеток идругих иммунных реакций при острых отравлениях спиртами ихлорированными углеводородами. Вполне очевидна необходимостьсравнительной оценки характера нарушений НРО и иммунного гомеостазапод влиянием рассмотренных токсикантов. Это позволит обосноватьвозможность использования иммуномодуляторов и других лекарственных
54средств для коррекции наиболее значимых в формированиипостинтоксикационного иммунодефицита нарушений НРО, гуморальных иклеточных иммунных реакций.Нерешенность многих вопросов, противоречивость и неоднозначностьрезультатов ряда исследований предполагает дальнейшее изучение этойпроблемы, решение которой позволит проводить патогенетическиобоснованную коррекцию нарушений иммунного гомеостаза после острыхотравлений спиртами и хлорированными углеводородами.
55ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ2.1. Объекты исследования и применяемые препаратыИсследования проводились на 5875 неинбредных крысах обоего пола икрысах Wistar, на 2379 беспородных белых мышах обоего пола и линии СВА.Масса крыс и мышей составляла соответственно 180-240 и 18-25 г. Дляопределения корреляции продуктов биотрансформации ДХЭ с показателямиклеточного звена иммунитета использовали 10 беспородных собак массой 10-15 кг.Хлорированные углеводороды и спирты вводили внутрь в растворесоответственно оливкового масла и воды (40% раствор) в дозах 0,25, 0,50 и0,75 LD 50 . Для оценки эффективности иммуностимуляторов токсикантыприменяли в дозах 0,75 LD 50. Среднелетальные дозы М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ иТХЭ для мышей составляли соответственно 7,2+1,1; 8,2+1,3; 10,3+1,4;0,58+0,06; 8,3+0,7 и 2,6+0,3 г/кг, для крыс – соответственно 8,5+1,5; 9,8+ 1,6;12,3+1,3; 0,97+0,08; 6,5+0,6 и 4,7+0,4 г/кг. Этанол в качестве антидотаметанола вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 3 г/кг 2 раза в сутки.Фолинат кальция (ФК) применяли внутримышечно в дозе 2 мг/кг трехкратнос 12 ч интервалом. Первая доза ФК вводилась через 10 мин после введения М.Для анализа взаимосвязи продуктов биотрансформации ДХЭ споказателями клеточного звена иммунитета 2-хлорэтанол и хлоруксуснуюкислоту определяли в селезенке собак при помощи хроматографа ЛХМ-8МДс плазменно-ионизационным детектором по методике [Лужников Е.А. исоавт., 1985; Елькин А.И. и соавт., 2004] через 3 сут послевнутрижелудочного введения ДХЭ в дозе 3,0 г/кг.Для определения роли кортикостерона (КС) в формировании иммунныхреакций его применяли в опытах на крысах подкожно в дозах 1,0 и 0,5 мг/кгсоответственно с интервалом 2 ч в изотоническом растворе хлорида натрия
56[Забродский П.Ф. и соавт., 2000; Szot R.J., Murphy S.D., 1970; Dhabhar F. S.et al., 1996]. Адреналин (А) и норадреналин (НА) с этой же цельюиспользовали подкожно в дозах 0,025 и 1,0 мг/кг.В качестве иммуностимуляторов использовали тимоген (10 мкг/кг), Т-активин (5 мкг/кг), миелопид (5 мкг/кг) и имунофан (10 мкг/кг), которыевводили внутримышечно ежедневно в течение 3 сут. Дозыиммуностимуляторов для животных обоснованы данными литературы ирасчетами по общепринятым методам вычисления [Рыболовлев Ю.Р., 1982].Первую дозу животные получали через 30 мин после острой интоксикациитоксикантами.Кровь для исследования титра антител получали из подъязычной веныживотных. Лимфоидные органы извлекали у животных после цервикальнойдислокации в различные сроки после интоксикации.Эксперименты на животных проводили в соответствии с требованиямиЖеневской конвенции "International Guiding Principles for Biomedical ResearchInroling Animals" (Geneva, 1990).2.2. Исследование состояния неспецифической резистентностиорганизмаИнтегральное состояние неспецифической резистентности организмаопределяли по показателям течения экспериментальной инфекции, вызваннойвнутриплевральным введением крысам суспензии суточной культуры Рroteusvulgaris в дозах 1,5; 2,0; 2,5 млрд. микробных тел [Забродский П.Ф. и соавт.,1997]. Выбор данного микроорганизма обусловлен возрастанием ролиусловнопатогенной флоры в возникновении различных инфекционныхосложнений [Бельцкий С.М., Снастина Г.И., 1985; Германчук В.Г., 2000].Антиинфекционную НРО определяли по летальности крыс в течении 2сут от экспериментальной инфекции, по LD 50 Рroteus vulgaris исреднеэффективному времени жизни животных (Et 50 ) в опытной и
57контрольной группах, рассчитанных методом пробит-анализа [БеленькийМ.Л., 1963]. Введение Рroteus vulgaris производили одновременно сприменением спиртов и ХУ.Из факторов НРО нами исследовались наиболее значимые показатели:бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК), сывороточнаяактивность лизоцима и тромбоцитарного катионного белка - ТКБ (β-лизина),комплементарная активность сыворотки крови и показатели активностифагоцитоза общепринятыми методами.БАСК определи ускоренным фотонефелометрическим методом.Содержание сывороточного лизоцима оценивали методом О. В. Бухарина(1974), основанным на способности лизоцима растворять индикаторныймикрококк (Micrococcus lysodeicticus), измеряя при этом оптическуюплотность опытной и контрольной суспензии микроорганизмов.Тромбоцитарный катионный белок сыворотки крови (β-лизин) исследовалифотонефелометрическим ускоренным методом, учитывая изменениеоптической плотности раствора сахарозы при росте в ней индикаторнойкультуры B. subticis [Бухарин О.В., Бичеева Р.Ч., 1970]. Определениеактивности комплемента проводили гемолитическим методом путемтитрования комплемента по 50% гемолизу [Ремезов А.И., Башмаков Г.А.,1976; Денисенко П.П., Чередниченко Р.П., 1970; Денисенко П.П., 1980;Новикова Л.В. и соавт., 1981; Василенко О.А., 2004].Оценку фагоцитарно-метаболической активности полиморфноядерныхлейкоцитов проводили общепринятыми методами [Хаитов Р.М., ПинегинБ.В., 1995; Сакаева Д.Д., Лазарева Д.Н., 1998; Белокрылов Г.А., Попова О.Я.,2002], в том числе, путем определения степени восстановления поглощенногофагоцитом растворимого красителя нитросинего тетразолия (НСТ) внерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона, образующегосяв НАДФ-Н-оксидазной реакции. В исследованиях применялся
58цитохимический вариант этого метода [Измайлова Ф.А., 1985; Бровкина И.Л.и соавт., 2004а, 2004б; Рыбников В.Н. и соавт., 2004; Park B.H., 1971].2.3. Оценка влияния токсикантов на миграцию колониеобразующихединиц в селезенкуМиграция колониеобразующих единиц в селезенку (КОЕс) отражаетиндуктивный период иммуногенеза: созревание лимфоидных клеток и ихмиграцию в органы системы иммунитета. Следует отметить, что КОЕ вселезенке образуют кроме лимфоидных колоний миелоидные, эритроидные,мегакариоцитоидные и смешанные [Петров Р. В. и соавт., 1981б]. Влияниеспиртов и хлорированных углеводородов на миграцию КОЕс проводилипутем определения миграции КОЕ из костного мозга (КМ) в селезенкуметодом эндогенного колониеобразования после летального облучениямышей в дозе 8 Гр при экранировании костного мозга задней конечности доуровня 1/2 голени. Через 30 мин после облучения животных им вводилитоксикант. Через 8 сут извлекали селезенку, фиксировали ее в раствореБоуэна и подсчитывали число колониеобразующих единиц [Till J. E., McCulloch E. A., 1961; Петров Р.В., Хаитов Р.М., 1972]. Данный метод широкоиспользуется для оценки митостатического действия токсикантов и влиянияразличных патологических процессов на индуктивную фазу иммуногенеза[Петров Р.В. и соавт., 1981б; Александров В.Н., 1982; Тодрия Т.В., Цандер А.,2004].2.4. Оценка лимфоидных индексов тимуса и селезенки, содержанияпопуляций лимфоцитов в органах системы иммунитетаи циркулирующей кровиМассу тимуса и селезенки определяли гравиметрическим методом.Лимфоидный индекс (ЛИ) вычислялся общепринятым способом [ГольдбергЕ. Д. и соавт., 1972; Тихонов В. Н., 1981; Германчук В.Г., 2000; Сидельникова
59Н. М., 2004; Василенко О.А., 2004] путем деления массы органа в мг намассу тела в г через 1-6 cут после отравления.Содержание Т-клеток в тимусе крыс определяли общепринятымметодом подсчета ядросодержащих клеток в органе, учитывая тообстоятельство, что лимфоциты в вилочковой железе представленыпрактически только Т- популяцией [Петров Р. В., 1987; Ройт А., 1991; ХаитовР. М. и соавт., 2000]. Лимфоциты в селезенке, лимфатических узлах (дляизучения брали паховые лимфоузлы) и костном мозге (исследовали клеткикостного мозга бедренной кости) подсчитывали, исходя из их относительногосодержания в мазках данного органа, окрашенных по Романовскому-Гимзе.Для определения содержания в лимфоидных органах лимфоцитов клеточныесуспензии из тимуса, селезенки, костного мозга и паховых лимфоузловмышей и крыс готовили после интоксикации ТХВ в дозе 0,75 ЛД 50 через 2 и6 cут после отравления. Содержание лимфоцитов в крови животных послеинтоксикации ТХВ определяли общепринятым методом [Гембицкий Е.В. исоавт., 1987].2.5. Исследование кооперации Т- и В- лимфоцитов in vitroДля получения Т-клеток использовали метод фильтрованияселезеночной суспензии через нейлоновую вату (“Нитрон”) [Ширшев С.В.,1998]. Для выделения В-лимфоцитов применяли реакциюкомплементзависимого масс-цитолиза. В качестве цитотоксическойсыворотки использовали моноклональные антитела против Thy 1.2 антигеновТ-лимфоцитов мыши (Cedarlane Laboratories Limited; London, Canada)[Marshak-Rothstein A. et al., 1979]. Антителообразующие клетки (АОК),число которых характеризует эффект кооперации Т- и В- лимфоцитовподсчитывали в инкубационных камерах через 4 сут [Thomas I. K., ImamuraT., 1986]. До помещения лимфоцитов в камеры они (Т- или В-клетки)
60подвергались воздействию токсикантов в течение 2 ч. Кооперация Т- и В-лимфоцитов оценивалась также in vitro после извлечения через 1 сут Т- илиВ-лимфоцитов из селезенки мышей (СВА), подвергавшихся действиютоксикатов. При этом соответственно В- или Т-клетки для исследованияреакции получали от интактных сингенных животных.2.6. Изучение гуморального звена иммунного ответаДля оценки гуморальных иммунных реакций в качестве антигеновприменяли эритроциты барана (ЭБ) и брюшнотифозный Т-независимый Viантиген(Vi-Ag). Использование данных антигенов позволяет рассмотретьвлияние спиртов и ХУ на Т-зависимый или Т-независимый иммунный ответв сравнительном аспекте, а также оценить роль Т-хелперов в реализациигуморального звена иммунного ответа [Утешев Б. С., 1984; Descotes J.,1986;Jeurissen A., Bossuyt X., 2004]. Данный подход широко используется дляоценки действия химических соединений на систему иммунитета [ПлецитыйК.Д., Сухих Г.Т., 1985; Ройт А, 1991; Германчук В.Г., 2000; Беликов В.Г.,2001; Сидельникова Н. М., 2004; Василенко О.А., 2004].Антителообразование определяли по отрицательному двоичному логарифмутитра антител (ОДЛТА) через 5, 8 и 11 сутoк после острой интоксикацииспиртами и ХУ. Иммунизацию эритроцитами барана проводили путем ихвнутрибрюшинного введения в дозе 2·10 8 клеток в 0,5 мл изотоническогораствора хлорида натрия. Титры антител к ЭБ определяли в реакциигемолиза эритроцитов в присутствии комплемента.Гуморальную иммунную реакцию к Т-зависимому и Т-независимомуантигенам оценивали также через 5 суток по числу АОК в селезенке[Белокрылов Г. А. и соавт., 1980; Jerne N. K., Nordin A. A., 1963] послевведения токсикантов с одновременной внутрибрюшинной иммунизациейкрыс ЭБ в дозе 2·10 8 клеток в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия
61и Vi-Ag в дозе 8 мкг/кг, а также через 3 сут после иммунизации(использованный тест отражал синтез IgM B-клетками селезенки виндуктивной и продуктивной фазе антителогенеза). АОК, характеризующиепродукцию иммуноглобулинов G, определяли в селезенке методомлокального гемолиза в геле через 8 сут после иммунизации [Jerne N. K.,Nordin A. A., 1963] после разрушения IgM на поверхности лимфоцитов спомощью 2-меркаптоэтанола (2-МЭ). Для этого спленоциты каждогоживотного инкубировали в течение 2 ч при 4 0 С с равным объемом 0,2 Мраствора 2-МЭ [Smialowicz R. J. et al., 1992]. Гуморальный иммунный ответопределяли также по числу иммунных розеткообразующих клеток (РОК),несущих на своей поверхности IgM и IgG, в селезенке крыс через 8 сут послеиммунизации ЭБ [Jordan M. et al., 1972; Бровкина И.Л. и соавт., 2004а, 2004б].2.7. Оценка клеточного звена иммунного ответаИсследование состояния клеточного звена системы иммунитета подвлиянием спиртов и ХУ проводили с использованием методов исследования,широко применяемых для определения влияния фармакологическихпрепаратов на систему иммунитета и иммунотоксичности различныхсоединений: оценка функции Т-лимфоцитов, реакция гиперчувствительностизамедленного типа (ГЗТ) и показатель антителозависимой клеточнойцитотоксичности [Петров Р.В., 1987; Забродский П. Ф., 1998; DescotesJ.,1986]. Формирование ГЗТ при воздействии ТХВ позволяет, прежде всегооценить их влияние на функцию Th1-лимфоцитов [Kimber I., 1996]. Данныйтест также широко используется для получения интегральной характеристикиклеточного иммунитета [Фримель Х., Брок Й., 1986; Descotes J.,1986].Реакция ГЗТ изучалась в общепринятой модели, а также адоптивных моделях,связанных с переносом клеток от животного-донора к животномуреципиенту.
62Исследование функции Т-лимфоцитов проводили по реакцииторможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) периферической крови вприсутствии конконавалина А (КонА). РТМЛ основана на способностисенсибилизированных Т-лимфоцитов в реакциях с антигеном или митогенами(ФГА, КонА) in vitro выделять биологически активные субстанции –лимфокины, в том числе фактор, ингибирующий миграцию лейкоцитов (одиниз лимфокинов воспаления) [Фримель Х., и Брок Й., 1986].Для исследования РТМЛ кровь у крыс получали из подъязычной венычерез 2 и 5 сут после интоксикации. В капилляры для определения С -реактивного белка набирали с часового стекла смесь, состоящую изгепаринизированной крови (0,2 мл) исследуемых крыс (опыт и контроль) ираствора КонА (0,5 мл). Концентрация митогена (КонА) в растворесоставляла 100 мкг/мл. Капилляры запаивали с одного конца парафином ицентрифугировали 5 мин при 1500 об/мин, затем в вертикальном положенииих инкубировали 24 ч в термостате при температуре 37 0 С. Учет реакциипроводили путем измерения длины зоны миграции основной массылейкоцитов от границы эритроцитарного осадка в контроле и опыте.Результат реакции оценивали в виде индекса миграции (ИМ), выраженного впроцентах [Гембицкий Е.В. и соавт., 1987]. Величина ИМ обратнопропорциональна функции Т-клеток.Для оценки влияния спиртов и ХУ на формированиегиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) использовали модельданной реакции, в которой не используется перенос сингенныхиммуноцитов, и адоптивную модель (связанные с переносом ИКК). ГЗТоценивали у крыс после иммунизации внутривенным введением 2·10 8эритроцитов барана (ЭБ) в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрияодновременно с введением токсиканта. Разрешающую (вызывающуюреакцию) дозу ЭБ (5·10 8 в 0,05 мл изотонического раствора хлорида натрия)вводили под апоневроз задней лапы через 4 сут после иммунизации. Оценку
63реакции осуществляли через 24 часа по приросту массы стопы задней лапыкрыс по сравнению с контрольной [Брюхин Г.В. и соавт.,1990]. Данный тестотражал функцию Th1 лимфоцитов и способность их к продукции ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферона, β-фактора некроза опухоли - лимфотоксина игранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) [Georgiev V.St., Albright J.E., 1993].При исследовании формирования ГЗТ у крыс-реципиентов (Вистар)после переноса им спленоцитов (5·10 8 ), иммунизированных 10 8 ЭБ сингенныхдоноров, реципиентов через 1 ч сенсибилизировали внутривеннымвведением 10 8 ЭБ. Через 4 сут под апоневроз стопы реципиентов вводилиразрешающую дозу ЭБ (5·10 8 ) с последующей оценкой реакции через 24 ч.Спленоциты получали через 5 сут после иммунизации доноров. В данномэксперименте формирование ГЗТ отражало влияние острой интоксикациитоксикантами на вторичный иммунный ответ в модели адоптивной реакции,связанной с переносом иммунных спленоцитов крысам-реципиентам.Донорам вводили токсиканты через 30 мин после иммунизации [ЧерноусовА.Д., Юрин Б.Л., 1982; Фролов Б.А. и соавт., 1985; Германчук В.Г., 2000;Сидельникова Н.М., 2004].Антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ),характеризующую функцию К-клеток (клеток-киллеров, относящихся к такназываемым «нулевым» лимфоцитам [Фримель Х., Брок Й., 1986]),определяли по методу Ю. И. Зимина, В. Ф. Ляхова (1985) через 5 сут послеиммунизации, осуществляемой за 1 сут и одновременно с отравлением ТХВ(оценка действия яда в индуктивной фазе иммуногенеза). Кроме того,токсиканты вводили через 3 сут после иммунизации ЭБ (оценка действияхимического ксенобиотика в продуктивной фазе иммуногенеза). Мышейиммунизировали ЭБ (5·10 8 клеток в 0,5 мл изотонического раствора хлориданатрия). Через 5 сут извлекали селезенку и тимус, готовили клеточныесуспензии в растворе Хенкса, который затем фильтровали через капроновую
64сетку. Суспензии клеток дважды отмывали изотоническим растворомхлорида натрия по 10 мин при 400 g. Жизнеспособность клеток определялиметодом суправитальной окраски 0,1 % раствором трипанового синего. Вкачестве клеток-мишеней использовали трижды отмытые по 10 мин при 400 gЭБ, которые в 2,5 % суспензии смешивали с равным объемом гипериммуннойантисыворотки кролика в субагглютинирующем разведении (1:5000). Смесьинкубировали 30 минут при 37°С, а затем отмывали 3 раза раствором Хенксаи доводили до необходимой концентрации. Используемую антисывороткупредварительно инактивировали в течении 30 минут при 56°С. Спленоциты(тимоциты) смешивали с ЭБ в соотношении 20 : 1 (абсолютные значениясоответственно 20·10 6 и 1·10 6 ) в 2 мл раствора Хенкса без феноловогокрасного и инкубировали 4 ч при 37°С. После инкубации смесь клетокцентрифугировали 20 минут при 200 g, собирали супернатант.Цитопатогенность киллеров оценивали спектрофотометрическим методом повыходу гемоглобина из лизированных эритроцитов. Контролем служилипробы, содержащие эффекторы и интактные ЭБ. Измерения оптическойплотности проводили при длине волны 412 нм на спектрофотометре СФ-46.Уровень АЗКЦ оценивали по индексу цитотоксичности (ИЦ) по формуле,предложенной Ю. И. Зиминым и В. Ф. Ляховым (1985).Оценка естественной цитотоксичности (ЕЦ) осуществляласьспектрофотометрическим методом [Гордиенко С.М., 1983, 1984], гдеклетками-эффекторами служили спленоциты крыс, а клетками-мишенями -эритроциты кур (ЭК) [Белокрылов Г. А. и соавт., 1980]. Результаты реакцииучитывали по спектрофотометрическому определению концентрациигемоглобина, выделившегося из не разрушенных ЭК. В опытах in vitro доинкубации клеток эффекторы подвергали действию токсикантов в течение 4ч. Оценку ЕЦ при применении иммуностимуляторов проводили через 3 сутпосле отравления.
652.8. Определение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитови α-нафтил-АS-ацетатэстеразы и α-нафтил-бутиратэстеразыспленоцитовАктивность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Т-лимфоцитах определялиметодом G.M. Ellman et al. (1961), выделяя клетки путем фильтрованияселезеночной суспензии через нейлоновую вату (“Нитрон”) [Ширшев С.В.,1998] и осуществляя реакции и расчеты, описанные J.G.Szelenyi et al. (1982) иK. M. Kutty et al. (1976). Активность α-нафтил-АS-ацетатэстеразы и α-нафтил-бутиратэстеразы спленоцитов крыс (Т-клеток органа) изучалигистохимическим методом [Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983]. Принципметода основан на том, что эстеразы, вступая во взаимодействие с субстратомв присутствии красителя прочного синего, окрашивают эстерапозитивныеклетки. Следует отметить, что эстеразопозитивные клетки в селезенкепредставлены в основном Т-клетками, хотя к ним относится относительнонебольшое число и других спленоцитов – моноцитов и макрофагов [ХейхоуФ. Г. Дж., Кваглино Д., 1983].2.9. Оценка массового индекса надпочечников после остроговоздействия токсикантовМассовый индекс надпочечников после острого воздействия токсикантовопределялся как отношение массы надпочечника в мг к массе тела животногов г. Данный показатель в определенной степени отражает реакцию ГГАС(стресс-реакцию) на химический раздражитель. Согласно теории Г. Селье(1972) под влиянием химических факторов из гипофиза секретируется АКТГ,который стимулирует синтез и инкрецию главным образомглюкокортикоидов, чему соответствует гипертрофия пучковой зонынадпочечников. В меньшей степени гипертрофируются зоны, секретирующиеполовые гормоны и минералокортикоиды [Лемус В. Б., Давыдов В. В., 1974].Следует учитывать, что ряд веществ, к которым относятся ингибиторы
66функции коры надпочечников [Комиссаренко В.П., Резников А.Г., 1972], и, вчастности, цианокетон (2-α-циано-4,4,17-α-триметил-17-β-гидрокси-5-андростен-3-он) [Dhabhar F.S. et al., 1996] при поступлении в организм неувеличивают, а снижают функцию ГГАС и не способны повышатьконцентрацию КС в плазме крови (стресс-реакция в ее классическомпонимании не реализуется).2.10. Исследование функции коры надпочечников, симпатикоадреналовойсистемы и перекисного окисления липидовИсследование функционального состояния ГГАС определяли путемизмерения относительной массы надпочечников (отношение массы органа вмг к массе тела в г), концентрации кортикостерона (КС), адреналина (А) инорадреналина (НА). Для определения уровня КС в плазме крови крысиспользовали флюорометрический метод определения уровнянеконъюгированных 11-оксикетостероидов [Moor P. et al., 1962, 1976] через2, 12 и 24 ч после интоксикации ТХВ в модификации В.В. Давыдова (1970).Перекисное окисление липидов (ПОЛ) оценивали по суммарнойпродукции радикалов в крови методом люминолзависимойхемилюминесценции, активированной форболовым эфиром (0,156 МКм)[Михальчик Е.В. и соавт., 2004], по активности каталазы и пероксидазы,содержанию малонового диальдегида в крови спектрофотометрически[Покровский А.А., 1969; Коробейникова Э.Н., 1989; Кунцевич А.Д. и соавт.,1994; Валеева И.Х. и соавт., 2002].Содержание адреналина и норадреналина определяли в плазме кровиспектрофлюориметрически [Матлина Э.Ш., 1965; Филатова Г.Ф. и соавт.,1987].2.11. Методы статистической обработки результатов исследованийПолученные данные обрабатывались с использованием общепринятыхстатистических методов [Сепетлиев Д. Н., 1975; Урбах В. Ю., 1975; Гублер
67Е. В., 1978; Лакин Г. Ф., 1980]. При этом различия между среднимизначениями в опытной и контрольной группах считались значимыми при р
68ГЛАВА 3.ВЛИЯНИЕ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВНА НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА3.1. Нарушение интегральной антиинфекционной неспецифическойрезистентности организмаВ экспериментах на беспородных белых крысах при введении спиртови хлорированных углеводородов в дозах 0,75 LD 50 исследовалось состояниеантиинфекционной неспецифической резистентности организма. В даннойэкспериментальной модели используемый токсикант и культура Рroteusvulgaris вводились одновременно. Летальность оценивалась до 48 ч, черезкаждые 4 часа. В исследованный период после введения суспензии Рroteusvulgaris летальность от экспериментальной пневмонии связанапреимущественно с реализацией механизмов неспецифическойрезистентности организма, так как значимая гуморальная и клеточнаяиммунная реакция формируется начиная со вторых суток после введенияантигена (микробных тел) [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000; Ройт А. исоавт., 2000]. Аналогичные инфекционные защитные тесты предлагаются вкачестве первичной скрининговой модели для оценки иммунотоксичностихимических веществ [Забродский П.Ф., 1998; Сидельникова Н.М., 2004;Василенко О.А., 2004; Mc Grath J., Wong S., 1987]. В данных тестах оценкапоказателей летальности животных проводится через несколько суток послеинфицирования животных с одновременным введения яда безпредварительной иммунизации использованными микроорганизмами илипосле их введения в иммуногенной дозе.Проведенные опыты показали (табл.3.1), что острое отравлениеспиртами и хлорированными углеводородами приводит к увеличениюлетальности крыс при экспериментальной пневмонии от 18,0% (этанол) до32,3% (дихлорэтан), снижению ЛД 50 Рroteus vulgaris и среднеэффективного
69времени жизни – Еt 50 . По степени редукции антиинфекционной НРОтоксиканты существенно не отличались, за исключением действия этанола.Среднее увеличение летальности при действии спиртов и хлорированныхуглеводородов составляло соответственно 21,6% и 28,6%.Таблица 3.1Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами вдозе 0,75 ЛД 50 на летальность крыс от экспериментальной пневмонии(Рroteus vulgaris), ЛД 50 Рroteus vulgaris и Еt 50 (M+m)ЛДЛетальность, %50 РroteusТоксикантыvulgaris,10 9 микр. Еt 50 , чтелКонтроль 20,0+5,2 (60) 2,21+0,07 (60) 18,1+1,1 (60)Метанол 5,0+5,0 (20) _ _(без введенияРroteus vulgaris)Метанол 44,0+9,9* (25) 1,66+0,13* (25) 12,8+2,3* (25)Этиленгликоль 5,0+4,4 (25) _ _(без введенияРroteus vulgaris)Этиленгликоль 42,9+10,8** (21) 1,69+0,14* (21) 12,0+2,3* (21)Этанол(без введенияРroteus vulgaris8,0+5,4 (20) _ _Этанол 38,0+9,7 (25) 1,78+0,17* (21) 15,5+2,1 (21)7,7+5,2 (26) _ _Дихлорэтан(без введенияРroteus vulgaris)Дихлорэтан 52,3+10,9* (21) 1,64+0,14* (21) 11,2+2,5* (21)Тетрахлорметан(без введенияРroteus vulgaris)8,0+5,4 (25) _ _Тетрахлорметан 49,0+11,1* (20) 1,67+0,15* (20) 11,7+2,2* (20)Трихлорэтилен(без введенияРroteus vulgaris)0,0 (12) _ _Трихлорэтилен 44,4+11,7** (18) 1,70+0,16* (18) 13,1+2,3* (18)Примечание: в скобках - число животных в серии; *;**(χ 2 ) - различие с контролемдостоверно р
70инфекции погибало 0,0 – 8,0 % животных (1-2 крысы из серии). Этот уровеньлетальности практически не влияет на выявленные нами изменениявыживаемости животных от экспериментальной инфекции после острогоотравления спиртами и хлорированными углеводородами.Среднеэффективная продолжительность жизни подопытных крыс придействии спиртов снижалась в 1,35 раза, а после отравления хлорированнымиуглеводородами – в 1,51 раза.Увеличение летальности от экспериментальной инфекции через 2 сутпосле острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородамиможет быть связано с редукцией бактерицидной активности сыворотки крови,сывороточной активности лизоцима, тромбоцитарно-катионного белка ифагоцитарно-метаболической активности ПЯЛ [Мартынова Н.А., 1992;Гребенюк А.Н. и соавт., 1998; Забродский П. Ф., 2002], системы комплементаи пропердина, изменением активности ГГАС [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б;Петров Р.В., 1987; Кузник Б.И. и соавт., 1989; Ледванов М. Ю., Киричук В.Ф.,1996; Шмидт Р., Тевс Г., 1996; Василенко О.А., 2004].Изменения интегрального состояния НРО под влиянием спиртов и ХУ,вероятно, обусловлены ингибированием многочисленных энзимов, в томчисле неспецифических эстераз клеточных элементов, в частности, клетоккрови [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983; Забродский П.Ф. и соавт., 1997]как самими токсикантами, так и их высокотоксичными метаболитами(продуктами «летального синтеза») [Румянцев А.П. и соавт., 1981;Забродский П.Ф., 1999а].При этом вероятно, помимо снижения продукции неспецифическихфакторов защиты организма, уменьшается также устойчивость клеток тканейк микроорганизмам и их токсинам [Горизонтов П. Д., 1981б]. Нельзяисключить, что помимо ингибирования эстераз макрофагов, моноцитов иЕКК редукция НРО обусловлена снижением процессов тканевого дыханиявследствие взаимодействия спиртов, ХУ и их продуктов биотрансформации с
71ферментами тканевого дыхания митохондрий клеток крови [Ротенберг Ю.С.,1982; Забродский П. Ф., 1998; Parry M.F., Wallach M.D., 1974; Jackson I. C. etal., 1986; Gabon P.A., 1986] и уменьшением окислительногофосфорилирования (синтеза АТФ) [Голиков С.Н. и соавт., 1986] в ПЯЛ,обеспечивающих НРО, и других клетках организма. Это приводит кснижению устойчивости тканей, в частности, тканей легких к развитиювоспаления и сепсиса.Существуют основания считать, что выявленное увеличение летальностии сопряженное с ней уменьшение величин ЛД 50 Proteus vulgaris и значенийЕt 50 , свидетельствующие о снижении антиинфекционной НРО под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами, могут бытьобусловлены редукцией основных гуморальных и клеточных факторовнеспецифической защиты организма, связанной с мембранотоксическимдействием ядов [Голиков С.Н. и соавт., 1986].Следует учитывать, что на устойчивость животных к инфекцииоказывают влияние симпатический и парасимпатический отделывегетативной нервной системы, функциональное состояние ГГАС[Забродский П.Ф., 1998; Петрусенко Г.П., Тумилович М.К., 2004; MaddenK.S. et al., 1991; Rinner I. et al., 1995].Для более полного представления о характере изменения НРО подвлиянием спиртов и хлорированных углеводородов в следующем разделепредставлены результаты исследования изменений основных гуморальных иклеточных факторов НРО под влиянием токсикантов: БАСК, сывороточногосодержания лизоцима, тромбоцитарного катионного белка, комплемента ифагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов.Таким образом, под влиянием метанола, этиленгликоля, этанола,дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена происходит однотипныйхарактер редукции интегральной антиинфекционной неспецифическойрезистентности организма.
723.2. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на бактерициднуюактивность сыворотки кровиБактерицидная активность сыворотки крови является интегральнымпоказателем естественной способности крови к самоочищению отмикроорганизмов. БАСК связана с неспецифическими факторами защитыорганизма и является одним из параметров, используемых для изучениявлияния химических соединений на организм [Шафеев М. Ш., 1976, 1978;Евсеев В. А., Магаева Е. В., 1985; Забродский П. Ф., 1986, 2002; Агапов В.И.и соавт., 2004]. Данный показатель является чувствительным тестом длявыявления ранних изменений в организме под влиянием токсических веществ[Бухарин О. В. и соавт., 1985]. Это доказано и более позднимиисследованиями [Забродский П. Ф., 1998; Василенко О.А., 2004; Агапов В.И.и соавт., 2004; Сидельникова Н.М., 2004].Результаты исследования БАСК, проводившиеся на беспородных белыхкрысах, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами в дозе 0,75 ЛД 50 представлены в табл. 3.2.Таблица 3.2Изменение бактерицидной активности сыворотки крови крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-9 сут, % (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6 9Контроль 85,7+3,2 (42)Метанол 61,4+5,3* 60,1+5,0* 73,3+4,8* 81,4+4,3Этиленгликоль 67,3+5,0* 72,3+4,9* 76,0+5,3 88,1+3,7Этанол 72,5+5,5* 75,9+5,3 75,5+4,6 83,3+4,0Дихлорэтан 51,9+5,1* 60,3+5,2* 71,2+4,4* 74,3+4,6Тетрахлорметан 54,6+5,2* 67,9+4,8* 70,0+5,0* 75,0+5,0Трихлорэтилен 64,7+5,8* 63,2+5,2* 73,1+4,7* 84,5+5,2Примечание: в скобках – число крыс; в каждой серии использовалось 14-20 животных; * -различие с контролем достоверно р
73Через 1 сут метанол, этиленгликоль, этанол, дихлорэтан, тетрахлорметан итрихлорэтилен снижали исследованный параметр соответственно в 1,40; 1,27;1,18; 1,65; 1,57 и 1,32 раза (р
74908070***К60*504030201000,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 3.1. Изменение бактерицидной активности сыворотки крови крыспосле острого отравления метанолом (М) и дихлорэтаном (ДХЭ) взависимости от дозы через 1 сут (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: %; К – контроль (n=42); в каждой сериииспользовалось 14-20 животных; * - различие с контролем достоверно р
75Содержится во многих секретах, жидкостях и тканях [Диксон М., Уэбб Э.,1982]. Ферментативная специфичность лизоцима заключается в разрушениисвязи между N-ацетилмураминовой кислотой и N-ацетилглюкозамином вмукополисахариде, образующем оболочку многочисленныхмикроорганизмов, особенно грамположительных. Образующиесягликопептиды обладают адъювантной активностью, стимулируютпродукцию антител, повышают митотическую активность иммуноцитов,индуцируют гиперчувствительность замедленного типа. Источникомлизоцима являются нейтрофильные гранулоциты и моноциты [Бухарин О.В.,Васильев Н.В., 1974; Гембицкий Е.В. и соавт., 1987]. Некоторыеиммунологические реакции связаны с активностью лизоцима. Так, комплекс"IgA-антиген" проявляет антибактериальную и нейтрализующую активностьпосле активации комплементом только в присутствии мурамидазы[Nouragargh S., Holt J.R.S., 1986].Использование показателя лизоцимной активности для оценкинеблагоприятного действия химических факторов на организмсвидетельствуют о высокой чувствительности данного теста [Измеров Н.Ф.,и соавт., 1977; Бухарин О. В. и соавт., 1985; Генес В. С. и соавт.,1981;Забродский П. Ф., 1998; Агапов В.И. и соавт., 2004; Сидельникова Н.М.,2004]. Как правило, химические соединения вызывают снижение лизоцимнойактивности сыворотки крови [Забродский П.Ф., 1999б; 2002; Агапов В.И. исоавт., 2004; Василенко О.А., 2004]. Однако свидетельством отрицательноговоздействия ксенобиотиков на организм может являться также икратковременное повышение содержания лизоцима в крови [Барштейн Ю. А.и соавт., 1991].Проведенные эксперименты показали (табл. 3.3), что спирты ихлорированные углеводороды приводили к существенному снижениюсывороточной активности лизоцима в дозе 0,75 ЛД 50 .
76Таблица 3.3Изменение активности лизоцима сыворотки крови крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-9 сут, мг/л (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6 9Контроль 8,7+0,3 (42)Метанол 5,9+0,5* 6,1+0,6* 6,3+0,7** 8,4+0,8Этиленгликоль 6,2+0,6** 6,6+0,5** 7,1+0,6 8,1+0,7Этанол 7,1+0,7** 7,9+0,7 7,5+0,7 8,3+0,6Дихлорэтан 4,8+0,5* 6,0+0,6* 6,5+0,5** 8,0+0,7Тетрахлорметан 5,2+0,5* 6,2+0,4* 6,6+0,5** 7,5+0,5Трихлорэтилен 5,4+0,6* 6,3+0,5* 6,4+0,6** 8,5+0,8Примечание: в скобках – число крыс; в каждой серии использовалось 14-20 животных; *;**- различие с контролем достоверно - р
77По степени редукции активности лизоцима токсиканты в порядкеуменьшения эффекта располагались в последовательности: хлорированныеуглеводороды – метанол - этиленгликоль – этанол.Исследование сывороточной активности лизоцима после острогоотравления наиболее токсичными из рассматриваемой группы токсикантовметанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное с дозой снижениеданного параметра через 1 сут после отравления (рис. 3.2). Существуютоснования полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ идругим спиртам и хлорированным углеводородам.98765****К432100,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 3.2. Изменение активности лизоцима сыворотки крови крыс послеострого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1сут (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: мг/л; К – контроль (n=42); в каждой сериииспользовалось 14-20 животных; * - различие с контролем достоверно - р
78клеток крови, а также вследствие эффекта токсикантов и их метаболитов,ингибирующих многочисленные биохимические реакции [Ефремов А.М.,1976а, 1976б; Забродский П.Ф., 2002]. Редукция синтеза лизоцима можетпроисходить также вследствие воздействия продуктов биотрансформацииспиртов и ХУ на ДНК, что приводит к нарушению нуклеинового обмена[Голиков С.Н. и соавт., 1986; Тиунов Л.А., 1990а, 1990б].Таким образом, под влиянием спиртов и хлорированных углеводородовпроисходит прямо связанное с дозой уменьшение активности лизоцима всыворотке крови. По степени снижения параметра токсиканты в порядкеуменьшения эффекта располагались в последовательности: хлорированныеуглеводороды – метанол - этиленгликоль – этанол. Сывороточная активностьлизоцима после острого действия токсикантов восстанавливается к 9 сут.3.4. Активность тромбоцитарного катионного белка в сыворотке кровиОдним из факторов сохранения и поддержания неспецифическойрезистентности организма является тромбоцитарный катионный белоксыворотки крови, ранее известный как β-лизин [Бухарин О. В и соавт., 1977;1985; 1998]. β-лизин - бактерицидное вещество сыворотки крови,избирательно активное в отношении грамположительных микроорганизмов испорообразующих бацилл. Существует гипотеза, согласно которойактивность β-лизина регулируется гипоталамо-гипофизарной системой[Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1977]. Как правило, отмечается угнетениеактивности данного фактора НРО при острой и хронической интоксикациях[Забродский П.Ф., 2002;Агапов В.И. и соавт.,2004;Сидельникова Н.М.,2004].Острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами вдозе 0,75 ЛД 50 вызывала существенное снижению активности ТКБ, заисключением действия этанола (табл.3.4). Через 1 сут метанол,этиленгликоль, дихлорэтан, тетрахлорметан и трихлорэтилен снижалиисследованный параметр соответственно в 1,26; 1,22; 1,56; 1,36 и 1,27 раза
79(р
80706050*****К4030201000,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 3.3. Изменение содержания тромбоцитарного катионного белка всыворотке крови крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном взависимости от дозы через 1 сут (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: %; К – контроль (n=40); в каждой сериииспользовалось 14-20 животных; * - различие с контролем достоверно р
81Iokobsen D.,1984], инициацией перекисного окисления липидов [Голиков С.Н.и соавт., 1986; Забродский П.Ф. и соавт., 2004а, 2004б; Василенко О.А., 2004].Нарушение продукции ТКБ, вероятно, наряду с действием спиртов,хлорированных углеводородов и их метаболитов на клеточном уровне можетбыть обусловлено изменением активности ГГАС [Бухарин О.В. и соавт.,1974, 1998; Забродский П.Ф., 2002].Таким образом, под влиянием спиртов и хлорированных углеводородовпроисходит прямо связанное с дозой уменьшение активности ТКБ всыворотке крови. Активность ТКБ в крови после острого действиятоксикантов восстанавливается к 9 сут. Степень снижения активности ТКБхлорированными углеводородами превышала редукцию ее спиртами.3.5. Комплементарная активность сыворотки кровиИзвестно, что комплемент представляет собой сложную биологическуюсистему из 20 компонентов, активация которой может иметь два основныхпоследствия: необратимое повреждение мембран чужеродных клеток иактивация специфических функций иммуноцитов. Система комплементаиграет важную роль в защите организма от инфекции, принимая участие внеспецифической и иммунологической резистентности организма [КульбергА.Я., 1986; Осипов С.Г., Титов В.Н., 1984; Kondo M. et al., 1986]. Различныефрагменты 3-го компонента комплемента (СЗ) оказывают селективноедействие на разные субпопуляции лимфоцитов и могут моделироватьиммунный ответ на многих уровнях, включая рециркуляцию, переработкуантигена, пролиферацию и дифференцировку клеток [Петров Р.В., 1987; РойтА., 1991; Kondo M. et al., 1986]. Токсичные химические соединения, какправило, снижают активность комплемента [Голиков С.Н. и соавт., 1986;Забродский П.Ф., 1993; 1998; 2002].В проведенных нами экспериментах зарегистрировано снижениеактивности комплемента под влиянием метанола, этиленгликоля,
82дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена только в течение 1-3 сутпосле отравления (табл.3.5).Таблица 3.5Изменение сывороточной активности комплемента крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-9 сут, % (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6 9Контроль 49,3+1,3 (39)Метанол 43,2+2,0* 45,3+2,6 46,4+2,1 48,4+2,4Этиленгликоль 44,0+2,1* 46,7+2,5 46,4+2,4 49,8+2,5Этанол 46,1+2,3 47,0+2,4 45,7+2,6 51,1+2,4Дихлорэтан 40,1+3,0* 45,4+2,3 47,3+2,0 50,5+2,2Тетрахлорметан 42,4+2,9* 46,8+3,1 45,1+2,9 48,2+3,2Трихлорэтилен 39,9+3,1* 43,0+3,0 49,7+4,0 53,8+3,9Примечание: в скобках – число крыс; в каждой серии использовалось 14-20 животных; * -различие с контролем достоверно р
83605040**К30201000,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 3.4. Изменение сывороточной активности комплемента крыс послеострого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1сут (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: %; К – контроль (n=39); в каждой сериииспользовалось 14-20 животных; * - различие с контролем достоверно р
84активности системы комплемента. Дозозависимый токсический эффект ядовслабо выражен.3.6. Фагоцитарная активность нейтрофиловФагоцитоз относится к клеточному фактору НРО. Процесс фагоцитозаосуществляется микрофагами (гранулоцитами) и макрофагами (моноцитамикрови, клетками пульпы селезенки, эндотелия кровеносных сосудов,полибластами, гистиоцитами и др.) [Solberg C. O., 1984] и представляетсобой сложный многоступенчатый процесс [Хаитов Р.Я., Пинегин Б.В., 1995;Ледванов М.Ю., Киричук В.Ф., 1996; Гребенюк А.Н. и соавт., 1998; Hong R.,1984; Elsbach P., Weise J., 1985; Nouragargh S., Holt J.R.S., 1986]. Помимодействия ферментов уничтожение чужеродной клетки может осуществлятьсяпутем "дыхательного" (кислородного) взрыва [Nogueira N., 1984]. Внастоящее время получены данные, свидетельствующие о том, что вфагоцитарной реакции активное участие принимают радикал оксида азота(NO˙), макрофаги, продуцирующие ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12 и ТNF-α (αфакторнекроза опухоли), простагландины, лейкотриен В 4 (LTB 4 ), фактор,активирующий тромбоциты. Нейтрофилы синтезируют и выделяют в кровьТNF-α и ИЛ-12, а также хемокин ИЛ-8 [Гребенюк А.Н. и соавт., 1998;Хаитов Р. М. и соавт., 2000]. При остром действии токсикантов, как правило,отмечается снижение функции макрофагов и нейтрофилов [Шубик В.М.,1976; Забродский П.Ф. 1998; Агапов В.И. и соавт., 2004]. Однако в рядеслучаев отмечается кратковременная активация фагоцитарной активности[Шубик В.М., 1976; Забродский П.Ф., 1998, 2002], в частности, увеличениекатионных белков в нейтрофилах крыс после острой интоксикациидихлорэтаном в дозе 0,1 ЛД 50 [Давыдова Е.В. и соавт., 2004а].В опытах на крысах нами показано (табл. 3.6), что под влиянием остройинтоксикации различными спиртами и хлорированными углеводородами
85(0,75 ЛД 50 ) фагоцитарно-метаболическая активность нейтрофилов (ФМАН)существенно снижалась.Изменение фагоцитарно-метаболической активности ПЯЛ крыспод влиянием острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) через 1-9 сут (M+m)ТоксикантыКонтроль(41)МетанолЭГЭтанолДХЭТХМТХЭТаблица 3.6Срок наблюдения, сут1 3 6 9ФИ 27,5+0,8ФЧ 1,4+0,1НСТ сп 0,26+0,01НСТ инд 0,57+0,02ФИ 19,1+2,3* 22,0+2,1* 24,8+2,6 28,4+2,4ФЧ 0,8+0,2* 0,9+0,2* 1,2+0,2 1,6+0,2НСТ сп 0,14+0,02* 0,14+0,02* 0,19+0,02* 0,22+0,02НСТ инд 0,25 +0,04* 0,20 +0,04* 0,47+ 0,03* 0,55+0,03ФИ 21,9+2,4* 22,0+2,1* 24,8+2,6 28,4+2,4ФЧ 0,9+0,2* 1,0+0,2 1,3+0,2 1,5+0,2НСТ сп 0,16+0,03* 0,14+0,02* 0,19+0,02* 0,22+0,02НСТ инд 0,37+0,03* 0,45 +0,02* 0,49+ 0,03* 0,58+0,03ФИ 23,1+2,2 25,0+2,4 28,0+2,9 29,1+2,7ФЧ 0,9+0,2* 1,1+0,3 1,4+0,2 1,6+0,2НСТ сп 0,19+0,03* 0,21+0,03 0,28+0,03 0,27+0,02НСТ инд 0,48+0,04* 0,52 +0,04 0,56+ 0,04 0,60+0,04ФИ 15,0+1,9* 20,0+1,9* 22,4+2,3* 26,3+2,5ФЧ 0,5+0,2* 0,7+0,2* 1,0+0,2 1,3+0,2НСТ сп 0,11+0,02* 0,13+0,02* 0,17+0,02* 0,23+0,02НСТ инд 0,21 +0,04* 0,19 +0,04* 0,39+ 0,03* 0,54+0,04ФИ 18,2+1,7* 21,4+1,8* 22,0+2,2* 22,5+2,6ФЧ 0,7+0,2* 0,8+0,2* 1,1+0,2 1,2+0,2НСТ сп 0,14+0,02* 0,15+0,02* 0,20+0,02* 0,22+0,03НСТ инд 0,26 +0,04* 0,22 +0,04* 0,43+ 0,03* 0,48+0,04ФИ 22,0+2,2* 23,0+2,3 25,3+2,4 27,9+2,7ФЧ 0,9+0,2* 0,9+0,2* 1,5+0,3 1,7+0,3НСТ сп 0,18+0,03* 0,20+0,02* 0,22+0,03 0,25+0,03НСТ инд 0,35+0,04* 0,40 +0,04* 0,52+ 0,04 0,59+0,04Примечание: ФИ, ФЧ – соответственно фагоцитарный индекс, фагоцитарное число; НСТ –НСТ-тест спонтанный и индуцированный – индекс активности ПЯЛ; в скобках – числокрыс; в каждой серии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достовернор
86Действие метанола, этиленгликоля, дихлорэтана и тетрахлорметанаприводило к существенной редукции двух-трех из четырех исследованныхпоказателей ФМАН (фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа; НСТтестаспонтанного и индуцированного) в течение 1-6 сут. ФМАН подвлиянием этанола и трихлорэтилена изменялась в течение соответственно 1 и3 сут. Максимальное снижение ФМАН зарегистрировано после отравлениядихлорэтаном, минимальное – после действия этанола. Так, спонтанныйНСТ-тест под влиянием дихлорэтана и этанола через 1 сут снижалсясоответственно в 2,36 и 1,37 раза (р
87дихлорэтана, проявление их токсичности на уровне ПЯЛ, как и впроведенных нами опытах, было сходным [Гребенюк А.Н., Романенко О.И.,1996].Исследование ФМАН после острого отравления наиболее токсичными израссматриваемой группы токсикантов метанолом и дихлорэтаном показалопрямо связанное с дозой снижение данного параметра через 1 сут (табл. 3.7).Существуют основания полагать, что такой же характер дозозависимогоэффекта в исследованном диапазоне доз присущ и другим спиртам ихлорированным углеводородам [Гребенюк А.Н. и соавт., 1998].Таблица 3.7Изменение фагоцитарно-метаболической активности ПЯЛ крыспосле острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимостиот дозы через 1 сут, % (M+m)Доза, ЛД 50 Метанол ДихлорэтанКонтроль(41)0,250,50,75ФИ 27,5+0,8ФЧ 1,4+0,1НСТ сп 0,26+0,01НСТ инд 0,57+ 0,02ФИ 23,0+2,1 20,1+2,0*ФЧ 1,2+0,2 0,9+0,2*НСТ сп 0,20+0,02* 0,18+0,03*НСТ инд 0,52 +0,04 0,45 +0,04*ФИ 20,3+2,1* 18,1+1,8*ФЧ 0,9+0,2* 0,7+0,2*НСТ сп 0,17+0,02* 0,17+0,02*НСТ инд 0,37 +0,04* 0,30 +0,04*ФИ 19,1+2,3* 15,0+1,9*ФЧ 0,8+0,2* 0,5+0,2*НСТ сп 0,14+0,02* 0,11+0,02*НСТ инд 0,25 +0,04* 0,21 +0,04*Примечание: в скобках – число крыс; в каждой серии использовалось 14-20 животных; * -различие с контролем достоверно р
88подтверждают данные литературы [Румянцев А.П. и соавт., 1981; БрызгинаТ.М., 1989]. Действие спиртов, хлорированных углеводородов и ихметаболитов может быть также связано с ингибированием ФАД + , ФАД·Н,восстановленным и окисленным убихиноном и цитохромом b 245 лейкоцитовили иными механизмами нарушения функционирования НАДФ·Ноксидазногокомплекса нейтрофилов. Кроме кислородзависимыхантиинфекционных систем фагоцитоза, спирты, хлорированныеуглеводороды и продукты их биотрансформации, вероятно, поражают икислороднезависимые микробицидные системы фагоцитов [Гребенюк А.Н. исоавт., 1998]. Это доказано в опытах Е.В. Давыдовой и соавт. (2004а, 2004б),результаты которых свидетельствуют о снижении внутриклеточногосодержания катионных белков в нейтрофилах крыс после остройинтоксикации дихлорэтаном в дозе 1,0 ЛД 50 .Существенное значение в угнетении ФМАН может иметь дисфункцияГГАС под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов, приводящая кизменению чувствительности микро- и макрофагов к микроорганизмам, врезультате чего угнетается их цитотоксичность [Тихонов В. Н., 1981;Маянский А. Н., Маянский Д. Н., 1983; Петров Р. В., 1987; Брюхин Г. В.,Михайлова Г. И., 1990; Гребенюк А.Н. и соавт., 1998]. Так, показано, чтоглюкокортикоиды снижаю суммарную фагоцитарную активность фагоцитовкрыс. Причем существенную роль в данном феномене играет адреналин[Шилов Ю.И., Ланин Д.В., 2001]. Кроме того, нарушение активности ФМАНможет быть связано с мембранотоксическим действием спиртов ихлорированных углеводородов, инициацией ПОЛ мембран нейтрофилов, ихвзаимодействием с сульфгидрильными, гидроксильными и другими группамимембран фагоцитов, нарушением функции ферментов тканевого дыханиямитохондрий ПЯЛ [Ротенберг Ю.С., 1980, 1982; Голиков С.Н. и соавт., 1986;Забродский П.Ф., 1998, 2002; Gabon P.A., 1986; Iokobsen D.,1984]. Неисключено ингибирование неспецифической эстеразы нейтрофилов
89хлорированными углеводородами и их метаболитами [Забродский П.Ф. исоавт., 1997, 2000; Li C.G. еt al., 1983]. Один из метаболитов дихлорэтана –хлоруксусная кислота – является сильным митохондриальным ядом,ингибитором цикла трикарбоновых кислот (тканевого дыхания) клеток ММС[Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Таким образом, под влиянием спиртов и хлорированных углеводородовпроисходит дозозависимое снижение ФМАН в течение 1-3 сут (этанол), 3-6сут (трихлорэтилен) и до 9 сут (метанол, этиленгликоль, дихлорэтан,тетрахлорметан). Максимальное снижение ФМАН зарегистрировано послеотравления дихлорэтаном, минимальное – после действия этанола. Постепени редукции ФМАН токсиканты в порядке уменьшения токсическогоэффекта располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль – этанол.РезюмеПодводя итог данной главе можно заключить, под влиянием метанола,этиленгликоля, этанола, дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтиленапроисходят однотипные изменения интегральной антиинфекционной НРО,выраженные в ее снижении.При остром токсическом действии спиртов и хлорированныхуглеводородов происходит дозозависимая редукция БАСК в течение 6-9 сут.По степени снижения параметра токсиканты в порядке уменьшения эффектарасполагались в следующей последовательности: хлорированныеуглеводороды – метанол - этиленгликоль – этанол.Острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородамивызывает прямо связанное с дозой уменьшение активности лизоцима всыворотке крови. По степени снижения параметра токсиканты в порядкеуменьшения эффекта располагались в последовательности: хлорированные
90углеводороды – метанол - этиленгликоль – этанол. Сывороточная активностьлизоцима после острого действия токсикантов восстанавливается к 9 сут.Под влиянием острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами происходит прямо связанное с дозой уменьшение активностиТКБ в сыворотке крови. Активность ТКБ в крови после острого действиятоксикантов восстанавливается к 9 сут. Степень снижения активности ТКБпри интоксикации хлорированными углеводородами превышает редукцию ееспиртами.Спирты и хлорированные углеводороды через 1-3 сут после отравлениявызывают незначительную редукцию активности системы комплемента.Дозозависимый эффект ядов выражен незначительно.При остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородамипроисходит дозозависимое снижение ФМАН в течение 1-3 сут (этанол), 3-6сут (трихлорэтилен) и до 9 сут (метанол, этиленгликоль, дихлорэтан,тетрахлорметан). Максимальное снижение ФМАН зарегистрировано послеотравления дихлорэтаном, минимальное – после действия этанола. Постепени редукции ФМАН токсиканты в порядке уменьшения токсическогоэффекта располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль – этанол.
91ГЛАВА 4.ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ СПИРТОВ ИХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА СОДЕРЖАНИЕИММУНОЦИТОВ В ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНАХ4.1. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на миграциюколониеобразующих единиц в селезенкуПримитивные стволовые кроветворные клетки (СКК) в культуресозревают до стадии колониеобразующей единицы селезенки (КОЕс) за 4-6недель. Несмотря на то, что ни КОЕс и ни одна из категорий клеток,способных к колониеобразованию в культуре, не относятся к классупримитивных СКК [Чертков И.Л. и соавт.,1990], тем не менее, согласнотеории клональной саксессии (последовательная смена кроветворных клоновв результате последовательного созревания одной за другой СКК), числоКОЕс, мигрировавших из костного мозга (КМ) в селезенку, в определеннойстепени отражает функциональное состояние клона кроветворных клеток и,следовательно, функцию СКК, продуцирующих этот клон.В литературе описывают содержание КОЕ в селезенке после летальногооблучения мышей с экранированием определенного участка голени или бедракак отражение функции стволовых кроветворных клеток [Петров Р.В., ХаитовР.М., 1972; Петров Р.В. и соавт.,1981б; Корнева Е.А., 1990; Забродский П.Ф.,1993, 1998, 2000; Забродский П.Ф. и соавт., 1997; Беликов В.Г., 2001;Сидельникова Н.М., 2004]. Описан также и упрощенный метод оценкисодержания КОЕс в селезенке после сублетального тотального облучения вдозе 6 Гр [Петров Р. В. и соавт., 1970]. Метод эндогенного клонированияпредусматривает введение сингенных клеток КМ от мышей-доноров,подвергшихся воздействию ксенобиотика, мышам-реципиентам, облученнымв летальной дозе (8 Гр) [Till J. E., Mc Culloch E. A., 1961]. Чертков И.Л. исоавт. (1990) считают, что при остром воздействии токсикантов при
92определении КОЕс следует говорить не о влиянии ядов на СКК, а о действииих именно на КОЕс. Существуют основания полагать, что содержание КОЕсотражает митостатическое действие ядов при изучении лимфопоэтическойфункции КМ, обеспечивающей иммунопоэз [Петров Р.В., Хаитов Р.М., 1981а;Забродский П.Ф., 2002].Использованный нами метод исследования влияния спиртов ихлорированных углеводородов на миграцию КОЕс является одним изнаиболее часто применяемых в прикладных областях иммунологии [КорневаЕ.А., 1990; Забродский П.Ф. и соавт., 1997; Забродский П.Ф., 2002].Проведенные нами исследования показали (рис. 4.1), что острое1614121086420**** *1 2 3 4 5 6КРис. 4.1. Влияние острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на число колониеобразующих единиц в селезенкемышей через 8 сут (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно; по осиординат: число КОЕс; К – контроль (n=40); в каждой серии использовалось 9-10животных; * - различие с контролем достоверно р
93интоксикации этиленгликолем, метанолом, трихлорэтиленом,тетрахлорметаном и дихлорэтаном составляло соответственно 31,2; 41,3;44,2; 50,7 и 52,9%. При этом в среднем спирты снижали показатель в 1,46раза, а хлорированные углеводороды – в 1,96 раза (p>0,05).Исследование КОЕс после острого отравления метанолом идихлорэтаном показало прямо связанное с дозой снижение данного параметра(рис. 4.2). Можно вполне обоснованно полагать, что аналогичный характердозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированнымуглеводородам.1514131211109876543210***К0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 4.2. Изменение число колониеобразующих единиц в селезенкемышей через 8 сут после острого отравления метанолом и дихлорэтаном взависимости от дозы (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: число КОЕс; К – контроль (n=40); в каждойсерии использовалось 9-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
94неспецифическим действием веществ и их метаболитов. Выявленныетоксические эффекты, связанные с ингибированием ферментных системлимфоидной стволовой клетки и КОЕс, а также с реализацией стрессреакции,по всей видимости, приводят к редукции пролиферации КОЕс и/илиувеличению их гибели, что не противоречит данным других авторов [ПетровР.В., Хаитов Р.М., 1981а; Гаврилов О.К. и соавт., 1985; Переверзев А.Е., 1986;Беликов В.Г., 2001; Василенко О.А., 2004].Острое отравление хлорированными углеводородами, вероятно,вызывает инактивацию эстераз КОЕс [Забродский П. Ф., 1993, 2002]. Одействии хлорированных углеводородов на неспецифические эстеразы КОЕсможно говорить лишь предположительно, так как в литературе наличие этихэнзимов в КОЕс не описано. Это связано с методическими трудностямивыделения КОЕс из КМ - в селезенке определяется не одиночнаяколониеобразующая клетка, а бляшка, сформировавшаяся за 8 сут исостоящая из пяти типов клеточных элементов: миелоидных,мегакариоцитарных, эритроидных, недифференцированных и смешанных[Петров Р.В. и соавт., 1981б]. Следует отметить, что среди клеток костногомозга эстеразопозитивными клетками являются мегакариоциты, монобласты,миэлобласты, промиелоциты [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983].Снижение числа КОЕс под влиянием спиртов может быть обусловленоингибированием тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования влимфоидных стволовых клетках, КОЕс (реализация одного их общихмеханизмов токсичности большого числа ксенобиотиков [Ротенберг Ю.С.,1982]), нарушением функции ферментов этих клеток в результатевзаимодействия метаболитов токсикантов с их сульфгидрильными иаминогруппами [Iokobsen D., 1984; Gabon P.A., 1986].Инициация ПОЛ под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов,как одного их общих механизмов иммунотоксичности [Забродский П. Ф.,1998; 2002], также, вероятно, может приводить к снижению КОЕс.
95Следует отметить, возможна активация парасимпатического отделавегетативной нервной системы вследствие антихолинэстеразного эффектахлорированных углеводородов [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б]. При этомацетилхолин, вероятно, способен активировать м-холинорецепторы КОЕс,что приводит к увеличению их миграции из костного мозга в селезенку споследующим образованием пяти типов колоний [Забродский П.Ф., 1993].Многочисленные данные литературы косвенно подтверждают этопредположение [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б; Петров Р.В., Хаитов Р.М.,1981а; Дешевой Ю. Б., 1984, 1985; Kutty K. M. et al., 1976; Maslinski W. et al.,1992]. Приведенные на рис. 4.1 и 4.2 данные свидетельствуют о том, чтофакторы, снижающие КОЕс, существенно превышают возможныйстимулирующий миграцию КОЕс эффект ацетилхолина при действиихлорированных углеводородов (дихлорэтана, трихлорэтилена) [Тиунов Л.А.,1990а; Забродский П.Ф. и соавт., 2004а].Уменьшение числа КОЕс прямо связано с миграцией В-клеток из КМ[Петров Р.В. и соавт., 1981б], поэтому вполне обоснованно можно полагать,что спирты и хлорированные углеводороды снижают также и этот важныйпараметр индуктивной фазы иммуногенеза.Таким образом, под влиянием острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами снижается миграция КОЕс из костногомозга, что подтверждает нарушение функционального состояния клонакроветворных клеток, относящихся к КОЕс, и, следовательно, нарушениефункции стволовых кроветворных клеток, продуцирующих этот клон.Редуцирующий эффект токсикантов уменьшался в последовательности:дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль –этанол.4.2. Определение лимфоидного индекса тимуса и селезенкиЛимфоидный индекс тимуса и селезенки (относительная масса органов)является косвенным показателем содержания ядросодержащих клеток в этом
96органе, то есть в определенной степени характеризует процессы апоптозатимоцитов и миграцию их в циркулирующую кровь [Гольдберг Е. Д. и соавт.,1972; Тихонов В. Н., 1981; Александров В. Н., 1983; Беликов В.Г., 2001;Мальцева Г.М., 2002; Молотков А.О., 2002; Сидельникова Н.М., 2004].Известно, что тимэктомия приводит к существенному снижению содержаниялимфоцитов в органах системы иммунитета вследствие супрессиилимфоидного ростка кроветворения [Жданов В.В. и соавт., 2002].Оценку влияния острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами на лимфоидный индекс тимуса и селезенки белых крыспроводили через 1-6 cут после введения ядов. В этот период при острыхвоздействиях ксенобиотиков на животных происходит снижение ЛИ тимуса[Забродский П.Ф., 1998; Descotes J., 1986].В проведенных нами исследованиях установлено (табл. 4.1), что придействии токсикантов через 1-3 сутЛИ тимуса существенно снижался(р
97Редуцирующий эффект токсикантов уменьшался в последовательности:дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль -этанол.Оценка ЛИ тимуса крыс после острого отравления метанолом идихлорэтаном (их эффекты наиболее выражены) показала наличиедозозависимого действия этих ядов через 1 сут после отравления (рис. 4.3).По всей видимости, такой же характер эффекта присущ и другим спиртам ихлорированным углеводородам.2,52** *К1,5*10,500,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 4.3. Изменение лимфоидного индекса тимуса крыс после острогоотравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут(M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: ЛИ, усл. ед.; К – контроль (n=40); в каждойсерии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
98органа после отравления токсикантами практически полностьювосстанавливалась.Таблица 4.2Изменение лимфоидного индекса селезенки крыс под влиянием острогоотравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-6 сут, усл. ед. (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6Контроль 4,90+0,16 (40)Метанол 3,90+0,31* 4,07+0,35* 4,78+0,34Этиленгликоль 3,71+0,33* 3,74+0,29* 4,98+0,37Этанол 4,20+0,35 4,83+0,40 4,94+0,38Дихлорэтан 3,44+0,32* 3,56+0,35* 5,01+0,40Тетрахлорметан 3,52+0,29* 3,78+0,37* 4,85+0,41Трихлорэтилен 3,98+0,36* 4,05+0,31* 5,06+0,39Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10крыс; * - различие с контролем достоверно - р
9954**К* К*32100,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 4.4. Изменение лимфоидного индекса селезенки крыс после острогоотравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут(M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: ЛИ, усл. ед., ; К – контроль (n=40); в каждойсерии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
100Таблица 4.3Изменение содержания лимфоцитов в тимусе крыс под влиянием острогоотравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-6 сут, 10 8 (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6Контроль 6,21+0,37 (32)Метанол 3,82+0,71* 4,02+0,73* 6,32+0,75Этиленгликоль 4,03+0,63* 4,40+0,70* 6,08+0,72Этанол 4,85+0,73 5,23+0,67 6,65+0,64Дихлорэтан 3,49+0,61* 3,65+0,60* 6,12+0,70Тетрахлорметан 3,67+0,65* 3,84+0,64* 5,59+0,68Трихлорэтилен 4,17+0,67* 4,44+0,69* 6,50+0,63Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10крыс; * - различие с контролем достоверно - р0,05) до 43,8% (дихлорэтан). В дальнейшем снижениепоказателя отмечалось в течение 3 сут.Существенных различий вуменьшении эффектов под влиянием ядов не выявлено. Восстановлениепоказателя до контрольного значения было зарегистрировано через 6 сутпосле отравления.Представленные в табл. 4.4 результаты позволяют сделать заключение оТаблица 4.4Изменение содержания лимфоцитов в селезенке крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-6 сут, 10 8 (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6Контроль 7,22+0,38 (32)Метанол 5,45+0,68* 6,62+0,60 7,01+0,69Этиленгликоль 5,73+0,72* 6,05+0,62 7,45+0,73Этанол 6,56+0,70 6,83+0,73 7,91+0,75Дихлорэтан 5,12+0,61* 5,31+0,66* 6,87+0,69Тетрахлорметан 5,35+0,65* 5,38+0,59* 6,25+0,60Трихлорэтилен 5,51+0,67* 5,42+0,58* 6,94+0,68Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10крыс; * - различие с контролем достоверно - р
101том, что содержание лимфоцитов в селезенке после отравления спиртами ихлорированными углеводородами изменялось аналогично. Максимальнаяредукция показателя установлена после острого отравления дихлорэтаном (в1,41 раза, p0,05).Полученные данные показывают, что различий между параметрамиредукции числа клеток выявлено не было. В селезенке под влиянием остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами содержаниелимфоцитов уменьшалось в наибольшей степени при действиихлорированных углеводородов (табл. 4.4).Следует отметить, что только после действия тетрахлорметанаотмечалась выраженная тенденция к снижению содержания лимфоцитов влимфоидных органах через 6 сут. Это обусловлено, видимо, способностьюданного яда к более длительному депонированию в органах богатыхлипидами по сравнению с дихлорэтаном, трихлорэтиленом и спиртами[Тиунов Л.А., 1990а, 1990б; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001].Исследование содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке послеострого отравления метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное сдозой снижение данного параметра через 1 сут (рис. 4.5, 4.6). Существуютоснования полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта висследованном диапазоне доз присущ и другим спиртам и хлорированнымуглеводородам.Известно, что содержание в тимусе и селезенке лимфоцитов являетсяпоказателем, характеризующим способность данных органов обеспечиватьиммуногенез, то есть реализацию клеточных и гуморальных иммунныхреакций. Многие авторы считают, что спирты и хлорированныеуглеводороды способны снижать массу тимуса и селезенки, а такжесодержание в них лимфоцитов в результате реализации стресс-реакции(действие гормонов коры надпочечников, в частности, кортикостерона)[Мутускина Е.А. и соавт., 2001], уменьшая миграцию в эти органы
1027654****К32100,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 4.5. Изменение содержания лимфоцитов в тимусе крыс послеострого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1сут, (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: 10 8 лимфоцитов; К – контроль (n=32); вкаждой серии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
103лимфоцитов из костного мозга [Петров Р. В. и соавт., 1981а, 1981б;Забродский П.Ф., 1998; Молотков А.О., 2002], подавляя пролиферациюлимфоцитов в тимусе и селезенке [Петров Р. В., 1987], усиливая миграцию изтимуса и селезенки лимфоцитов в циркулирующую кровь (реализацияперераспределения, вследствие действия кортикостероидов и катехоламинов)[Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б; Молотков А.О., 2002; Dhabhar F. S. et al.,1996]. Кроме данных процессов после отравления возможен лизислимфоцитов в органах системы иммунитета под влиянием кортикостероидов[Петров Р. В. и соавт., 1981а, 1981б; Молотков А.О., 2002; Петров Р. В., 1987;Claman H.N., 1972, 1983]. Имеются сведения о том, что содержание Т-лимфоцитов в тимусе снижают механическая травма [Александров В.Н.,1983] и другие стрессорные воздействия, приводящие к увеличениюконцентрации кортикостероидов в плазме крови [Горизонтов П.Д., 1981а,1981б]. Такой же эффект оказывает ацетилхолин (стимуляция м-холинорецепторов тимоцитов), вызывая выход зрелых Т-клеток из тимуса[Maslinski W. et al., 1992]. Можно предположить, что дихлорэтан,трихлорэтилен, оказывая антихолинэстеразный эффект [Тиунов Л.А., 1990а],снижают число клеток в тимусе не только вследствие апоптоза [Хаитов Р.Ми соавт., 2000; Durant S., 1986], но и в результате их миграции из органа.Кроме того, содержание лимфоцитов в селезенке зависит отфункционального состояния α-адренорецепторных структур этого органа[Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б]. Возможно, изменение активности ГГАСтакже приводит к снижению лимфоцитов в данном органе.Существует мнение, что при действии спиртов и хлорированныхуглеводородов снижение содержания лимфоцитов в тимусе и селезенкепроисходит, вероятно, и вследствие их общетоксического эффекта –подавление пролиферации иммуноцитов в результате ингибированияферментов тканевого дыхания митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1982;Забродский П.Ф., 1998], а также инактивации метаболитами токсикантов
104многочисленных ферментных систем лимфоцитов [Тиунов Л.А., 1990а].Кроме того, токсиканты способны нарушать процесс позитивной(положительной) селекции Т-лимфоцитов [Fink P.J., Bevan M.J., 1995].Необходимо отметить, что миграция лимфоцитов из органов системыиммунитета весьма динамичный процесс, зависящий от времени суток[Dhabhar F. S. et al., 1996] и различных факторов, в частности от измененияфункционального состояния органов системы иммунитета под влияниемГГАС, а также от содержания кортикостероидов [Горизонтов П. Д., 1981б;Claman H.N., 1983; Dhabhar F. S. et al., 1996], катехоламинов [Маdden K. S.,Livnat S., 1991] и от состояния холинергической системы [Забродский П.Ф.,Германчук В.Г., 2001].Таким образом, под влиянием острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами в прямой зависимости от дозы снижаетсясодержание Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенке через 1-3 сутпосле интоксикации, что доказывает нарушение иммуногенеза и реализацииклеточных и гуморальных иммунных реакций. Существенных различиймежду установленными показателями редукции, вызванной ядами, выявленоне было, хотя максимальное снижение показателя характерно длядихлорэтана, а минимальное - для этиленгликоля и этанола. В течение 6 сутпосле действия токсикантов содержание лимфоцитов в тимусе и селезенкевосстанавливалось до контрольного уровня.4.4. Содержание лимфоцитов в лимфатических узлах, костном мозгеи крови при действии спиртов и хлорированных углеводородовРезультаты проведенных опытов позволили установить (табл. 4.5), чтопри остром токсическом действии хлорированных углеводородов в дозе 0,75ЛД 50 через 1-3 сут отмечается снижение лимфоцитов в костном мозге(р
105Таблица 4.5Изменение содержания лимфоцитов в костном мозге крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-6 сут, 10 6 (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6Контроль 39,1+1,9 (32)Метанол 35,3+3,5 34,8+3,2 39,1+3,8Этиленгликоль 34,0+3,4 33,7+3,5 40,2+3,9Этанол 36,5+3,7 38,0+3,1 38,5+3,7Дихлорэтан 30,6+3,3* 21,0+3,2* 37,5+3,0Тетрахлорметан 31,1+3,0* 30,2+3,3* 35,0+3,5Трихлорэтилен 33,2+3,1** 34,1+3,4 41,3+4,0Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10крыс; *; **- различие с контролем достоверно - р
106Кроме того, при отравлении тетрахлорметаном отмечалась тенденция кснижению содержания лимфоцитов в лимфоидных органах через 6 сут. Этообусловлено, по-видимому, способностью тетрахлорметана к болеедлительному депонированию в органах богатых липидами по сравнению сдругими хлорированными углеводородами [Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А.,1990а, 1990б].Изучение содержания лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах белыхкрыс после острого отравления дихлорэтаном (наиболее иммунотоксичнымиз исследованных токсикантов) показало, что снижение данных параметровпрямо связано с дозой токсиканта через 1 сут после отравления (рис. 4.7 и4.8).45403530*2520151050К 0,25 0,5 0,75Рис. 4.7. Изменение содержания лимфоцитов в костном мозге крыс послеострого отравления дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут, 10 6(M+m).По оси абсцисс: К – контроль (n=32), ЛД 50 ; по оси ординат: 10 6 лимфоцитов; вкаждой серии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
107Однако это связь выражена незначительно. Так, при действиидихлорэтана в дозах 0,25 и 0,50 ЛД 50 содержание лимфоцитов в костноммозге и лимфоузлах белых крыс уменьшалось несущественно.Статистически достоверные различия с контролем исследованныхпоказателей наблюдались только лишь при остром токсическом действиидихлорэтана в дозе 0,75 ЛД 50 (р
108Таблица 4.7Изменение содержания лимфоцитов в крови крыс под влияниемострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 1-6 сут, 10 9 /л (M+m)ТоксикантыСрок наблюдения, сут1 3 6Контроль 7,4+0,1 (20)Метанол 8,0+0,3 7,9+0,3 7,6+0,3Этиленгликоль 7,8+0,2 7,5+0,2 7,7+0,2Этанол 7,6+0,3 7,3+0,2 7,5+0,2Дихлорэтан 6,8+0,2* 6,7+0,2* 7,1+0,3Тетрахлорметан 7,0+0,3 6,9+0,2* 7,2+0,3Трихлорэтилен 7,1+0,2 7,3+0,3 8,0+0,3Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10крыс; * - различие с контролем достоверно - р
109Учитывая имеющиеся данные, что под влиянием постинтоксикационногостресса, вызванного отравлением спиртами и хлорированнымиуглеводородами, число лимфоцитов снижается в тимусе и селезенке, а вдругих органах системы иммунитета этот феномен выявлен только придействии хлорированных углеводородов (в частности, после отравлениядихлорэтаном и в меньшей степени после интоксикации тетрахлорметаном итрихлорэтиленом), можно предположить, что постинтоксикационный апоптозхарактерен для хлорированных углеводородов в большей степени посравнению со спиртами. Его реализация обеспечивается высокойконцентрацией кортикостероидов после отравления (стресс-реакция) [ПетровР.В. и соавт., 1981а, 1981б; Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001; МолотковА.О., 2002; Петров Р.В., 1987; Claman H.N., 1983], эффектом хлорированныхуглеводородов и их метаболитов [Забродский П.Ф., 2002; Durant S., 1986].При изучении содержания Т- и В-лимфоцитов под влиянием спиртов ворганах системы иммунитета белых мышей установлено (табл. 4.8), чтометанол и этиленгликоль через 2 сут после отравления уменьшаютсодержание Т-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Выявленамаксимально выраженная редукция числа В-клеток в селезенке под влияниемметанола. Этанол практически не влиял на содержание Т- и В-клеток влимфоидных органах. Кроме того, отмечалась тенденция к снижениюсодержания данных популяций лимфоцитов в других органах системыиммунитета. Через 6 сут исследованные показатели восстанавливались доконтрольных значений.Полученные результаты наших исследований свидетельствуют о том,что при остром отравлении хлорированными углеводородами (табл. 4.9)существенно (p
110через 6 сут после отравления содержание лимфоцитов в лимфоидных органахвосстанавливалось до контрольного уровня.Таблица 4.8Влияние острого отравления спиртами (0,75 LD 50 ) на содержаниеТ- и В-лимфоцитов в лимфоидных органах мышейчерез 2 и 6 сут, 10 6 [M+m]Спирты Время после Орган Содержание лимфоцитовинтоксикации,сутТВТимус 59,3+3,2 -Контроль - Селезенка 68,2+4,5 72,3+4,0КМ - 3,5+0,3ЛУп 1,7+0,1 0,5+0,1Тимус 47,1+3,1* -2 Селезенка 59,0+4,3 53,5+4,1*КМ - 3,0+0,3МетанолЛУп 1,7+0,1 0,3+0,1Тимус 64,1+3,5 -6 Селезенка 70,0+4,2 75,1+4,3КМ - 3,2+0,3ЛУп 1,9+0,2 0,6+0,2Тимус 49,2+3,2* -2 Селезенка 61,2+4,1 59,3+4,0*КМ - 3,1+0,2ЭтиленгликольЛУп 1,7+0,1 0,3+0,1Тимус 55,8+3,7 -6 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4,3КМ - 3,1+0,3ЛУп 1,5+0,2 0,3+0,1Тимус 55,8+3,7 -2 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4,3ЭтанолКМ - 3,1+0,3ЛУп 1,5+0,2 0,3+0,1Тимус 56,1+3,3 -6 Селезенка 65,0+4,3 69,5+4,3КМ - 3,6+0,2ЛУп 1,5+0,2 0,6+0,1Примечание: КМ – костный мозг, ЛУп – паховые лимфоузлы; в каждой сериииспользовалось от 9 до 13 мышей; * - различие с контролем достоверно - р
111Таблица 4.9Влияние острого отравления хлорированными углеводородами (0,75 LD 50 ) насодержание Т- и В-лимфоцитов в лимфоидных органах мышейчерез 2 и 6 сут, 10 6 [M+m]Хлорированные Время послеЛимфоцитыуглеводороды интоксикации, ОргансутТВТимус 59,3+3,2 -Контроль - Селезенка 68,4+4,5 72,3+4,0КМ - 3,5+0,2ЛУп 1,9+0,1 0,7+0,1Тимус 45,1+3,3* -2 Селезенка 56,0+4,0* 62,9+3,8*КМ - 2,8+0,2*ДХЭЛУп 1,3+0,2* 0,3+0,1*Тимус 55,8+3,7 -6 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4,3КМ - 3,0+0,3ЛУп 1,6+0,2 0,5+0,1Тимус 44,9+3,9* -2 Селезенка 58,3+3,4* 60,2+4,1*КМ - 2,7+0,2*ТХМЛУп 1,4+0,1* 0,4+0,1*Тимус 56,1+3,3 -6 Селезенка 63,0+4,3 67,5+4,3КМ - 3,1+0,2ЛУп 1,7+0,2 0,6+0,1Тимус 49,1+3,5* -2 Селезенка 56,5+3,4* 60,5+3,8*КМ - 2,9+0,2*ТХЭЛУп 1,5+0,1* 0,4+0,1*Тимус 62,0+3,5 -6 Селезенка 65,4+4,7 70,1+4,2КМ - 3,3+0,4ЛУп 1,9+0,2 0,8+0,2Примечание: КМ – костный мозг, ЛУп – паховые лимфоузлы; в каждой сериииспользовалось от 9 до 13 мышей; * - различие с контролем достоверно - р
112дихлорэтаном и тетрахлорметаном [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б; Корнева ЕА. и соавт., 1985, 1988, 1990; Rey A. et al., 1984; Maslinski W. et al., 1992].Кроме того, спирты, хлорированные углеводороды и их метаболитыспособны, ингибируя многочисленные энзимы ИКК и инициируя ПОЛ,вызывать нарушение гемопоэза и гибель иммуноцитов (апоптоз) [Хаитов Р.Ми соавт., 2000; Durant S., 1986].Известно, что выраженное действие метанола на В-лимфоциты в отличиеот эффектов других токсикантов обусловлено основным фолат-зависимымметаболизмом формиата [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Можнопредположить, что при этом формиат является своего рода антагонистомфолиевой кислоты в связи с ее практически полным потреблением. В отличиеот антиметаболита фолиевой кислоты (таковым является метотрексат),формиат, активно ее используя, снижает ресурсы дигидрофолатредуктазы. Врезультате реализуются такие же эффекты, как и у иммунодепрессантаметотрексата - уменьшается образование тетрагидрофолиевой кислоты,ингибируется перенос метильных групп, снижается синтез ДНКпреимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000]. Вероятно,метанол способен нарушать и процесс селекции естественныхаутореактивных В-лимфоцитов [Hayakawa K., 1999].Таким образом, при исследовании влияния спиртов и хлорированныхуглеводородов в дозе 0,75 ЛД 50 на число лимфоцитов в костном мозге илимфоузлах установлено, что редукцию показателя вызывают через 1-3 суттолько хлорированные углеводороды. Снижение количества лимфоцитов вкрови обусловливает только дихлорэтан. Для дихлорэтана характер снижениялимфоцитов в органах носит дозозависимый характер. Через 2 сут послеострого действия спирты – метанол и этиленгликоль - снижают содержаниеТ-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Редукция числа В-клеток вселезенке максимально выражена под влиянием метанола. Этанолпрактически не влияет на содержание Т- и В-клеток в лимфоидных органах.
113Хлорированные углеводороды уменьшают содержание Т-клеток в тимусе,селезенке, лимфатических узлах и В-лимфоцитов в селезенке, костном мозгеи лимфатических узлах через 2 сут. В последующее время через 6 сутсодержание лимфоцитов в лимфоидных органах восстанавливается доконтрольного уровня.РезюмеМатериалы данной главы свидетельствуют о снижении числа КОЕс илимфоцитов в органах системы иммунитета после острой интоксикацииспиртами и хлорированными углеводородами. В целом в порядке увеличенияэффекта токсиканты располагались в последовательности: этанол,этиленгликоль, метанол, трихлорэтилен, тетрахлорметан, дихлорэтан.Под влиянием острого действия спиртов и хлорированныхуглеводородов дозозависимо в течение 1-3 сут снижаются лимфоидныеиндексы тимуса и селезенки. Показатели восстанавливались до контрольногоуровня через 6 сут. Максимальное уменьшение показателя характерно дляхлорированных углеводородов.Спирты и хлорированные углеводороды в прямой зависимости от дозыуменьшают содержание Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенкечерез 1-3 сут после интоксикации. Существенных различий междуустановленными показателями редукции, вызванной ядами, выявлено небыло, хотя максимальное снижение показателя характерно для дихлорэтана, аминимальное - для этиленгликоля и этанола. Через 6 сут после действиятоксикантов содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке восстанавливалосьдо контрольного уровня.При исследовании влияния спиртов и хлорированных углеводородов вдозе 0,75 ЛД 50 на содержание лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах,показано, что редукцию показателя вызывают через 1-3 сут только
114хлорированные углеводороды. Снижение количества лимфоцитов в кровиобусловливает только дихлорэтан. Для дихлорэтана характер снижениялимфоцитов в органах носит дозозависимый характер. Через 2 сут послеострого действия спирты – метанол и этиленгликоль - снижают содержаниеТ-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Редукция числа В-клеток вселезенке максимально выражена под влиянием метанола. Этанолпрактически не влияет на содержание Т- и В-клеток в лимфоидных органах.Хлорированные углеводороды уменьшают содержание Т-клеток в тимусе,селезенке и лимфатических узлах, и В-лимфоцитов в селезенке, костноммозге и лимфатических узлах через 2 сут. Через 6 сут содержаниелимфоцитов в лимфоидных органах восстанавливается до контрольногоуровня.
115ГЛАВА 5.ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ СПИРТОВИ ХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА ГУМОРАЛЬНЫЕИММУННЫЕ РЕАКЦИИ5.1. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на Т-зависимыйгуморальный иммунный ответ5.1.1. Оценка воздействия токсичных химических веществ наантителообразование к Т-зависимому антигену в динамикепо титру антител в кровиВ экспериментах на белых крысах оценивали действие острогоотравления спиртами и ХУ на гуморальный иммунный ответ ктимусзависимому антигену эритроцитам барана по титру антител через 5, 8 и11 сут при иммунизации ЭБ, проводившейся через 3 сут после интоксикациии практически одновременно с ней. Через 5 сут после введения ЭБ отмечаетсяпик иммунного ответа, связанный с синтезом IgM, а через 8 и 13 сут титрантител отражает синтез преимущественно IgG, и в меньшей степени IgM[Петров Р.В. и соавт., 1981а, 1981б]. Учитывая то обстоятельство, что Th1-лимфоциты участвуют в синтезе Ig M, G 2 , а Th2-лимфоциты способствуютсинтезу Ig G 1 , A, E [Pfeifer C. et al., 1991; Georgiev V.St., Albright J.E., 1993],использованный тест дает представление о функциональной активности какTh1, так и Th2-лимфоцитов [Abbas A.K. et al., 1996; Fleisher T.A., Oliveira J.B.,2004; Maekawa Y., Yasutomo K., 2005].Проведенные нами эксперименты показали (табл. 5.1), что после остройинтоксикации спиртами и ХУ (0,75 ЛД 50 ) отрицательный двоичный логарифмтитра антител (ОДЛТА) к эритроцитам барана в периферической крови через5 сут (токсиканты вводили одновременно с иммунизацией, в индуктивнуюфазу антителогенеза) существенно снижался, максимально в 1,67 (р0,05) при отравлении
116этанолом. Через 8 сут сохранялась редукция ОДЛТА при действии всехтоксикантов, кроме этанола. К 11 сут статистически значимых отличий отконтрольных значений при действии спиртов и ХУ на титр антител к ЭБ невыявлено. Сохранялась тенденция к снижению показателя при действииТХМ, что обусловлено особенностями его токсикокинетики (медленноевыведение из организма) [Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А., 1990а]. Постепени редукции синтеза антител токсиканты в порядке снижения эффектарасполагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль - этанол. Выявлено, что в целомхлорированные углеводороды по сравнению со спиртами оказывали болеевыраженное действие на ОДЛТА. Так, через 1 сут среднее значениепоказателя при действии спиртов и ХУ составляло соответственно 5,0+0,2 и4,0+0,2 (р
117выраженное снижение синтеза антител к ЭБ при остром отравлении ХУ посравнению с эффектом спиртов. Так, через 1 сут ОДЛТА при действииспиртов и ХУ составлял соответственно 3,47+0,19 и 4,43+0,21 (р
118(3-5 сут после иммунизации), а также ингибирующим синтез антителдействием кортикостероидов [Claman H.N., 1983], концентрация которых вкрови при действии различных токсикантов увеличивается (стресс – реакция)[Селье Г., 1972].Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) происходит снижение Т-зависимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к ЭБ в кровичерез 5, 8 и 11 сут после иммунизации, в большей степени в продуктивнуюфазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом. По степениредукции синтеза антител токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.5.1.2. Исследование действия острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами на число антителообразующих клетокв селезенке, синтезирующих IgMПри исследовании содержания антителообразующих клеток (АОК) вселезенке к ЭБ у белых мышей после острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) через 5 сут послеиммунизации (при действии токсикантов в индуктивной фазе антителогенеза)было установлено (рис. 5.1) существенное уменьшение числа АОК. Внаибольшей степени число АОК в селезенке мышей снижал ДХЭ (в 1,85раза), в наименьшей – этанол (в 1,28 раза). В целом ХУ по сравнению соспиртами оказывали более выраженное действие на синтез IgM. Так, среднеезначение показателя при действии спиртов и ХУ составляло соответственно21,9+2,2 и 16,8+2,0 (р>0,05). По степени снижения супрессии синтеза IgMтоксиканты располагались в порядке: ДХЭ – ТХМ - ТХЭ – М – ЭГ – Э.При введении спиртов и ХУ в продуктивной фазе иммуногенеза числоАОК к ЭБ в селезенке мышей уменьшалось при действии ДХЭ, ТХМ, ТХЭ,
119М, ЭГ и Э соответственно в 1,87; 1,70; 1,55; 2,48; 2,20 и 1,90 раза. В среднемХУ и спирты снижали число АОК в селезенке соответственно в 2,19 и 1,71раза (р>0,05).30252015**** **** ****К10501 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6ИРис. 5.1. Влияние острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на число антителообразующих клеток кэритроцитам барана, синтезирующих Ig M, в селезенке белых мышей через 5сут в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно; И, П –индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно; по оси ординат: числоАОК, 10 3 ; К – контроль (n=32); в каждой серии использовалось 7-10 животных; * -различие с контролем достоверно р
120Исследование Т-зависимого гуморального иммунного ответа послеострого отравления наиболее иммунотоксичными из рассматриваемойгруппы токсикантов метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное сдозой его снижение (рис. 5.2). Вполне логично заключить, что такой жехарактер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и ХУ.30 К****20*1000,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 5.2. Изменение содержания числа антителообразующих клеток кэритроцитам барана, синтезирующих IgM, в селезенке белых мышей через 5сут после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости отдозы в продуктивной фазе иммуногенеза (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: число АОК, 10 3 ; К – контроль (n=32); в каждойсерии использовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно р
121углеводородов может быть связано с реализацией различных механизмовиммунотоксических эффектов: на уровне систем – с активацией ГГАС, науровне взаимодействия клеток – со снижением кооперации Т- и В-лимфоцитов, на субклеточном уровне - с инициацией ПОЛ, ингибированиемэстераз иммуноцитов, мембранотоксическим действием, в частности, сповреждением мембраны лизосом ИКК с высвобождением и активациейкислых гидролаз [Ахматова М.А. и соавт., 1982; Голиков С.Н. и соавт., 1986;Забродский П.Ф., 2002], на молекулярном уровне – с ингибированиемэнзимов тканевого дыхания митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1980; 1982].Кроме того, показано, что стресс-реакция вследствие психоэмоциональногонапряжения также может приводить к снижению АОК в селезенке мышей в 4раза [Идова В.Г. и соавт., 2004] вследствие увеличения содержания в кровиглюкокортикоидов [Свирид В.Д., 2002]. Вполне логично полагать,постинтоксикационный стресс оказывает существенное влияние насупрессию гуморального иммунного ответа. Так, при действии ФОС(метафоса) удельный вес кортикостероидов в реализацию редукции Т-зависимого гуморального иммунного ответа составляет более 35%[Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000].Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами происходит дозозависимое снижение Т-зависимого антителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке,отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный периодиммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. По степениредукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.
1225.1.3. Оценка влияния острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами на число антителообразующих клетокв селезенке, синтезирующих IgGИсследование числа антителообразующих клеток в селезенке мышей,синтезирующих IgG, через 8 сут после острого действия спиртов ихлорированных углеводородов показало (рис. 5.3), что токсиканты снижаютисследованный показатель в разной степени (иммунизацию ЭБ проводилиодновременно с введением токсикантов).20181614121086420******1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6ИРис. 5.3. Влияние острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на число антителообразующих клеток кэритроцитам барана, синтезирующих IgG, в селезенке мышей через 8 сут виндуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно; И, П –индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно; по оси ординат: числоАОК, 10 3 ; К – контроль (n=28); в каждой серии использовалось 7-8 животных; *- различиес контролем достоверно - р
123Так, при действии этанола отмечалась тенденция к супрессииисследованного показателя. Наибольшую редукцию синтеза IgG виндуктивной фазе иммуногенеза вызывал ТХЭ (уменьшение числа АОК к ЭБв 2,15 раза), наименьшую ЭГ (уменьшение числа АОК к ЭБ в 1,43 раза). Всреднем спирты и ХУ снижали показатель соответственно в 1,46 и 1,83 раза.По степени снижения числа АОК, синтезирующих IgG в селезенке,токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан - метанол –дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль - этанол.Аналогичные сдвиги показателя, но более выраженные, былизарегистрированы после действия спиртов и хлорированных углеводородов впродуктивной фазе иммуногенеза. Обращает на себя внимание наибольшийиммунотоксический эффект ТХМ. Это связано с оценкой показателя на 8 сутпосле отравления. ТХМ, который, по сравнению с другими хлорированнамиуглеводородами и спиртами, выводится из организма более медленно[Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А., 1990а]. Именно на 8 сут ТХМ оказываетмаксимально выраженный по сравнению с другими ядами эффект.К факторам, супрессирующим синтез IgG при острой интоксикацииспиртами и ХУ (это относится и к другим ядам, не ингибирующим синтезгормонов надпочечниками), вероятно, относится эффект кортикостероидов[Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000; Хусинов А.А. и соавт., 1991; SzotR.J., Murphy S.D., 1970; Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985; Szelenyi J.G. etal., 1982; Casale G.P. et al., 1983].Установленное снижение синтеза IgG (а также IgM) под влияниемспиртов и ХУ, по всей видимости, обусловлены ингибированиеммногочисленных энзимов, в том числе неспецифических эстераз Т-лимфоцитов (в основном, Th2) и макрофагов [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д.,1983] как самими токсикантами, так и их метаболитами [Забродский П. Ф. исоавт., 2004б]. Кроме ингибирования эстераз данных клеток, редукцияантителобразования может быть обусловлена снижением процессов
124тканевого дыхания вследствие взаимодействия метаболитов ТХВ сразличными компонентами тканевого дыхания и окислительногофосфорилирования митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1980, 1982;Забродский П. Ф., 1998, 2002].Таким образом, под влиянием спиртов и ХУ уменьшаетсяантителообразование, в частности, синтез IgG, что свидетельствует оснижении функции Th2-лимфоцитов. По степени уменьшения числа АОК,синтезирующих IgG в селезенке, токсиканты располагались впоследовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен– этиленгликоль - этанол.5.1.4. Изучение действия острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами на число розеткообразующихклеток в селезенкеОпределение числа розеткообразующих клеток (РОК) в селезенке мышейчерез 8 сут после иммунизации ЭБ характеризует состояние В-звенаиммунитета [Утешев Б. С., 1984; Петров Р.В., 1987; Ройт А., 1991; Ройт А. исоавт., 2000]. В этот период после иммунизации Т-зависимым антигеномпроисходит переключение плазмоцитов с синтеза IgМ на продукцию IgG[Хаитов Р. М. и соавт., 2000].Нами установлено (рис. 5.4), что под влиянием острой интоксикацииразличными спиртами и хлорированными углеводородами происходитсущественное снижение числа РОК в селезенке белых мышей. Максимальноеуменьшение РОК в индуктивной фазе иммуногенеза вызывал ТХМ (в 1,81раза), минимальное – этанол (в 1,28 раз).Аналогичные сдвиги параметра, но более выраженные, отмечалисьпосле действия спиртов и хлорированных углеводородов в продуктивнойфазе иммуногенеза. Как и при оценке синтеза IgG обращает на себя вниманиенаибольший иммунотоксический эффект ТХМ. Это связано с отмеченными
125особенностями токсикокинетики ТХМ [Чиркова В.М., 1983; Тиунов Л.А.,1990а].5045К4035302520***********1510501 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6ИРис. 5.4. Влияние острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на число РОК в селезенке мышей через 8 сут виндуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно; И, П –индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно; по оси ординат: числоРОК, 10 5 ; К – контроль (n=28); в каждой серии использовалось 7-8 животных; * - различиес контролем достоверно - р
126[Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Как уже указывалось, вероятно, формиатможно рассматривать, как своего рода антагонист фолиевой кислоты в связис ее практически полным потреблением в процессе метаболизма большихколичеств метанола. При этом снижаются ресурсы дигидрофолатредуктазы.В результате уменьшается образование тетрагидрофолиевой кислоты,ингибируется перенос метильных групп, снижается синтез ДНКпреимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000].Снижение РОК при остром токсическом действии различных спиртов ихлорированных углеводородов может быть связано с действием гормоновкоры надпочечников (стресс-обусловленная активация ГГАС) [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б; Хусинов А.А. и соавт., 1991; Забродский П.Ф., ГерманчукВ.Г., 2000; Szot R.J., Murphy S.D., 1970; Rey A. et al., 1984; Tiefenbach B. et al.,1980, 1983, 1985; Szelenyi J.G. et al., 1982; Casale G.P. et al., 1983; Dhabhar F. S.et al., 1996], а также возможной инициацией апоптоза иммуноцитов илиснижением их функции спиртами, хлорированными углеводородами и ихметаболитами [Хаитов Р. М. и соавт., 2000; Durant S., 1986; Rinner I. et al.,1995].Таким образом, под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов(0,75 ЛД 50 ) снижается число РОК в селезенке крыс. В порядке сниженияэффекта данного показателя токсиканты располагались впоследовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен– этиленгликоль - этанол. Различная степень иммунотоксичности спиртов ихлорированных углеводородов может быть обусловлена особенностями ихтоксикокинетики и токсикодинамики.5.1.5. Нарушение кооперации Т- и В-клеток под влиянием спиртов,хлорированных углеводородов и их метаболитов in vitroПри изучении кооперации Т- и В-лимфоцитов мышей СВА in vitroоценка функции этих популяций иммуноцитов в данной реакцииосуществлялась по формированию АОК к ЭБ . Удельный вес Т- и В-клеток в
127обеспечении антителопродукции определяли путем сравнения числа АОКпосле инкубации той или иной популяции лимфоцитов в течение 2 ч сразличными концентрациями спиртов и хлорированных углеводородов.Кооперацию Т- иВ-лимфоцитов можно рассматривать, как механизм науровне взаимодействия клеток, определяющий антителопродукцию. В моделиin vitro роль клеток, представляющих антиген Т-лимфоцитам, вместомакрофагов выполняют В-клетки [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Ex vivoизучался данный процесс в модели, предусматривающей забор Т- или В-клеток через 1 сут от сингенных доноров после воздействия на них ядов дляизучения in vitro кооперации этих клеток соответственно с В- или Т-лимфоцитами интактных животных.В наших исследованиях показано (табл. 5.3), что спирты ихлорированные углеводороды в концентрациях 1, 10 и 50 мМ в прямойзависимости от дозы уменьшают функцию Т- и В-клеток в кооперациисоответственно с В- и Т-лимфоцитами.Таблица 5.3Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей in vitro (число АОК на 10 6 В-клеток) [М+m, n=7-8]ТХВВ 0 +Т В+Т 01мМ 10мМ 50мМ 1мМ 10мМ 50мММ 365+37 301+30* 254+29* 349+35 287+28* 229+26*ЭГ 377+35 310+31* 236+28* 335+33 259+25* 206+21*Э 415+42 325+37 278+26* 368+37 295+29* 235+21*ДХЭ 298+30* 235+23* 157+17* 275+22* 214+24* 110+11**ТХМ 306+35* 250+24* 165+15* 287+27* 227+25* 124+13**ТХЭ 314+38* 273+29* 179+18* 306+29* 230+26* 140+14**Примечание: контроль: В-клетки - 60+7 на 10 6 В-клеток; В+Т - 405+35 на 10 6 В-клеток; В 0 , Т 0 - В- и Т-клетки в течение 2 ч до добавления ЭБ инкубировали стоксикантами; *- различие с контролем (В+Т) достоверно – p
128В большей степени поражались под влиянием токсикантов Т-клетки. Так,при концентрации 50 мМ ЭГ снижает активность В- и Т-клетоксоответственно в 1,72 и 1,97 раза, а ДХЭ - соответственно в 3,68 и 2,56 раза.Максимальная супрессия активности Т- и В- клеток зарегистрирована подвлиянием ДХЭ, минимальная - при действиии этанола. Так, приконцентрации ДХЭ и Э, составляющей 10 мМ, активность В-клетокснижалась соответственно в 1,72 и 1,25 раза, а Т-лимфоцитов - в 1,89 и 1,37раза соответственно. ХУ по сравнению со спиртами снижали кооперациюлимфоцитов в существенно большей степени. По мере снижения редукциикооперации Т- и В-клеток (при действии спиртов и ХУ как на Т-, так и В-клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан -тетрахлорметан - трихлорэтилен - метанол – этиленгликоль – этанол.Следует отметить, что существенных отличий между действием накооперацию клеток различных спиртов не отмечено. Аналогичныерезультаты получены и при изучении реакции под влиянием ХУ.При исследовании кооперации Т- и В-клеток после выделения их умышей через 1 сут после введения им спиртов и ХУ в дозах 0,25 и 0,75 LD 50 ,установлено (табл. 5.4), что в прямой зависимости от дозы токсикантыпоражали в большей степени Т-клетки по сравнению с В-клетками, заисключеним метанола, при действии которого наблюдали больший эффект вотношении В-лимфоцитов.Зарегистрировано существенное снижение активности В-лимфоцитов вэффекте кооперации клеток после действия М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ и ТХЭ вдозе 0,75 LD 50 соответственно в 3,01; 1,89; 1,48; 2,41; 2,27 и 1,99 раза, а Т-клеток - соответственно в 1,63; 2,37; 1,55; 3,17; 2,96 и 2,68 раза. Постепени снижения супрессии кооперации Т- и В-клеток при действии спиртови хлорированных углеводородов на Т-лимфоциты токсиканты располагалисьв последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан - трихлорэтилен -этиленгликоль - метанол – этанол, а по степени уменьшения редукции
129кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - впоследовательности: метанол - дихлорэтан - тетрахлорметан - трихлорэтилен- этиленгликоль - этанол.Таблица 5.4Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородамичерез 1 сут на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей еx vivo (число АОК на10 6 В-клеток) [М+m, n=7-8]ТХВВ 0 +Т В+Т 00,25 ЛД 50 0,75 ЛД 50 0,25 ЛД 50 0,75 ЛД 50М 180+19* 138+20* 286+27* 255+23**ЭГ 270+25* 219+23* 236+20* 175+16**Э 328+37 281+30* 314+37 267+21*ДХЭ 220+22* 172+18* 198+18* 131+12**ТХМ 234+21* 183+15* 205+20* 140+14**ТХЭ 246+28* 208+22* 218+22* 155+13**Примечание: контроль: В-клетки - 63+7 на 10 6 В-клеток; В+Т - 415+35 на 10 6 В-клеток; В 0 , Т 0 – клетки получали через 1 сут от мышей, подвергавшихся действию яда; *-различие с контролем (В+Т) достоверно – p
1302002, 2004а; Descotes G., 1986; Luster M. J. et al., 1987; Sullivan J. B., 1989;Kimber I., 1996]. Метанол при метаболизме in vivo образует формиат,который поражает В-клетки, вследствие снижения ресурсовдигидрофолатредуктазы, образования тетрагидрофолиевой кислоты, чтоингибирует перенос метильных групп, уменьшает синтез ДНКпреимущественнов В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000]. Вероятно,формиат является в определенной степени функциональным антагонистомфолиевой кислоты в связи с ее быстрой утилизацией.Полученные нами результаты показывают, что воздействие in vitroспиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов в прямойзависимости от концентрации (10, 100, 500мМ) вызывает редукциюкооперации Т- и В-лимфоцитов, приводящую к ингибированиюантителопродукции. Выявленный феномен связан с нарушением функции какТ-, так и В-клеток, причем активность Т-лимфоцитов снижалась в большейстепени (табл.5.5).Таблица 5.5Влияние спиртов и их метаболитов на кооперацию Т- и В-лимфоцитовмышей in vitro (число АОК на 10 6 В-клеток) [М+m, n=7-8]ТХВВ 0 +Т В+Т 010мМ 100мМ 500мМ 10мМ 100мМ 500мММ 260+27 208+21* 161+17* 221+22* 158+16** 127+12**МК 110+12* 87+7* 59+6* 141+14* 105+10** 78+8**ЭГ 277+30 215+24* 174+19* 232+23* 167+16** 123+13**ГА 169+17* 139+12* 108+10* 162+21* 131+13** 103+10**ГК 216+20 178+19* 132+15* 178+16** 124+12** 95+9**ГОК 137+14* 108+9* 70+7* 118+13* 80+8* 65+7*Э 286+31 237+23* 185+18* 242+24* 180+19** 138+12**АДГ 252+25* 184+18* 148+12* 205+19* 143+14* 115+11*Примечание: М – метанол, МК – муравьиная кислота, ЭГ – этиленгликоль, ГА –гликолевый альдегид, ГК – гликолевая кислота, ГОК – глиоксиловая кислота; Э – этанол,АДГ - ацетальдегид; контроль 1 и 2: В-клетки - 56+6 на 10 6 В-клеток; В+Т - 345+35 на 10 6В-клеток; В 0 , Т 0 - Т- и В-клетки в течение 2 ч до добавления ЭБ инкубировали со спиртамиили их метаболитами; *- различие с контролем (В+Т) достоверно – p
131Характер снижения функции Т- и В-лимфоцитов в процессе кооперациипо сравнению с контролем при действии М, ЭГ и Э в данном экспериментебыл такой же, как при изучении данной реакции при концентрациях спиртов,составляющих 1, 10 и 50 мМ (табл. 5.3). При действии на Т - и В-лимфоцитыметаболитов спиртов: муравьиной кислоты, гликолевого альдегида,гликолевой кислоты, глиоксиловой кислоты, ацетальдегида, отмечаласьпрямо связанная с дозой редукция их способности участвовать в кооперациилимфоцитов. Причем спирты по сравнению с их метаболитами поражали какТ-, так и В-лимфоциты в меньшей степени. Метаболит этиленгликоля -глиоксиловая кислота оказывала более выраженное воздействие на Т-клетки,чем метаболиты метанола и этанола – муравьиная кислота и ацетальдегид приконцентрациях 10, 100 и 500 мМ. Гликолевый альдегид и гликолевая кислотав эквимолярных концентрациях повреждали Т-клетки в меньшей степени, чеммуравьиная кислота. По степени редукции функции Т-клеток в эффектекооперации клеток метаболиты спиртов располагались в порядке уменьшенияэффекта в последовательности: глиоксиловая кислота – муравьиная кислота –гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид.Метаболит метанола муравьиная кислота оказывала большийсупрессирующий эффект на функцию В-лимфоцитов, чем другие продуктыбиотрансформации спиртов в эквимолярных концентрациях. В порядкеснижения редуцирующего эффекта в отношении активности В-клеток приисследовании эффекта кооперации лимфоцитов метаболиты спиртоврасполагались в следующей последовательности: муравьиная кислота -глиоксиловая кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота –ацетальдегид.Следует отметить, что число АОК при инкубации ЭБ только с В-лимфоцитами (контроль 1) статистически значимо не отличалось отпоказателя, полученного при инкубации Т-, В-клеток и ЭБ после действия наВ-клетки муравьиной кислоты и глиоксиловой кислоты, а также при
132инкубации лимфоцитов и ЭБ после воздействия на Т-клетки глиоксиловойкислоты в эквимолярной концентрации, составляющей 500 мМ. Этосвидетельствует о практически полном нарушении кооперации лимфоцитовв процессе антителогенеза при действии этой концентрации токсикантоввследствие поражения В-лимфоцитов муравьиной и глиоксиловой кислотамии Т-клеток – глиоксиловой кислотой.Как уже указывалось, более выраженное повреждающие воздействиемуравьиной кислоты в отношении В-клеток обусловлено основным фолатзависимымметаболизмом формиата [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Мыпредполагаем, что при этом муравьиная кислота является своего родаантагонистом фолиевой кислоты в связи с ее практически полнымпотреблением. В отличие от антиметаболита фолиевой кислоты (таковымявляется метотрексат) формиат, активно ее используя, снижает ресурсыдигидрофолатредуктазы. В результате реализуются такие же эффекты, как и уиммунодепрессанта метотрексата - уменьшается образованиететрагидрофолиевой кислоты, ингибируется перенос метильных групп,снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт.,2000].Патогенез редукции активности Т- и В-клеток в процессе их кооперации,вероятно, связан с нарушением их функции как в результате прямогомембранотоксического эффекта спиртов, так и вследствие взаимодействия ссульфгидрильными и аминогруппами энзимов лимфоцитов высокотоксичныхпродуктов их биотрансформации, ингибирования ими тканевого дыхания,окислительного фосфорилирования и синтеза белков [Iokobsen D., 1984;Gabon P.A., 1986], уменьшения активации Т- и В-лимфоцитов вследствиеснижения продукции циклических нуклеотидов и секреции Т-клетками ИЛ-2[Сухих Г.Т. и соавт., 1984; Козлов В.А. и соавт., 2001; Parker D.C., 1993] иИЛ-4 [Шуршалина А.В. и соавт., 2001], а также в результате повреждения
133токсикантами мембран лизосом ИКК с высвобождением и активацией кислыхгидролаз [Ахматова М.А. и соавт., 1982].Данные литературы свидетельствуют о том, что in vivoиммунотоксический эффект метаболита этиленгликоля глиоксиловойкислоты, по-видимому, минимальный. Это обусловлено тем, что наиболеетоксичная глиоксиловая кислота определяется в биосредах в концентрации1300 раз меньшей, чем гликолевая кислота [Chou S.Y., Richardson K.E., 1978],вероятно, вследствие ее быстрой биотрансформации.Таким образом, по степени снижения редукции кооперации Т- и В-клеток(при действии спиртов и хлорированных углеводородов как на Т-, так и В-клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан –тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.Существенных различий между действием на кооперацию клеток различныхспиртов и ХУ не отмечено. По степени снижения супрессии кооперации Т- иВ-клеток при действии спиртов и ХУ на Т-лимфоциты при переносе in vitroклеток от мышей после отравления токсиканты располагались впоследовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен –этиленгликоль – метанол – этанол, а по мере уменьшения редукциикооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - впоследовательности: метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. По степени редукции функции Т-клеток в эффекте кооперации клеток спирты и их метаболиты располагалисьв порядке уменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота– муравьиная кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота –ацетальдегид, а по степени супрессии активности В-клеток – впоследовательности: муравьиная кислота – глиоксиловая кислота –гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид (эффект прямозависел от концентрации токсиканта).
134Нами установлено (табл. 5.6), что под влиянием ДХЭ и его метаболитов –2-хлорэтанола (ХЭ), хлоруксусного альдегида (ХУА), хлоруксусной кислоты(ХУК) – в прямой зависимости от концентрации происходит снижениеэффекта кооперации Т- и В-лимфоцитов, оцениваемого поантителообразованию, связанного с нарушением функции как В-лимфоцитов,так и Т-клеток.Таблица 5.6Влияние ДХЭ и его метаболитов на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышейin vitro (число АОК на 10 6 В-клеток) [М+m, n=7-8]Клетки Концентрация,ДХЭ и его метаболитымМ ДХЭ ХЭ ХУА ХУК1 345+30 295+22* 198+20* 148+15*В 0 +Т 10 265+27* 218+16* 120+14* 95+11*50 195+18* 135+12* 74+11* 45+5*1 301+22* 229+21* 154+17* 115+12*В+Т 0 10 234+24* 161+19* 121+10* 85+7*50 160+15* 98+9* 63+8* 67+6*Примечание: контроль: В-клетки - 70+ 8 на 10 6 В-клеток; В+Т - 398+37 на 10 6 В-клеток; В 0 , Т 0 - Т- и В-клетки в течение 1 ч до добавления ЭБ инкубировали с ДХЭ илиего метаболитами; *- различие с контролем (В+Т) достоверно – p0,05); 1,35; 2,01 и 2,69 (p
135нарушением функции В-лимфоцитов в эффекте кооперации приконцентрации дихлорэтана, 2-хлорэтанола, хлоруксусного альдегида ихлоруксусной кислоты, составляющей 50 мМ, отмечалось соответственно в2,04; 2,95; 5,38 и 8,84 раза (p
136располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль – этанол. Спирты и хлорированныеуглеводороды нарушают кооперацию Т- и В-лимфоцитов преимущественновследствие иммунотоксического эффекта продуктов их биотрансформации.Под влиянием токсикантов в большей степени поражаются Т-клетки, заисключением действия метанола при переносе in vitro Т- или В-клеток отмышей после отравления. По степени снижения эффекта кооперации Т- и В-клеток при действии спиртов и хлорированных углеводородов на Т-лимфоциты при переносе in vitro клеток от мышей после отравлениятоксиканты располагались в последовательности: дихлорэтан -тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол, а постепени уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты – в последовательности: метанол – дихлорэтан –тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. По степениснижения функции Т-клеток в реакции кооперации клеток спирты и ихметаболиты располагались в порядке уменьшения эффекта впоследовательности: глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолеваякислота, муравьиная кислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль и этанол,а по степени супрессии активности В-клеток – в последовательности:муравьиная кислота, глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолеваякислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль и этанол, Увеличениеиммунотоксичности дихлорэтана и его продуктов биотрансформации вреакции кооперации лимфоцитов in vitro происходит в последовательности:дихлорэтан – 2-хлорэтанол – хлоруксусный альдегид – хлоруксусная кислота.Действие ядов прямо связано с их концентрацией или дозой (при переносеклеток in vitro от мышей после их отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами).
1375.2. Исследование эффекта спиртов и хлорированных углеводородов наТ-независимый гуморальный иммунный ответ5.2.1. Оценка воздействия на антителопродукцию к Т-независимомуантигену в динамике по титру антител в кровиПрименение Vi-антигена позволяет рассмотреть влияние ядов на Т-независимый иммунный ответ, а также оценить роль Т-хелперов в реализациигуморального иммунного ответа при сравнении Т-зависимого и Т-независимого антителобразования [Утешев Б. С., 1984; Descotes J.,1986].Данный подход широко используется для оценки действия химическихсоединений на систему иммунитета [Плецитый К.Д., Сухих Г.Т., 1985; РойтА., 1991; Молотков А.О., 2002; Василенко О.А., 2004; Сидельникова Н.М.,2004; Забродский П.Ф., 1998, 2002; Забродский П.Ф. и соавт., 2001, 2004а,2004б]. При гуморальном иммунном ответена Т-независимый антигенсинтезируются только IgM [Фримель Х., Брок Й., 1986; Ройт А. и соавт., 2000,Хаитов Р.М. и соавт., 2000].При оценке содержания титра антител к Vi-Ag у белых крыс былоустановлено (табл. 5.7),Таблица 5.7Изменение Т-независимой гуморальной иммунной реакции у крыс к Vi-Ag (-log2 титра) при остром отравлении спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) в индуктивной фазе антителогенеза(токсиканты вводили одновременно с иммунизацией) (M+m)Время после интоксикации, сутТоксиканты 5 8 11Контроль 4,2+ 0,2 3,8+ 0,2 3,1+ 0,3Метанол 2,8+ 0,2* 3,2+ 0,3* 2,8+ 0,3Этиленгликоль 3,2 + 0,2* 3,5 + 0,2 2,9 + 0,2Этанол 3,8+ 0,2 3,7+ 0,2 3,3+ 0,3Дихлорэтан 3,0+ 0,2* 3,4+ 0,2 3,2+ 0,4Тетрахлорметан 2,9+0,2* 3,3+ 0,2 3,0+ 0,2Трихлорэтилен 3,1+ 0,2* 3,4+ 0,2 3,1+ 0,2Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс; * - различие с контролемдостоверно - р
138что после острой интоксикации спиртами и ХУ отрицательный двоичныйлогарифм титра антител к ЭБ в периферической крови через 5 сут(токсиканты вводили одновременно с иммунизацией в индуктивную фазуантителогенеза) существенно уменьшался в наибольшей степени в 1,50 разапри действии метанол и минимально в 1,35 раза при отравленииэтиленгликолем. Этанол снижал ОДЛТА несущественно. Через 8 сутсохранялась статистически значимая редукция ОДЛТА только при действииметанола. К 11 сут статистически значимых различий от контрольныхзначений при действии токсикантов на титр антител к Vi-Ag не выявлено.По степени редукции синтеза антител спирты и хлорированныеуглеводороды в порядке уменьшения показателя располагались впоследовательности: метанол–тетрахлорметан - дихлорэтан - трихлорэтилен -этиленгликоль - этанол. Существенных различий в супрессии показателя подвлиянием различных ядов не выявлено. Отмечалась несущественная разницав среднем редуцирующем действии хлорированных углеводородов испиртов.Применение токсикантов через 3 сут после иммунизации Vi-Ag(продуктивная фаза гуморального иммунного ответа) приводило к болеевыраженной редукции ОДЛТА через 5 сут по сравнению с эффектом виндуктивной фазе иммуногенеза (табл. 5.8). Максимальное уменьшениеантителопродукции через 5 сут наблюдалось под влиянием метанола в 1,63раза, минимальное – под воздействием этанола в 1,18 раза. Через 8 сутсохранялась тенденция к супрессии синтеза антител при действии всехтоксикантов. Метанол и дихлорэтан вызывали достоверное снижениепоказателя (р
139последовательности: метанол – тетрахлорметан - трихлорэтилен - дихлорэтан- этиленгликоль - этанол. Существенные различия в эффектах токсикантовотсутствовали, за исключением действия этанола, которое было достоверносниженным по сравнению с действием других спиртов и хлорированныхуглеводородов.Таблица 5.8Изменение Т-независимой гуморальной иммунной реакции у крыс к Vi-Ag(-log2 титра) при остром отравлении спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) в продуктивной фазе антителогенеза (токсикантывводили через 3 сут после иммунизации) (M+m)Время после иммунизации, сутТоксиканты 5 8 11Контроль 3,9+ 0,2 3,5+ 0,2 2,9+0,3Метанол 2,4+ 0,2* 2,7+ 0,2* 2,5+0,3Этиленгликоль 2,9 + 0,2* 3,2 + 0,2 2,7+0,2Этанол 3,3+ 0,2* 3,3+ 0,2 3,1+ 0,3Дихлорэтан 2,8+ 0,2* 2,9+ 0,2* 2,8+ 0,3Тетрахлорметан 2,5+0,2* 3,0+ 0,2 2,6+ 0,2Трихлорэтилен 2,7+ 0,2* 3,1+ 0,2 3,0+ 0,2Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс; * - различие с контролемдостоверно - р
140антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом антителопродукции.В порядке уменьшения редукции синтеза антител спирты и хлорированныеуглеводороды располагались в последовательности: метанол –тетрахлорметан - трихлорэтилен - дихлорэтан - этиленгликоль – этанол.Существенные различия в действии токсикантов отсутствовали, заисключением эффекта этанола, который был ниже, чем иммунотоксичностьдругих ядов.5.2.2. Исследование действия острого отравления токсикантами на числоантителообразующих клеток в селезенке к Т-независимому антигенуПри оценке содержания АОК к Vi-Ag в селезенке у мышей после остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами через 5 сутокпосле иммунизации в индуктивной и продуктивной фазах антителогенезабыло установлено (рис. 5.5), что при введении токсикантов одновременнос Vi-Ag происходит существенное уменьшение числа АОК под влияниемметанола, дихлорэтана, тетрахлорметана, трихлорэтилена, этиленгликоля иэтанола соответственно в 1,96; 1,59; 1,52; 1,46; 1,31 и 1,19 раза.При введении токсикантов через 3 сут после иммунизации (впродуктивной фазе антителогенеза) отмечалось более выраженное снижениеиммунной реакции по сравнению с действием ядов в индуктивной фазеантителопродукции. Максимальная супрессия образования АОК к Vi-Agнаблюдалась при действии метанола (в 2,97 раза), а минимальная - приотравлении этанолом (в 1,19 раза). В порядке уменьшения редукцииобразования числа АОК, синтезирующих IgM к Vi-Ag в селезенке, спирты иХУ располагались в последовательности: метанол – тетрахлорметан -трихлорэтилен - дихлорэтан - этиленгликоль – этанол.
141201816141210****** **** **К8*64201 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6ИРис. 5.5. Влияние острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на число антителообразующих клеток к Vi-Ag ,синтезирующих Ig M, в селезенке белых мышей через 5 сут в индуктивной ипродуктивной фазах антителогенеза (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – метанол, этиленгликоль, этанол, дихлорэтан,тетрахлорметан, трихлорэтилен соответственно; И, П – индуктивная и продуктивная фазыантителогенеза соответственно; по оси ординат: число АОК, 10 3 ; К – контроль (n=28); вкаждой серии использовалось 7-9 животных; * - различие с контролем достоверно - р
142Сравнительная оценка влияния спиртов и хлорированных углеводородовна Т-зависимое и Т-независимое антителообразование показывает, что подвлиянием токсикантов наблюдается преимущественное нарушение Т-зависимой антителопродукции. Так, в продуктивный период иммуногенезадихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль, этанолснижали число АОК к ЭБ в селезенке мышей соответственно в 1,87; 1,70;1,55; 2,48; 2,20 и 1,90 раза (в среднем – в 1,95 раза), а число АОК к Vi-Ag в1,59; 1,52; 1,46; 1,96; 1,31 и 1,19 раза соответственно (в среднем – в 1,50раза). Это обусловлено, по нашему мнению, наряду с другими механизмами,действием токсикантов одновременно на макрофаги, В-лимфоциты и Т-клетки (в использованной нами экспериментальной модели на субпопуляциюTh1), участвующие в реализации данной иммунной реакции, в то время как Т-независимый гуморальный иммунный ответ обеспечивается в основномфункцией В-клеток, активируемых антигеном в присутствии ИЛ-1,секретируемом макрофагами [Ройт А., 1991; Ройт А. и соавт., 2000; GillbertR.V., Hoffmann M.K., 1985; Sinha A.A. et al., 1987]. Вполне естественно, чтоиммунотоксическое действие на три элемента, взаимодействующих впроцессе антителообразования, проявляется большим его угнетением, чемпри поражении одного или двух элементов, если нет оснований предполагатьреализации селективного иммунотропного эффекта. Следует отметить, чтометанол не способен избирательно поражать только В-лимфоциты. Оказываямаксимальный повреждающий эффект на эти клетки по сравнению с другимиядами, он, как показали наши эксперименты, действует и на Т-клетки. Приэтом суммарный редуцирующий эффект на Т- и В-клетки (Т-зависимыйантителогенез) у метанола меньше, чем у дихлорэтана.Исследование Т-независимого гуморального иммунного ответа послеострого отравления наиболее иммунотоксичными из рассматриваемойгруппы токсикантов метанолом и дихлорэтаном в продуктивной фазеиммуногенеза показало прямо связанное с дозой его снижение (рис. 5.6).
143Логично полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ идругим спиртам и хлорированными углеводородами.201816141210*****К8*64200,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 5.6. Изменение содержания числа антителообразующих клеток кVi-Ag, синтезирующих IgM, в селезенке белых мышей через 5 сут послеострого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы впродуктивной фазе иммуногенеза (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат: число АОК, 10 3 ; К – контроль (n=30); в каждойсерии использовалось 7-10 животных; *- различие с контролем достоверно - р
144последовательности: метанол, дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен,этиленгликоль и этанол.РезюмеПодводя итог результатам, изложенным в данной главе, можнозаключить, что под влиянием острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) происходит снижение Т-зависимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к ЭБ в кровичерез 5, 8 и 11 сут после иммунизации, в большей степени в продуктивнуюфазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом. По степениредукции синтеза антител токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.Спирты и хлорированные углеводороды дозозависимо снижают Т-зависимое антителообразование (оцениваемое по числу АОК в селезенке,отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный периодиммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. По степениредукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.После острого действия спиртов и хлорированных углеводородовснижается число АОК в селезенке, характеризующих синтез IgG, чтосвидетельствует о редукции функции Th2-лимфоцитов. По степениуменьшения числа АОК, синтезирующих IgG, в селезенке токсикантырасполагались в последовательности: тетрахлорметан – метанол - дихлорэтан– трихлорэтилен - этиленгликоль - этанол.Под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов (0,75 ЛД 50 )снижается число РОК в селезенке мышей. В порядке снижения данного
145показателя токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан– метанол - дихлорэтан – трихлорэтилен - этиленгликоль - этанол.Наши исследования выявили различную степень иммунотоксичностиспиртов и хлорированных углеводородов, что может быть объяснимоособенностями их токсикокинетики и токсикодинамики. Так, мы считаем,более выраженная иммунотоксичность метанола по сравнению с другимиспиртами, а также дихлорэтана по сравнению с другими хлорированнымиуглеводородами обусловлена относительно более высокимиммунотоксическим эффектом их метаболитов (муравьиная кислота, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид и хлоруксусная кислота). Как и приоценке синтеза IgG обращает на себя внимание наибольшийиммунотоксический эффект тетрахлорметана. Это связано с отмеченнымиранее особенностями токсикокинетики тетрахлорметана.По степени снижения редукции кооперации Т- и В-клеток (при действиитоксикантов in vitro как на Т-, так и В-клетки) токсиканты располагались впоследовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен –метанол - этиленгликоль - этанол. Существенных различий между действиемна кооперацию клеток различных спиртов (а также различныххлорированных углеводородов) не отмечено. Спирты и хлорированныеуглеводороды нарушают кооперацию Т- и В-лимфоцитов преимущественновследствие иммунотоксического эффекта продуктов их биотрансформации.Под влиянием токсикантов в большей степени поражались Т-клетки, заисключением действия метанола при переносе in vitro Т- или В-клеток отмышей после отравления. По степени снижения супрессии кооперации Т- иВ-клеток при действии спиртов и ХУ на Т-лимфоциты при переносе in vitroклеток от мышей после отравления токсиканты располагались впоследовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен –этиленгликоль - метанол - этанол, а по степени уменьшения редукциикооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - в
146последовательности: метанол - дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен– этиленгликоль – этанол. По степени снижения функции Т-клеток в эффектекооперации клеток спирты и их метаболиты располагались в порядкеуменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота –гликолевый альдегид – гликолевая кислота – муравьиная кислота –ацетальдегид – метанол – этиленгликоль – этанол, а по степени супрессииактивности В-клеток – в последовательности: муравьиная кислота –глиоксиловая кислота - гликолевый альдегид - гликолевая кислота -ацетальдегид – метанол – этиленгликоль – этанол. Сравнительная оценкадействия дихлорэтана и его продуктов биотрансформации на кооперацию Т-и В-лимфоцитов in vitro в процессе антителогенеза позволяет заключить, чтоувеличение их иммунотоксичности происходит в последовательности:дихлорэтан – 2-хлорэтанол – хлоруксусный альдегид – хлоруксусная кислота.Действие ядов было прямо связано с их концентрацией или дозой (припереносе клеток in vitro от мышей после их отравления спиртами ихлорированными углеводородами).Под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами происходит снижение Т-независимого антителообразования,оцениваемого по ОДЛТА к Vi-Ag в крови через 5 и 8 сут после иммунизации,преимущественно в продуктивную фазу антителогенеза по сравнению синдуктивным периодом антителопродукции. В порядке уменьшенияредукции синтеза антител спирты и ХУ располагались в последовательности:метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль -этанол. Существенные различия в токсических эффектах ядов отсутствовали,за исключением эффекта этанола, который был ниже, чем токсоэффектыдругих ядов.Острое отравление спиртами и хлорированными углеводородамивызывает дозозависимое снижение Т-независимого антителообразования(оцениваемого по числу АОК в селезенке, отражающему синтез IgМ) в
147большей степени в продуктивный период антителогенеза по сравнению синдуктивной фазой антителопродукции. По степени редукции синтеза IgМ В-клетками в Т-независимой гуморальной иммунной реакции токсикантырасполагались в порядке снижения эффекта в последовательности: метанол –дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол.
148ГЛАВА 6.ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХУГЛЕВОДОРОДОВ НА КЛЕТОЧНЫЕИММУННЫЕ РЕАКЦИИ6.1. Оценка функции Т-лимфоцитовИсследование функции Т-лимфоцитов проводили по реакцииторморжения миграции лейкоцитов (РТМЛ) периферической крови белыхкрыс в присутствии конконавалина А (КонА). РТМЛ основана наспособности сенсибилизированных Т-лимфоцитов в реакциях с антигеномили митогенами (ФГА, КонА) in vitro выделять биологически активныесубстанции – лимфокины, в том числе фактор, ингибирующий миграциюлейкоцитов (один из лимфокинов воспаления) [Фримель Х., Брок Й., 1986;Andrian U.H., Mackay C.R., 2000].Установлено (табл. 6.1), что при оценке функции Т-лимфоцитов поРТМЛ (реакция обратно пропорциональна функции Т-клеток) у крыс послеострой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75ЛД 50 ) происходит снижение функции Т-клеток до 6-9 сут. Так, через 1 сутпараметр при действии метанола, этанола, этиленгликоля, дихлорэтана,тетрахлорметана и трихлорэтилена увеличился соответственно на 16,7; 13,8;11,7; 28,7; 22,9 и 20,6% (p
149токсикантами активности Т-клеток не выявлено, за исключениемтоксического эффекта дихлорэтана с эффектом этанола.Таблица 6.1Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) на функцию Т-лимфоцитов крыс, % (M+m)Время после интоксикации, сутТоксиканты 1 3 6 9Контроль 55,3+ 1,8 (57)Метанол 72,0+ 4,9* 74,7+ 6,2* 65,2+ 5,6** 58,0+ 5,8Этиленгликоль 69,1+ 5,1* 70,3+ 6,1* 63,0+ 5,4** 54,5+ 5,5Этанол 67,0+ 5,0* 61,8+ 6,0* 59,5+ 5,2 53,1+ 5,0Дихлорэтан 84,0+ 5,1*˚ 68,7+ 6,1* 63,2+ 5,0** 59,5+ 5,7Тетрахлорметан 78,2+ 6,3* 72,1+ 5,9* 65,0 +6,1** 57,0 + 6,3Трихлорэтилен 75,9+ 5,9* 75,3+ 5,7* 61,4+6,0** 51,9+ 5,4Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 8 до 12крыс; *; **- различие с контролем достоверно - р
150Таким образом, наши исследования выявили существенные нарушенияфункции Т-лимфоцитов при действии спиртов и хлорированныхуглеводородов. Под влиянием острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) происходит снижение функцииТ-клеток, оцениваемой по ингибированию миграции лейкоцитов, в течение6-9 сут после отравления.По степени выраженности редукции функции Т-лимфоцитов спирты ихлорированные углеводороды в порядке уменьшения токсического эффектарасполагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.6.2. Исследование реакции гиперчувствительности замедленного типаИзучение формирования ГЗТ под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов в модели, не связанной с переносом клеток, позволяетустановить их действие на клеточный иммунитет, в частности, на функциюTh1 и продукцию ими ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферона, β-фактора некрозаопухоли и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующегофактора (ГМ-КСФ) лимфоцитов [Georgiev V.St., Albright J.E., 1993], а такжена участвующие в реализации гиперчувствительности IV типа Т-клеткипамяти и макрофаги [Ройт А., 1991]. В адоптивной реакции (связанной спереносом клеток, to adopt – принимать, присваивать) существуетвозможность оценить действие токсикантов на вторичный клеточныйиммунный ответ, формирование Th1-лимфоцитов в селезенке.Нами показано (табл. 6.2), что при острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) происходит снижение реакцииГЗТ (без переноса клеток) [p
151Таблица 6.2Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) на формирование гиперчувствительности замедленного типа укрыс по приросту массы задней стопы, % (М+m)Модели ГЗТТоксикантыРеакция без переносаклетокРеакция с переносомспленоцитов послеиммунизации ЭБКонтроль 26,5+1,0 (36) 78,4+2,7 (34)Метанол 18,1+2,1* 60,1+5,1*Этиленгликоль 20,2+1,9* 63,4+5,2*Этанол 23,5+2,3 66,5+5,0*Дихлорэтан 16,8+1,7* 50,2+5,4*Тетрахлорметан 19,5+2,0* 55,0+5,3*Трихлорэтилен 20,0+2,1* 61,2+5,5*Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;* - различие с контролем достоверно р
152исследованную реакцию ГЗТ (p
153группы токсикантов метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное сдозой ее снижение (рис. 6.1). Логично полагать, что такой же характердозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированнымуглеводородам.302520***К1510500,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МДХЭРис. 6.1. Изменение реакции гиперчувствительности замедленного типа(без переноса клеток) у крыс после острого отравления метанолом идихлорэтаном в зависимости от дозы, % (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат, %; К – контроль (n=36); в каждой сериииспользовалось 6-9 животных; *- различие с контролем достоверно - р
1546.3. Изучение антителозависимой клеточной цитотоксичностиПоследние исследования в области иммунологии показали, что клеткикиллеры- К-клетки (кроме миелоидных) - это ЕКК, использующие дляусиления реакции антитела (IgG) [Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов Р. М. исоавт., 2000; Delves P.J., Roitt I.M., 2000]. Естественные клетки-киллеры(ЕКК), активированные связанными с клеткой-мишенью (например, клеткой,пораженной вирусом) антителами, уничтожают ее. При этом антитела (IgG)привлекают своим Fc-хвостом ЕКК, имеющие для этого соответствующийFcγRIII. Возникает комплекс клетка-мишень – антитело – ЕКК, в которомЕКК реализует свою киллерную функцию в отношении клетки-мишени[Хаитов Р. М. и соавт., 2000]. Эта система получила названиеантителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ). Помимо ЕКК в этусистему входят полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ) – моноциты,базофилы, эозинофилы, сегментоядерные лейкоциты, а также другиефагоцитирующие и нефагоцитирующие миелоидные клетки [Ройт А., 1991].В использованной нами модели эксперимента исследовалась через 5 сутпосле иммунизации ЭБ вся система АЗКЦ: ЕКК (большие зернистыелимфоциты) и ПЯЛ в индуктивной (введение спиртов и хлорированныхуглеводородов одновременно с иммунизацией) и продуктивной фазахиммуногенеза (введение токсикантов через 3 сут после иммунизации).Проведенный анализ результатов исследований выявил, что придействии спиртов и хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД 50 на АЗКЦселезенки мышей в индуктивной фазе иммуногенеза происходитстатистически значимое уменьшение активности К-клеток при остромотравлении всеми исследованными токсикантами (р
155АЗКЦ в 1,28 раза). Этанол не вызывал редукцию АЗКЦ. Существенныеразличия (p
156существенные различия (p
157клетки (перекисное окисление липидов мембран ИКК, нарушение ихпроницаемости), приводящего к изменению соотношения цАМФ/цГМФ[Trinchievi G., de Marchi M., 1976] .При анализе супрессии АЗКЦ в индуктивный и продуктивный периодыиммуногенеза обращает на себя внимание увеличение эффекта редукциипараметра при введении спиртов и хлорированных углеводородов впродуктивный период формирования иммунного ответа. В наибольшейстепени это характерно для дихлорэтана.Таким образом, острое отравление спиртами и хлорированнымиуглеводородами дозозависимо снижает АЗКЦ спленоцитов преимущественнов продуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом.Хлорированные углеводороды обладают более выраженными эффектамиредукции АЗКЦ по сравнению со спиртами. Максимальная супрессияпоказателя характерна для дихлорэтана.6.4. Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами на активность естественных клеток-киллеров6.4.1. Действие токсикантов на активность ЕКК in vivoВ связи с продолжающей интенсивно развиваться иммунологиейменяются подходы к определению некоторых понятий и определений. Внастоящее время иммунитетом называются только те защитные процессы,которые реализуются с участием лимфоцитов [Хаитов Р.М. и соавт., 2000].Функцию ЕКК рассматривали как один из факторов неспецифическойрезистентности организма [Descotes J., 1986]. В настоящее время ЭКК в связис их возможностью уничтожать как клетки опухоли, так и клетки,пораженные вирусами или паразитами, а также ксеногенные клетки безпредварительного контакта с антигенами, находящимися на их поверхности,относят к клеточному иммунитету [Хаитов Р.М. и соавт., 2000].
158К ЕКК, открытым в 1976 году, относятся клетки, не имеющиеантигенных маркеров Т- и В-лимфоцитов (так называемые, О-клетки).Предполагают, что ЕКК происходят из предшественников Т-лимфоцитов[Ройт А., 1991]. ЕКК и К-клетки - это одни и те же клетки, отличающиесялишь механизмами реализации киллинга (убийства) клеток-мишеней. Приконтакте с клетками опухоли, клетками, пораженными вирусами илипаразитами, ксеногенными клетками ЕКК способны уничтожать их безпредварительного контакта с антигенами, находящимися на их поверхности.Они узнают определенные структуры высокомолекулярных гликопротеидов,которые экспрессируются на мембране инфицированных вирусом клеток[Ройт А. и соавт., 2000].Известно, что на поверхности естественных клеток-киллеровэкспрессированы следующие СD-маркеры: СD2, СD11b, СD16, СD27, СD30,СD39, CD56, CD57, СD62L, СD87, CD94, СD119 и СD132. ЕКК представленыпреимущественно клетками с маркерами СD16, CD56. Ингибируютцитотоксическую активность ЕКК субпопуляции нормальных (естественных)киллеров СD158а, СD158b [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Цитолиз клеткимишениосуществляется проникновением ферментов из гранул ЕКК вцитоплазму клетки-мишени (порообразование перфорином) [Хаитов Р. М. исоавт., 2000; Nogueira N., 1984]. Кроме того, ЕКК способны обеспечиватьуничтожение чужеродной клетки путем реализации "дыхательного взрыва"(поражение активными радикалами кислорода, гидроксильного радикала ит.п.), а также индукцией апоптоза. Активность ЕКК повышаетсяинтерферонами, интерлейкинами (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13)[Хаитов Р. М. и соавт., 2000; Шуршалина А.В. и соавт., 2001; Kimber I., MoreM., 1985]. ЕКК не обладают способностью к фагоцитозу [Петров Р.В., 1987;Ройт А., 1991].При изучении влияния на ЕКК (естественную цитотоксичность – ЕЦ)спиртов и хлорированных углеводородов нами установлено (табл. 6.3)
159статистически значимое уменьшение их активностипосле острогоотравлении всеми использованными токсикантами (р
160Следует отметить, что через 6 сут максимальное снижение ЕЦхарактерно для тетрахлорметана, при этом и через 9 сут отмечаетсятенденция к снижению параметра. Это обусловлено особенностямитоксикокинетики тетрахлорметана, связанными со способностью данногохлорированного углеводорода к более длительному депонированию в органахбогатых липидами по сравнению с дихлорэтаном, трихлорэтиленом испиртами [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004].Кроме того, учитывая то, что печень является органом, в котором образуетсябольшая часть ЕКК [Хаитов Р.М. и соавт., 2000], а тетрахлорметан обладаетмаксимальным гепатотропным эффектом из использованных нами ядов[Тиунов Л.А., 1990а; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000; КуценкоС.А., 2004], наиболее выраженная редукция активности ЕКК именно даннымтоксикантом вполне объяснима. Именно поэтому все хлорированныеуглеводороды, являясь гепатотропными ядами, поражают ЕКК в большейстепени, чем спирты.Исследование активности ЕКК через 3 сут после острого отравленияметанолом и тетрахлорметаном выявило прямо связанное с дозой ееснижение (рис. 6.4). Вполне логично допустить, что такой же характердозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированнымиуглеводородами.Снижение активности ЕКК под влиянием хлорированных углеводородов(и возможно спиртов), вероятно, связано с ингибированием их эстераз,которые, по-видимому, содержатся в ЕКК, как предполагаемых потомкахпредшественников Т-клеток [Ройт А., 1991]. Эффекты кортикостероидов икатехоламинов вследствие активации спиртами и хлорированнымиуглеводородами гипоталамо-гипофозарно-адреналовой системы и увеличенияконцентрации в крови кортикостероидов и катехоламинов [Тиунов Л.А.,1990а, 1990б] также обусловливают редукцию активности ЕКК [Rey A. et al.,
1611984; Маdden K. S., Livnat S., 1991; Claman H.N., 1983; Mc Even Bruce S. et al.,1997].30252015*****К10500,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0,75МТХМРис. 6.4. Изменение активности ЕКК мышей через 3 сут после остроговоздействия метанола и тетрахлорметана в зависимости от дозы (M+m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат, %; К – контроль (n=31); в каждой сериииспользовалось 7-10 животных; * - различие с контролем достоверно - р
162между эффектами редукции ЕЦ различными токсикантами, кроме этанола, неотмечается. В целом хлорированные углеводороды вызывают большуюредукцию ЕЦ по сравнению со спиртами.6.4.2. Влияние спиртов и хлорированых углеводородов на активностьЕКК селезенки in vitroРезультаты исследования по оценке влияния спиртов и хлорированыхуглеводородов в концентрациях, составляющих 1; 10; 50 и 100 мМ, наактивность ЕККбелых мышей in vitro показывают (табл. 6.4), что привоздействии хлорированных углеводородов в концентрации 1,0 мМпроисходит снижение ЕЦ (p
увеличении концентрации ядов163их эффект увеличивался. Существенныхразличий между эффектами различных хлорированных углеводородов (имежду эффектами различных спиртов) при эквимолярных концентрациях невыявлено. В среднем хлорированные углеводороды вызывали редукциюпоказателя в 1,31 и 1,50концентрациях соответственно 1,0 и 10 мМ.раз большую, чем спирты (p
164при концентрации 10 мМ - в 2,25; 3,12; 3,21 и 4,92 раза, а при концентрации50 мМ - в 3,09; 4,37; 5,94 и 7,87 раза (р
165иммунотоксический эффект глиоксиловой кислоты был достоверно вышегликолевой кислоты (p
166этиленгликоля, метанола и этанола на ЕКК в эквимолярных концентрацияхсущественно не отличались. Метаболиты этиленгликоля и метанола могутдействовать на сульфгидрильные и аминогруппы энзимов ЕКК, а такжеингибировать тканевое дыхание и окислительное фосфорилирование этихклеток [Parry M. F., Wallach M. D., 1974; Iokobsen D., 1984; Gabon P.A.,1986]. In vivo это может снижать активацию ЕКК также, вызывая недостатокпродукции ИЛ-2 и γ-интерферона Тh1-лимфоцитами [Сухих Г.Т. и соавт.1984; Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов Р.М. и соавт., 2000].Таким образом, in vitro редуцирующее действие спиртов ихлорированных углеводородов на активность ЕКК прямо зависит отконцентрации, а иммунотоксичность ядов обусловлена преимущественноэффектами их метаболитов. По степени снижения ЕЦ токсикантырасполагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол. В порядке увеличениясупрессии ЕКК дихлорэтан и его метаболиты располагались впоследовательности: дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид,хлоруксусная кислота, а спирты и их метаболиты – в последовательности:глиоксиловая, муравьиная кислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислотаи ацетальдегид.6.5. Определение взаимосвязи концентрации продуктовбиотрансформации дихлорэтана с показателями клеточного звенаиммунитета in vivoПосле острого отравления собак дихлорэтаном в дозе 3 г/кг через 3 сут вселезенке животных определяли содержание 2-хлорэтанола, хлоруксуснойкислоты и активность ЕКК и АЗКЦ. Установлено (рис. 6.5), что остроеотравление дихлорэтаном через 3 сут приводило к редукции ЕЦ и АЗКЦ посравнению с контролем соответственно в 1,99 и 2,40 раза (p
1672-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты, которое составляло соответственно0,23+0,05 и 1,75+0,24 мг/кг.3530252015*105*0К ДХЭ К ДХЭЕЦАЗКЦРис. 6.5. Влияние острого отравления дихлорэтаном (3 г/кг) на ЕЦ иАЗКЦ спленоцитов собак через 3 сут, (М+ m).По оси абсцисс: ЛД 50 ; по оси ординат, %; К – контроль - интактные собаки (n=5);отравление дихлорэтаном (ЕЦ и АЗКЦ, n=5); * - различие с контролем достоверно - р
168РезюмеМатериалы, приведенные в данной главе, позволяют заключить, что подвлиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) происходит снижение функции Т-клеток, оцениваемой поингибированию миграции лейкоцитов до 6-9 сут. По степени редукциифункции Т-лимфоцитов, связанной с синтезом фактора ингибированиямиграции лейкоцитов, спирты и хлорированные углеводороды в порядкеуменьшения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан -тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.Существенных различий в супрессии токсикантами активности Т-клеток невыявлено, за исключением действия дихлорэтана с эффектом этанола. Остраяинтоксикация спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимоснижает реакцию ГЗТ, характеризующую как первичный, так и вторичныйклеточный иммунный ответ. Наименьшей активностью обладает этанол.Действие остальных токсикантов существенно не отличается. В целомтоксический эффект хлорированных углеводородов превышает токсическоедействие спиртов. Выявленные изменения формирования ГЗТ в различныхмоделях позволяют полагать, что спирты и хлорированные углеводородывызывает супрессию Th1-лимфоцитов как в первичном, так и вторичномклеточном иммунном ответе.Острое отравление спиртами и хлорированными углеводородамидозозависимо снижает АЗКЦ спленоцитов преимущественно в продуктивнойфазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом. Хлорированныеуглеводороды обладают более выраженными эффектами редукции АЗКЦ посравнению со спиртами. Максимальная супрессия показателя характерна дляДХЭ.Спирты и хлорированные углеводороды дозозависимо снижаютактивность ЕКК в течение 1-9 сут. Этанол уменьшает параметр в течение 3-6сут. Существенных различий между эффектами редукции ЕЦ различными
169токсикантами, кроме этанола, не отмечается. В целом хлорированныеуглеводороды вызывают большую редукцию ЕЦ по сравнению со спиртами.In vitro редуцирующие эффекты спиртов и хлорированныхуглеводородов на активность ЕКК прямо зависят от концентрации.Иммунотоксичность ядов обусловлена преимущественно действием ихметаболитов. По степени снижения ЕЦ токсиканты располагались впоследовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан – трихлорэтилен –метанол – этиленгликоль – этанол. В порядке увеличения супрессии ЕККдихлорэтан и его метаболиты располагались в последовательности:дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид, хлоруксусная кислота, аспирты и их метаболиты – в последовательности: глиоксиловая, муравьинаякислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислота и ацетальдегид.Роль метаболитов хлорированных углеводородов в реализации ихиммунотоксичности подтверждена опытами на собаках, в которыхустановлена обратная корреляция между содержанием метаболитовдихлорэтана (2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты) в селезенке и ЕЦ иАЗКЦ спленоцитов собак (r составляли от – 0,767 до - 0,831 (p
170ГЛАВА 7.РОЛЬ ФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ,СИМПАТИКО-АДРЕНАЛОВОЙ СИСТЕМЫ,ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И АКТИВНОСТИЭСТЕРАЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ФОРМИРОВАНИИИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИСПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ7.1. Влияние токсикантов на функциональное состояние корынадпочечников и симпатико-адреналовой системы7.1.1. Изменение массового индекса надпочечников после остроговоздействия токсикантовИзвестно, что среди факторов, определяющих патогенез химическойпатологии, относительная масса (массовый индекс) надпочечников послеострого воздействия токсикантов (отношение массы надпочечника в мг кмассе тела животного в г) в определенной степени отражает реакцию ГГАС(стресс-реакцию) на химический раздражитель. Поэтому существуютоснования считать (согласно теории Г. Селье [1972]), что под влияниемхимических факторов из гипофиза секретируется АКТГ, которыйстимулирует синтез и инкрецию главным образом глюкокортикоидов, чемусоответствует гипертрофия пучковой зоны надпочечников. В меньшейстепени гипертрофируются зоны, секретирующие половые гормоны иминералокортикоиды [Лемус В. Б., Давыдов В. В., 1974; Горизонтов П.Д.,1981а]. Ряд токсикантов, к которым относятся, в частности, нитрилы[Забродский П.Ф., 1998; Szabo S., Selye H., 1971, 1972; Szabo S. et al., 1980], ифармакологических препаратов (дихлордифенилхлорэтан, ингибиторысинтеза белка, амфенон и др.) [Комиссаренко В.П., Резников А.Г., 1972],цианокетон (2-α-циано-4,4,17-α-триметил-17-β-гидрокси-5- андростен-3-он)
171[Dhabhar F.S. et al., 1996] способны ингибировать функцию корынадпочечников.Таким образом, изменение массы надпочечников в определенной степенисвидетельствует о реализации неспецифических механизмов (стресс-реакции)под влиянием токсикантов, в частности, спиртов и ХУ.Нашими исследованиями показано (табл. 7.1), что после отравленияспиртами и ХУ массовый индекс надпочечников через 1 сут статистическизначимо увеличивался (р
172быть обусловлено также под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов активацией симпатико-адреналовой системы [Сидорин Г.И. исоавт., 2004].Тенденция к снижению токсикантами массового индекса надпочечниковчерез 3 сут после воздействия (при объединении всех показателей в однугруппу эта редукция достоверна (р
173концентрации этих гормонов необходимы для реализации полноценногогуморального иммунного ответа [Корнева Е.А., 1990]. В то же времядоказано, что высокие концентрации кортикостероидов, в частности, приинтоксикации ФОС [Иванова А.С., 1998; Szot R.J., Murphy S.D., 1970],вызывают супрессию ряда показателей системы иммунитета [Хусинов А.А. исоавт., 1991; Забродский П.Ф., 1993; Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000;Claman H.N., 1983; Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985]. Всевышеизложенное послужило основанием для выявления значениякортикостероидов в патогенезе отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами.Нами установлено (табл. 7.2), что под влияние спиртов ихлорированных углеводородов содержание кортикостерона (КС) в плазмекрови через 1-3 ч после интоксикации увеличивается.Таблица 7.2Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ) на содержание кортикостерона в плазме кровикрыс, нг/мл (М + m)Токсиканты Контроль Время после воздействия, ч1 3 12Метанол 40,3+3,3* 28,9+3,1* 14,9+2,7ЭГ 44,2+4,0* 31,1+2,4* 17,0+1,9Э 19,7+1,4 38,3+3,1* 30,7+3,3* 20,5+1,8ДХЭ (23) 37,3+4,2* 35,5+3,2* 14,5+2,6ТХМ 40,3+3,3* 27,5+3,0* 15,5+2,7ТХЭ42,1+4,7* 33,2+2,8* 16,2+2,0Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;* - различие с контролем достоверно - р
174Анализируя экспериментальные данные, следует отметить, чтоувеличение КС в крови под влиянием ДХЭ и ТХМ, помимо общей для всехтоксикантов активации ГГАС, может быть обусловлено стимуляциейацетилхолином центральных м-холинореактивных структур, приводящей кувеличению продукции АКТГ [Гурин В.Н., 1970; Денисенко П.П.,Чередниченко Р.П., 1970; Денисенко П.П., 1980], вероятно, вследствие ихантихолинэстеразного эффекта.При вычислении коэффициентов корреляции между концентрациейкортикостерона в крови и АОК к ЭБ (см. главу 8) при остром отравлениикрыс метанолом и дихлорэтаном установлено, что они составлялисоответственно –0,715 (p
1757.1.3. Исследование влияния кортикостерона на основные показателисистемы иммунитетаДанные литературы свидетельствуют, что высокие концентрации КС, вчастности, при интоксикациях различными токсикантами, вызываютсупрессию ряда показателей системы иммунитета [Лазарева Д.Н., АлехинЕ.Н., 1985; Корнева Е.А., 1985, 1990; Claman H.N., 1983; Tiefenbach B. et al.,1980, 1983, 1985]. Вполне закономерно, что перед нами появилась задачавыяснить влияние КС в концентрациях, которые появляются в плазме кровипри интоксикациях спиртами и хлорированными углеводородами, наосновные показатели системы иммунитета. Это позволит определитьудельный вес кортикостероидов в формировании иммунодефицитногосостояния при отравлениях данными ТХВ.Наши эксперименты позволили установить (рис. 7.1), что под влияниемдвухкратного введения кортикостерона в дозах 1,0 и 0,5 мг/кг соответственнос интервалом 2 ч основные показатели системы иммунитета существенноснижаются. Следует отметить, что введение КС в указанных дозах вызывалоувеличение данного гормона в крови через 1 ч до 45,2+4,5 нг/мл (n=7), ачерез 3 ч – до 26,9+3,7 нг/мл (контроль составлял – 19,7+1,4 нг/мл). Данныеконцентрации приблизительно соответствовали содержанию КС в плазмекрови после интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами вдозе 0,75 ЛД 50 .Супрессия Т-зависимого, Т-независимого антителообразования (числоАОК к ЭБ и Vi-Ag cоответственно), Т-звена иммунитета (реакция ГЗТ),активности ЕКК (ЕЦ) и АЗКЦ под влиянием экзогенного КС в дозах 1,0 и 0,5мг/кг соответственно с интервалом 2 ч составила соответственно 19,7; 21,7;18,3; 25,1 и 25,4%. При этом достоверны только сдвиги числа АОК к ЭБ и ЕЦ(p
17635302520151050**К КС К КС К КС К КС К КСАОК к ЭБ АОК к Vi-Ag ГЗТ ЕЦ АЗКЦРис. 7.1. Влияние кортикостерона (в дозах 1,0 и 0,5 мг/кг с интервалом2 ч соответственно) на показатели системы иммунитета у крыс.По оси абсцисс: К – контроль (n=5-7), действие КС (n=5-7); по оси ординат: АОК кЭБ, 10 3 ; АОК к Vi-Ag, 10 3 ; реакция ГЗТ, ЕЦ, АЗКЦ, %; * - различия достоверны посравнению с контролем –р
177углеводородов также способна изменять физиологическую регуляциюиммунного гомеостаза [Dhabhar F.S. et al., 1996].Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют о том,что концентрация кортикостерона, соизмеримая с содержанием этого гормонав крови при острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами, играет весьма незначительную роль в супрессиигуморальной иммунной реакции и клеточного звена иммунитета (ЕЦ, АЗКЦ иреакции ГЗТ, характеризующей функцию Th1-лимфоцитов и макрофагов).7.1.4. Влияние спиртов и хлорированных углеводородовна функциональное состояние симпатико-адреналовой системыВ литературе имеются лишь отдельные сообщения, что активация ГГАС(стресс-реакция) при острой интоксикации ксенобиотиками (в частности,ФОС) вызывает увеличение в крови кортикостероидов, а также приводит кувеличению функциональной активности САС. Это сопровождаетсяповышением содержания в крови катехоламинов (КА): адреналина (А),норадреналина (НА) [Brzezinski J., 1972]. В настоящее время роль САС, вчастности, А и НА при остром отравлении различными токсикантами вреализации основных иммунных реакций исследовано не достаточно[Забродский П.Ф.,1998, 2002]. В целом, изучение реакции организма наострое отравление ТХВ является лишь частным исследованиемпостстрессорных изменений в организме и вопросов профилактики ихпоследствий [Сухих Г.Т. и соавт., 1984].Кроме того, существуют основания предполагать, что глюкокортикоидыспособны модулировать иммунотропные эффекты ксенобиотиков ифизических факторов. Так, при постинтоксикационной стресс-реакции КА,возможно, способны усиливать иммунодепрессивный эффекткортикостероидов [Rey A. et al., 1984]. Известно, что супрессирующее
178действие кортикостероидов на суммарную фагоцитарную активностьфагоцитов частично отменяется блокадой β-адренорецепторов [Шилов Ю.И.,Ланин Д.В., 2001].В наших исследованиях установлено (рис. 7.2), что спирты ихлорированные углеводороды в дозе 0,75 ЛД 50 статистически значимоувеличивают концентрацию А и НА в плазме крови крыс.161412********10864**** ***20К 1 2 3 4 5 6 К 1 2 3 4 5 6АРис. 7.2. Содержание адреналина и норадреналина в плазме крови крыспосле острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) через 3 ч, мкг/л (M+m).По оси абсцисс: К – контроль; 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭсоответственно; по оси ординат: концентрация А и НА в плазме крови, мкг/л; в каждойсерии опытов использовали 9-10 крыс; *; **- различие с контролем достоверно – р
179метанола, этанола, этиленгликоля, дихлорэтана, тетрахлорметана итрихлорэтилена не выявлено. Следует отметить, что именно через 3 чадреналин и норадреналин оказывают максимальное воздействие наперераспределение иммуноцитов между органами системы иммунитета[Techima H.et al., 1991].На основании результатов исследований, можно отметить, чтоувеличение КА в плазме крови под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов обусловлено реализацией стресс-реакции, активациейсимпатико-адреналовой системы [Горизонтов П. Д., 1981б]. Кроме того,дихлорэтан и тетрахлорметан могут оказывать антихолинэстеразный эффект[Тиунов Л.А., 1990а], в результате которого ацетилхолин возбуждает н-холинорецепторы мозгового вещества надпочечников [Судаков К.В., 1983;Денисенко П.П., 1980; Виноградов В.М. и соавт., 1986], что приводит квыделению адреналина в циркулирующую кровь.Исследованиями многих авторов в настоящее время доказано наличие налимфоцитах β-адренорецепторов, на которые способны воздействовать КА,повышая в физиологических концентрациях иммунные реакции, заисключением активности ЕКК [Маdden K.S., Livnat S., 1991]. Также отмеченоусиление дифференцировки незрелых лимфоидных клеток [Coffey R.G.,Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988] подвлиянием активации их β-адренорецепторов.Поэтому проблема нарушения САС при отравлениях различными ядамиимеет важное теоретическое и практическое значение и нуждается вовсестороннем исследовании. Проведенные эксперименты предполагаютизучение изменения иммунных реакций под влиянием доз адреналина инорадреналина, которые способны создать концентрацию в крови,соизмеримую с содержанием КА под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов.
180Коэффициенты корреляции между концентрацией адреналина в крови иАОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлении крыс дихлорэтаномсоставляли соответственно –0,708 (p
181селезенке), АЗКЦ в 1,38; 1,59 и 1,43 раза соответственно. При введениикрысам НА в дозе 0,025 мг/кг (данная доза обеспечивала содержание НА вкрови – 4,1+0,7 мкг/л – соизмеримое с концентрацией этого медиатора придействии спиртов и хлорированных углеводородов) происходилонезначительное (p>0,05) увеличение Т-зависимого иммунного ответа (числоАОК к ЭБ в селезенке), Т-независимой иммунной реакции (число АОК к Vi-Ag в селезенке) и АЗКЦ.Таблица 7.3Влияние адреналина и норадреналина на основные иммунные реакциив плазме крови крыс (М+m)Параметры Контроль Адреналин, мг/кг Норадреналин, мг/кг0,025 1,0 0,025 1,0А, мкг/л 6,82+1,03 15,5+2,5* - - -Н, мкг/л 1,95+0,27 - - 4,1+0,7* -ЕЦ,% 22,4+3,0 18,1+2,5 16,0+2,1* 17,4+2,3 12,4+2,3*АОК к ЭБ, 10 3 27,2+2,5 37,5+3,5* 20,2+2,2* 34,7+3,1 19,3+1,9*АОК к 18,4+1,9 29,2+3,2* 12,1+1,3* 25,0+2,3 12,1+1,1*Vi-Ag, 10 3АЗКЦ, % 9,5+1,4 13,6+1,3* 5,8+0,8* 13,1+1,2 6,0+0,7*Реакция ГЗТ % 28,3+2,6 35,7+3,1 18,8+1,8* 30,6+2,6 17,7+1,7*Примечание: А – адреналин, НА – норадреналин; в каждой серии опытов использовалось7-9 крыс; * - различия достоверны по сравнению с контролем р< 0,05.По нашему мнению, менее выраженная активация иммунных реакцийНА связана с тем, что данный медиатор в отличие от А стимулируетпреимущественно β-адренорецепторы иммуноцитов. Именно данныеструктуры, а не α-адренорецепторы обеспечивают активацию лимфоцитов[Rinner I., et al., 1995]. Доза А, составляющая 0,025 мг/кг, вызывала менеевыраженную стимуляцию Т-зависимого антителообразования по сравнению стимуснезависимым (соответственно в 1,38 и 1,59 раза).Установлено, что в дозе 1,0 мг/кг А и НА вызывали редукцию всехисследованных иммунных реакций. Следует отметить, что испытанная доза
182А и НА способна создать концентрацию в плазме крови, превышающуюсодержание данных КА после острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) более, чем в 30 раз (с учетомбиотрансформации, взаимодействия с рецепторами и выведения эти значениямогут быть несколько меньшими). Усиление дифференцировки незрелыхлимфоидных клеток [Coffey R.G., Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988] под влиянием активации их β-адренорецепторов объясняет выявленное нами и описанное в литературеувеличение антителопродукции преимущественно к Т-независимомуантигену при введении А и НА в малых дозах [Gilbert R.V., Hoffmann M.K.,1985; Holte H. et al., 1988].Имеются данные, что стимулирующее действие КА опосредуется черезα- и β-адренорецепторы иммуноцитов, путем синтеза цАМФ, приводящего кпродукции соответствующих интерлейкинов, осуществляющих регуляциюиммунных реакций [Маdden K. S., Livnat S., 1991]. Кроме того, известно, чтоцАМФ стимулирует дифференцировку незрелых лимфоидных клеток [CoffeyR.G., Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988].Предполагают, что активация β-адренорецепторов иммунокомпетентныхклеток в первые 12 ч после (индуктивная фаза иммунного ответа)антигенного стимула увеличивает антителообразование.Данные литературы свидетельствуют, что увеличение под влияниемадреналина L3T4 (Т-хелперов/Тгзт – Тh1) и особенно Lyt-1 (Т-хелперов/Тгзт),а также Lyt-2 (цитотоксических Т-лимфоцитов/Т-супрессоров – CD8) вселезенке мышей через 90 мин после его введения [Techima H.et al., 1991],видимо, обусловливает активацию индуктивной фазы иммуногенеза,сопровождающуюся увеличением числа АОК, реакции ГЗТ и АЗКЦ.Существуют основания полагать, что увеличение А и НА в крови при остройинтоксикации дихлорэтаном и тетрахлорметаном сопровождается ихуменьшением в мозгу и надпочечниках вследствие действия ацетилхолина
183[Brzezinski J., 1972]. Угнетение иммунных реакций при высоких дозах КА[Денисенко П.П., 1980] объясняется тем обстоятельством, что эти дозыявляются пусковым фактором В-клеточной активации, но одновременноподавляют Т-клеточную хелперную активность [Gilbert R.V., Hoffmann M.K.,1985]. Незначительная редукция ЕЦ под влиянием КА обусловленаувеличением соотношения цАМФ/цГМФ [Garoroy M.R. et al., 1975].Доказано, при адреналэктомии функция ЕКК повышается [Маdden K. S.,Livnat S., 1991]. Не исключено, что введение КА в продуктивную фазуиммунного ответа может приводить к сдвигам исследованных иммунныхреакций существенно отличающихся от описанных.Таким образом, при действии адреналина и норадреналина вконцентрации соизмеримой с содержанием данных медиаторов после остройинтоксикации спиртами и ХУ (введение А и НА в дозе 0,025 мг/кг)вызывает увеличение основных иммунных реакций. Следовательно, несмотряна выявленную обратную корреляцию между Т-зависимым гуморальнымиммунным ответом, реакцией ГЗТ и концентрацией адреналина в кровипосле острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами,иммуносупрессивные эффекты данных токсикантов не связаны сувеличением концентрации при их остром действии в плазме крови А и НА.Доза А и НА, составляющая 1,0 мг/кг, вызывает редукцию основныхпоказателей гуморального и клеточного звена иммунитета.7.2. Изменение активности эстераз Т-клеток и спленоцитовпод влиянием спиртов и хлорированных углеводородовК настоящему времени достоверно установлено, что неспецифическиеэстеразы, как и кислые фосфатазы, являются лизосомальными ферментами.Эти энзимы играют важную роль в реализации киллерной функции Т-лимфоцитов [Ледванов М. Ю., Киричук В. Ф., 1996; Fergula J. et al., 1972; LiC.G., et al., 1983]. Изменение эстеразной активности в клетках отражает, с
184одной стороны, функциональную активность иммуноцитов, с другой - можетслужить количественным критерием Т-клеток в циркулирующей крови, таккак именно эта субпопуляция лимфоцитов является эстеразопозитивной[Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983; Ferluga J. et al., 1972; Li C. G et al.,1973;Kutty K. M. et al., 1976; Кullenkampff J. et al., 1977]. Роль ацетилхолинэстеразына поверхности Т-лимфоцитов [Kutty K. M. et al., 1976; Szelenyi J.G. et al.,1982] до сих пор не ясна. Возможно, она регулирует влияние ацетилхолина нахолинореактивные структуры Т-лимфоцитов [Забродский П.Ф. , ГерманчукВ.Г., 2001; Gordon M.A. et al., 1975; Richman D.P., Arnason B.G.W., 1979].Данные литературы позволяют предполагать, что хлорированныеуглеводороды способны ингибировать эстеразы Т-клеток [Тиунов Л.А.,1990а; Куценко С.А., 2004; Куценко С.А. и соав., 2004]. Вышеизложенноепослужило основанием для выполнения настоящего раздела исследования.Проведенные нами опыты показали (табл. 7.4), что под влияниемхлорированных углеводородов активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Т-лимфоцитах тимуса и селезенки у крыс через 3 сут существенно снижается.Таблица 7.4Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) на активность ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимусаи селезенки у крыс (мЕд/10 9 ) через 3 сут (M+m)Токсиканты Тимус СелезенкаКонтроль 69,2+7,0 58,4+6,1Метанол 61,4+6,9 51,0+ 5,7Этиленгликоль 73,1+7,2 62,4+ 6,0Этанол 64,7+6,8 55,2+ 5,3Дихлорэтан 44,5+5,3* 37,5+ 4,5*Тетрахлорметан 48,0+6,1* 45,0+4,8**Трихлорэтилен 54,5+5,7** 48,4+4,7**Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс; *; **- различие с контролемдостоверно - р
185АХЭ в Т-лимфоцитах тимуса соответственно в 1,55; 1,49 и 1,27 раза (р
186дихлорэтан в среднем снижал активность эстераз на 32,9%, атетрахлорметан и трихлорэтилен – на 21,9% (р
187вызываемое токсикантами (например, ФОС), ослабляет процессэстеразозависимой детоксикации, в результате чего способствует развитиюпроцесса лимфомогенеза. Кроме того, снижение активности эстеразподавляет иммунитет к таким патогенам, способствующим развитиюлимфом, как герпесвирусы [Newcombe D.S., 1991]. Учитывая изложенноепредположение, можно считать, что кроме ФОС хлорированныеуглеводороды, обладающие антихолинэстеразным эффектом, способнывызывать лимфомы вследствие их способности ингибировать эстеразы Т-клеток.Коэффициент корреляции между активностью ацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса крыс и АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлениикрыс дихлорэтаном составляли соответственно 0,755 (p
188Т- лимфоцитах тимуса, содержанием эстераз в спленоцитах крыс послеострого отравления хлорированными углеводородами.7.3. Изменение показателей перекисного окисления липидовпосле острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородамиПроцессы перекисного окисления липидов до сих пор привлекаютвнимание многих исследователей и интенсивно изучаются при отравленияхксенобиотиками [Абдрашидова Н.Ф., Романов Ю.А., 2001; Бурмистров С.О. исоавт., 2001] и самых различных патологических состояниях [Лукьянова Л.Д.и соавт., 2001; Зарубина И.В., Миронова О.П., 2001; Плужников Н.Н. исоавт., 2003а, 2003в]. Известно, что перекисное окисление липидов мембран,в том числе и ИКК при остром отравлении различными ТХВ включаетследующие стадии: разрыхление гидрофобной области липидного бислоямембран, что делает белковые компоненты более доступными для протеаз;появление в гидрофобном хвосте жирной кислоты гидрофильной перекиснойгруппы, приводящее к конформационным изменениям в фосфолипиде илипопротеидном комплексе, что изменяет биофизические свойствамембраны и ферментативные функции липопротеидных комплексов;разрушение веществ, обладающих антиоксидантной активностью(витаминов, стероидных гормонов, убихинона) и снижающих концентрациитиолов в клетке; образование по мере накопления гидроперекиси липидовтрансмембранных перекисных кластеров, являющихся каналамипроницаемости для ионов, в частности для ионов кальция. Формированиетаких каналов патологической проницаемости может играть важную роль ввозникновении избытка кальция в иммунокомпетентных клетках иреализации повреждающего действия этого катиона [Меерсон Ф.З., 1984;Плужников Н.Н. и соавт., 2003а]. В дальнейшем происходит изменениефункциональных свойств белков, входящих в состав мембран и
189мембраносвязанных ферментов и рецепторов, от их активации до полногоингибирования. Это может быть связано с изменением составафосфолипидных мембран ИКК, с прямым окислением SH-групп в активныхцентрах мембраносвязанных ферментов, с образованием внутри- имежмолекулярных "сшивок", гидроперекисей липидов, способных такжетрансформировать активность ряда ферментов, например,моноаминооксидазы с моноаминов на другие амины, а малоновыйдиальдегид может образовывать ковалентные связи со многими амидамиИКК [Арчаков А.И., 1993; Плужников Н.Н. и соавт., 2003б].Ранее было показано, что весьма высокотоксичным и относительностабильным является супероксидный анион. Он взаимодействует смолекулами белка, липопротеидов, вызывает разрыв спиралей ДНК,окисление тиоловых групп, инициирует ПОЛ, вызывая структурныенарушения биологических мембран иммуноцитов и других клеток. С прямымили опосредованным через другие активные формы кислорода действиемсупероксидного аниона связывают мутагенные и канцерогенные эффекты, атакже нарушение многочисленных функций иммунитета [Голиков С.Н. исоавт., 1986; Арчаков А.И., 1993; Плужников Н.Н. и соавт., 2003а, 2003б;Куценко С.А., 2004].В литературе имеются сведения о том, что исследование суммарнойпродукции радикалов (СПР), активности каталазы, пероксидазы иколичественного содержания малонового альдегида являютсяинформативными показателями ПОЛ при интоксикацияхТХВ [Кунцевич А.Д.и соавт., 1994]. Доказано, что каталаза и пероксидаза характеризуютактивность ферментативной антиоксидантной защиты, а малоновый альдегидявляется показателем развития процессов ПОЛ.Наши исследования по оценке влияния спиртов и хлорированныхуглеводородов на ПОЛ показали (табл. 7.5), что все испытуемые токсикантыактивируют интенсивность процессов свободно – радикального ПОЛ.
190Таблица 7.5Действие острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) на показатели перекисного окисления липидов у крыс через 3 сут(M+m)ТоксикантыСуммарнаяпродукциярадикалов,усл. ед.Каталаза,ммоль/мин/лПероксидаза,мкмоль/мин/лМалоновыйдиальдегид,нмоль/млКонтроль 20,4+5,9 264,5+27,5 39,7+3,9 6,54+0,51М 48,3+6,0* 162,8+ 27,5 29,3+ 2,9** 8,56+ 0,58*ЭГ 43,2+6,3* 176,0+ 24,5** 28,0+ 2,7* 9,07+ 0,61*Э 31,4+6,2** 187,5+ 20,1** 30,3+ 2,5** 7,38+ 0,50ДХЭ 65,7+6,8* 145,2+ 25,0* 23,7+ 2,4* 9,05+ 0,60*ТХМ 70,2+9,0* 135,7+ 20,7* 20,1+ 2,0* 9,89+ 0,64*ТХЭ 51,0+6,7* 150,0+ 26,8* 24,0+ 2,3* 8,68+ 0,67*Примечание: в каждой серии использовалось от 9 до 14 крыс; *; **- различие с контролемдостоверно - р
191Аналогичное действие токсиканты оказывали на активность пероксидазы.Статистически значимых различий в редукции данных показателей подвлиянием различных спиртов и хлорированных углеводородов не выявлено.При вычислении средней степени активации ПОЛ хлорированнымиуглеводородами и спиртами установлено, что хлорированные углеводородыинициируют ПОЛ в 2,01 раза, а спирты – в 1,54 раза (p
192внутриклеточных мембран (олеиновая, линолевая, линолиновая,арахидоновая), которые в свою очередь образуют свободный радикал какрезультат акта одноэлектронного окисления (отрыв атома водорода отреагирующей цепи). Образуются радикалы (RО + 2) и гидроперекиси (RООН)жирных кислот, что приводит к структурной и функциональной перестройкемембран. В результате увеличивается проницаемость мембран для ионов Н + ,К + , Nа + , Са 2+ с последующим пространственным разобщением окислительныхцепей [Меерсон Ф.З. 1984; Плужников Н.Н. и соавт., 2003а]. Наконец,разрывается мембрана с выходом внутриклеточных протеолитическихферментов и клетка погибает [Лужников Е.А., 1999]. На наш взгляд,приведенные факты в полной мере можно отнести к ММС и лимфоцитам.Процесс этот носит специфический характер только в самом начале - настадии образования радикала ССl + 3, который запускает всю цепь. Весьмеханизм переоксидации липидов как цепной реакции, однаждыиндуцированной, является неспецифическим. Это обычный, стандартныйпуть повреждения внутриклеточных мембран, которым завершается любаяпатология, любое острое отравление ксенобиотиками, ведущие к истощениюантиоксидантных систем организма. Однако имеются работы, в которыхдоказано повреждение тетрахлорметаном мембран лизосом клеток, несвязанного с ПОЛ, и последующее высвобождение и активация кислыхгидролаз [Ахматова М.А. и соавт., 1982].Коэффициенты корреляции между показателями системы иммунитета(числом АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ) при остром отравлении тетрахлорметаноми суммарной продукцией радикалов составили соответственно -0,732(p
193углеводородов составляли от -0,639 до -0,769. Значения r междупараметрами были статистически значимы, за исключением показателей,сравниваемых после действия этанола.Таким образом, острая интоксикация спиртами и хлорированнымиуглеводородами приводит к инициации интенсивности процессов свободнорадикальногоПОЛ, что проявляется угнетением активности ферментативнойантиоксидантной защиты (редукция каталазы и пероксидазы) и увеличениемсуммарной продукции радикалов и количественного содержания малоновогоальдегида в плазме крови. Хлорированные углеводороды в целом в большейстепени инициируют ПОЛ, чем спирты. Установлена прямая корреляциямежду показателями гуморального, клеточного звена иммунитета иактивностью каталазы, пероксидазы в крови крыс и обратная корреляциямежду Т-зависимой гуморальной иммунной реакцией, ГЗТ и суммарнойпродукцией радикалов, количественным содержанием малонового альдегидав плазме крови крыс после острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами. Инициация интенсивности процессов свободнорадикальногоПОЛ под влиянием спиртов и хлорированных углеводородовявляется одним из факторов, способствующих формированиюпостинтоксикационного иммунодефицитного состояния.РезюмеНа основании результатов наших исследований можно отметить, что подвлиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородамипроисходит активация ГГАС (регистрируемая по функции корынадпочечников) вследствие постинтоксикационной стресс-реакции.Выявлено, что при отравлении токсикантами через 1 сут относительная массанадпочечников увеличивается, через 3 сут она незначительно уменьшается,восстанавливаясь до контрольного значения в течение 6 сут. Острое действиеспиртов и хлорированных углеводородородов повышает концентрациюкортикостерона в плазме крови через 1 и 3 ч. Затем в последующие 24 ч
194содержание КС в плазме крови после действия токсикантоввосстанавливается до контрольного значения. Установлена обратнаякорреляция между гуморальной иммунной реакцией, формированием ГЗТ иконцентрацией кортикостерона в крови после острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами.Доказано, что концентрация кортикостерона, соизмеримая ссодержанием этого гормона в крови при острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами, способна играть определенную роль всупрессии Т-зависимой гуморальной иммунной реакции и клеточного звенаиммунитета (ЕЦ, АЗКЦ и реакции ГЗТ, характеризующей функцию Th1-лимфоцитов и макрофагов).Острое отравление спиртами и хлорированными углеводородами (0,75ЛД 50 ) приводит к активации САС, что сопровождается статистическизначимым увеличением концентрации адреналина и норадреналина в плазмекрови крыс. Существенных различий между токсическими эффектамиметанола, этиленгликоля, этанола, дихлорэтана, тетрахлорметана итрихлорэтилена не выявлено. Установлена обратная корреляция между Т-зависимым гуморальным иммунным ответом, ГЗТ и концентрациейадреналина в крови после острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами.При действии адреналина в концентрации соизмеримой с содержаниемданных медиаторов после острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами (введение А и НА в дозе 0,025 мг/кг) установленоувеличение основных иммунных реакций. Следовательно, несмотря навыявленную обратную корреляцию между Т-зависимым гуморальнымиммунным ответом, реакцией ГЗТ и концентрацией адреналина в кровипосле острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами,иммуносупрессивные эффекты данных токсикантов не связаны сувеличением концентрации при их остром действии в плазме крови А и НА.
195Доза А и НА, составляющая 1,0 мг/кг, вызывает редукцию основныхпоказателей гуморального и клеточного звена иммунитета.Острая интоксикация дихлорэтаном, тетрахлорметаном итрихлорэтиленом вызывает существенное снижение активностиацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса и селезенки, α-нафтил-АSацетатэстеразыи α-нафтилбутиратэстеразы в спленоцитах крыс. При этомантиэстеразный эффект испытуемых спиртов не выявлен. Установленапрямая корреляция между Т-зависимым гуморальным иммунным ответом,ГЗТ и активностью ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимуса,содержанием эстераз в спленоцитах крыс после острого отравленияхлорированными углеводородами.Токсическое действие спиртов и хлорированных углеводородовприводит к инициации интенсивности процессов свободно-радикальногоПОЛ, что проявляется угнетением активности ферментативнойантиоксидантной защиты. Хлорированные углеводороды в целом в большейстепени инициируют ПОЛ, чем спирты. Установлена прямая корреляциямежду показателями гуморального, клеточного звена иммунитета иактивностью каталазы, пероксидазы в крови крыс и обратная корреляциямежду Т-зависимой гуморальной иммунной реакцией, ГЗТ и суммарнойпродукцией радикалов, содержанием малонового альдегида в плазме кровикрыс после острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами.Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что впатогенезе формирования иммунодефицита после острого отравленияспиртами и хлорированными углеводородами важную роль играютпостинтоксикационная активация ГГАС, увеличение функциинадпочечников, приводящие к возрастанию концентрации кортикостероидовв крови, инициация ПОЛ, а также ингибирование хлорированнымиуглеводородами эстераз Т-клеток.
196ГЛАВА 8.КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ СПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИУГЛЕВОДОРОДАМИ8.1. Патогенетическое обоснование коррекции нарушенийнеспецифической резистентности организма и основных гуморальных иклеточных иммунных реакций после острого отравления спиртами ихлорированными углеводородамиПатогенетическое обоснование научных принципов, средств и методовприменения различных лекарственных средств и анализ их возможнойэффективности для коррекции нарушений механизмов регуляциииммуногенеза при острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами предполагает краткое рассмотрение широко используемых внастоящее время для профилактики и лечения вторичныхиммунодефицитных состояний иммуностимуляторов [Германчук В.Г., 2000;Беликов В.Г., 2001; Молотков А.О., 2002; Василенко О.А., 2004;Сидельникова Н.М., 2004; Нестерова И.В., 2005].Исследованиями многих авторов доказано, что к иммуностимуляторамобычно относят соединения, способные увеличивать нормальный илипониженный гуморальный и клеточный иммунный ответ [Лазарева Д.Н.,Алехин Е.К., 1985; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 1995]. В настоящее времяиммуностимуляторы по основным функциональным признакамподразделяются на препараты, стимулирующие преимущественно НРО(продигиозан, метилурацил, пентоксил, нуклеинат натрия, ликопид),клеточный иммунитет (тималин, тактивин, тимоптин, тимоген, витамин А,молграмостин, леакадин), В-систему иммунитета (миелопид, спленин)[Виноградов В.М. и соавт., 1986; Утешев Б.С. и соавт., 1995; Хаитов Р.М. исоавт., 2000, 1995; Коготкова О.И. и соавт., 2004; Сидельникова Н.М., 2004].
197Известно, что по происхождению иммуностимуляторы подразделяютсяна продукты жизнедеятельности микроорганизмов, растений и животных(полисахариды, фосфолипиды мембран, гликопептиды, модифицированныетоксины, ДНК и РНК микроорганизмов, вакцины и др.) [Лазарева Д.Н.,Алехин Е.К., 1985; Виноградов В.М. и соавт., 1986; Хаитов Р.М. и соавт.,2000; Чекнёв С.Б, Бабаева Е.Е, 2004; Медуницин Н.В., 2005; ХабибуллаевБ.Б., 2005; Khaitov R.M., 1993], пептидные эндогенные стимуляторыиммунитета (препараты тимуса, селезенки, костного мозга, интерлейкины,интерфероны и др.) [Арион В.Я., 1981; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1978,1983; Яковлев Г.М. и соавт., 1987; Базарный В.В., Ястребов А.П., 1990;Нестерова И.В., 2005; Петров Р.В. и соавт., 2005; Minich E. et al., 1983;Georgiev V.St. et al., 1993; Stevens G., 1993], синтетические стимуляторыиммунитета (левамизол, леакадин, тимоген) [Утешев Б.С. и соавт., 1995;Kimball E. S., 1993; Janik G., Kopp W.C., 1993; Sosa М., Sana A., 1993],стимуляторы метаболических процессов - экстраиммунная терапия(анаболические гормоны, рибоксил, плазмол, витамины и др.) [Лазарева Д.Н.,Алехин Е.К., 1985; Хаитов Р.М. и соавт., 1995].Наряду с иммуностимуляторами для коррекции постинтоксикационныхнарушений системы иммунитета могут использоваться средстваэкстраиммунной терапии - стимуляторы метаболических процессов,антигипоксанты, психоэнергизаторы, актопротекторы (анаболическиегормоны, рибоксил, плазмол, витамины пирроксан, цитохром С, олифен,бемитил, пирацетам, оротат калия, инозин и др.) [Плецитый К.Д., Сухих Г.Т.,1984, 1985; Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., 1985; Забродский П.Ф., 1986; ХаитовР.М. и соавт., 1995; Зарубина И.В., Миронова О.П., 2001].Кроме того, синтетические низкомолекулярные пептиды (тафтсин, егоаналог ригин, вещество Р, трипептид SKE и др.) также обладаютиммуностимулирующей активностью [Чейдо М.А. и соавт., 1990;Белокрылов Г.А. и соавт., 1999]. Характерная особенность данных пептидов
198– наличие в их химических структурах основных аминокислот (аргинина илизина), а также тирозина и фенилаланина, определяющих специфичностьдействия иммуностимуляторов [Чейдо М.А. и соавт., 1990]. Так,хлорированные углеводороды левамин и церебролизин (смесииммуноактивных и неактивных аминокислот) при пероральном введениикрысам в дозе 10-500 мкг/кг усиливают Т-зависимый иммунный ответ[Белокрылов Г.А. и соавт., 1991а].Число существующих в настоящее время средств коррекции нарушенийсистемы иммунитета включает несколько сотен соединений, однако широкоиспользуются лишь несколько десятков из них. Необходимо учитывать, чтопрактически все иммуностимуляторы имеют те или иные нежелательныепобочные эффекты. Однако при применении тимогена, Т-активина иимунофана они не выявлены [Хавинсон В.Х. и соавт., 1990; Забродский П.Ф.,Германчук В.Г., 2001], а при использовании миелопида – незначительны[Машковский М.Д., 2000].Поэтому помимо имеющихся на сегодня данных об иммунотропныхэффектах токсикантов при назначении иммуностимуляторов в случаяхострых и хронических отравлений спиртами и хлорированнымиуглеводородами необходимо руководствоваться поставленнымиммунологическим диагнозом, то есть характером нарушения комплексапоказателей НРО и системы иммунитета [Ширинский В.С., ЖукЕ.А.,1991;1994]. Иммунотерапия должна проводиться на фонемониторирования иммунного статуса, причем должна проводиться не толькомоно-, но и комбинированная иммуномодулирующая терапия [НестероваИ.В., 2005].Известно, что клеточное звено иммунитета, которое в наибольшейстепени поражается при интоксикации всеми использованными спиртами ихлорированными углеводородами, кроме менее выраженного эффекта на Т-клетки метанола (впрочем, стимуляторы Т-звена иммунитета обязательно
199будут стимулировать в той или иной степени В-систему иммунитета, тесносвязанную и зависимую от функции Т-клеток), может коррегироватьсятималином, Т-активином, тимоптином, тимогеном и другими препаратами,полученными из тимуса, и их синтетическими аналогами [Морозов В.Г.,Хавинсон В.Х., 1978, 1983; Арион В.Я.,1981; Лазарева Д.Н., Алехин Е.К.,1985; Виноградов В.М. и соавт., 1986; Яковлев Г.М. и соавт., 1987; БазарныйВ.В., Ястребов А.П., 1993; Белокрылов Г.А. и соавт., 1991б; Утешев Б.С. исоавт., 1995; Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., 1999; Minich E., Fefer A., 1983;Georgiev V.St. et al., 1993; Khaitov R.M., 1993; Kimball E. S., 1993; Janik G.,Kopp W.C., 1993; Stevens G., 1993; Sosa M., Sana A., 1993].Изучение иммуностимулирующих характеристик различных препаратов[Осипова Л.О.,1990; Хавинсон В.Х. и соавт., 1990; Яковлев Г.М. и соавт.,1990; Гюллинг Э.В. и соавт., 1991; Земсков В.М., 1991; Петров Р.В., 1991;Ширинский В.С., Жук Е.А.,1991, 1994; Семина О.В. и соавт., 1993, 1997;Юшков В.В., Хавинсон В.Х., 1993; Утешев Б.С. и соавт., 1995; Ершов Ф.И.,1995; Невидимова Т.И., Суслов Н.И., 1995; Жук Е.А., Галенюк В.А., 1996;Нечаев В.И. и соавт., 2003; Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., 1999; ЗабродскийП.Ф. и соавт., 2004а; Елизарова Н.Л. и соавт., 2005] показывает, что наиболееэффективным при нарушении Т-звена иммунитета и снижении активностиЕКК являются тимоген и Т-активин, при поражении В-звена иммунитета –миелопид, а при комбинированной супрессии Т- и В-системы иммунитета -имунофан. Следует учитывать, что в связи с тесной взаимосвязью всехзвеньев, факторов и элементов иммунной системы, ряд авторов относят такиепрепараты, как полиоксидоний и миелопид, к препаратам, влияющимпрактически на все компоненты иммунной системы и НРО [Хаитов Р.М. исоавт., 2000]. И.В. Нестерова (2005) к препаратам, восстанавливающимфункционирование фагоцитов, ЕКК и дефекты гуморального иммунитета,относит ликопид и полиоксидоний, востанавливающим гуморальный
200иммунитет – миелопид, а функционирование Т-клеточного звена – Т-активин(тактивин), тимоген, имунофан, бестим и т.д.В литературе имеются противоречивые отрывочные данныеотносительно характера изменения факторов НРО и иммунного гомеостазапод влиянием спиртов и хлорированных углеводородов, а также отдельныесведения, имеющие отношения к сравнительной характеристике действиянекоторых иммуностимуляторов на НРО, клеточный и гуморальныйиммунитет [Арион В.Я. и соавт., 1984, 1987, 1991; Земсков В.М., 1991;Петров Р.В., 1991; Ширинский В.С., Жук Е.А.,1991,1994; Утешев Б.С. исоавт., 1995; Бажигитова Б.Б., Шортанбаев А.А., 2003; Михайлова М.Н. исоавт., 2003; Попова Е.А. и соавт., 2003; Щеглова М.Ю., Макарова Г.А., 2003;Елизарова Н.Л. и соавт., 2005], которые позволяют считать наиболееприемлемыми препаратами для коррекции постинтоксикационныхнарушений, вызванных отравлениями спиртами и хлорированнымиуглеводородами, тимоген, Т-активин, миелопид и имунофан.Анализируя результаты работ многих исследователей можно отметить,что тимоген представляет собой соединение двух молекул аминокислот –глутамина и триптофана. Данный препарат является синтетическиполученным дипептидом. Он оказывает регулирующее влияние на реакцииклеточного, гуморального иммунитета и НРО, стимулирует процессырегенерации в случаях их угнетения, а также улучшает течение клеточногометаболизма [Хавинсон В.Х. и соавт., 1990]. Тимоген усиливает процесыдифференцировки антигенов на поверхности лимфоцитов и нормализуетколичество Т-хелперов, клеток-супрессоров и их соотношение приразличных иммунодефицитных состояниях [Осипова Л.О.,1990; ХавинсонВ.Х. и соавт., 1990; Юшков В.В., Хавинсон В.Х., 1993; Утешев Б.С. и соавт.,1995; Ершов Ф.И., 1995; Невидимова Т.И., Суслов Н.И., 1995; Семина О.В. исоавт., 1993, 1997; Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., 1999].
201Так, например, в условиях стресса тимоген в дозе 100 мкг/кг в опытах намышах линии СВА приближал сниженные показатели системы иммунитета(количество клеток в тимусе, индекс цитотоксичности тимоцитов) кконтрольным значениям [Невидимова Т.И., Суслов Н.И., 1995]. Тимоген invitro влияет на функцию "активных" розеткообразующих лимфоцитов и нареактивность базофилов периферической крови [Осипова Л.О.,1990;Гюллинг Э.В. и соавт., 1991]. Данный препарат коррегирует стрессиндуцированныедисфункции иммунной системы [Яковлев Г.М., ХавинсонВ.Х. 1989], обладает противовоспалительным действием, механизм которого,возможно, включает снижение чувствительности тканей к медиаторамвоспаления и усиление синтеза антигистаминовых и антисеротониновыхантител, нейтрализующий характер которых и их патогенетическая рольпоказаны на моделях агарового и серотонинового воспаления [Яковлев Г.М.и соавт., 1990; Юшков В.В., Хавинсон В.Х., 1993]. Тимоген оказываетстимулирующее действие практически на все звенья дифференцировки Т-лимфоцитов (от стволовой клетки до эффекторов клеточного иммунитета),что выражается в значительном повышении функции клеточного игуморального звеньев иммунитета и НРО. Он усиливает процессыдифференцировки лимфоидных клеток, индуцирует экспрессиюдифференцировочных антигенов, нормализует количество Т-хелперов, Т-супрессоров и В-клеток, восстанавливает коэффициент дифференцировкииммунокомпетентных клеток. По своей биологической активности тимоген в10-100 раз, а в отдельных случаях в 1000 раз превосходит природныйпрепарат тимуса тималин [Яковлев Г.М. и соавт., 1990]. По показаниям кприменению тимоген в основном сходен с другими иммуностимуляторами ииспользуется в комплексной терапии взрослых и детей при острых ихронических инфекционных заболеваниях, сопровождающихся снижениемпоказателей клеточного иммунитета, при угнетении репаративных процессов
202после тяжелых травм, а также при других иммунодефицитных состояниях[Машковский М.Д., 2000].Положительными свойствами препарата являются отсутствие побочныхэффектов при лечении, совместимость практически со всеми лекарственнымипрепаратами различных фармакологических групп, возможностьиспользования с традиционными методами лечения [Яковлев Г.М. и соавт.,1990; Невидимова Т.И., Суслов Н.И., 1995; Утешев Б.С. и соавт., 1995]. Вэкспериментах на животных установлено, что иммуностимулирующая дозатимогена в зависимости от патологического состояния и вида животныхнаходится в пределах от 1 до 100 мкг/кг [Невидимова Т.И., Суслов Н.И.,1995; Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., 1999]. При отравленияхдихлорэтаном, нитрилами, некоторыми спиртами и ФОС тимоген способен втой или иной степени восстанавливать некоторые показатели системыиммунитета [Забродский П.Ф. и соавт., 1997].Известно, что Т-активин является иммуномодулирующим препаратомполипептидной природы, полученным из вилочковой железы крупногорогатого скота. При иммунодефицитных состояниях он восстанавливаетизмененные функциональные показатели Т-системы иммунитета,стимулирует продукцию лимфокинов, в том числе интерферонов,нормализует другие показатели клеточного иммунитета. Применяют Т-активин у взрослых в комплексной терапии инфекционных, гнойных,септических процессов и других заболеваний, сопровождающихсяиммунодефицитным состоянием с преимущественным поражением Т-системы иммунитета [Ковальская Н.И. и соавт., 1984; Арион В.Я. 1981;Арион В.Я. и соавт., 1984, 1987, 1991; Базарный В.В., Ястребов А.П., 1993;Нечаев В.И. и савт., 2003]. Препарат противопоказан при атопической формебронхиальной астмы и беременности [Машковский М.Д., 2000]. Показанаэффективность Т-активина при отравлениях хлорорганическимисоединениями [Вахидова Г.А. и соавт.,1990].
203Имеются сведения, что Т-активин обладает более высокойэффективностью в связи с его способностью активировать выработку γ-интерферона Т-лимфоцитами [Вахидова Г.А. и соавт., 1990; Борисова А.М. исоавт., 1991; Ханафиева И.В. и соавт., 1992; Базарный В.В., Ястребов Ф.П.,1993; Машковский М.Д., 2000]. Этот лимфокин активирует ЕКК ивосстанавливает постинтоксикационное нарушение их функции, а такжеиндуцирует экспрессию рецепторов ИЛ-2 на их поверхности [Сухих Г.Т. исоавт., 1984]. Препарат оказывает существенное иммуномодулирующеевлияние на функцию макрофагов и различные иммунные реакции в оченьшироком диапазоне доз от 0,001 до 5 мкг/кг [Большаков и соавт., 1991;Кириличева Г.Б. и соавт., 1990]. В литературе описаны свойства Т-активинаувеличивать пролиферацию, дифференцировку и функциональнуюактивность Т-клеток [Шляхов Э.Н., Гылка В.В., 1989; Арион В.Я. и соавт.,1987; Стасий Е.Д. и соавт., 1990; Арион В.Я., Иванушкин Е.Ф., 1991]. Т-активин способен также стабилизировать В-звено иммунитета [ИмантаеваГ.М., 2005].Сравнительно недавно стало известно, что Т-независимый иммунныйответ на антигены 2-го класса, к которым относятся полисахаридыбактериальных стенок и, в частности, Vi-Ag, обеспечиваетсявзаимодействием В-лимфоцитов с тимуснезависимыми Т-лимфоцитами (Тγδ)[Хаитов Р. М. и соавт., 2000]. Поэтому вполне логично предположить, что Т-активин способен стимулировать и Т-независимый гуморальный иммунныйответ, активируя Тγδ. Кроме того, Т-активин, повышая функцию макрофагов[Таранов В.А., Короткова М.И., 1989], приводит к увеличению имипродукции ИЛ-1, который может активировать Т-независимоеантителообразование [Gillbert R.V., Hoffmann M.K., 1985] при остромотравлении различными ТХВ .Миелопид - иммуностимулирующий препарат пептидной природы,получаемый из культуры клеток костного мозга млекопитающих (свиней или
204телят). При иммунодефицитных состояниях миелопид восстанавливаетпоказатели В- и Т-систем иммунитета, стимулирует продукцию антител ифункциональную активность иммунокомпетентных клеток и способствуетвосстановлению ряда других показателей гуморального звена иммунитета,коррегирует дифференцировку кроветворных клеток – предшественников умышей с экспериментальным Т-иммунодефицитом, обладаетстресспротективным действием, оказывает терапевтический эффект приразличных инфекционных заболеваниях [Руднева Т.Б. и соавт., 1989;Подосинников И.С. и соавт.,1991; Степаненко Р.Н. и соавт., 1991; ТурсуновБ.С. и соавт., 1992; Михайлова А.А. и соавт., 1989; Михайлова А.А., 1997;Баранова И.Д. и соавт., 1998; Кирилина Е.А. и соавт., 1998; Хаитов Р.М. исоавт., 2000; Mikhailova A.A., Fonina L.A., 1990].Исследованиями последних лет показано, что имунофан (аргинил-альфааспартил-лизил-тирозил-аргинин)– гексапептид с молекулярной массой 836Д. Препарат относится к синтетическим иммуностимуляторам, обладаетиммунорегулирующим, детоксикационным, гепатопротективным действиеми вызывает инактивацию свободнорадикальных процессов ПОЛ [ПокровскийВ.И. и соавт., 1997; Лебедев В.В. и соавт., 2000]. Фармакологическоедействие пептидного иммунооксидредуктанта основано на достижениикоррекции иммунной и окислительно-антиокислительной систем организма.Действие препарата начинает развиваться в течение 2-3 часов (быстрая фаза)и продолжается до 4 мес (средняя и медленная фазы).В течение быстрой фазы (продолжительность до 2-3 суток) преждевсего, проявляется детоксикационный эффект – усиливаетсяантиоксидантная защита организма путем стимуляции продукциицерулоплазмина, лактоферрина, активности каталазы. Препарат нормализуетперекисное окисление липидов, ингибирует распад фосфолипидов клеточноймембраны и синтез арахидоновой кислоты с последующим снижениемуровня холестерина крови и продукции медиаторов воспаления. При
205токсическом и инфекционном поражении печени имунофан предотвращаетцитолиз, снижает активность трансаминаз и уровень билирубина в сывороткекрови [Караулов А.В., 2000а, 2000б; Константинов Б.А. и соавт, 2000;Лебедев В.В. и соавт., 2000].В течение средней фазы (начинается через 2-3 суток, продолжительность– до 7-10 суток) происходит усиление реакций фагоцитоза и гибеливнутриклеточных бактерий и вирусов. В течение медленной фазы (начинаетразвиваться на 7-10 сут, продолжительность до 4 месяцев) проявляетсяиммунорегуляторное действие препарата – восстановление нарушенныхпоказателей клеточного и гуморального иммунитета. В этот периоднаблюдается восстановление иммунорегуляторного индекса, отмечаетсяувеличение продукции иммуноглобулинов [Лебедев В.В. и соавт., 2000;Бажигитова Б.Б., Шортанбаев А.А., 2003; Михайлова М.Н. и соавт., 2003;Попова Е.А. и соавт., 2003; Щеглова М.Ю., Макарова Г.А., 2003].Влияние препарата на продукцию специфических противовирусных иантибактериальных антител эквивалентно действию некоторых лечебныхвакцин. В отличие от последних препарат не оказывает существенноговлияния на продукцию реагиновых антител класса IgE и не усиливаетреакцию гиперчувствительности немедленного типа [Лебедев В.В., 1999;Лебедев В.В., Покровский В.И. , 1999а, 1999б].В связи с установленным нами поражением различных элементовсистемы иммунитета, нарушением его разнообразных реакций, популяцийлимфоцитов под влиянием токсикантов имунофан, возможно, может являтьсяпрепаратом выбора при остром отравлении различными спиртами ихлорированными углеводородами. Имунофан в отличие от тимогена и Т-активина способен оказывать не только иммуностимулирующее влияние навсе звенья системы иммунитета, но и обеспечивать детоксицирующий,гепатопротективный и антиоксидантный эффекты [Покровский В.И. и соавт.,1997; Лебедев В.В., 1999; Лебедев В.В., Покровский В.И. , 1999а, 1999б;
206Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001]. Антиоксидантное действиеимунофана предотвращает повреждение ДНК лимфоцитов и гранулоцитов,вызванное гонотоксическими факторами окружающей среды (токсикантами)[Караулов А.В. и соавт., 2005].Исходя из имеющихся в литературе данных и в связи с важностьютеоретического и практического значения проблемы коррекциииммунодефицитных состояний после интоксикации ТХВ, учитываяэффективность Т-активина [Таранов В.А., Короткова М.И., 1989; БольшаковИ.Н. и соавт., 1991] и тимогена [Забродский П.Ф., 1999], в частности, принекоторых постинтоксикационных иммунодефицитных состояниях,целесообразно было уточнить и провести дополнительную оценку ихдействия на различные иммунные реакции после острой интоксикацииспиртами и хлорированными углеводородами. Нуждается во всестороннемисследовании и возможность коррекции иммунного гомеостаза имунофаномпосле острого токсического действия спиртов и хлорированныхуглеводородов, которая практически не исследована. Предположительноэффективность имунофана для восстановления показателей иммунногостатуса при постинтоксикационных иммунодефицитах, вызванныхалкоголем, его суррогатами и хлорированными углеводородами можнооценить, как очень высокую [Забродский П.Ф. и соавт, 2004а].В литературе также описано подавление иммуностимуляторомреафероном (α-интерфероном) потребления алкоголя у мышей [ДавыдоваТ.В., Фомина В.Г., 2001]. Это создает научную предпосылку и практическуювозможность лечить иммунодефицит после отравления этанолом иодновременно снижать тягу к его потреблению. Однако реаферон имеетбольшое число побочных эффектов и противопоказаний [Забродский П.Ф.,Германчук В.Г., 2001]. Т-активин способен приводить к увеличениюинтерферонов, активируя Тh-1-лимфоциты [Базарный В.В., Ястребов Ф.П.,1993; Машковский М.Д., 2000].
207Исследованиями последних лет показано, что длительное введениеиммуностимулятора полиоксидония алкоголизированным крысам в периоддепривации снижало влечение к алкоголю [Кушнир Е.А. и соавт., 2004].Поэтому данный препарат, наряду с имунофаном, Т-активином, тимогеном имиелопидом, можно рассматривать как весьма перспективное средствовосстановления функции иммунной системы после острого отравленияспиртами. Однако в отличие от имунофана у полиоксидония не описаногепатопротективного и антиоксидантного эффекта.В литературе имеются сведения о том, что одним из способовпрофилактики и лечения, возникающего при этом постинтоксикационногоиммунодефицитного состояния, может быть применение фолината кальция(ФК) для ускорения метаболизма высокотоксичного продуктабиотрансформации метанола муравьиной кислоты (МК), так как основнойпуть деградации данного соединения является фолат-зависимым [КожемякинЛ. А. и соавт., 1991; Ройт А и соавт., 2000]. Вероятно, возможноеиммунопротективное (иммуностимулирующее) действие ФК в отношенииантителообразования, обусловленного функцией В-клеток, объясняется темобстоятельством, что при практически полном потреблении фолиевойкислоты метанолом ФК, восполняя ее ресурсы, возможно, способенвосстанавливать антителообразование (синтез Ig) В-лимфоцитами.Таким образом, сравнительная оценка эффективности тимогена, Т-активина, миелопида и имунофана показывает возможность ихизолированного или комбинированного применения для восстановленияНРО, Т-, В-звена иммунитета, активности ЕКК и АЗКЦ после отравленияспиртами и хлорированными углеводородами. Для восстановления функцииВ-клеток после отравления метанолом может быть целесообразнымиспользование фолината кальция.
2088.2. Сравнительная оценка эффективности иммуностимуляторовпосле острого действия спиртов и хлорированных углеводородов8.2.1. Влияние иммуностимуляторов на показатели неспецифическойСравнительное влияниерезистентности организмаиммуностимуляторов на показатели НРОпроводили при остром отравлении всеми испытуемыми ТХВ в дозе 0,75 ЛД 50.Результаты исследования показали, что данная доза для оценки эффектаиммунокорректоров является оптимальной, так как использованные спирты ихлорированные углеводороды вызывают при данной дозе гибель животных,существенно меньше 15% в течение 2 сут.Нами установлено, что при острой интоксикации метанолом в дозе 0,75ЛД 50 тимоген, Т-активин, миелопид и имунофан через 3 сут после ихприменения увеличивают активность основных факторов НРО (табл. 8.1).Таблица 8.1Влияние иммуностимуляторов на основные показатели НРО у крыс послеострого отравления метанолом (0,75 ЛД 50 ) (M+m)ПрепаратыЛизоцим,мг/лТКБ,%Индекс активностинейтрофилов(НСТсп)Контроль 8,7+0,3 (42) 65,4+2,3 (40) 0,26+0,01 (41)Метанол 5,4+0,5* 45,8+4,3* 0,12+0,02*Метанол + тимоген 6,7+0,6** 53,1+4,0* 0,16+0,02*Метанол+Т-активин 7,1 +0,7** 55,0+4,2* 0,19+0,03**Метанол+миелопид 6,3 +0,8* 51,9+4,5* 0,20+0,02*Метанол + имунофан 8,9+0,9 67,3+5,1 0,28+0,03Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 10 до 15животных; *; **- различие с контролем достоверно - р
209миелопид увеличивали по сравнению с показателем после отравления,который был снижен по сравнению с контролем в 1,61 раза, соответственно в1,24; 1,31 и 1,10 раза.Содержание ТКБ в крови тимоген, Т-активин и миелопид увеличивалипо сравнению с показателем после отравления, который был снижен посравнению с контролем в 1,43 раза, соответственно в 1,16; 1,20 и 1,13 раза, аиндекс активности нейтрофилов - в 1,33; 1,58 и 1,67 раза соответственно.Существенных различий в активности использованныхиммуностимулятров не выявлено, за исключением более выраженногоэффекта имунофана по сравнению с действием тимогена и миелопида вотношении ряда показателей НРО. В целом по увеличению степениактивности они располагались в порядке: миелопид, тимоген, Т-активин иимунофан.В экспериментах на белых крысах нами установлено (табл. 8.2), что приострой интоксикации дихлорэтаном в дозе 0,75 ЛД 50 тимоген увеличивалактивность лизоцима, ТКБ и ФМАН соответственно в 1,34; 1,10 и 1,45 разачерез 3 сут по сравнению с показателем при интоксикации.Таблица 8.2Влияние иммуностимуляторов на основные показатели НРО у крыс послеострого отравления дихлорэтаном (0,75 ЛД 50 ) (M+m)ПрепаратыЛизоцим,мг/лТКБ,%Индекс активностинейтрофилов(НСТсп)Контроль 8,7+0,3 (42) 65,4+2,3 (40) 0,26+0,01 (41)ДХЭ 5,0+0,6* 45,1+4,3* 0,11+0,02*ДХЭ + тимоген 6,7 +0,8* 50,0+4,0* 0,16+0,02*ДХЭ +Т-активин 7,0 +0,7* 54,4+4,2* 0,18+0,03*ДХЭ +миелопид 6,5 +0,9* 55,9+4,3** 0,19+0,03**ДХЭ + имунофан 9,1+0,9 69,0+5,1 0,29+0,04Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии использовалось от 10 до 15животных; *; **- различие с контролем достоверно - р
210Применение Т-активина приводило к статистически значимому повышениюданных параметров по сравнению с показателями при отравлении ДХЭсоответственно в 1,40; 1,21 и 1,64 раза, а миелопида - в 1,30; 1,24 и 1,73 разасоответственно.Эффекты тимогена, Т-активина и миелопида практически не отличалисьи не приводили к полному восстановлению активности исследованныхпоказателей. Иммуностимулирующее действие имунофана полностьювосстанавливало, сниженную острой интоксикацией дихлорэтаном,активность исследованных гуморальных и клеточных факторов НРО. Постепени активности иммуностимуляторы существенно не отличались, заисключением имунофана, эффективность которого по сравнению с другимипрепаратами в отношении ряда показателей НРО была существенно выше. Вцелом в порядке увеличения активности иммуностимуляторы располагалисьв последовательности: миелопид-тимоген-Т-активин-имунофан.Принимая во внимание то обстоятельство, что при использованиииммуностимуляторов после острой интоксикации метанолом идихлорэтаном, которые поражали систему НРО в большей степени, чемдругие спирты и хлорированные углеводороды (см. главу 3), наибольшейактивностью отличался имунофан, именно данный препарат применялсянами для оценки его эффективности после отравления этиленгликолем,тетрахлорметаном, трихлорэтиленом и этанолом.Нашими исследованиями показано (табл. 8.3), что при остройинтоксикации ЭГ в дозе 0,75 ЛД 50 имунофан через 3 сут после егоприменения существенно увеличивал активность лизоцима, ТКБ и ФМАНсоответственно в 1,52; 1,34 и 2,33 раза через 3 сут по сравнению споказателем при интоксикации.Данный препарат повышал активность лизоцима, ТКБ и ФМАНсоответственно в 1,29; 1,22 и 1,31 раза через 3 сут по сравнению спараметром после отравления этанолом, отмечалось увеличение данных
211факторов НРО в 1,55; 1,38 и 2,00 раза по сравнению с показателем приинтоксикации ТХМ и в 1,56; 1,46 и 1,71 раза по сравнению с показателем приинтоксикации ТХЭ (р
2121991б]. Доказано, что механизм иммунотропного действия аспарагиновойкислоты связан с активацией цАМФ, последующей стимуляцией синтезаДНК, что приводит к увеличению продукции иммунокомпетентных клеток втимусе, повышению функции лимфоцитов [Базарный В.В., Ястребов А.П.,1993]. При лечении больных с заболеваниями легких (следует отметить, чтопневмонии являются наиболее частыми осложнениями после отравленийспиртами и ХУ [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000]) доказанаэффективность имунофана в повышении ФМАН [Жубантурлиева А.Б. исоавт., 2003].Таким образом, применение тимогена, Т-активина и миелопида втечение 3 сут приводило к частичному восстановлению факторов НРОпосле отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ).Использование имунофана в течение 3 сут в дозе 10 мкг/кг обеспечивалополное восстановление до контрольных уровней основных факторов НРО.В целом в порядке увеличения активности иммуностимуляторырасполагались в последовательности: миелопид – тимоген - Т-активин -имунофан.8.2.2. Оценка действия иммуностимуляторов на основныепоказатели гуморального звена иммунитетаНами установлено (табл. 8.4), что применение тимогена в дозе 10 мкг/кгпри его использовании в течение 3 сут частично восстанавливало Т-зависимое антителообразование, увеличивая число АОК к ЭБ в селезенкекрыс в 1,53 раза по сравнению с данным показателем при отравленииметанолом. Т-активин и миелопид в дозе 5 мкг/кг также частичновосстанавливали Т-зависимый гуморальный иммунный ответ, повышаячисло АОК к ЭБ соответственно в 1,71 и 1,44 раза.
213Таблица 8.4Влияние иммуностимуляторов на основные показатели В-звена иммунитетау крыс при острой интоксикации метанолом (0,75 ЛД 50 ) (M+m)Метанол и егокомбинации симмуностимуляторамиАОК к ЭБ, 10 3 АОК к Vi-Ag, 10 3 синтезирующиеАОК,IgG, 10 3Контроль (23) 35,1+1,7 28,5+1,6 18,4+1,1Метанол 19,7+2,2* 17,8+2,3* 10,0+1,5*Метанол+тимоген 30,2+2,5 21,2+2,5* 15,8+1,5Метанол+Т-активин 33,7+2,3 19,9+2,2* 17,1+1,6Метанол+миелопид 28,3+2,2 26,2+2,3 14,2+1,7Метанол+имунофан 37,0+3,7 33,8+3,3 23,3+2,3Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии опытов использовалось 7-9животных; *- различие с контролем достоверно - р
214По возрастанию степени активности в отношении Т-зависимойантителопродукции (число АОК к ЭБ; АОК, синтезирующие IgG) приострой интоксикации метанолом иммуностимуляторы располагались впоследовательности: миелопид- тимоген-Т-активин-имунофан, а в отношенииТ-независимого антителобразования в порядке увеличения эффекта – впоследовательности: Т-активин - тимоген - миелопид – имунофан.Проведенный анализ результатов исследования позволяет обобщить, чтоТ-активин повышает Т-зависимый иммунный ответ, возможно, вследствиеего стимулирующего влияния на функцию макрофагов [Большаков И.Н. исоавт., 1991; Кирилличева Г.Б. и соавт., 1990]. Известно, что эти клеткипоставляют после поглощения и переработки антиген Т-хелперам, после чегопроисходит кооперация макрофагов, Т- и В-лимфоцитов, осуществляющихсинтез иммуноглобулинов [Ройт А., 1991; Хаитов Р.М. и соавт., 2000].Стимуляция Т-независимой антителопродукции осуществляетсятимогеном и имунофаном, вероятно, путем увеличения секреции ИЛ-1макрофагами или экспрессии рецепторов к ИЛ-1 на В-клетках, а такжеактивацией процессов пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов[Georgiev V.St., Albright J.E., 1993]. Стимуляция Т-активином, тимогеном иимунофаном Т-независимого антителообразования при остром отравленииспиртами и хлорированными углеводородам, возможно, обусловлена ихдействием на макрофаги [Таранов В.А., Короткова М.И., 1989], в результатекоторого они продуцируют ИЛ-1, являющийся помимо антигена фактором,участвующим в независимом от тимуса антителообразовании [Gillbert R.V.,Hoffmann M.K., 1985]. Не исключена также активация иммуностимуляторамитимуснезависимых Т-лимфоцитов (Тγδ), индуцирующих продукцию В-клетками антител к Vi-Ag [Хаитов Р.М. и соавт., 2000],В настоящее время при лечении острых интоксикаций метанолом иэтиленгликолем в качестве антидота обязательно используется этанол[Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000; Маркова И.В. и соавт., 1998;
215Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001; Куценко С.А. и соавт., 2004]. Известно, чтоэтот спирт при комбинированном применении с метанолом усиливает егоиммунодепрессивный эффект [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001],поэтому представляет интерес исследование эффективностииммуностимуляторов при комбинированном действии метанола и егоантидота этанола.Проведенные нами эксперименты показали (табл. 8.5), что послеТаблица 8.5АОК к Vi-Ag, АОК,Влияние иммуномодуляторов на показатели В-звена иммунитета у крыс приинтоксикации метанолом (0,75 ЛД 50 ) с применением этанола (M+m)Вещества АОК к ЭБ,10 3 10 3 синтезирующиеIgG, 10 3Контроль (23) 35,1+1,7 28,5+1,6 18,4+1,1Метанол 19,7+2,2* 17,8+2,3* 10,0+1,5*Этанол 28,3+2,6* 22,7+2,1* 14,1+1,6*Метанол +этанол 15,5+2,0* 12,9+1,8* 8,2+0,9*Метанол +этанол+ 27,0+2,3* 20,3+2,0* 12,8+1,3*имунофанМетанол +этанол+ 29,5+2,4** 22,5+2,1* 13,9+1,4*фолинат кальцияМетанол +этанол+Тактивин25,1+2,2* 19,8+2,0* 11,3+1,2*Метанол +этанол+ 31,0+2,4 23,6+2,0** 15,8+1,3Т-активин+имунофанМетанол +этанол+ 38,2+3,9 34,9+3,4 24,0+2,5имунофан+фолинаткальцияПримечание: в скобках – число животных; в каждой серии опытов использовалось 7-9животных; этанол вводили внутрибрюшинно в дозе 3 г/кг 2 раза в сутки); *; **- различие сконтролем достоверно - р
216воздействии метанола в комбинации с этанолом. Число АОК к Vi-Ag и АОК,синтезирующих IgG, имунофан после действия метанола в комбинации сэтанолом увеличивал соответственно в 1,57 и 1,56 раза по сравнению споказателем после отравления метанолом в сочетании с этанолом.Применение фолината кальция после отравления метанолом в комбинации сэтанолом повышало по сравнению с показателями при интоксикации Т-зависимое антителообразование, число АОК к Vi-Ag (Т-незавимуюантителопродукцию) и число АОК, синтезирующих IgG, соответственно в1,90; 1,74 и 1,69 раза. Применение Т-активина, а также комбинацииимунофана и Т-активина восстанавливало показатели гуморальногоиммунитета частично. Использование имунофана в комбинации сфолинатом кальция после действия метанола в сочетании с этаноломполностью восстанавливало исследованные показатели В-системыиммунитета.Проведенные нами исследования показали (табл. 8.6), что применениеТ-активина в дозе 10 мкг/кг (как препарата, повышающего большинствопоказателей В-звена иммунитета) после отравления этиленгликолем илечения его интоксикации назначением этанола частично восстанавливалоТ-зависимое антителообразование, увеличивая число АОК к ЭБ в селезенкекрыс в 1,79 раза по сравнению с данным показателем при остромвоздействии этиленгликоля в комбинации с этанолом. Число АОК к Vi-Ag иАОК, синтезирующих IgG, Т-активин после отравления этиленгликолем вкомбинации с этанолом увеличивал соответственно в 1,56 и 1,38 раза посравнению с показателем после некомбинированного действия спиртов.Применение имунофана после отравления этиленгликолем в комбинации сэтанолом повышало по сравнению с показателями при интоксикацииданными спиртами Т-зависимое антителообразование, число АОК к Vi-Ag(Т-незавимую антителопродукцию) и число АОК, синтезирующих IgG,соответственно в 1,85; 1,74 и 1,61 раза. Использование имунофана в
217комбинации с Т-активином после действия этиленгликоля в сочетании сэтанолом полностью восстанавливало исследованные показатели В-звенаиммунитета.Таблица 8.6Влияние иммуномодуляторов на основные показатели В-звена иммунитета укрыс при острой интоксикации этиленгликолем (0,75 ЛД 50 ) с применениемего антидота этанола (M+m)Вещества АОК к ЭБ, 10 3 АОК к Vi-Ag, 10 3 АОК,синтезирующиеIgG, 10 3Контроль (23) 35,1+1,7 28,5+1,6 18,4+1,1Этиленгликоль 20,1+2,2* 18,2+2,3* 10,5+1,5*Этанол 28,3+2,6* 22,7+2,1* 14,1+1,6*ЭГ +Э 16,1+1,9* 13,3+1,8* 8,7+0,9*ЭГ +Э+ Т-активин 28,9+2,0** 20,7+2,0** 12,0+1,4*ЭГ +Э+ имунофан 29,8+2,3** 23,3+2,2** 14,0+1,3*ЭГ +Э+ Т-активин 36,9+3,0 29,6+2,1 19,9+1,2+имунофанПримечание: в скобках – число животных; в каждой серии опытов использовалось 7-9животных; этанол вводили внутрибрюшинно в дозе 3 г/кг 2 раза в сутки; *; **- различие сконтролем достоверно - р
218Таблица 8.7Влияние иммуностимуляторов на основные показатели В-звена иммунитетау крыс при острой интоксикации дихлорэтаном (0,75 ЛД 50 ) (M+m)Вещества АОК к ЭБ, 10 3 АОК к Vi-Ag, 10 3 АОК,синтезирующиеIgG, 10 3Контроль (23) 35,1+1,7 28,5+1,6 18,4+1,1ДХЭ 14,1+1,9* 13,5+1,8* 9,8+1,2*ДХЭ+ тимоген 23,1+2,0** 20,0+3,0** 14,3+1,5**ДХЭ + 24,0+2,3** 18,7+2,5* 15,2+1,3Т-активинДХЭ+ миелопид 27,2+2,4** 23,0+2,2** 16,1+1,4ДХЭ +имунофан 34,4+3,4 31,1+3,0 19,3+1,9Примечание: в скобках – число животных; в каждой серии опытов использовалось 7-9животных; *; **- различие с контролем достоверно - р
219Учитывая, что под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов внаибольшей степени страдает Т-зависимая антителопродукция, а действие Т-активина и миелопида на Т-независимую гуморальную реакцию существенноне отличалось, в последующих экспериментах оценивалось действиеиммуностимуляторов после отравления хлорированными углеводородами иэтанолом только на Т-зависимое антителообразование.Проведенные нами исследования показали (рис. 8.1), что применениетимогена, Т-активина, миелопида и имунофана увеличивало Т-зависимыйгуморальный иммунный ответ по сравнению с данным параметром приострой интоксикации тетрахлорметаном соответственно в 1,55; 1,99; 1,69 и2,53 раза.4035К3025***2015*10501 2 3 4 5Рис. 8.1. Влияние иммуностимуляторов на Т-зависимое антителообразованиеу крыс после острой интоксикации тетрахлорметаном (0,75 ЛД 50 ) (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – ТХМ, ТХМ+ тимоген, ТХМ +Т-активин,ТХМ+миелопид, ТХМ+имунофан соответственно; по оси ординат: содержание АОК к ЭБ,10 3 ; К – контроль (n=23); в каждой серии опытов использовали 7-9 крыс; *- различие сконтролем достоверно - р
220иммуностимуляторы располагались в последовательности: миелопид –тимоген - Т-активин – имунофан.Наши эксперименты свидетельствуют (рис. 8.2), что использование454035К302520****1510501 2 3 4 5Рис. 8.2. Влияние иммуностимуляторов на Т-зависимоеантителообразование у крыс при острой интоксикации трихлорэтиленом (0,75ЛД 50 ) (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – ТХЭ, ТХЭ+тимоген, ТХЭ+Т-активин, ТХЭ+миелопид,ТХЭ+имунофан соответственно; по оси ординат: содержание АОК к ЭБ, 10 3 ; К – контроль(n=23); в каждой серии опытов использовали 6-8 крыс; *- различие с контролемдостоверно - р
221Мы считаем, что при Т-зависимом антителообразовании действиетимогена и имунофана, вероятно, реализуется путем активации процессакооперации макрофагов, Т-клеток и В-лимфоцитов, антителопродуцирующихВ-клеток, функции Th1-лимфоцитов и Th2-клеток, cекретируемыхсоответственно ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферон, β-фактора некроза опухоли(лимфотоксин), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующийфактор и ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10 [Kimber I., 1996].Наши эксперименты свидетельствуют (рис. 8.3), что применениетимогена, Т-активина, миелопида и имунофана увеличивало гуморальныйиммунный ответ к тимусзависимому антигену ЭБ по сравнению с даннымпараметром при острой интоксикации этанолом соответственно в 1,13; 1,25;1,10 и 1,36 раза.45403530252015105*К01 2 3 4 5Рис. 8.3. Влияние иммуностимуляторов на Т-зависимое антителообразованиеу крыс при острой интоксикации этанолом (0,75 ЛД 50 ) (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – Э, Э+тимоген, Э+Т-активин, Э+миелопид, Э+имунофансоответственно; по оси ординат: содержание АОК к ЭБ, 10 3 ; К – контроль (n=23); в каждойсерии опытов использовали 7-9 крыс; *- различие с контролем достоверно - р
222При этом все иммуностимуляторы восстанавливали число АОК к ЭБ вселезенке крыс до контрольного уровня. Относительно большей активностьюпо сравнению с другими препаратами обладали имунофан и Т-активин.Существенной разницы между иммуностимулирующим эффектоммиелопида, тимогена, Т-активина и имунофана не выявлено.Таким образом, использование в качестве иммуностимуляторов приострой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75ЛД 50 ) любого из использованных препаратов (тимогена, Т-активина,миелопида, имунофана) обеспечивало полное восстановление основныхпоказателей В-системы иммунитета только при отравлении этанолом.Нормализация гуморального иммунного ответа, изменяемого действиемдихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена, достигалась только приприменении имунофана. После острого действия метанола в комбинации сэтанолом лишь использование имунофана в сочетании с фолинатом кальцияполностью восстанавливало показатели В-системы иммунитета. При остромотравлении этиленгликолем и применении в качестве антидота этанолатолько использование имунофана в комбинации с Т-активином полностьювосстанавливало показатели В-звена системы иммунитета. В целом поувеличению степени активности в отношении Т-зависимого иммуногенезапри острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородамииммуностимуляторы располагались в последовательности: миелопид –тимоген - Т-активин - имунофан, а в отношении Т-независимогоантителобразования в порядке увеличения эффекта – в последовательности:Т-активин - тимоген - миелопид – имунофан.8.2.3. Исследование действия иммуностимуляторов на основныепоказатели клеточного звена иммунитетаВ процессе сравнительной оценки действия различныхиммуностимуляторов на показатели клеточного звена иммунитета нами
223установлено (табл. 8.8), что применение тимогена в дозе 10 мкг/кг при егоиспользовании в течение 3 сут частично восстанавливало функцию Th1-лимфоцитов, оцениваемую по реакции ГЗТ, увеличивая ее в 1,45 раза посравнению с данным показателем при отравлении ДХЭ. Т-активин в дозе 5мкг/кг частично восстанавливал данный показатель, повышая его в 1,68 разапо сравнению с параметром при интоксикации, а миелопид в дозе 5 мкг/кг – в1,25 раза, Имунофан в дозе 10 мкг/кг практически полностью восстанавливалформирование ГЗТ, повышая ее в 2,27 раза по сравнению с данной реакциейпри отравлении ДХЭ в дозе 0,75 ЛД 50 .Таблица 8.8Влияние иммуностимуляторов на показатели клеточного иммунитета у крыспри острой интоксикации ДХЭ в дозе 0,75 ЛД 50 (M+m)Препараты Реакция ГЗТ, % ЕЦ, % АЗКЦ,%Контроль (23) 30,2+1,3 31,2+1,4 19,1+0,8ДХЭ 12,0+1,9* 11,2+ 2,0* 7,5+1,2*ДХЭ+ тимоген 17,4+2,4* 24,4+2,2* 15,0+1,5**ДХЭ+Т-активин 20,1+2,3* 30,5+2,5 19,7+1,8ДХЭ+ миелопид 15,0+2,0* 17,8+2,1* 12,9+1,3*ДХЭ+имунофан 27,2+3,1 29,8+3,0 23,4+2,4Примечание: ЕЦ и АЗКЦ определяли соответственно через 3 и 5 сут; в каждой серииопытов использовали 7-9 животных; *; **- различие с контролем достоверно - р
224Доказанная нами возможность частичного восстановления тимогеномфункции Т-, В-системы иммунитета и ЕКК дает основания полагать, чтомеханизм его действия связан с неспецифической стимуляцией функцийклеток организма, способных к пролиферации. Возможно,иммуностимулирующие свойства тимогена обусловлены активацей зрелыхлимфоцитов полипотентных стволовых кроветворных клеток. Этотмеханизм, вероятно, обеспечивается стимуляцией синтеза энзимов и другихбелков вследствие активации тимогеном цАМФ, РНК-полимеразы, синтезаДНК [Чейдо М.А. и соавт., 1990; Белокрылов Г.А. и соавт., 1991а, 1999;Базарный В.В., Ястребов А.П., 1993]. По нашему мнению, Т-активинстимулирует ЕКК после интоксикации ТХВ вследствие его способностиактивировать выработку γ-интерферона Т-лимфоцитами [Вахидова Г.А. исоавт., 1990; Борисова А.М. и соавт., 1991; Ханафиева И.В. и соавт., 1992;Базарный В.В., Ястребов Ф.П., 1993; Машковский М.Д., 2000]. Этотлимфокин активирует ЕКК и восстанавливает постинтоксикационноенарушение их функции, а также индуцирует экспрессию рецепторов ИЛ-2 наих поверхности [Сухих Г.Т. и соавт., 1984].Итак, в целом по степени активности в отношении Т-звена иммунитетапри острой интоксикации дихлорэтаном иммуностимуляторы располагалисьв последовательности: миелопид - тимоген - Т-активин - имунофан. Вотношении ЕЦ Т-активин и имунофан обладали практически равнойактивностью.Проведенные нами эксперименты показали (рис. 8.4), что применениетимогена в дозе 10 мкг/кг при его использовании в течение 3 сут частичновосстанавливало реакцию ГЗТ, увеличивая ее по сравнению с даннымпоказателем при острой интоксикации ТХМ, в 1,35 раза (p
225восстанавливало функцию Th-лимфоцитов (и макрофагов) после остройинтоксикации ТХМ, повышая ГЗТ в 2,01 раза.4035*302520*****15*1050К 1 2 3 4 5 К 1 2 3 4 5ГЗТЕЦРис. 8.4. Влияние иммуностимуляторов на реакцию ГЗТ и ЕЦ у крыспри острой интоксикации ТХМ в дозе 0,75 ЛД 50 (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – ТХМ, ТХМ+тимоген, ТХМ+Т-активин,ТХМ+миелопид, ТХМ+имунофан соответственно; по оси ординат: ГЗТ и ЕЦ, %; К –контроль (n=23); ЕЦ и АЗКЦ определяли соответственно через 3 и 5 сут; в каждой серииопытов использовали 7-9 крыс; *- различие с контролем достоверно - р
226В ходе проведенных нами экспериментов установлено (рис. 8.5), чтоприменение тимогена, Т-активина, миелопида и имунофана увеличивалореакцию ГЗТ по сравнению с данным параметром при острой интоксикацииТХЭ соответственно в 1,31; 1,59; 1,20 и 1,89 раза.4035*3025***2015**1050К 1 2 3 4 5 К 1 2 3 4 5ГЗТРис. 8.5. Влияние иммуностимуляторов на реакцию ГЗТ и ЕЦ у крыспри острой интоксикации ТХЭ в дозе 0,75 ЛД 50 (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – ТХЭ, ТХЭ+тимоген, ТХЭ+Т-активин, ТХЭ+миелопид,ТХЭ+имунофан соответственно; по оси ординат: ГЗТ и ЕЦ, %; К – контроль (n=23); ЕЦопределяли через 3 сут; в каждой серии опытов использовали 7-9 крыс; *- различие сконтролем достоверно - р
227Таким образом, по возрастанию активности в отношении Т-звенаиммунитета и активности ЕКК при острой интоксикации трихлорэтиленомиммуностимуляторы располагались в последовательности: миелопид –тимоген - Т-активин - имунофан.Проведенные нами исследования параметров клеточного иммунитета укрыс показали (табл. 8.9), что при острой интоксикации метанолом в дозе0,75 ЛД 50 тимоген, Т-активин, миелопид и имунофан существенно повышалиреакцию ГЗТ (активность Тh-лимфоцитов и макрофагов) соответственно в1,42; 1,53; 1,23 и 1,84 раза по сравнению с показателем при интоксикации.При этом все иммуностимуляторы, за исключением миелопида,обеспечивали восстановление параметра практически до контрольногозначения.Таблица 8.9Влияние метанола (0,75 ЛД 50 ) и его комбинаций с иммуностимуляторами наосновные показатели клеточного иммунитета у крыс (M+m)Вещества Реакция ГЗТ, % ЕЦ, % АЗКЦ,%Контроль (23) 30,2+1,3 31,2+1,4 19,1+0,8Метанол 18,0+1,9* 17,2+ 2,1* 8,7+1,1*Метнол + тимоген 25,6+2,5 24,7+2,3** 16,1+1,2Метанол + Т-активин 27,5+2,6 32,2+2,0 20,2+1,5Метанол + миелопид 22,1+2,2* 20,9+2,0* 13,0+1,4*Метанол + имунофан 33,1+3,1 34,0+3,3 21,9+2,2Примечание: ЕЦ и АЗКЦ определяли через 3 и 5 сут соответственно; в каждой серииопытов использовалось 7-9 животных; * - различия достоверны по сравнению с контролем(р
228показателем при интоксикации метанолом, при этом обеспечиваяпрактически полное его восстановление до контрольного уровня.В связи с тем, что под влиянием этанола (0,75 ЛД 50 ) существеннаясупрессия отмечалась только в отношении активности ЕКК, исследовалосьвлияние иммуностимуляторов именно на данный показатель. Нашиэксперименты свидетельствуют (рис. 8.6), что применение тимогена, Т-активина, миелопида и имунофана увеличивало ЕЦ по сравнению с даннымпараметром при острой интоксикации Э соответственно в 1,42; 1,69; 1,32 и1,76 раза. При действии всех иммуностимуляторов активность ЕККстатистически значимо не отличалась от контрольного показателя.Максимальная активность установлена у имунофана, минимальная – умиелопида.4035302520151050*1 2 3 4 5КРис. 8.6. Влияние иммуномодуляторов на естественную цитотоксичностьу крыс при острой интоксикации этанолом (0,75 ЛД 50 ) (M+m).По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5 – Э, Э+тимоген, Э+Т-активин, Э+миелопид, Э+имунофансоответственно; по оси ординат: %; К – контроль (n=23); ЕЦ определяли через 3 сут; вкаждой серии опытов использовали 7-9 крыс; *; **- различие с контролем достоверно -р
229используется этанол [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000; МарковаИ.В. и соавт., 1998; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001; Куценко С.А. и соавт.,2004]. Доказано, что этот спирт при комбинированном применении сметанолом (в качестве антидота) усиливает его иммуносупрессивный эффект[Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001], поэтому представляет интересисследование эффективности иммуностимуляторов при комбинированномдействии метанола, этиленгликоля и их антидота этанола.В ходе проведенных нами опытов установлено (табл. 8.10), чтоприменение Т-активина (как препарата, восстанавливающего наряду симунофаном показатели клеточного иммунитета) в дозе 10 мкг/кг послеотравления метанолом и лечения его назначением этанола частичновосстанавливало реакцию ГЗТ, увеличивая ее в 1,63 раза по сравнению сданным показателем при комбинированном действии спиртов.Таблица 8.10Влияние иммуномодуляторов на показатели клеточного иммунитета у крыспри острой интоксикации метанолом с применением его антидота этанола(0,75 ЛД 50 ) (M+m)ВеществаРеакция ГЗТ, ЕЦ, % АЗКЦ,%%Контроль (23) 30,2+1,3 31,2+1,4 19,1+0,8Метанол 18,0+1,9* 17,2+ 2,1* 8,7+1,1*Этанол 24,3+2,5** 21,5+2,2* 13,8+1,4*Метанол +этанол 15,0+1,8* 12,9+1,5* 6,6+0,8*Метанол +этанол + Т-активин 24,5+2,3 24,2+2,1* 12,3+1,9*Метанол +этанол + имунофан 26,1+2,5 26,2+2,0* 14,1+1,8*Метанол+этанол+Т-активин+имунофан31,4+2,6 32,4+3,0 22,3+2,3Примечание: ЕЦ и АЗКЦ определяли через 3 и 5 сут соответственно; в каждой серииопытов использовалось 6-9 животных; этанол вводили внутрибрюшинно в дозе 3 г/кг 2раза в сутки; *; **- различие с контролем достоверно - р
230показателем после комбинированного воздействия спиртов без примененияиммуностимулятора. Применение имунофана после отравления метанолом вкомбинации с этанолом повышало по сравнению с показателями приинтоксикации данными веществами формирование ГЗТ, ЕЦ и АЗКЦсоответственнов 1,74; в 2,03 и 2,14 раза. При этом ЕЦ и АЗКЦ послеприменения Т-активина и имунофана оставались ниже контрольного уровня(p
231Активность ЕКК и АЗКЦ Т-активин после действия этиленгликоля вкомбинации с этанолом увеличивал соответственно в 1,73 и 2,31 раза посравнению с показателем после отравления данными соединенями.Применение имунофана после отравления этиленгликолем в сочетании сэтанолом повышало по сравнению с показателями при интоксикации этимиспиртами без применения иммуностимулятора формирование ГЗТ, ЕЦ иАЗКЦ соответственно в 1,82; в 1,88 и 2,18 раза. При этом ЕЦ и АЗКЦ послеприменения Т-активина и имунофана оставались ниже контрольного уровня(p
232дозе 10 мкг/кг при назначении его в течение 3 сут полностью восстанавливалфункцию Th1-лимфоцитов (в реакции ГЗТ), активность ЕКК и АЗКЦ послеострого отравления метанолом, этиленгликолем, этанолом, дихлорэтаном,тетрахлорметаном и трихлорэтиленом. При комбинированном действииметанола и этанола, а также этиленгликоля и этанола (использование этанолав качестве антидота после отравления метанолом и этиленгликолем) толькоиспользование Т-активина в комбинации с имунофаном в течение трех сутокприводило к полному восстановлению параметров клеточного звенаиммунитета. При острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами по степени увеличения активности иммуномодуляторы вотношении основных показателей клеточного иммунитета располагались впоследовательности: миелопид – тимоген - Т-активин - имунофан.Стимуляция активности ЕКК и АЗКЦ Т-активином и имунофаном былапрактически одинаковой.8.3. Влияние имунофана на перекисное окисление липидов после острогоотравления спиртами и хлорированными углеводородамиУчитывая антиоксидантные свойства имунофана, представляет интересисследование его влияния на состояние ПОЛ при остром отравленииспиртами и ХУ. Наши исследования влияния имунофана на ПОЛ послеострой интоксикации данными токсикантами показали (табл. 8.12), чтоприменение имунофана в дозе 10 мкг/кг в течение 3 сут частичновосстанавливает показатели ПОЛ, увеличенные воздействием ядов.Установлено, что под влиянием имунофана после действия спиртов ихлорированных углеводородов происходит снижение суммарной продукциирадикалов (СПР) и содержания МДА в крови по сравнению с показателямипри отравлении ксенобиотиками.
233Таблица 8.12Действие острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами(0,75 ЛД 50 ) на показатели перекисного окисления липидову крыс через 3 сут (M+m)ТоксикантыСуммарнаяпродукциярадикалов, усл. ед.Малоновыйдиальдегид, нмоль/млКонтроль 33,4+4,0 8,51+ 0,38Метанол 53,6+6,1* 10,43+ 0,47*Метанол+имунофан 42,1+4,0** 9,34+ 0,40**Этиленгликоль 56,3+6,5* 11,15+ 0,53*Этиленгликоль+имунофан 43,0+5,1** 9,87+ 0,50**Этанол 44,5+3,9** 9,36+ 0,57Этанол+имунофан 36,1+3,7 8,90+ 0,55Дихлорэтан 67,8+6,9* 12,13+ 0,59*Дихлорэтан+имунофан 51,9+5,3* 10,49+ 0,60*Тетрахлорметан 75,5+7,1* 14,27+ 0,61*Тетрахлорметан+имунофан 56,9+5,8* 11,82+ 0,63*Трихлорэтилен 60,0+6,8* 11,56+ 0,62*Трихлорэтилен+имунофан 49,8+5,4* 9,39+ 0,44**Примечание: в каждой серии использовалось от 9 до 14 крыс; *; **- различие с контролемдостоверно - р
234Известно, что антиоксидантное действие имунофана предотвращаетповреждение ДНК лимфоцитов и гранулоцитов, вызванное действиемтоксикантов, вызывая редукцию образования апоптотических клеток[Караулов А.В. и соавт., 2005].Таким образом, имунофан снижает процессы свободно-радикальногоперекисного окисления липидов (в том числе, по всей видимости, липидовИКК) после острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами. Этот эффект имунофана является одним из факторов,способствующих восстановлению показателей системы иммунитета послеострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами.РезюмеПодводя итог данной главы, можно заключить, применение тимогена, Т-активина и миелопида в течение 3 сут приводило к частичномувосстановлению факторов НРО после отравлении спиртами ихлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ). Использование имунофана втечение 3 сут в дозе 10 мкг/кг обеспечивало полное восстановление доконтрольных уровней основных факторов НРО. В целом в порядкеувеличения активности иммуностимуляторы располагались впоследовательности: миелопид-тимоген-Т-активин-имунофан.Использование в качестве иммуностимуляторов после остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 )любого из использованных препаратов (тимогена, Т-активина, миелопида,имунофана) обеспечивало полное восстановление основных показателей В-системы иммунитета только при отравлении этанолом. После острогодействия дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена только придействии имунофана достигалась нормализация показателей гуморальногозвена иммунитета. После острого действия метанола в комбинации сэтанолом только использование имунофана в сочетании с фолинатом кальция
235полностью восстанавливало показатели В-системы иммунитета. Послеострого отравления этиленгликолем и применения после него в качествеантидота этанола только использование имунофана в комбинации с Т-активином полностью восстанавливало показатели В-звена системыиммунитета. В целом по увеличению степени активности в отношении Т-зависимого иммуногенеза при острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами иммуностимуляторы располагались впоследовательности: миелопид – тимоген - Т-активин - имунофан, а вотношении Т-независимого антителобразования (число АОК к Vi-Ag) впорядке увеличения эффекта – в последовательности: Т-активин - тимоген -миелопид – имунофан.Применение в качестве иммуностимуляторов после острого отравленияспиртами и хлорированными углеводородами тимогена и Т-активина в дозе10 мкг/кг в течение 3 сут обеспечивало частичное восстановление основныхпоказателей клеточного иммунитета. Применение миелопида в дозе 5 мкг/кг(3 сут) не восстанавливало клеточные иммунные реакции (за исключениемэффекта после отравления этанолом). Имунофан в дозе 10 мкг/кг приназначении его в течение 3 сут полностью восстанавливал функцию Th1-лимфоцитов (в реакции ГЗТ), активность ЕКК и АЗКЦ после острогоотравления метанолом, этиленгликолем, этанолом, дихлорэтаном,тетрахлорметном и трихлорэтиленом. При комбинированном действииметанола и этанола, а также этиленгликоля и этанола (использование этанолав качестве антидота после отравления метанолом и этиленгликолем) толькоиспользование Т-активина в комбинации с имунофаном в течение трех сутокприводило к полному восстановлению параметров клеточного звенаиммунитета. При острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами по степени увеличения активности иммуномодуляторы вотношении основных показателей клеточного иммунитета располагались впоследовательности: миелопид – тимоген - Т-активин - имунофан.
236Стимуляция активности ЕКК и АЗКЦ Т-активином и имунофаном былапрактически одинаковой.Таким образом, тимоген, Т-активин, миелопид и иммунофан способнывосстанавливать показатели НРО, гуморального и клеточного иммунитета.Максимальная стимулирующая способность выявлена у имунофана.Высокая эффективность в отношении Т-зависимого антителообразования,клеточного звена иммунитета и Т-независимой антителопродукцииустановлена соответственно у Т-активина и миелопида. Прикомбинированном действии метанола и этанола, этиленгликоля и этанолавосстановление иммунного статуса достигается примененениемсоответственно имунофана в сочетании с фолинатом кальция и имунофана всочетании с Т-активином. Имунофан снижает процессы свободнорадикальногоперекисного окисления липидов после острого отравленияспиртами и хлорированными углеводородами. Этот эффект имунофанаявляется одним из факторов, способствующих восстановлению показателейсистемы иммунитета после острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами.
237ЗАКЛЮЧЕНИЕПроведенные исследования закономерностей острогоиммунотоксического действия спиртов и хлорированных углеводородов насостояние НРО и иммунной защиты позволили выявить глубину и основныетенденции происходящих нарушений иммунного гомеостаза, определитьнаправления патогенетически обоснованной коррекции изменений наиболееважных показателей НРО, а также гуморальных и клеточных иммунныхреакций, вызванных данными ТХВ. В ходе обобщения обширногоинформационного материала и результатов собственных исследованийпроанализированы причинно- следственные связи в процессах измененияхарактера и механизмов нарушений НРО и иммунного статуса приотравлении спиртами и хлорированными углеводородами, что позволилосформулировать основные положения заключения и выводы.В последнее десятилетие частота острых интоксикаций различнымихимическими соединениями и, в частности, спиртами и хлорированнымиуглеводородами существенно увеличилась [Алиев Н.А., 1991а; Алиев Н.А.,Мустафаев М.А., 1992; Лукомская М.И., 1992; Бонитенко Е.Ю., 1995; НемцовА.В., 1995; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. 2000; Забродский П.Ф. и соавт.,2004б]. Наибольшие темпы роста характерны в последние годы в отношенииуровня острых отравлений этанолом, этиленгликолем и метанолом. Данныеотравления по числу летальных исходов занимают первое место средиинтоксикаций другими химическими веществами [Кожемякин Л.А. и соавт.,1991; Нужный В.П., Прихожан Л.М., 1996; Нужный В.П., 2001]. Это связано спостоянно увеличивающимся потреблением этилового спирта [Ливанов Г.А.,2000], которое может сопровождаться в случаях использования вместо него сцелью опьянения ядовитых спиртов и хлорированных углеводородов.Данные токсиканты оказывают многосторонее действие на все системыорганизма, а особенностями острых отравлений этими ТХВ является их
238групповой или массовый характер [Забродский П.Ф., 1999; Бонитенко Ю.Ю.,Куценко С.А., 2004; Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Не вызывает сомнения, что одной из причин танатогенеза при острыхотравлениях спиртами и хлорированными углеводородами являютсяинфекционные заболевания и осложнения (постинтоксикационныепневмонии), обусловленные нарушениями НРО и иммунной защиты.Патогенез поражения НРО и иммунной системы спиртами и хлорированнымиуглеводородами в настоящее время изучен недостаточно, не исследованавзаимосвязь нарушений иммунного гомеостаза с перекисным окислениемлипидов и изменением функции гипоталамо-гипофизарно-адреналовойсистемы [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000; Забродский П.Ф. и соавт.,2004а, 2004б].Изучение влияния патогенетически обоснованной коррекции нарушенийНРО и иммунного статуса при остром токсическом действии спиртов ихлорированных углеводородов имеет как теоретическое значение, раскрываянеизвестные механизмы регуляции иммуногенеза, так и практическое,позволяя обеспечить профилактику и лечение возникающих при острых ихронических интоксикациях спиртами и хлорированными углеводородамимногочисленных инфекционных заболеваний в результате дисфункцийсистемы иммунитета [Хаитов Р. М. и соавт., 2000; Агапов В.И. и соавт., 2004;Забродский П. Ф. и соавт., 2004а; Descotes J., 1986; Luster M. J. et al., 1987;Georgiev V. St., Albright J. E., 1993].Анализ источников литературы, посвященных патогенезу пораженияразличными ядами печени, позволяет считать, что данный эффект тесносвязан с реализацией иммунных реакций и функцией цитокинов [KaplowitzN., 2004]. Токсиканты и их метаболиты в результате взаимодействия спротеинами, липидами и нуклеиновыми кислотами гепатоцитов, а такжевследствие инициирования ПОЛ приводят к поражению митохрондрий ипоследующему некрозу клеток. Кроме того, реализация повреждений,
239связанных с «внутриклеточным стрессом» (повреждение различных органеллклеток – ядра, микротрубочек, эндоплазматического ретикулума и др.),вызывает апоптоз гепатоцитов. К апоптозу приводит также сенситизация(увеличение чувствительности) клеток к цитокинам, в частности к факторамнекроза опухоли (TNF). Являясь гаптенами, а также инициируя их появлениевследствие повреждения цитохрома Р-450 и других энзимов, гепатотропныеяды активируют иммунные реакции, в частности апоптоз вследствие действиягранзимов ЕКК [Kaplowitz N., 2004].Систематизированные сведения о влиянии различныхиммуностимуляторов на НРО и иммунную систему при острых отравленияхспиртами и хлорированными углеводородами крайне ограниченны и неотражают даже минимального уровня представлений о характере влиянияэтих препаратов на основные гуморальные и клеточные иммунные реакции.Этот вопрос имеет большое прикладное значение, несомненно, что егорешение будет способствовать снижению числа инфекционных осложненийи заболеваний, уменьшению частоты смертельных исходов после острыхотравлений не только спиртами и хлорированными углеводородами, но идругими токсикантами.Таким образом, проблема нарушений неспецифической резистентностиорганизма и иммунного статуса при острых отравлениях спиртами ихлорированными углеводородами и их коррекция в постинтоксикационныйпериод важна как в теоретическом, так и в практическом отношении,учитывая достаточно широкое распространение и использование впромышленности, технике и быту спиртов и хлорированных углеводородов, атакже ядовитых технических жидкостей, содержащих эти соединения,высокую летальность при отравлении ими (возможность использованияметанола, этиленгликоля и хлорированных углеводородов в качествесуррогатов алкоголя), недостаточно изученные особенности их действия намеханизмы регуляции системы иммунитета.
240Полученные результаты нашего исследования в экспериментах набеспородных белых крысах после острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами в дозах 0,75 LD 50 по изучению состоянияантиинфекционной неспецифической резистентности организма показали,что под влиянием метанола, этиленгликоля, этанола, дихлорэтана,тетрахлорметана и трихлорэтилена происходят однотипные измененияинтегральной антиинфекционной НРО, выраженные в ее снижении.Увеличение летальности от экспериментальной инфекции через 2 сутпосле острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородамиможет быть связано с редукцией бактерицидной активности сыворотки крови,сывороточной активности лизоцима, тромбоцитарно – катионного белка (βлизина)и фагоцитарно-метаболической активности ПЯЛ, системыкомплемента и пропердина, а также с изменением активности ГГАС, чтосогласуется с результатами исследований других авторов [Горизонтов П.Д.,1981а, 1981б; Петров Р.В., 1987; Ледванов М. Ю., Киричук В.Ф., 1996;Шмидт Р., Тевс Г., 1996; Василенко О.А., 2004].На устойчивость животных к инфекции оказывают влияние состояниесимпатического и парасимпатического отдела вегетатиной нервной системы,функциональное состояние ГГАС и ГАМК-ергической нейромедиаторнойсистемы, измененное острой интоксикацией ксенобиотиками [ЗабродскийП.Ф., 1999а; Забродский П.Ф. и соавт., 2004а; Агапов В.И. и соавт., 2004;Madden K.S., Livnat S., 1991; Rinner I. et al., 1995].Анализируя результаты, следует отметить, что под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов происходит дозозависимая редукция БАСКв течение 6-9 сут после острого отравления. По степени сниженияпараметра токсиканты в порядке уменьшения эффекта располагались вследующей последовательности: хлорированные углеводороды, метанол,этиленгликоль, этанол.
241По нашему мнению, снижение БАСК, которая определяется активностьюлизоцима, ТКБ, комплемента и других факторов, под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов может быть связано с нарушением синтезаданных антибактериальных ферментов, уменьшением их активности и/илисекреции из клеток крови. Можно предположить, что БАСК уменьшаетсятакже вследствие взаимодействия и последующей инактивации метаболитовспиртов и хлорированных углеводородов с пептидными антибиотиками,синтезируемыми организмом животных и человека.Полученные данные показывают, что спирты и хлорированныеуглеводороды вызывают прямо связанное с дозой уменьшение активностилизоцима в сыворотке крови. По степени снижения параметратоксиканты в порядке уменьшения эффекта располагались впоследовательности: хлорированные углеводороды, метанол, этиленгликоль,этанол. Сывороточная активность лизоцима после острого действиятоксикантов восстанавливается к 9 сут. наблюдения.Редукция активности лизоцима под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов, вероятно, связана с ингибированием неспецифических эстеразклеток крови, а также вследствие эффекта токсикантов и их метаболитов,ингибирующих многочисленные биохимические реакции. Редукция синтезализоцима может происходить также вследствие воздействия продуктовбиотрансформации спиртов и хлорированных углеводородов на ДНК, чтоприводит к нарушению нуклеинового обмена [Голиков С.Н. и соавт., 1986;Тиунов Л.А., 1990а].Нами установлено, что спирты и хлорированные углеводороды приостром отравлении вызывают прямо связанное с дозой уменьшениеактивности тромбоцитарно-катионного белка в сыворотке крови. При этомактивность ТКБ в крови после острого действия токсикантоввосстанавливается к 9 сут. наблюдения. Степень снижения активности ТКБхлорированными углеводородами превышала редукцию ее спиртами.
242Снижение сывороточной активности ТКБ может быть связано сдействием спиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов на егосинтез и выделение тромбоцитами. Механизм супрессии активности ТКБ (βлизина),видимо, обусловлен нарушением функции тромбоцитов в результатевзаимодействия с сульфгидрильными и аминогруппами ферментоввысокотоксичных продуктов биотрансформации испытуемых токсикантов,ингибированием тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования,инициацией перекисного окисления липидов, что не противоречитлитературным данным [Ротенберг Ю.С., 1982; Голиков С.Н. и соавт., 1986;Gabon P.A., 1986; Iokobsen D.,1984; Забродский П.Ф. и соавт., 2004а, 2004б;Василенко О.А., 2004]. Нарушение продукции ТКБ, вероятно, наряду сдействием спиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов наклеточном уровне может быть обусловлено изменением активности ГГАС[Бухарин О.В. и соавт., 1998].Показано, что острое токсическое действие спиртов и хлорированныхуглеводородов через 1-3 сут после отравления вызывает незначительнуюредукцию активности системы комплемента. При этом дозозависимыйэффект ядов выражен слабо.Исходя из данных литературы [Кульберг А.Я., 1985, 1986; Тиунов Л.А.,1990а, 1990б; Kondo M. et al., 1986], установленный факт может бытьобъяснен тем, что система комплемента представляет собой сложнуюмногокомпонентную биологическую систему, для нарушения которойтоксическое действие яда должно быть направлено на определенныеключевые ее энзимы (то есть должна быть обеспечена специфичность). Крометого, такая сложная система способна к саморегуляции в случаях воздействияхимических и физических факторов, которое не превышает ее возможностисохранить свою функцию. Система комплемента высокодинамична ибиосинтез ее компонетов с большой скоростью осуществляется в клетках
243паренхимы печени и моноцитарно-макрофагальной системы [Хаитов Р.М. исоавт., 2000].Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что при остройинтоксикации спирты и ХУ вызывают дозависимое снижение ФМАН втечение 1-3 сут (этанол), 3-6 сут (трихлорэтилен) и до 9 сут (метанол,этиленгликоль, дихлорэтан, тетрахлорметан). Максимальное снижениеФМАН зарегистрировано после отравления дихлорэтаном, минимальное –после действия этанола. По степени редукции ФМАН токсиканты в порядкеуменьшения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан,тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль, этанол.Анализируя ФМАН, следует отметить, что характер измененийпоказателей при действии исследуемых спиртов и хлорированныхуглеводородов практически не отличался. Менее токсичные соединениятрихлорэтилена и этанола вызывали более кратковременные и менеевыраженные сдвиги параметров ФМАН.Похожий характер изменений ФМАН был обнаружен ранее вэкспериментах с пероральным отравлением дихлорэтаном [Давыдова Е.В. исоавт., 1995] при обследовании пациентов с отравлениями суррогатамиалкоголя [Романенко О.И., Гребенюк А.Н., 1997; Сосюкин А.Е. и соавт.,1997]. Несмотря на различные специфические механизмы действия метанолаи дихлорэтана, проявление их токсичности на уровне ПЯЛ, как и впроведенных нами опытах, было сходным [Гребенюк А.Н., Романенко О.И.,1996].Результаты, полученные нами в НСТ-тесте, свидетельствуют, чтодействие спиртов и хлорированных углеводородов на ФМАН реализуетсявследствие взаимодействия токсикантов и их метаболитов с НАДФ·Н,НАДФ + . Это подтверждают данные литературы [Румянцев А.П. и соавт.,1981; Брызгина Т. М., 1989]. Кроме того, токсическое действие спиртов ихлорированных углеводородов может связано с ингибированием ФАД + ,
244ФАД·Н, восстановленным и окисленнным убихиноном и цитохромом b 245лейкоцитов. Кроме кислородзависимых антиинфекционных системфагоцитоза спирты, хлорированные углеводороды и продукты ихбиотрансформации, вероятно, поражают и кислороднезависимыемикробицидные системы фагоцитов [Гребенюк А.Н. и соавт., 1998].Существенное значение в угнетении ФМАН может иметь дисфункцияГГАС под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов, приводящая кизменению чувствительности микро- и макрофагов к микроорганизмам, врезультате чего угнетается их цитотоксичность [Маянский А. Н., МаянскийД. Н., 1983; Петров Р. В., 1987; Брюхин Г. В., Михайлова Г. И., 1990;Гребенюк А.Н. и соавт., 1998]. Показано, что глюкокортикоиды снижаюсуммарную фагоцитарную активность фагоцитов крыс, причемсущественную роль в данном феномене играют адреналин [Шилов Ю.И.,2001].Нарушение активности ФМАН, по нашему мнению может быть связанос мембранотоксическим действием спиртов и хлорированных углеводородов,инициацией процессов ПОЛ мембран нейтрофилов, их взаимодействием ссульфгидрильными, гидроксильными и другими группами мембранфагоцитов, нарушением функции ферментов тканевого дыхания митохондрийПЯЛ [Ротенберг Ю.С., 1980, 1982; Голиков С.Н. и соавт., 1986; ЗабродскийП.Ф., 2002; Gabon P.A., 1986; Iokobsen D.,1984]. Не исключеноингибирование неспецифичекой эстеразы нейтрофилов хлорированнымиуглеводородами и их метаболитами [Забродский П. Ф., 1996; Забродский П.Ф. и соавт, 1997, 2000; Harris A., 1973; Li C. G. et al., 1983].Нами экспериментально установлено, что под влиянием острогоотравления спиртами и ХУ снижается миграция КОЕс из КМ. Редуцирующийэффект токсикантов уменьшался в последовательности: дихлорэтан,тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль и этанол.
245При острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородамиуменьшение числа КОЕс обусловлено, видимо, преимущественноспецифическим и неспецифическим действием исследуемых токсикантов иих метаболитов. Данные эффекты, связанные с ингибированием ферментныхсистем лимфоидной стволовой клетки и КОЕс, а также с реализацией стрессреакции,по всей видимости, приводят к редукции пролиферации КОЕс и/илиувеличению их гибели. Кроме того, острое отравление хлорированнымиуглеводородами, вероятно, вызывает инактивацию эстераз КОЕс [ПетровР.В., Хаитов Р.М., 1981; Беликов В.Г., 2001; Василенко О.А., 2004;Забродский П. Ф., 1998]. Следует отметить, что среди клеток костного мозгаэстеразопозитивными клетками являются мегакариоциты, монобласты,миэлобласты, промиелоциты [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983].Снижение числа КОЕс под влиянием спиртов может быть обусловленоингибированием тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования влимфоидных стволовых клетках, КОЕс (реализация одного их общихмеханизмов токсичности большого числа ксенобиотиоков [Ротенберг Ю.С.,1982]), нарушением функции ферментов этих клеток в результатевзаимодействия метаболитов токсикантов с их сульфгидрильными иаминогруппами [Iokobsen D., 1984; Gabon P.A., 1986].Инициация процессов ПОЛ под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов, как одного из общих механизмов иммунотоксичности[Забродский П.Ф., 2002], также, вероятно, может приводить к снижениюКОЕс.Следует отметить, возможна активация парасимпатического отделавегетативной нервной системы вследствие антихолинэстеразного эффектахлорированных углеводородов [Тиунов Л.А., 1990а; Забродский П.Ф. исоавт., 2003]. При этом ацетилхолин, вероятно, способен активировать м-холинорецепторы КОЕс, что приводит к увеличению их миграции изкостного мозга в селезенку с последующим образованием пяти типов колоний
246[Забродский П. Ф., 1993]. Многочисленные данные литературы косвенноподтверждают это предположение [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б; ПетровР.В. и соавт., 1981а; Дешевой Ю. Б., 1985; Kutty K. M., 1976; Maslinski W. etal., 1992]. Однако, несомненно, факторы, снижающие КОЕс, существеннопревышают возможный стимулирующий миграцию КОЕс эффектацетилхолина при действии хлорированных углеводородов (дихлорэтан,трихлорэтилен) [Тиунов Л.А., 1990б; Забродский П.Ф. и соавт., 2004а].Снижение числа КОЕс прямо связано с миграцией В-клеток из КМ[Петров Р.В. и соавт., 1981б], поэтому вполне обоснованно можно полагать,что спирты и ХУ снижают также и этот важный параметр индуктивной фазыиммуногенеза.Результаты исследования острого токсического действия спиртов ихлорированных углеводородов показали дозозависимое в течение 1-3 сутснижение лимфоидных индексов тимуса и селезенки. Показателивосстанавливаются до контрольного уровня в последующие 6 сут.Максимальное уменьшение показателя характерно для токсического действияхлорированных углеводородов, минимальное - для спиртов.Установленный эффект токсикантов может быть связан с апоптозомклеток органов иммунной системы в результате действия ядов и ихметаболитов, а также с эффектом кортикостероидов [Петров Р. В. и соавт.,1981а, 1981б] вследствие реализации стресс-реакции после острого действияксенобиотиков [Идова В.Г. и соавт., 2004].Проведенный анализ результатов исследования выявил, что подвлиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородамив прямой зависимости от дозы снижается содержание Т-лимфоцитов в тимусеи лимфоцитов в селезенке через 1-3 сут после интоксикации. Существенныхразличий между установленными показателями редукции, вызванной ядами,выявлено не было, хотя максимальное снижение показателя характерно длядихлоэтана, а минимальное - для этиленгликоля и этанола. В последующие
247сроки наблюдения, через 6 сут после действия токсикантов содержаниелимфоцитов в тимусе и селезенке восстанавливалось до контрольного уровня.Выявленное изменение содержания в тимусе и селезенке лимфоцитовявляется показателем, характеризующим способность данных органовобеспечивать иммуногенез, то есть реализацию клеточных и гуморальныхиммунных реакций. Поддерживая мнение других исследователей, мысчитаем, что спирты и хлорированные углеводороды способны снижать массутимуса и селезенки, а также содержание в них лимфоцитов в результатереализации стресс-реакции (действие гормонов коры надпочечников, вчастности, кортикостерона) [Мутускина Е.А. и соавт., 2001], уменьшаямиграцию в эти органы лимфоцитов из костного мозга [Петров Р. В. и соавт.,1981а, 1981б; Забродский П.Ф., 1998; Молотков А.О., 2002], подавляяпролиферацию лимфоцитов в тимусе и селезенке [Петров Р. В., 1987],усиливая миграцию из тимуса и селезенки лимфоцитов в циркулирующуюкровь (реализация перераспределения, вследствие действия кортикостероидови катехоламинов) [Горизонтов П.Д., 1981а; Dhabhar F. S. et al., 1996]. Кромеданных процессов, после отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами возможен лизис лимфоцитов в органах системы иммунитетапод влиянием кортикостероидов [Claman H.N., 1983].Можно предположить, что дихлорэтан, трихлорэтилен, оказываяантихолинэстеразный эффект [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б], снижают числоклеток в тимусе не только вследствие апоптоза [Хаитов Р.М и соавт., 2000;Durant S., 1986], но и в результате их миграции из органа.Содержание лимфоцитов в селезенке зависит от функциональногосостояния α-адренорецепторных структур этого органа [Горизонтов П.Д.,1981а, 1981б]. Возможно, изменение активности ГГАС приводит к снижениюлимфоцитов в данном органе.При остром токсическом действии спиртов и хлорированныхуглеводородов снижение содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке
248происходит, вероятно, и вследствие их общетоксического эффекта за счетподавления пролиферации иммуноцитов в результате ингибированияферментов тканевого дыхания митохондрий ИКК, а также инактивацииметаболитами токсикантов многочисленных ферментных системлимфоцитов. Кроме того, спирты и хлорированные углеводороды способнынарушать процесс позитивной (положительной) селекции Т-лимфоцитов[Fink P.J., Bevan M.J., 1995; Maekawa Y., Yasutomo K., 2005]. Один изметаболитов дихлорэтана – хлоруксусная кислота – является сильныммитохондриальным ядом, ингибитором цикла трикарбоновых кислот(тканевого дыхания) ИКК [Маркизова Н.Ф. и соавт., 2004].Необходимо отметить, что миграция лимфоцитов из органов системыиммунитета весьма динамичный процесс, зависящий от времени суток[Dhabhar F. S. et al., 1996] и различных физических и химических факторов, вчастности от изменения функционального состояния органов системыиммунитета под влиянием ГГАС, в частности от кортикостероидов[Горизонтов П. Д., 1981б; Claman H.N., 1983; Dhabhar F. S. et al., 1996],катехоламинов [Маdden K. S., Livnat S., 1991], а также изменения состоянияхолинергической системы [Забродский П.Ф. и соавт., 2001].Результаты исследования влияния спиртов и хлорированныхуглеводородов в дозе 0,75 ЛД 50 на число лимфоцитов в костном мозге илимфоузлах показали, что редукцию показателей вызывают в течении 1-3 суттолько хлорированные углеводороды. При этом установлено, что снижениеколичества лимфоцитов в крови вызывает отравление дихлорэтаном. Длядихлорэтана характерно снижение лимфоцитов в иммунных органах, котороеносит дозозависимый характер.Существуют основания полагать, что снижение лимфоцитов в органахсистемы иммунитета может быть связано с активацией ГГАС при действиихлорированных углеводородов, изменением характера холинергическойиннервации лимфоидных органов при остром отравлении дихлорэтаном и
249тетрахлорметаном. Кроме того, спирты, хлорированные углеводороды и ихметаболиты способны, ингибируя многочисленные энзимы ИКК и инициируяПОЛ, вызывать нарушение гемопоэза и гибель иммуноцитов (апоптоз)[Хаитов Р.М и соавт., 2000; Durant S., 1986].Выраженное токсическое действие метанола на В-лимфоциты в отличиеот эффектов других исследуемых токсикантов обусловлено, вероятно,основным фолат-зависимым метаболизмом формиата [Румянцев А.П. исоавт., 1981]. Можно предположить, что при этом формиат является своегорода антагонистом фолиевой кислоты, активно ее используя, снижаетресурсы дигидрофолатредуктазы. В результате уменьшается образованиететрагидрофолиевой кислоты, ингибируется перенос метильных групп,снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт.,2000]. Вероятно, метанол также способен нарушать и процесс селекцииестественных аутореактивных В-лимфоцитов [Hayakawa K., 1999].Полученные данные показали, что острое действие спиртов ихлорированных углеводородов (0,75 ЛД 50 ) приводит к снижению Т-зависимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к ЭБ в кровичерез 5, 8 и 11 сут после иммунизации, в большей степени в продуктивнуюфазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом. Токсикантырасполагались в порядке снижения эффекта в последовательности:дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль иэтанол.Проведенные нами экспериментальные исследования свидетельствуют,что при остром отравлении спиртами и хлорированных углеводородов впродуктивной фазе иммуногенеза их токсическое воздействие выражено вбольшей степени, чем в индуктивной фазе антителогенеза. Это может бытьсвязано с большим поражающим действием спиртов и особенно ихметаболитов на синтез IgM и IgG В-клетками (плазмоцитами) cпленоцитов,нарушением процессов дифференцировки В-лимфоцитов,
250перераспределением лимфоцитов между органами системы иммунитета впериод максимальной антителопродукции (3-5 сут после иммунизации), атакже с ингибирующим синтез антител действием кортикостероидов [ClamanH.N., 1983], концентрация которых в крови при действии различныхтоксикантов увеличивается (стресс-реакция) [Селье Г., 1972].Из полученных данных следует, что спирты и хлорированныеуглеводороды при острой интоксикации вызывают дозозависимое снижениеТ-зависимого антителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке,отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный периодиммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. Постепени редукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен,метанол, этиленгликоль и этанол.Существуют основания полагать, что под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов в продуктивной фазе иммуногенеза посравнению с индуктивным периодом происходит более выраженная редукцияфункции Th1-лимфоцитов, индуцирующих синтез IgM, а также, в меньшейстепени, Тh2-лимфоцитов [Pfeifer C. et al., 1991], участвующих в синтезе IgGплазмоцитами селезенки [Heyman B., 2003].Снижение функции Т-зависимого антителообразования под влияниемспиртов и хлорированных углеводородов, по нашему мнению, может бытьсвязано с реализацией различных механизмов иммунотоксических эффектов:на уровне систем – с активацией ГГАС, на уровне взаимодействия клеток - соснижением кооперации Т-и В-лимфоцитов, на субклеточном уровне - синициацией ПОЛ, ингибированием эстераз иммуноцитов,мембранотоксическим действием, в частности, повреждением мембранлизосом ИКК с высвобождением и активацией кислых гидролаз, намолекулярном уровне – с ингибированием энзимов тканевого дыхания
251митохондрий ИКК, что не противоречит литературным данным [Голиков С.Н.и соавт., 1986; Забродский П.Ф., 2002; Ротенберг Ю.С., 1982].Показано, что стресс-реакция вследствие психоэмоциональногонапряжения, может приводить к снижению АОК в селезенке мышей в 4 раза[Идова В.Г. и соавт., 2004] вследствие увеличения содержания в кровиглюкокортикоидов [Свирид В.Д., 2002]. Вполне логично полагать,постинтоксикационный стресс оказывает существенное влияние насупрессию гуморального иммунного ответа [Забродский П.Ф., и соавт., 2000].Исходя из полученных результатов следует, что под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов уменьшается антителообразование, вчастности, синтез IgG, что свидетельствует о снижении функции Th2-лимфоцитов. По степени уменьшения числа АОК, синтезирующих IgG вселезенке, токсиканты располагались в последовательности:тетрахлорметан, метанол, дихлорэтан, трихлорэтилен, этиленгликоль иэтанол. Обращает на себя внимание наибольший иммунотоксический эффекттетрахлорметана. Это связано с оценкой показателя на 8 сут послеотравления. Тетрахлорметан, который по сравнению с другимихлорированными углеводородами и спиртами выводится из организма оченьмедленно [Тиунов Л.А., 1990а]. Именно на 8 сут он оказывает максимальновыраженный по сравнению с другими ядами эффект.К факторам, супрессирующим синтез IgG при острой интоксикацииспиртами и хлорированными углеводородами (это относится и к другим ядам,не ингибирующим синтез гормонов надпочечниками), вероятно, относитсяэффект кортикостероидов [Хусинов А.А. и соавт., 1991; Szot R.J., MurphyS.D., 1970; Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985; Szelenyi J.G. et al., 1982;Casale G.P. et al., 1983].Кроме того, установленное снижение синтеза IgG (а также IgM) подвлиянием спиртов и хлорированных углеводородов, по всей видимости,обусловлены ингибированием многочисленных энзимов, в том числе
252неспецифических эстераз Т-лимфоцитов (в основном, Th2) и макрофагов[Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983] как самими токсикантами, так и ихметаболитами [Забродский П. Ф., 2004б]. Также редукцияантителобразования может быть обусловлена снижением процессовтканевого дыхания вследствие взаимодействия метаболитов спиртов ихлорированных углеводородов с различными компонентами тканевогодыхания и окислительного фосфорилирования митохондрий ИКК.Результаты наших исследований показали, что острое отравлениеспиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) снижает число РОКв селезенке крыс. В порядке снижения эффекта данного показателятоксиканты располагаются в последовательности: тетрахлорметан, метанол,дихлорэтан, трихлорэтилен, этиленгликоль, этанол. Мы поддерживаеммнение исследователей и считаем, что различная степень иммунотоксичностиспиртов и хлорированных углеводородов может быть обусловленаособенностями их токсикокинетики и токсикодинамики.Выраженное действие метанола на В-лимфоциты (сходное по величинеэффекта с действием ТХМ и ДХЭ) обусловлено, по нашему мнению,преимущественно биотрансформацией его метаболита формиата энзимами,связанными с фолиевой кислотой, повышенное расходование которой наметаболизм метанола нарушает нуклеиновый обмен преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000].Кроме того, снижение РОК при токсическом действии спиртов ихлорированных углеводородов может быть связано с действием гормоновкоры надпочечников (стресс-обусловленная активация ГГАС), а также свозможной инициацией апоптоза иммуноцитов или снижением их функцииспиртами, хлорированными углеводородами и их метаболитами [ХусиновА.А. и соавт., 1991; Хаитов Р. М. и соавт., 2000; Durant S., 1986; Rinner I. etal.. 1995; Dhabhar F. S. et al, 1996].
253При изучении кооперации Т- и В-лимфоцитов мышей СВА in vitroоценка функции этих популяций иммуноцитов в данной реакцииосуществлялась по формированию АОК к ЭБ . Удельный вес Т- и В-клеток вобеспечении антителопродукции определяли путем сравнения числа АОКпосле инкубации той или иной популяции лимфоцитов с различнымиконцентрациями спиртов и хлорированных углеводородов. Кооперацию Т- иВ-лимфоцитов можно рассматривать, как механизм на уровне взаимодействияклеток, определяющий антителопродукцию. В модели in vitro роль клеток,представляющих антиген Т-лимфоцитам, вместо макрофагов выполняют В-клетки [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Ex vivo данный процесс изучался вмодели, предусматривающей забор Т- или В-клеток через 1 сут от сингенныхдоноров после воздействия на них ядов для изучения in vitro кооперации этихклеток соответственно с В- или Т-лимфоцитами интактных животных.В результате проведенных исследований по оценке кооперации Т- и В-лимфоцитов при остром токсическом действии спиртов, хлорированныхуглеводородов и их метаболитов in vitro, нами установлено, что по степениснижения редукции кооперации Т- и В-клеток токсиканты располагались впоследовательности: дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол,этиленгликоль, этанол. Существенных различий между действием накооперацию клеток исследуемых спиртов (а также различных хлорированныхуглеводородов) не отмечено. Мы полагаем, что спирты и хлорированныеуглеводороды нарушают кооперацию Т- и В-лимфоцитов преимущественновследствие иммунотоксического эффекта продуктов их биотрансформации.Под влиянием токсикантов в большей степени поражались Т-клетки.Выявленная закономерность отсутствовала при действии метанола на клеткипри переносе in vitro Т- или В-лимфоцитов от мышей после отравления. Постепени супрессии кооперации Т- и В-клеток при действии спиртов ихлорированных углеводородов на Т-лимфоциты in vitro при выделении этихклеток от сингенных мышей после отравления токсиканты располагались в
254последовательности: дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол,этиленгликоль, этанол, а по степени редукции кооперации клеток придействии ядов на В-лимфоциты (in vivo с выделением клеток и изучениемреакции in vitro) - в последовательности: метанол, дихлорэтан,тетрахлорметан, трихлорэтилен, этиленгликоль, этанол. По степениснижения функции Т-клеток в эффекте кооперации клеток in vitro спирты иих метаболиты располагались в порядке уменьшения эффекта впоследовательности: глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолеваякислота, муравьиная кислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль и этанол,а по степени супрессии активности В-клеток – в последовательности:муравьиная кислота, глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолеваякислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль, этанол. Сравнительнаяоценка действия дихлорэтана и его продуктов биотрансформации накооперацию Т- и В-лимфоцитов in vitro в процессе антителогенеза позволяетзаключить, что увеличение их иммунотоксичности происходит впоследовательности: дихлорэтан – хлорэтанол – хлоруксусный альдегид –хлоруксусная кислота. Действие ядов было прямо связано с их концентрациейили дозой (при переносе клеток in vitro от мышей после отравления).Анализируя результаты наших исследований, мы полагаем, что патогенезредукции активности Т- и В-клеток в процессе их кооперации, вероятно,связан с нарушением их функции как в результате прямогомембранотоксического эффекта испытуемых токсикантов, так и вследствиевзаимодействия с сульфгидрильными и аминогруппами энзимов лимфоцитоввысокотоксичных продуктов их биотрансформации, ингибирования имитканевого дыхания, окислительного фосфорилирования и синтеза белков,уменьшения активации Т- и В-лимфоцитов вследствие снижения продукциициклических нуклеотидов и секреции Т-клетками ИЛ-2 и ИЛ-4, а также врезультате повреждения мембраны лизосом ИКК с высвобождением иактивацией кислых гидролаз, что согласуется с результатами исследований
255других авторов [Козлов В.А. и соавт., 2001; Шуршалина А.В. и соавт., 2001;Gabon P.A., 1986; Parker D.C., 1993].Данные литературы свидетельствуют о том, что in vivoиммунотоксический эффект метаболита этиленгликоля глиоксиловойкислоты, по-видимому, минимальный. Это обусловлено тем, что наиболеетоксичная глиоксиловая кислота определяется в биосредах в концентрации1300 раз меньшей, чем гликолевая кислота [Chou S.Y., Richardson K.E., 1978],вероятно, вследствие ее быстрой биотрансформации.Как уже указывалось, более выраженное повреждающие воздействиемуравьиной кислоты в отношении В-клеток (по сравнению с Т-лимфоцитами)обусловлено преимущественно фолат-зависимым метаболизмом формиата[Румянцев А.П. и соавт., 1981].Полученные данные свидетельствуют о том, что спирты ихлорированные углеводороды при остром токсическом воздействии снижаютТ-независимое антителообразование, оцениваемое по ОДЛТА к Vi-Ag вкрови через 5 и 8 сут после иммунизации, преимущественно в продуктивнуюфазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодомантителопродукции. В порядке уменьшения редукции синтеза антителспирты и хлорированные углеводороды располагались в последовательности:метанол, дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, этиленгликоль, этанол.Существенные различия в действии токсикантов отсутствовали, заисключением иммунотоксического эффекта этанола, который был ниже, чему других ядов.После острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами выявлено дозозависимое снижение Т-независимогоантителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке,отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный периодантителогенеза по сравнению с индуктивной фазой антителопродукции. Постепени редукции синтеза IgМ В-клетками в Т-независимой гуморальной
256иммунной реакции токсиканты располагались в порядке снижения эффекта впоследовательности: метанол, дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен,этиленгликоль, этанол.Снижение Т-зависимой антителопродукции под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов, вероятно, обусловлено редукцией синтезаряда лимфокинов: BSF-1, активирующего В-клетки; росткового фактора В-клеток – BCGF-II, стимулирующего клональную экспансию активированныхклеток; фактора дифференцировки В-клеток - μ - BCDFμ, которыйспособствует созреванию клеток с высокой скоростью секреции IgM;фактора BCDFγ, вызывающего переключение синтеза с IgM на IgG ивысокую скорость его секреции [Ройт А., 1991; Хаитов Р.М. и соавт., 2000;Delves P.J., Roitt I.M., 2000; Kracker S., Radbruch A., 2004].Обращает на себя внимание максимальная супрессия Т-независимогоантителообразования под влиянием метанола по сравнению с другими ядами.Известно, что Т-независимая антителопродукция осуществляется В-клеткамибез участия Т-хелперов (в данном случае Тh1-лимфоцитов) [Hausmann S.,Wucherpfennig K.W., 1997; Ройт А. и соавт., 2000; Kracker S., Radbruch A.,2004]. Полученные данные подтверждают результаты наших экспериментовin vitro, в которых доказано поражение метанолом В-лимфоцитов в большейстепени, чем Т-клеток, по-видимому, вследствие нарушения обмена фолиевойкислоты метаболитом метанола формиатом [Ройт А. и соавт., 2000].Сравнительная оценка влияния спиртов и хлорированных углеводородовна Т-зависимое и Т-независимое антителообразование показывает, что подвлиянием токсикантов наблюдается преимущественное нарушение Т-зависимой антителопродукции. По нашему мнению это обусловлено, наряду сдругими механизмами, действием токсикантов одновременно на макрофаги,В-лимфоциты и Т-клетки (преимущественно на Th1-лимфоциты) [DelvesP.J., Roitt I.M., 2000]), участвующие в реализации данной иммунной реакции,в то время как Т-независимый гуморальный иммунный ответ обеспечивается
257в основном функцией В-клеток, активируемых антигеном в присутствии ИЛ-1, секретируемом макрофагами, [Ройт А., 1991; Ройт и соавт., 2000; GillbertK. M., Hoffman M. K., 1985; Sinha A.A. et al., 1987], и нарушается в меньшейстепени. Вполне естественно, что иммунотоксическое действие на триэлемента, взаимодействующих в процессе антителообразования, проявляетсябольшим его угнетением, чем при поражении одного или двух элементов,если нет оснований предполагать реализации селективного иммунотропногоэффекта. Следует отметить, что метанол не способен избирательно поражатьтолько В-лимфоциты. Оказывая максимальный повреждающий эффект на этиклетки по сравнению с другими ядами, он, как показали наши эксперименты,действует и на Т-клетки. При этом суммарный редуцирующий эффект на Т- иВ-клетки (Т-зависимый антителогенез) у метанола меньше, чем удихлорэтана.Снижение числа АОК, синтезирующих IgM и IgG, под влиянием спиртови хлорированных углеводородов свидетельствует о нарушении функции какТh1- , так и Th2-лимфоцитов (Т-хелперов первого и второго типа) [Pfeifer C.et al., 1991; Ellmeier W. et al., 1999; Maekawa Y., Yasutomo K., 2005].Наши исследования выявили существенные нарушения клеточныхиммунных реакций при остром токсическом действии спиртов ихлорированных углеводородов. Установлено, что под влиянием остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 )происходит снижение функции Т-клеток, оцениваемой по ингибированиюмиграции лейкоцитов, в течение времени до 6-9 сут. По степени редукциифункции Т-лимфоцитов, связанной с синтезом фактора ингибированиямиграции лейкоцитов, исследуемые токсиканты в порядке уменьшенияэффекта располагались в последовательности: дихлорэтан, тетрахлорметан,трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль, этанол. Существенных различий всупрессии активности Т-клеток не выявлено, за исключением действиядихлорэтана с эффектом этанола.
258Изучение формирования ГЗТ под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов в модели, не связанной с переносом клеток, позволяетустановить их действие на клеточный иммунитет, в частности, на функциюTh1 и продукцию ими лимфокинов [Georgiev V.St., Albright J.E., 1993], атакже на участвующие в реализации гиперчувствительности IV типа Т-клетокпамяти и макрофагов [Ройт А., 1991]. В адоптивной реакции (связанной спереносом клеток от доноров реципиентам, «to adopt» – принимать,присваивать) существует возможность оценить действие токсикантов навторичный клеточный иммунный ответ, формирование Th1-лимфоцитов вселезенке.Результаты наших исследований показали, что острая интоксикацияспиртами и ХУ дозозависимо снижает реакцию ГЗТ, характеризующую какпервичный, так и вторичный клеточный иммунный ответ. При этом выявлено,что наименьшей активностью обладает этанол, а действие остальныхтоксикантов существенно не отличается. В целом эффект ХУ превышаетдействие спиртов.Известно, что Тh1-лимфоциты обеспечивают реализацию реакции ГЗТпутем активации макрофагов. В основном Тh1-лимфоциты регулируютфизиологические механизмы, обеспечивающие функцию Т-звена иммунитета[Хаитов Р.М и соавт., 2000; Georgiev V.St., Albright J.E., 1993; Kimber I.,1996]. Полученные нами результаты косвенно свидетельствуют о том, чтоТХВ уменьшают способность Th1-лимфоцитов синтезировать ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферон и β-фактор некроза опухоли (лимфотоксин), участвующие вформировании ГЗТ [Шуршалина А.В. и соавт., 2001; Kimber I., 1996; BhushanV. et al., 2001], а также гранулоцитарно – макрофагальныйколониестимулирующий фактор лимфоцитов. Кроме того, использованныеспирты и хлорированные углеводороды путем реализации различныхиммунотропных механизмов, вероятно, снижают активность и другихлимфокинов и клеток, обеспечивающих формирование ГЗТ, в частности, ИЛ-
25910, Т-клеток памяти, клеток Лангерганса и макрофагов [Ройт А., 1991; KimberI. et al., 2001].К ЕКК, открытым в 1976 году, относятся клетки, не имеющиеантигенных маркеров Т- и В-лимфоцитов (так называемые, О-клетки).Предполагают, что ЕКК происходят из предшественников Т-лимфоцитов[Ройт А., 1991; Kimber I., Moore M., 1985]. ЕКК и К-клетки - это одни и те жеклетки, отличающиеся лишь механизмами реализации киллинга (убийства)клеток-мишеней. Они узнают определенные структуры высокомолекулярныхгликопротеидов, которые экспрессируются на мембране инфицированныхвирусом клеток [Ройт А. и соавт., 2000].Полученные данные свидетельствуют, что при остром токсическомдействии спирты и хлорированные углеводороды дозозависимо снижаютактивность ЕКК в течение 1-9 сут. При этом этанол уменьшает параметр втечение 3-6 сут. Статистически значимых различий между эффектамиредукции ЕЦ различными токсикантами, кроме этанола, не отмечается. Вцелом хлорированные углеводороды вызывают большую редукцию ЕЦ посравнению со спиртами, причем максимальная редукция активности ЕКК (постепени эффекта и по длительности) обусловлена тетрахлорметаном.Учитывая то, что печень является органом, в котором образуется большаячасть ЕКК [Хаитов Р.М. и соавт., 2000], а тетрахлорметан обладаетмаксимальным гепатотропным эффектом из использованных нами ядов[Тиунов Л.А., 1990а; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000; КуценкоС.А. и соавт., 2004], наиболее выраженная редукция активности ЕКК именноданным токсикантом вполне объяснима. Именно поэтому, все хлорированныеуглеводороды, являясь гепатотропными ядами, поражают ЕКК в большейстепени, чем спирты.По нашему мнению, снижение активности ЕКК под влияниемхлорированных углеводородов (и возможно спиртов), вероятно, связано сингибированием их эстераз, которые, по-видимому, содержатся в ЕКК, как
260предполагаемых потомках предшественников Т-клеток [Ройт А., 1991].Кроме того, эффекты кортикостероидов и катехоламинов вследствиеактивации токсикантами ГГАС [Тиунов Л.А., 1990] также могутобусловливать редукцию активности ЕКК [Rey A. et al., 1984; Маdden K. S.,Livnat S., 1991; Claman H.N., 1993]. Однако, как показали нашиэксперименты, иммуносупрессивные эффекты спиртов и хлорированныхуглеводородов не связаны с увеличением содержания при их действии вплазме крови адреналина и норадреналина, а роль кортикостерона вформировании постинтоксикационного иммунодефицита весьманезначительна.Вероятно, спирты, хлорированные углеводороды и их метаболитыспособны снижать активность ЕКК вследствие поражения механизмовпорообразования перфорином и выделения в клетки мишени гранзимов (илиснижением их синтеза) [Ройт А. и соавт., 2000; Nogueira N., 1984], а такжеиндукцией апоптоза ЕКК [Хаитов Р. М. и соавт., 2000; Kimber I., More M.,1985; Durant S., 1986].Результаты наших исследований показали, что в опытах in vitroредуцирующее действие спиртов и хлорированных углеводородов наактивность ЕКК прямо зависит от концентрации, а иммунотоксичность ядовобусловлена преимущественно эффектами их метаболитов. По степениснижения ЕЦ токсиканты располагались в последовательности:тетрахлорметан – дихлорэтан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль –Э. В порядке увеличения супрессии ЕКК дихлорэтан и его метаболитырасполагались в последовательности: дихлорэтан, 2-хлорэтанол,хлоруксусный альдегид, хлоруксусная кислота, а спирты и их метаболиты – впоследовательности: глиоксиловая кислота, муравьиная кислота, гликолевыйальдегид, гликолевая кислота, ацетальдегид.Данные литературы свидетельствуют, что in vivo решающую роль вповреждении ЕКК играют, вероятно, не глиоксиловая кислота, а гликолевый
261альдегид и гликолевая кислота, так как уже указывалось, несмотря наменьшую по сравнению с глиоксиловой кислотой токсичностью гликолевойкислоты, ее концентрация в биосредах более чем в 1300 раз выше, чемглиоксиловой кислоты [Chou S.Y., Richardson K.E. , 1978 ].Полученные результаты свидетельствуют, что патогенез супрессииактивности ЕКК in vivo под влиянием этиленгликоля, метанола и этанолаобусловлен преимущественно взаимодействием с ферментными системамиЕКК высокотоксичных продуктов их биотрансформации, которые могутдействовать на сульфгидрильные и аминогруппы энзимов ЕКК, а такжеингибировать тканевое дыхание и окислительное фосфорилирование этихклеток. In vivo снижение активации ЕКК также возможно вследствиенедостатка продукции ИЛ-2 и γ-интерферона Тh1-лимфоцитами.Последние исследования в области иммунологии показали, что клеткикиллеры- К-клетки (кроме миелоидных) - это ЕКК, использующие дляусиления реакции антитела (IgG) [Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов Р. М. исоавт., 2000]. Естественные клетки-киллеры, активированные связанными склеткой-мишенью антителами, уничтожают ее. При этом антитела (IgG)привлекают своим Fc-хвостом ЕКК, имеющие для этого соответствующийFcγRIII. Возникает комплекс клетка – мишень – антитело – ЕКК, в которомЕКК реализует свою киллерную функцию в отношении клетки-мишени[Хаитов Р. М. и соавт., 2000]. Эта система получила названиеантителозависимая клеточная цитотоксичность. Помимо ЕКК в эту системувходят полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ) – моноциты, базофилы,эозинофилы, сегментоядерные лейкоциты, а также другие фагоцитирующие инефагоцитирующие миелоидные клетки [Ройт А., 1991].Результаты наших исследований показали, что острое отравлениеспиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает АЗКЦспленоцитов преимущественно в продуктивной фазе иммуногенеза посравнению с индуктивным периодом. При этом установлено, что
262хлорированные углеводороды обладают более выраженными эффектамиредукции АЗКЦ по сравнению со спиртами. Максимальная супрессияпоказателя характерна для острого токсического действия дихлорэтана.В наших исследованиях роль метаболитов хлорированных углеводородовв реализации их иммунотоксичности подтверждена опытами на собаках, вкоторых установлена обратная корреляция между содержанием метаболитовдихлорэтана (2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты) в селезенке и ЕЦ иАЗКЦ спленоцитов собак, r составляли от –0,767 до -0,831 (p
263Е.А. и соавт., 2001]. Увеличение массы надпочечников может бытьобусловлено также под влиянием спиртов и хлорированных углеводородовактивацией симпатико-адреналовой системы [Сидорин Г.И. и соавт., 2004].Тенденция к снижению токсикантами массового индекса надпочечниковчерез 3 сут после воздействия (при объединении всех показателей в однугруппу эта редукция достоверна (р
264крови после действия токсикантов восстанавливается до контрольногозначения.По-видимому, увеличение кортикостерона в крови под влияниемдихлорэтана и тетрахлорметана, помимо общей для всех токсикантовактивации ГГАС, может быть обусловлено стимуляцией ацетилхолиномцентральных м-холинореактивных структур, приводящей к увеличениюпродукции АКТГ [Гурин В.Н., 1970; Денисенко П.П., Чередниченко Р.П.,1970; Денисенко П.П., 1980] вследствие их антихолинэстеразного эффекта.Кроме того, нами установлено, что концентрация кортикостерона,соизмеримая с содержанием этого гормона в крови при острой интоксикацииспиртами и хлорированными углеводородами, способна играть определеннуюроль в супрессии гуморальной иммунной реакции и клеточного звенаиммунитета (ЕЦ, АЗКЦ и реакции ГЗТ, характеризующей функцию Th1-лимфоцитов и макрофагов).Можно полагать, что десинхронизация суточных колебанийконцентрации кортикостерона под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов также изменяет физиологическую регуляцию иммунногогомеостаза, что отмечено и другими исследователями [Dhabhar F.S. et al.,1996].При вычислении коэффициентов корреляции между концентрациейкортикостерона в крови и АОК к ЭБ при остром отравлении крыс метаноломи дихлорэтаном установлено, что они составляли соответственно -0,715(p
265показателей после действия токсикантов были достоверны (p
266Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988] подвлиянием активации их β-адренорецепторов.Коэффициенты корреляции между концентрацией адреналина в крови иАОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлении крыс дихлорэтаномсоставляли соответственно -0,708 (p
267Стимулирующее действие катехоламинов опосредуется через α- и β-адренорецепторы иммуноцитов, путем синтеза цАМФ, приводящего кпродукции соответствующих интерлейкинов, осуществляющих регуляциюиммунных реакций [Маdden K. S., Livnat S., 1991]. Известно, что цАМФстимулирует дифференцировку незрелых лимфоидных клеток [Coffey R.G.,Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988].Предполагают, что активация β-адренорецепторов иммунокомпетентныхклеток в первые 12 ч после (индуктивная фаза иммунного ответа)антигенного стимула увеличивает антителообразование.Данные литературы свидетельствуют, что увеличение под влияниемадреналина L3T4 (Т-хелперов/Тгзт) и особенно Lyt-1 (Т-хелперов/Тгзт), атакже Lyt-2 (цитотоксических Т-лимфоцитов/Т-супрессоров) в селезенкемышей через 90 мин после его введения [Techima H.et al., 1991], видимообусловливает активацию индуктивной фазы иммуногенеза,сопровождающуюся увеличением числа АОК, реакции ГЗТ и АЗКЦ.Существуют основания полагать, что увеличение адреналина инорадреналина в крови при острой интоксикации дихлорэтаном итетрахлорметаном сопровождается их уменьшением в мозгу и надпочечникахвследствие действия ацетилхолина [Brzezinski J., 1972]. Угнетение иммунныхреакций при высоких дозах катехоламинов [Денисенко П.П., 1980]объясняется тем обстоятельством, что эти дозы являются пусковым факторомВ-клеточной активации, но одновременно подавляют Т-клеточнуюхелперную активность [Gilbert K.M., Hoffmann M.K., 1985]. Незначительнаяредукция ЕЦ под влиянием катехоламинов обусловлена увеличениемсоотношения цАМФ/цГМФ [Garoroy M.R. et al., 1975]. Доказано, что приадреналэктомии функция ЕКК повышается [Маdden K. S., Livnat S., 1991]. Неисключено, что введение катехоламинов в продуктивную фазу иммунногоответа может приводить к сдвигам исследованных иммунных реакцийсущественно отличающихся от описанных [Маdden K. S., Livnat S., 1991].
268Нельзя исключить, что при постинтоксикационной стресс-реакциикатехоламины, возможно, способны усиливать иммунодепрессивный эффекткортикостероидов [Rey A. et al., 1984]. Известно, что супрессирующеедействие кортикостероидов на суммарную фагоцитарную активностьфагоцитов частично отменяется блокадой β-адренорецепторов [Шилов Ю.И.,Ланин Д.В., 2001].Неспецифические эстеразы являются лизосомальными ферментами. Этиэнзимы играют важную роль в реализации киллерной функции Т-лимфоцитов[Fergula J. et al., 1972; Li C. Y. et al., 1973]. Изменение эстеразной активностив клетках отражает, с одной стороны, функциональную активностьиммуноцитов, с другой - может служить количественным критерием Т-клетокв циркулирующей крови, так как именно эта субпопуляция лимфоцитовявляется эстеразопозитивной [Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983; Li C. G etal.,1973; Kutty K. M. et al., 1976; Кullenkampff J. et al., 1977]. Рольацетилхолинэстеразы на поверхности Т-лимфоцитов [Kutty K. M. et al., 1976;Szelenyi J.G. et al., 1982] до сих пор не ясна. Возможно, она регулируетвлияние ацетилхолина на холинореактивные структуры Т-лимфоцитов[Забродский П.Ф. и соавт., 2001; Gordon M.A. et al., 1978 Richman D.P.,Arnason B.G.W., 1989].Нами показано, что острое отравление дихлорэтаном, тетрахлорметаноми трихлорэтиленом вызывает существенное снижение активностиацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса и селезенки, α-нафтил-АSацетатэстеразыи α-нафтилбутиратэстеразы в спленоцитах крыс. При этомантиэстеразный эффект дихлорэтана в среднем выше действия другиххлорированных углеводородов. Влияния спиртов на активность АХЭ, α-нафтил-АS-ацетатэстеразы и α-нафтилбутиратэстеразы Т-лимфоцитовселезенки не выявлено. Результаты наших исследований и данныелитературы свидетельствуют, что инактивация эстераз в моноцитах,цитотоксических Т-лимфоцитах, интактных и активированных лимфокинами
269ЕКК ксенобиотиками ослабляет иммунологический контроль и эффекторныефункции, опосредуемые данными видами клеток. Выдвигается гипотеза, чтоторможение активности эстераз иммунокомпетентных клеток, вызываемоетоксикантами, ослабляет процесс эстеразозависимой детоксикации, врезультате чего способствует развитию процесса лимфомогенеза.Анализируя результаты наших исследований, можно отметить, чтокоэффициенты корреляции между активностью ацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса крыс и АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлениикрыс дихлорэтаном составляли соответственно 0,755 (p
270Показана, в частности, активация ПОЛ при гипоксической гипоксии[Зарубина И.В., Миронова О.П., 2002]. Следует отметить, что всдедствиепоражения дыхательной системы спирты и хлорированные углеводородывызывают этот вид гипоксии [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000].Обращает на себя внимание то, что активация ПОЛ под влияниемтетрахлорметана максимальная, что объясняется высокой активностьюрадикалов данного соединения, образующихся при его метаболизме.Свободный радикал ССl + 3 взаимодействует с субклеточными структурами инепосредственно повреждает ферментные системы, а также оказывает, такназываемое, прооксидантное действие, то есть является фактором,включающим цепную реакцию переокисления липидов. Первичным объектомтакого прооксидазного действия радикала ССl + 3 являются ненасыщенныежирные кислоты внутриклеточных мембран (олеиновая, линолевая,линолиновая, арахидоновая), которые в свою очередь образуют свободныйрадикал как результат акта одноэлектронного окисления (отрыв атомаводорода от реагирующей цепи). Образуются радикалы (RО + 2) игидроперекиси (RООН) жирных кислот, что приводит к структурной ифункциональной перестройке мембран. На наш взгляд, это в полной мереможно отнести к ММФ системе и лимфоцитам. Процесс этот носитспецифический характер только в самом начале - на стадии образованиярадикала ССl + 3, который запускает всю цепь. Весь механизм переоксидациилипидов как цепной реакции, однажды индуцированной, являетсянеспецифическим. Это обычный, стандартный путь повреждениявнутриклеточных мембран, которым завершается любая патология, любоеострое отравление ксенобиотиками, ведущая к истощению антиоксидантныхсистем организма. Доказано повреждение тетрахлорметаном мембранылизосом клеток, не связанного с ПОЛ, и последующее высвобождение иактивация кислых гидролаз [Ахматова М.А. и др., 1982].
271При вычислении коэффициентов корреляции между числом АОК к ЭБ,реакцией ГЗТ при остром отравлении тетрахлорметаном и суммарнойпродукцией радикалов установлено, что они составляли соответственно -0,732 (p
272и гуморальное звено иммунитета [Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., 1985; АрионВ.Я., 1991; Земсков В.М.,1991; Петров Р.В.,1991; Утешев Б.С. и соавт., 1995;Попова Е.А. и соавт., 2003; Щеглова М.Ю., Макарова Г.А., 2003 и др.]позволяют считать наиболее приемлемыми для коррекциипостинтоксикационных нарушений, вызванных спиртами и хлорированнымиуглеводородами, тимоген, Т-активин, миелопид и имунофан. Длявосстановления функции В-клеток после отравления метанолом может бытьцелесообразным использование фолината кальция.Полученные данные показали, что применение тимогена, Т-активина имиелопида в течение 3 сут приводило к частичному восстановлениюфакторов НРО после отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами (0,75 ЛД 50 ). Использование имунофана в течение 3 сут вдозе 10 мкг/кг обеспечивало полное восстановление до контрольных уровнейосновных факторов НРО. В целом в порядке увеличения активностииммуностимуляторы располагались в последовательности: миелопид –тимоген - Т-активин – имунофан .Рассматривая стимулирующие свойства тимогена и имунофана вотношении НРО следует упомянуть работы, в которых показано (опыты намышах), что глутаминовая, аспарагиновая кислоты, треонин, валинстимулируют антителогенез и фагоцитоз. Лизин, пролин, тирозин и лейцинне изменяют гуморальный иммунный ответ, но повышают фагоцитоз, ааргинин угнетает антителогенез, но увеличивает фагоцитарную активностьнейтрофилов. Регуляция иммуногенеза аминокислотами (а тимоген иимунофан – это соответственно две и шесть иммунологически активныхаминокислот) является эволюционно древним механизмом, сохранившимсвое значение и на более позднем этапе эволюции [Белокрылов Г.А. и соавт.,1991б].В наших исследованиях установлено, что использование в качествеиммуностимуляторов после острой интоксикации спиртами и
273хлорированными углеводородами (0,75 ЛД 50 ) любого из использованныхпрепаратов (тимогена, Т-активина, миелопида, имунофана) обеспечивалополное восстановление основных показателей В-системы иммунитета толькопри отравлении этанолом. После острого действия дихлорэтана,тетрахлорметана и трихлорэтилена только при действии имунофанадостигалась нормализация показателей гуморального звена иммунитета.Следует отметить, что после острого действия метанола в комбинации сэтанолом только использование имунофана в сочетании с фолинатом кальцияполностью восстанавливало показатели В-системы иммунитета. Послеострого отравления этиленгликолем и применения для лечения в качествеантидота этанола только использование имунофана в комбинации с Т-активином полностью восстанавливало показатели В-звена системыиммунитета. Полученные данные согласуются с результатами исследованийдругих авторов [Жубантурлиева А.Б. и соавт., 2003].В целом по увеличению степени активности в отношении Т-зависимогоиммуногенеза при острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами иммуностимуляторы располагались в последовательности:миелопид – тимоген - Т-активин - имунофан, а в отношении Т-независимогоантителобразования в порядке увеличения эффекта – в последовательности:Т-активин - тимоген - миелопид – имунофан.Т-активин повышает Т-зависимый иммунный ответ, возможно, помимопрямого действия на Т-клетки, также вследствие его стимулирующеговлияния на функцию макрофагов.Стимуляция Т-независимой антителопродукции осуществляетсятимогеном и имунофаном, вероятно, путем увеличения секреции ИЛ-1макрофагами или экспрессии рецепторов к ИЛ-1 на В-клетках, а такжеактивацией процессов пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов[Georgiev V.St., Albright J.E., 1993]. Стимуляция Т-активином, тимогеном иимунофаном Т-независимого антителообразования при остром отравлении
274спиртами и ХУ обусловлена его действием на макрофаги, в результатекоторого они продуцируют ИЛ-1, являющийся помимо антигена фактором,участвующим в независимом от тимуса антителообразовании. Не исключенатакже активация иммуностимуляторами тимуснезависимых Т-лимфоцитов(Тγδ), индуцирующих продукцию В-клеток антител к Vi-Ag [Хаитов Р. М. исоавт., 2000].Установленная нами возможность активации использованнымииммуностимуляторами синтеза IgM и IgG позволяет полагать, что тимоген, Т-активин, миелопид и имунофан восстанавливают функцию как Th1-лимфоцитов, так и Th2-лимфоцитов. Известно, что Th1-лимфоцитыучаствуют в синтезе IgM, G 2 (и формировании ГЗТ), а Th2-лимфоцитыспособствуют синтезу IgG 1 , A, E [Pfeifer C. et al., 1991; Georgiev V.St., AlbrightJ.E., 1993].При Т-зависимом антителообразовании действие тимогена и имунофана,вероятно, реализуется путем активации процесса кооперации макрофагов, Т-клеток и В-лимфоцитов; антителопродуцирующих В-клеток, функции Th1-лимфоцитов и Th2-клеток, секретирующие соответственно ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферон, β-фактора некроза опухоли (лимфотоксин), ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6,ИЛ-10 и ГМ-КСФ [Kimber I.et al., 2001; Delves P.J., Roitt I.M.,2000].Полученные данные свидетельствуют о том, что использование вкачестве иммуностимуляторов после острой интоксикации спиртами ихлорированными углеводородами тимогена и Т-активина в дозе 10 мкг/кг втечение 3 сут обеспечивало частичное восстановление основных показателейклеточного иммунитета. Показано, что применение миелопида в дозе 5 мкг/кг(3 сут) не восстанавливало клеточные иммунные реакции (за исключениемэффекта после отравления этанолом). В экспериментах установлено, чтоимунофан в дозе 10 мкг/кг при назначении его в течение 3 сут полностьювосстанавливал функцию Th1-лимфоцитов (в реакции ГЗТ), активность ЕККи АЗКЦ после острого отравления метанолом, этиленгликолем, этанолом,
275дихлорэтаном, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом. Следует подчеркнуть,что при комбинированном действии метанола и этанола, а такжеэтиленгликоля и этанола (использование этанола в качестве антидота послеотравления метанолом и этиленгликолем) только использование Т-активинав комбинации с имунофаном в течение 3 суток приводило к полномувосстановлению параметров клеточного звена иммунитета. При остройинтоксикации спиртами и хлорированными углеводородами по степениувеличения активности иммуномодуляторы в отношении основныхпоказателей клеточного иммунитета располагались в последовательности:миелопид – тимоген - Т-активин - имунофан. Стимуляция активности ЕКК иАЗКЦ Т-активином и имунофаном была практически одинаковой.Доказанная нами возможность частичного восстановления тимогеномфункции Т-, В-системы иммунитета и ЕКК дает основания полагать, чтомеханизм его действия связан с неспецифической стимуляцией функцийклеток организма, способных к пролиферации. Возможно,иммуностимулирующие свойства тимогена обусловлены помимо активациизрелых лимфоцитов, стимуляцией полипотентных стволовых кроветворныхклеток. Этот механизм, вероятно, обеспечивается повышением синтезаэнзимов и других белков вследствие активации тимогеном цАМФ, РНКполимеразы,синтеза ДНК. Т-активин стимулирует ЕКК после интоксикацииТХВ вследствие его способностью активировать выработку γ-интерферона Т-лимфоцитами [Вахидова Г.А. и соавт., 1990; Борисова А.М. и соавт., 1991;Ханафиева и соавт., 1992; Базарный В.В., Ястребов Ф.П., 1993; МашковскийМ.Д., 2000]. Этот лимфокин активирует ЕКК и восстанавливаетпостинтоксикационное нарушение их функции, а также индуцируетэкспрессию рецепторов ИЛ-2 на их поверхности [Сухих Г.Т. и соавт., 1984].Способность Т-активина активировать Т-систему иммунитета послеотравления спиртами и хлорированными углеводородами, должно бытьобусловлена его свойствами увеличивать пролиферацию, дифференцировку и
276функциональную активность Т-клеток [Арион В.Я., Иванушкин Е.Ф., 1991].Наличие в составе Т-активина β-эндорфина [Елизарова Н.Л. и соавт., 2005],вероятно, способно оказывать положительное влияние на функцию ЦНСпосле отравления этанолом и другими спиртами [Шабанов П.Д., КалишевичС.Ю., 1998].Анализируя полученные нами данные, можно отметить, чтоиммуностимулирующий эффект тимогена, Т-активина и имунофана вотношении клеточных иммунных реакций, сниженных острым воздействиемспиртов и хлорированных углеводородов, на клеточном и субклеточномуровне, весьма вероятно, обеспечивается восстановлением способности Th1-лимфоцитов синтезировать ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферон, β-фактор некрозаопухоли (лимфотоксин) и гранулоцитарно - макрофагальныйколониестимулирующий фактор. Должно быть, реализация реакции ГЗТобеспечивается в основном действием ИЛ-1, ИЛ-3, γ-интерферона [Kimber I.,1996]. Кроме того, тимоген, Т-активин и имунофан, вероятно, стимулирует идругие клетки, обеспечивающие ГЗТ – Т-клетки памяти и макрофаги[Белокрылов Г.А. и соавт., 1999].Механизм иммуностимулирующего действия тимогена и имунофана,вероятно, обеспечивается стимуляцией синтеза энзимов и других белковвследствие активации тимогеном цАМФ, РНК-полимеразы, синтеза ДНК.Основанием для подобного предположения является установленнаявозможность регуляции иммуногенеза при помощи аминокислот,относящимся к системе естественных иммуномодуляторов,сформировавшейся на раннем этапе эволюции [Белокрылов Г.А. и соавт.,1991а; Караулов А.В. и соавт., 2005].Являясь гексапептидом, имунофан действует подобно тимогену, приэтом его активность обусловлена оптимальной комбинацией входящих в егосостав аминокислот. Основанием для подобного предположения являетсяустановленная возможность существования двух систем регуляции
277иммуногенеза: древней – при помощи аминокислот, и новой,сформировавшейся на более позднем этапе эволюции – с участием пептидов[Белокрылов Г.А. и соавт., 1991а].Кроме того, аминокислоты, входящие в состав тимогена и имунофанаобладают антитоксическими свойствами. Не исключено, что на фоневозрастания в крови концентрации кортикостероидов при действии спиртови хлорированных углеводородов (постинтоксикационная стресс-реакция)тимоген и имунофан повышают чувствительность СКК и лимфоиднойстволовой клетки к этим гормонам. Поэтому, оказывая с одной стороныиммуносупрессирующий эффект, с другой стороны, кортикостероиды,вероятно, увеличивают чувствительность гемопоэтических стволовых клетокк действию стимуляторов кроветворения вследствие активации β-адренорецепторов [Claman H.N., 1983; Bhushan V. et al., 2001].Исследования сравнительной эффективности различныхиммуностимуляторов позволили установить, что тимоген, Т-активин,миелопид и имунофан способны восстанавливать показатели НРО,гуморального и клеточного иммунитета. Максимальная стимулирующаяспособность выявлена у имунофана. Высокая эффективность в отношении Т-зависимого антителообразования, клеточного иммунитета и Т-независимойантителопродукции установлена соответственно у Т-активина и миелопида.При комбинированном действии метанола и этанола, этиленгликоля иэтанола восстановление иммунного статуса достигается применениемсоответственно имунофана в сочетании с фолинатом кальция и имунофана всочетании с Т-активином. Имунофан снижает процессысвободнорадикального окисления липидов (в том числе, по всей видимости,липидов ИКК) после острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами. Этот эффект имунофана является одним из факторов,способствующих восстановлению показателей системы иммунитета послеострого отравления спиртами и хлорированными углеводородами.
278Таким образом, при остром отравлении спиртами и хлорированнымиуглеводородами происходят нарушения механизмов регуляциинеспецифической резистентности организма и иммунного гомеостаза,приводящие к дозозависимому снижению устойчивости животных кэкспериментальной инфекции, редукции факторов неспецифическойрезистентности организма – бактерицидной активности сыворотки крови,сывороточной активности лизоцима, тромбоцитарного катионного белка,комплемента, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов,уменьшению миграции КОЕс из костного мозга в селезенку, содержания Т- иВ-лимфоцитов в органах системы иммунитета, супрессии Т-зависимого и Т-независимого гуморального иммунного ответа, активности Т-клеток,естественных клеток-киллеров, АЗКЦ.Характер нарушения НРО и иммунного статуса под влиянием спиртов ихлорированных углеводородов в целом характеризуется общими(неспецифическими) проявлениями вторичного иммунодефицитногосостояния различной длительности и интенсивности, однако некоторыетоксиканты характеризуются особенностями поражения системы иммунитета(популяций и субпопуляций лимфоцитов) в зависимости от ихтоксикодинамических и токсикокинетических свойств.В механизме поражения системы иммунитета при отравлении спиртамии хлорированными углеводородами существенную роль играетпостинтоксикационная активация ГГАС, инициация процессов свободнорадикальногоПОЛ, а при интоксикации хлорированными углеводородами,кроме того, ингибирование эстераз Т-лимфоцитов.Патогенетические особенности острого поражения спиртами ихлорированными углеводородами иммунной системы предполагаетвозможность использования для иммунокоррекции тимогена, Т-активина,миелопида, имунофана и фолината кальция. После отравления этаноломдостигается полное восстановление показателей НРО и системы иммунитета
279применением любого из использованных иммуностимуляторов. Коррекциянарушений НРО и иммунного статуса при отравлении этиленгликолем,дихлорэтаном, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом достигаетсяназначением – имунофана, метанолом – имунофана или миелопида (длявосстановления В-системы иммунитета) и имунофана (для восстановленияклеточного иммунитета). Применение имунофана в сочетании с фолинатомкальция и имунофана в комбинации с Т-активином после отравлениясоответственно метанолом или этиленгликолем и использования в качествеантидота этанола обеспечивает полное восстановление иммунного статуса.
280ВЫВОДЫ1. При острых отравлениях спиртами и хлорированнымиуглеводородами (метанолом, этиленгликолем, этанолом, дихлорэтаном,тетрахлорметаном, трихлорэтиленом) происходит нарушение механизмоврегуляции иммунного гомеостаза, приводящее к дозозависимой редукциинеспецифической резистентности организма, снижению миграцииколониеобразующих единиц из костного мозга в селезенку, уменьшению Т- иВ-лимфоцитов в органах системы иммунитета, супрессии Т-зависимого и Т-независимого гуморального иммунного ответа, клеточного звена иммунитета,функции естественных клеток-киллеров. Характер и механизмы нарушенияиммунного гомеостаза под влиянием спиртов и хлорированныхуглеводородов предполагают возможность использования для его коррекциитимогена, Т-активина, миелопида, имунофана, фолината кальция и ихкомбинаций.2. Спирты и хлорированные углеводороды снижают антиинфекционнуюнеспецифическую резистентность организма, оцениваемую по летальностиживотных от экспериментальной инфекции. В порядке снижения редукциифакторов неспецифической резистентности организма (бактерициднойактивности сыворотки крови, сывороточной активности лизоцима,тромбоцитарного катионного белка, фагоцитарно-метаболической активностиполиморфноядерных лейкоцитов) токсиканты располагаются впоследовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен –метанол – этиленгликоль – этанол.3. Под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов дозозависимоуменьшается миграция колониеобразующих единиц из костного мозга вселезенку. Острое отравление метанолом и этиленгликолем снижаетсодержание Т-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Редукция числаВ-клеток в селезенке максимально выражена под влиянием метанола.Хлорированные углеводороды уменьшают содержание Т-клеток в тимусе,
281селезенке, лимфатических узлах и В-лимфоцитов в селезенке, костном мозгеи лимфатических узлах. Снижение количества лимфоцитов в крови вызываеттолько дихлорэтан. В целом по степени снижения показателей токсиканты впорядке увеличения эффекта располагаются в последовательности: этанол,этиленгликоль, метанол, трихлорэтилен, тетрахлорметан, дихлорэтан.4. После острого отравления спиртами и хлорированнымиуглеводородами происходит дозозависимое снижение Т-зависимогоантителообразования в большей степени в продуктивный периодиммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. Постепени редукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке сниженияэффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан –трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол, а по степени супрессиисинтеза IgG – в последовательности: тетрахлорметан – метанол – дихлорэтан– трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. Острое отравление спиртами ихлорированными углеводородами вызывает дозозависимое снижение Т-независимого антителообразования в большей степени в продуктивныйпериод антителогенеза по сравнению с индуктивной фазойантителопродукции. По степени редукции синтеза IgМ В-клетками в Т-независимой гуморальной иммунной реакции токсиканты располагаются впорядке снижения эффекта в последовательности: метанол, дихлорэтан,тетрахлорметан, трихлорэтилен, этиленгликоль и этанол.5. Спирты и хлорированные углеводороды нарушают кооперацию Т- иВ-лимфоцитов преимущественно вследствие иммунотоксического эффектапродуктов их биотрансформации. Под влиянием токсикантов, заисключением метанола, в большей степени поражались Т-клетки посравнению с В-лимфоцитами. По степени супрессии эффекта кооперации Т- иВ-клеток при действии спиртов и хлорированных углеводородов на Т-лимфоциты токсиканты располагаются в порядке: дихлорэтан -тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол, а по
282степени уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты – в последовательности: метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан– трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. Поражающий эффект метаболитовдихлорэтана, метанола, этиленгликоля и этанола в эквимолярныхконцентрациях на Т-клетки в эффекте кооперации лимфоцитов уменьшаетсяв следующем порядке: хлоруксусная кислота, хлоруксусный альдегид, 2-хлорэтанол, глиоксиловая кислота, муравьиная кислота, гликолевыйальдегид, гликолевая кислота, ацетальдегид, а на В-клетки – впоследовательности: хлоруксусная кислота, хлоруксусный альдегид, 2-хлорэтанол, муравьиная кислота, глиоксиловая кислота, гликолевыйальдегид, гликолевая кислота и ацетальдегид. Действие ядов прямо связано сих дозой или концентрацией.6. Острые отравления спиртами и хлорированными углеводородамиуменьшают функцию Т-клеток, дозозависимо снижают реакциюгиперчувствительности замедленного типа, характеризующую функцию Th1-лимфоцитов, как в первичном, так и во вторичном клеточном иммунномответе, вызывают редукцию активности естественных клеток-киллеров иантителозависимой клеточной цитотоксичности преимущественно впродуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом.Хлорированные углеводороды обладают более выраженными эффектамисупрессии по сравнению со спиртами.7. Редуцирующее действие спиртов и хлорированных углеводородов invitro на активность естественных клеток-киллеров прямо зависит отконцентрации, а иммунотоксичность ядов обусловлена преимущественноэффектами их метаболитов. По снижению активности естественных клетоккиллеровтоксиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан -дихлорэтан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол. В порядкеувеличения супрессии активности естественных клеток-киллеров метаболитыдихлорэтана располагались в последовательности: 2-хлорэтанол,
283хлоруксусный альдегид, хлоруксусная кислота, а метаболиты спиртов – впорядке: глиоксиловая кислота, муравьиная кислота, гликолевый альдегид,гликолевая кислота и ацетальдегид.8. Под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированнымиуглеводородами увеличивается функция коры надпочечников и активируетсясимпатико-адреналовая система, что сопровождается увеличениемконцентрации кортикостерона, адреналина, норадреналина в крови,инициируется перекисное окисление липидов. Установлена обратнаякорреляция между показателями иммунных реакций и параметрами,характеризующими инициацию ПОЛ после острого отравления спиртами ихлорированными углеводородами. Несмотря на выявленную обратнуюкорреляцию между гуморальным, клеточным иммунным ответом иконцентрациями адреналина и кортикостерона в крови после острогоотравления спиртами и хлорированными углеводородамииммуносупрессивные эффекты токсикантов не зависят от увеличениясодержания при их действии в плазме крови адреналина и норадреналина, ароль кортикостерона в формировании постинтоксикационногоиммунодефицита незначительна.9. Острое отравление хлорированными углеводородами вызываетснижение активности ацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса иселезенки, α-нафтил-АS-ацетатэстеразы и α-нафтилбутиратэстеразы вспленоцитах, при этом у дихлорэтана проявляется максимальныйантиэстеразный эффект. Влияние спиртов на активность эстераз Т-лимфоцитов тимуса и спленоцитов не выявлено. Установлена прямаякорреляция между иммунными реакциями и активностьюацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса, а также содержанием эстераз вспленоцитах после острого отравления хлорированными углеводородами.10. Коррекция нарушений неспецифической резистентности организмаи иммунной защиты при острой интоксикации спиртами и хлорированными
284углеводородами достигается патогенетически обоснованным применениемиммуностимуляторов: тимогена, Т-активина, миелопида и имунофана, атакже фолината кальция и их комбинаций. Все иммуностимуляторыобеспечивают полное восстановление параметров неспецифическойрезистентности организма, Т-, В-системы иммунитета, активностиестественных клеток-киллеров и антителозависимой клеточнойцитотоксичности при отравлении этанолом. Имунофан снижает процессысвободнорадикального окисления липидов после острого отравленияспиртами и хлорированными углеводородами. При интоксикацииэтиленгликолем, дихлорэтаном, тетрахлорметаном, трихлорэтиленомдостигается полное восстановление показателей неспецифическойрезистентности организма и системы иммунитета применением имунофана,метанолом – имунофана или миелопида (для восстановления В-системыиммунитета) и имунофана (для восстановления клеточного иммунитета).Применение имунофана в сочетании с фолинатом кальция и имунофана вкомбинации с Т-активином после отравления соответственно метанолом илиэтиленгликолем и использования в качестве антидота этанола обеспечиваетполное восстановление иммунного статуса.
285ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1. В эксперименте на животных наиболее информативными тестами дляоценки иммунотоксичности спиртов и хлорированных углеводородовявляются: определение Т-зависимого антителообразования, исследованиереакции гиперчувствительности замедленного типа, активности естественныхклеток-киллеров, антителозависимой клеточной цитотоксичности,кооперации Т- и В-клеток и функции естественных клеток-киллеров in vitro.2. После острых отравлений спиртами и хлорированнымиуглеводородами в сублетальных дозах в различной степени (в зависимости оттоксикодинамики яда) существенно снижается антиинфекционнаянеспецифическая и иммунологическая резистентность организма,гуморальное и клеточное звено системы иммунитета, функция естественныхклеток-киллеров, что предполагает применение средств профилактики илечения возможных инфекционных осложнений и заболеваний.3. После острого отравления этанолом целесообразно применениеиммуностимуляторов (имунофана, Т-активина, тимогена, миелопида),которые обеспечивают полное восстановление показателейнеспецифической резистентности организма и системы иммунитета.Использование имунофана позволяет решить те же задачи после остройинтоксикации дихлорэтаном, тетрахлорметаном, трихлорэтиленом.Назначение имунофана или миелопида (для восстановления В-системыиммунитета) и имунофана (для восстановления клеточного иммунитета)целесобразно после острого действия метанола. Применение имунофана всочетании с фолинатом кальция и имунофана в комбинации с Т-активиномпосле отравления соответственно метанолом или этиленгликолем ииспользования в качестве антидота этанола обеспечивает полноевосстановление всех основных показателей иммунного статуса.4. Целесообразно включить имунофан, Т-активин и фолинат кальция вчисло средств, применяющихся для оказания первой врачебной помощи и для
286последующего лечения на госпитальном этапе острых отравлений спиртами ихлорированными углеводородами с целью профилактики инфекционныхосложнений и заболеваний, возникающих вследствие формированияпостинтоксикационного иммунодефицитного состояния.
287ЛИТЕРАТУРА1. Абдрашидова Н.Ф., Романов Ю.А. Состояние эритроцитарной системы,ПОЛ-окислительная активность у больных хроническим бронхитом,вдыхавших и не вдыхавших озон // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. –Т.132, №9. – С. 317-319.2. Абрамов В.В., Ширинский В.С., Лозовой В.П., Козлов В.А. Влияниеацетилхолина на синтез Ig G и пролиферацию лимфоцитов в культуремононуклеаров, выделенных от больных ревматоидным артритом, ракоммолочной железы и здоровых доноров // Иммунология. - 1986. - № 6. - С.83-86.3. Агапов В.И., Гладких В.Д., Кирьянов В.В., Колосов Р.В., Кулажин О.А.Изменение неспецифической и иммунологической резистентности приостром отравлении норборнаном // Медико-биологические проблемыпротиволучевой и противохимической защиты. – СПб.: ООО «Изд.Фолиант», 2004. - С. 74-75.4. Адо А.Д., Алексеева Т.А., Авдеева Т.А. О взаимодействии холиновых ииммунных рецепторов В-лимфоцитов человека // Иммунология. - 1985а. -№ 4. - С. 57-59.5. Адо А.Д., Алексеева Т.А., Кравченко С.А. О взаимодействии иммунных имедиаторных рецепторов лимфоцитов мышей // Бюл. эксперим. биол. имед. - 1985б. - Т. 99, № 5. - С. 513-515.6. Адо А.Д., Донцов В.И., Гольдштейн М.М. Регуляция клеточного цикла В-лимфоцитов мыши веществами, увеличивающими уровеньвнутриклеточного цАМФ и цГМФ // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1985в. -Т. 99, №4. - С. 455-458.7. Адо А.Д. Некоторые вопросы нервной регуляции иммунных иаллергических реакций (об отношении холиновых и антигенсвязывающихрецепторов // Эксперим. и клин. фармакология. - 1995. - № 3. - С. 43-45.
2888. Александров В.Н. Патология иммунной системы при травме. // Пат.физиол. и эксперим. терапия. - 1982. - № 6. - С. 45 - 47.9. Александров В.Н. Гуморальный иммунный ответ после травмы различнойтяжести // Пат. физиол. и эксперим. терапия. – 1983. - №4. – С. 70-72.10. Александров В.Н., Емельянов В.И. Отравляющие вещества. Учебноепособие. - М.: Военное издательство, 1990. - 271 с.11. Алиев Н.А. Влияние алкоголя на функционирование иммунной системы //Сов. медицина. - 1991а. - №2. - С.41-44.12. Алиев Н.А. Нейроэндокринные и иммунологические взаимодействия прихроническом алкоголизме // Фармакол. и токсикол. - 1991б. - №6. - С.39-41.13. Алиев Н.А., Мустафаев М.А. О возможности применения интерферонапри лечении алкоголизма // Невропатология. - 1992. - №4. - С.65-69.14. Алимова М.Т., Маджидов А.В., Арипова Т.У. Влияние пестицидов наантителообразование и иммунорегуляторные показатели лимфоцитов умышей // Иммунология. - 1991. - № 2. - C.33-34.15. Ананченко В.Г., Лужников Е.А., Алехин Ю.Д. Влияниефосфорорганических пестицидов на систему иммунитета при острыхпероральных отравлениях // Сов. мед. - 1987. - № 3. - С.106-108.16. Андронова М.Н., Башкирцев А.С., Орницан Э.Ю., Абламунец К.Я.Показатели минерального обмена и неспецифической резистентностиорганизма на фоне различных рационов питания при воздействиинеорганических соединений фтора // Актуал. пробл. питания пром. раб. -Л., 1988. - С.61-67.17. Андрюкин А.А. Токсическое действие дихлорэтана на сердечнососудистуюсистему // Клин. мед. – 1979. – Т.57, №1. – С.43-47.18. Арион В.Я. Иммунологически активные факторы тимуса // Медиаторыиммунной системы. - М.: ВИНИТИ, 1981. – Итоги науки и техники. Сер.Иммунология. - Т.9. - С.232.
28919. Арион В.Я., Иванушкин Е.Ф. Принципы иммунокоррегирующей терапиипрепаратом тимуса Т-активином // Хирургия. - 1984. - №11. - С.44-48.20. Арион В.Я., Караулов Ю.В., Хроменков Ю.И. и др. Изменениянекоторых иммунологических и биохмических параметров Т-активина убезмикробных животных // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1987. - Т.104, №9. - C.332-334.21. Арион В.Я., Иванушкин Е.Ф. Принципы иммунокоррегирующей терапиипрепаратом тимуса Т-активин: А. с. 1673122 СССР, МКИ 5 А 61 К 35/26;Красноярский мед. ин-т. - № 4452382/12; заявл. 31.05.88; опубл. 30.08.91. -Бюл. №32.22. Арчаков А.И. Оксигенация биологических мембран. – М.: Медицина, 1993.– 189 с.23. Ахматова М.А., Саватеев Н.В., Тиунов Л.А. Исследование биологическихмембран при регламентировании содержания химических веществ вокружающей среде // Гиг. труда и проф. забол. – 1982. - №10. - С.55-57.24. Базарный В.В., Ястребов А.П. К механизму иммунотропного эффектааспарагиновой кислоты // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1990. - Т.110, №11.- C.468-471.25. Базарный В.В., Ястребов А.П. Действие некоторых иммуномодуляторовна гемопоэз // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1993. - Т.115, № 2. - C. 53-54.26. Бажигитова Б.Б., Шортанбаев А.А. Динамика иммунологическихпоказателей у больных с частыми повторными заболеваниямиреспираторного тракта в результате применения имунофана // Физиологияи патология иммунной системы. - 2003. - Т.5. - №2. – С.205.27. Баранова И.Д., Молотилов В.Ф., Симонова А.В. Иммунологическаяэффективность применения иммуномодуляторов в лечении больныхфурункулезом // Иммунология. - 1998. - № 4. – С.63-64.28. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологическогоэффекта. – Л.: Медицина, 1963. – 235 с.
29029. Барштейн Ю. А., Палий Г. К., Персидский Ю.В. и др.Иммунофармакологический анализ длительной интоксикации малымидозами гербицида симазана // Бюл. экспер. биол. и медицины. - 1991. - №12. - C.657-659.30. Беликов В.Г. Коррекция тимогеном нарушений физиологическихмеханизмов регуляции иммуногенеза при остром отравлении токсичнымихимическими веществами / Дисс. … канд. мед. наук. – Саратов, СГМУ. -2001. - 149 с.31. Белокрылов Г. А., Хавинсон В. Х., Морозов В. Г. Влияние веществполипептидной природы, выделенных из тимуса и коры головного мозга,на первичный иммунный ответ у мышей к тимусзависимому итимуснезависимому антигену // Журн. микробиол. и эпидемиол. - 1980. -№3. - С.97-99.32. Белокрылов Г.А., Молчанов И.В. Левамин и церебролизин какиммуностимуляторы // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1991а. - № 2. - C.165-166.33. Белокрылов Г.А., Попов Н.В., Молчанова О.А. Неоднозначность действияпептидов и составляющих их аминокислот на антителообразование ифагоцитарную активность нейтрофилов у мышей // Бюл. эксперим. биол. имед. - 1991б. - №1. - C.53-55.34. Белокрылов Г.А., Попова О.Я., Сорочинская Е.И. Сходство иммуно-,фагоцитозмодулирующих и антитоксических свойств дипептидов исоставляющих их аминокислот // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1999. -Т.127, № 6. -C.674-676.35. Белокрылов Г.А., Попова О.Я. Лизосомально-катионный тест и тествосстановления НСТ лишь частично отражают степень завершенностифагоцитарного процесса в ганулоцитах человека // Бюл. эксперим. биол. имед. - 2002. - Т.133, № 1. - C.75-77.
29136. Бельцкий С. М., Снастина Г. И. Механизм защиты от гнойной инфекции //Иммунология. – 1985. - №2. - С.14-20.37. Большаков И.Н., Хороших Л.В., Арион В.Я., Лопухин Ю.М. Влияниетактивина на антителообразующие клетки селезенки // Бюл. эксперим.биол. и мед. - 1991. - № 6. - C.644-646.38. Бережной Р.В. Судебно-медицинская экспертиза отравленийтехническими жидкостями. – М.: Медицина, 1977. – С.110-130.39. Бонитенко Е.Ю. Отравления этиленгликолем и его эфирами. Вопросыпатогенеза, антидотной и патогенетической терапии (клиникоэкспериментальноеисследование) // Автрореф. …дисс. канд. мед. наук. –СПб., 1995. - 24 с.40. Бонитенко Ю.Ю., Куценко С.А. Современные направленияфармакотерапии острой алкогольной интоксикации // Токсиколог. вестн. –2004. -№4. - С.2-11.41. Борисов В.А. Влияние антигениндуцированного супрессорного фактораселезенки на иммунный ответ к различным антигенам // Физиол. журн. -Киев, 1990. - Т.36, № 4. - С.48-51.42. Борисова А.М., Алексеева А.Б., Сидоров М.З. Роль естественнойцитотоксичности в иммунопатогенезе рецидивирующей герпетическойинфекции и влияние иммуномодуляторов на клиникоиммунологическийстатус // Иммунология. – 1991. - №6. - С.60-62.43. Бровкина И.Л., Конопля А.А., Утешев Б.С., Рыбников В.Н.Иммуномодулирующее действие пиридоксина, фолата и кобаламина приразличных формах анемии // Эксперим. и клин. фармакол.. - 2004а. - Т.67,№1. – С.32-36.44. Бровкина И.Л., Конопля А.А., Утешев Б.С. Иммунометаболическиеэффекты взаимодействия жирорастворимых и водорастворимыхвитаминов при токсических формах анемии // Эксперим. и клин.фармакол.. - 2004б. - Т.67, №3. - С.51-55.
29245. Брызгина Т.М., Мартынова Т.В. Изменение бласттрансформациилимфоцитов крови крыс в условиях экспериментального воздействия напечень // Физиолог. журн. – Киев, 1985. – Т.31, №3. – С.278-281.46. Брызгина Т.М. Изменение кооперации Т- и В-лимфоцитов при иммунномответе на эритроциты барана на фоне поражения печеничетыреххлористым углеродом // Физиол. журн. – Киев, 1989. - №1. – С.25-29.47. Брызгина Т.М., Мартынова Т.В., Алексеева И.И. Роль нарушенияпроцессов кооперации Т- и В-лимфоцитов и активностиантигеннеспецифических супрессоров в изменении иммунного ответа натимусзависимый антиген при токсическом поражении печени //Иммунология и аллергия. – 1990. - №24. – С.111-113.48. Брюхин Г.В., Михайлова Г.И. Интенсивность реакциигиперчувствительности замедленного типа у потомства крыс схроническим поражением печени // Физиол. журн. - Киев, 1990. - Т.36. -N6. - С.94-100.49. Брызгина Т.М., Мартынова Т.В., Алексеева И.И. Активностьнеспецифических хелперов и супрессоров у кроликов в динамикепервичного и вторичного иммунного ответа на эритроциты барана вусловиях применения четыреххлористого углерода // Иммунология. –1992. - №1. – С. 43-45.50. Брюхин Г.В., Грачев А.Ю. Интенсивность Fc-зависимого фагоцитозаперитониальных макрофагов и моноцитов крови у потомства крыс схроническим поражением печени // Физиол. журн. – Киев, 1991. – Т.37. -№6. – С.91-94.51. Брюхин Г.В., Грачев А.Ю. Особенности миграционной активностиперитониальных макрофагов и моноцитов периферической крови употомства самок крыс с хроническим поражением гепатобилиарнойсистемы // Физиол. журн. – Киев, 1993. – Т.39. - №1. – С.50-53.
29352. Брюхин Г.В., Пивель Г.В. АКТГ-продуцирующая функцияадреногипофиза и масса надпочечника у потомства самок крыс схроническим поражением печени // Физиол. журн. – Киев, 1993. – Т.39. -№2-3. – С.63-66.53. Бурмистров С.О., Арутюнян А.В., Степанов М.Г., Опарина Т.И.,Прокопенко В.М. Нарушение активности свободно-радикальныхпроцессов в ткани яичников и мозга крыс при хронической ингаляциитолуолом и диоксином // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. – Т.132, №9.– С.257-262.54. Бухарин О.В., Бичеева Р.Ч. Фотонефелометрический метод определениябета-лизинов в сыворотке крови // Лаб. дело. – 1970. - №3. – С.160-162.55. Бухарин О. В., Васильев Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине.– Томск: Изд. Томск. Ун-та, 1974. – 209 с.56. Бухарин О. В., Васильев Н. В. Система β-лизина и его роль в клиническойи экспериментальной медицине. – Томск, 1977. – 166 с.57. Бухарин О. В., Сетко Н. П., Желудева Г. Н. Иммунологические сдвиги уэкспериментальных животных при воздействии комплекса химическихвеществ // Гигиена труда. - 1985. - №3. - С.45-46.58. Бухарин О. В., Сулейманов К. Г., Чернова О. Л., Иванов Ю. Б.Способность микроорганизмов к инактивации бактерицидного действиятромбоцитарного катионного белка (β-лизина) // Бюл. экспер. биол. и мед.-1998. - №7. - С.66-67.59. Быкова А.А., Сединина Н.С. Иммунные и аутоиммунные эффекты этанола// Фармакол. и токсикол. - 2002. - №1. – С.85-87.60. Валеева И.Х., Зиганшина Л.Е., Бурнашова З.А., Зиганшин А.У. Влияниедимесфосфона и ксидифона на показатели перекисного окисления липидови антиоксидантной системы крыс, длительно получавших преднизолон //Эксперим. и клин. фармакол. - 2002. - Т.65, № 2. - С.40-43.
29461. Василенко О.А. Характер и механизмы нарушения неспецифическойрезистентности организма и специфической иммунной защиты приостром отравлении арсенитами // Дисс. … канд. мед. наук. – Саратов,СГМУ. -2004. - 165 с.62. Вахидова Г.А., Мельстер Е.Ш., Васильева Ф.В. Иммуномодулирующаятерапия при заболеваниях органов дыхания у больных с наличием в кровихлорорганических соединений / Тез. 1 Всесозн. конгр. по болезням органовдыхания. - Киев, 1990. - С. 750.63. Венгеровский А.И., Седых И.М., Саратиков А.С. Эффективностьферментиндуцирующих средств при экспериментальном поражениипечени тетрахлорметаном // Эксперим. и клин. фармакол. - 1993. - Т.56, №5. -С. 47-49.64. Венгеровский А.И., Огородова Л.М., Перевозчикова Т.В.Гепатопротекторы, содержащие фосфолипиды, ослабляютиммунодепрессивный эффект преднизолона при экспериментальномхроническом гепатите // Эксперим. и клин. фармакол. - 2004. - Т.67, № 4. -С.50-53.65. Виноградов В.М., Гембицкий Е.В., Мухин Е.А., Фролов С.Ф.Фармакология / Под ред. В.М. Виноградова. – Л.: Изд. ВМА, 1985. – 515 c.66. Виноградов В.М., Гембицкий Е.В., Мухин Е.А., Фролов С.Ф.Фармакология средств с преимущественным действием на обмен веществи противомикробных препаратов. – Л.: Изд. ВМА, 1986. – 404 с.67. Гаврилов О.К., Козинец Г.И., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга ипериферической крови. - М.: Медицина, 1985. – 284 с.68. Гембицкий Е.В., Бонитенко Ю.Ю. О механизме токсического действиядихлорэтана // Воен.-мед. журн. – 1983. - №9. – С.17-19.69. Гембицкий Е.В., Кожемякин Л.А., Королюк А.М., Морозов В.Г.,Хавинсон В.Х. Оценка иммунного статуса организма в лечебных
295учреждениях СА и ВМФ. Метод. пособ. - М.: Изд. ЦВМУ МО СССР, 1987.– С.24-25.70. Генес В.С., Шмутер Л.М., Буркина-Вовк З.И. Об едином математическомподходе к выявлению хронического действия малых концентрацийпромышленных ядов // Гигиена труда. - 1981. -№1. - С.30-32.71. Германчук В.Г. Нарушения регуляции физиологических механизмовиммуногенеза при остром отравлении нитрилами / Дисс. … канд. мед.наук. – Саратов, СВИРХБЗ. - 2000. - 121 с.72. 1,2-дихлорэтан // Гигиенические критерии окружающей среды. - Вып. 62.– Женева: ВОЗ, 1990. - С.80 c.73. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмытоксического действия // АМН СССР. - Л.: Медицина, 1986. – 280 с.74. Гольдберг Е.Д., Штернберг И.Б., Михайлова Т.Н. Состояние лимфоиднойткани при введении рубомицина С // Пат. физиол. и эксперим. терапия. –1972. - №2. - С.67-686.75. Гордиенко С.М. Приемлемый для клинической практики метод оценкиактивности естественных и антителозависимых киллерных клеток // Лаб.дело. - 1983. - №9. - С.45-48.76. Гордиенко С. М. Нерадиометрические методы оценки естественнойцитотоксичности на эритроцитарные клетки-мишени // Иммунология. -1984. - №1. - С.31-36.77. Горизонтов П. Д. Система крови как основа резистентности и адаптацииорганизма // Физиол. журн. – Киев. - 1981а. - Т 27. - №3. - С.317-321.78. Горизонтов П. Д. Гомеостаз. – М.: Медицина, 1981б. - С.538-573.79. ГребенюкА.Н.,АнтушевичА.Е.,Беженарь В.Ф.Нейтрофил и экстремальныевоздействия / Под ред. А.Н. Гребенюка. – СПб., 1998. - 215 с.80. Гребенюк А.Н., Романенко О.И. Общие механизмыиммуноцитологических реакций при химических воздействиях / Сб.материалов XIII научн. конф. ВмедА. - СПб., 1996. - С.21-22.
29681. Гублер Е. В. Вычислительные методы анализа и распознаванияпатологических процессов. – Л.: Медицина, 1978. - 296 с.82. Гудзь О.В. Сравнительное изучение влияния эфиров этиленгликоля наморфологический состав и функциональное состояние клетокпериферической крови белых крыс // Фармакол. и токсикол. - 1988. -№ 23.- С.110-115.83. Гурин В.Н. Роль центральных холинергических структур в механизместимуляции гипофизарно-адренокортикальной системыфармакологическими средствами // Фармакологическая регуляцияжизнедеятельности организма через холинергические системы. - Л.:Лен.сан.-гиг. мед. ин-т.- 1970. – С.174-175.84. Гущин Н.В., Хайдарова Д.С., Кугушева Л.И. и др. Активностьацетилхолинэстеразы лимфоцитов крыс при интоксикации пестицидами //Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1991. - Т.111, №2. - С.144-146.85. Гюллинг Э.В., Гоц Т.Ю., Гремяков В.А. Модуляция реактивностибазофилов низкомолекулярными тимическими препаратами // Докл. АНУССР. - 1991. - № 6. - С.174-175.86. Давыдов В.В. Флюорометрическое определение неконъюгированных 11-оксикортикостероидов в биологических средах организма // Труды ВмедА.- Л., 1970. - Т.189. - С.85-86.87. Давыдова Е.В., Романенко О.И., Шилов В.В., Гребенюк А.Н. Состояниелейкоцитарной защиты при экспениментальных отравлениях карбофосоми дихлорэтаном / Актуальные проблемы теоретической и прикладнойтоксикологии: Тез. докл. 1 Всерос. Конф. токсикол. - СПб, 1995. - С.44.88. Давыдова Т.В., Фомина В.Г. Адоптивная иммунотерапияэкспериментального алкоголизма у мышей С57В1/6 спленоцитами,экстракорпорально стимулированными реафероном // Бюл. эксперим.биол. и мед. – 2001. – Т.132, №9. – С.294-296.
29789. Давыдова Е.В., Алексеев С.М., Бонитенко Е.Ю., Гребенюк А.Н.,Романенко О.А., Сидоров Д.А. Состояние нейтрофилов периферическойкрови в условиях острых воздействий токсикантов различных групп //Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимическойзащиты – СПб.: ООО «Изд. Фолиант», 2004а. - С.74-75.90. Давыдова Е.В., Бонитенко Е.Ю., Романенко О.А., Шилов В.В., ГребенюкА.Н. Лейкоцитарная защита при острых отравлениях липофильнымиксенобиотиками // Медико-биологические проблемы противолучевой ипротивохимической защиты – СПб.: ООО «Изд. Фолиант», 2004б. - С. 74-75.91. Денисенко П.П. , Чередниченко Р.П. Взаимное влияние нервных ииммунных процессов / Тез. докл. науч. конф. - Л.: Изд. Лен. сан.-гиг.мединститут, 1970. – С.25.92. Денисенко П.П. Роль холинореактивных систем в регуляторныхпроцессах. - М: Медицина. - 1980. - С.296.93. Дешевой Ю.Б. Реакция эозинофилов костного мозга у интактных иадреналэктомированных крыс на введение препаратов, действующихпреимущественно в области периферических М-холинорецептров // Бюл.эксперим. биол. и мед. - 1984. - № 10. - С. 512.94. Дешевой Ю. Б. Влияние ацетилхолина на миграцию зрелых эозинофиловиз костного мозга в циркулирующую кровь // Пат. физиол. и эксперим.терапия. - 1985. - №. 5. - С.48-50.95. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. Пер. с англ. - М.: Мир, 1982. - Т 2. - 806 с.96. Долинская С.И., Лурье Л.М., Таги-заде Р.К. Влияние пестицидов намиграционную активность макрофагов и некоторые показателиметаболизма // Гиг. и сан. - 1989. - № 7. - С.76-77.97. Дьячук И. А. Состояние иммунобиологической реактивности организмаработников индейководческих птицефабрик // Гиг. труда. - 1979. - №2. -С.53-55.
29898. Евсеев В.А., Фомина В.Г., Давыдова Т.В. Иммунодепрессивное,противовоспалительное действие этанола и развитие повышеннойчувствительности к нему лейкоцитов крови и тучных клеток крыс //Иммунология. – 1983. - №2. – С.60-63.99. Евсеев В.А., Магаева С.В. Стресс в механизмах развития вторичныхиммунодефицитных состояний // Вестн. АМН СССР. - 1985. - №8. - С.18-23.100. Елизарова Н.Л., Арион В.Я., Зимина И.В. Опиоиды в составе тактивина:β-эндорфин // Аллергол. и иммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.204.101. Елькин А.И., Елизаров Д.П., Даванков В.А., Катаев С.С. Эффективностьгемосорбции на синтетических сорбентах при отравлении 1,2-дихлорэтаном // Токсикол. вестн. - 2004. - №2. – С.6-8.102. Ершов Ф.И. Иммуномодуляторы – новое поколение противовирусныхсредств // Эксперим. и клин. фармакол. - 1995. - Т.58, № 2.2. - С.74-78.103. Ефремов А. М. Исследование свободных радикалов крови, мозга, печении селезенки белых крыс, подвергавшихся хроническому отравлениюнитрилом акриловой кислоты // Здравоохр. Белоруссии. - 1976. - №6. -С.74-78.104. Ефремов А. М. Исследование биотрансформации нитрила акриловойкислоты в организме животных // Здравоохр. Белоруссии. - 1976. - №7. -С.85-86.105. Жамсаранова С.Д., Лебедева С.Н., Ляшенко В.А. Оценкафункциональной активности макрофагов при воздействии карбофоса и 2,4Д //Сборник науч. трудов ВНИИ гигиены и пестицидов, полимеров ипласт. масс.-1988.-N 18.-С. 143-147.106. Жданов В.В., Лукьянова Т.А., Кириенкова Е.В. Механизмыкроветворения у бестимусных крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2002.– Т.133, №5. – С.522-524.
299107. Жубантурлиева А.Б., Шортанбаев А.А., Туремуратова Ш.К.,Курбанбаева Н.К. Имунофан в комплексном лечении больных схроническим обструктивным заболеванем легких // Физиол. и патол.иммунной системы. - 2003. - Т.5. - №2. - С.218.108. Жук Е.А., Галенюк В.А. Тимоген в лечении сахарного диабета I типа //Тер. архив. - 1996. - Т.68, №10. - С.12-14.109. Забродский П.Ф. Иммунотропные свойства ацетилхолинэстеразныхвеществ / Проблемы охраны здоровья населения и защиты окружающейсреды от химических вредных факторов: Тез. докл. I Всес. съездатоксикологов. - Ростов н/Д, 1986. - С.342-343.110. Забродский П.Ф. Механизмы иммунотропных эффектовфосфорорганических соединений // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 1993. –Т.116. - №8. - С.181-183.111. Забродский П.Ф. Иммунотропные свойства ядов и лекарственныхсредств. - Саратов: Изд. СГМУ, 1998. - 213 с.112. Забродский П.Ф. Иммунотоксические эффекты при остром отравленииметанолом // Токсикол. вестн. - 1999а, №2. - C.8-11.113. Забродский П.Ф. Влияние тимогена на постинтоксикационноеиммунодефицитное состояние, вызванное острым отравлениемацетонитрилом // Эксперим. и клин. фармакол. – 1999б. - Т 62, №3. - С.48-49.114. Забродский П. Ф., Влияние ксенобиотиков на иммунный гомеостаза /Общая токсикология под ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филова. - М.:Медицина, 2002. – С. 352-384.115. Забродский П. Ф., Германчук В.Г. Оценка роли кортикостерона вреализации иммуносупрессивных эффектов при остром отравлениитоксичными химическими веществами // Бюл. эксперим. биол. и мед. –2000. - Т.129, №5. - С.552-555.
300116. Забродский П. Ф., Германчук В.Г. Влияние этанола на изменениеиммунотоксичности метанола // Эксперим. и клин. фармакол. – 2001. -Т64, №5. - С.40-42.117. Забродский П.Ф., Германчук В.Г., Нодель М.Л., Василенко О.А.,Аредаков А.Н. Влияние имунофана на показатели системы иммунитета иперекисного окисления липидов после острых отравлений токсичнымихимическими веществами // Эксперим. и клин. фармакол. - 2004а. – Т. 67,№5. - С.28-30.118. Забродский П. Ф., Киричук В.Ф. Фармакологическая коррекцияпостинтоксикационных иммунодефицитных состояний // Докл. АВН. -1999. - №2. - С.45-54.119. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., Грызунов А.В. Изменениенеспецифической и иммунологической резистентности организма приостром отравлении дихлорэтаном // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 1997. -Т.123, №1. - С.51-53.120. Забродский П. Ф., Киричук В.Ф., Германчук В.Г., Карпенко Н.И.Влияние тетрахлорметана на показатели системы иммунитета // Бюл.эксперим. биол. и мед. – 2004б. – Т.137, №1. - С.56-58.121. Зарубина И.В., Миронова О.П. Антиоксидантная защита головного мозгапри острой гипоксии беметилом // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. –Т.133, №2. – С.165-167.122. Земсков В.М. Неспецифические иммуностимуляторы // Успехисовременной биологии. - 1991. - Т.111, № 5. - С.707-721.123. Зимин Ю. И., Ляхов В. Ф. Эффект кооперации в реакции зависимой отантител клеточной цитотоксичности // Иммунология. - 1985. - №1. - С. 27-30.124. Золотникова Г.П. О нарушении иммунологической реактивностиорганизма под воздействием пестицидов в условиях теплиц //Гиг. труда.-1980.-N 3.-С. 38-40.
301125. Золотухин А.Н., Пронин А.Т. Профилактика поражений личного составаавиации Вооруженных Сил СССР ядовитыми техническими жидкостями. -М.: Воениздат, 1982. - 88 с.126. Иванова В.А. Вредные химические вещества. Углеводороды.Хлорпроизводные углеводородов. Справочное издание. Под ред. ФиловаВ.А. – Л.: Химия, 1990. - С.438-454.127. Иванова А.С. Характер вовлечения эндокринной системы в стресс ответена отравления нейротропными средствами // Токсикол. вестн. -1998. - №4.- С.16-19.128. Идова В.Г., Чейдо М.А., Девойно Л.В. Иммунная реакция у мышей припсихоэмоциональном напряжении в условиях снижения синтезасеротонина в мозге // Докл. акад. наук, 2004. - Т.398, №1. – С.132-134.129. Измайлова Ф. А. Упрощенный метод химического исследованиядегидрогеназ с применением П-нитротетразолия фиолетового (методика Р.П. Нарциссова) // Здравоохр. Таджикистана. – 1985. - №1. - С. 93.130. Измеров Н. Ф., Саноцкий И. В., Сидоров К. К. Параметры токсикометриипромышленных ядов при однократном воздействии. - М: Медицина, 1977.- 239 с.131. Ильичевич Н.В., Алексеева И.Н., Брызгина Т.М., Галенко Т.И.Иммунологическая реактивность организма в условияхэкспериментальных воздействий на печень // Иммунология. – 1984. - №5. –С.65-67.132. Имантаева Г.М. Иммунореабилитационная активность Т-активина вкомплексном лечении больных инфарктом миокарда // Аллергол. ииммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.246-247.133. Калинкович А.Г., Борисова Л.С., Инжеваткина С.М. Влияние веществ,увеличивающих внутриклеточное содержание цГМФ, на функциональнуюактивность В-клеток у мышей // Иммунология. - 1988. - № 4. - С.33-36.
302134. Караулов А.В. Молекулярно-биологическое обоснование примененияимунофана в клинической практике // Лечащий врач. – 2000а. – № 4. -С.46-47.135. Караулов А.В. Клинико-иммунологическая эффективность примененияимунофана при оппортунистических инфекциях // Лечащий врач. – 2000б.- №5-6. - С.28-29.136. Караулов А.В. Ликов В.Ф., Евстигнеева И.В., Кокушков Д.В. Оценкаразличных методов иммуномониторинга при проведениииммунокоррекции // Аллергол. и иммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.136-137.137. Кирилина Е.А., Михайлова А.А., Малахов А.А. Гурьянов С.А., ЕфремовМ.А. Механизм иммунокоррегирующего действия миелопида //Иммунология. - 1998. - № 4. - С.27-29.138. Кирилличева Г.Б., Батурина И.Г., Митькин В.В. Особенности влиянияТ-активина на активность 5- нуклеотидазы макрофагов и уровенькортизола крови в зависисмости от времени суток // Бюл. эксперим. биол.и мед. - 1990. - Т.110, №11. - C.468-471.139. Ковальская Н.И., Арион В.Я., Бреусов Ю.Н., Линдер Р.П. Влияниедлительного введения Т-активина на структуру тимуса // Бюл. эксперим.биол. и мед. - 1984. - Т.97, №1. - C.101-102.140. Коготкова О. И., Буравцева Н. П., Еременко Е. И., Ефременко В. И.,Аксенова Л. Ю. Сочетанное применение в эксперименте живойпротивосибиреязвенной вакцины СТИ с ликопидом // Иммунология. -2004. - № 2. - С.109-111.141. Кожемякин Л.А., Бонитенко Ю.Ю., Иванова Л.И. Этиопатогенезотравлений компонентами технических жидкостей // Воен.-мед. журн. -1991. - №9. - С.36-39.142. Козлов В.А., Любимов Г.Ю., Вольский Н.Н. Активность цитохром Р-450-зависимых монооксидаз и функции иммунокомпетентных клеток // Вест.акад. мед. наук СССР. – 1991. - №12. – С.8-12.
303143. Козлов В.А., Сафронов И.В., Кудаева О.Т., Колесникова О.П. Участиеинтерлейкина-1 в развитии Тh1- и Тh2-зависимых вариантов хроническойреакции «трансплантат против хозяина» // Бюл. эксперим. биол. и мед. –2001. – Т.132, №8. – С.185-187.144. Кокаровцева М.Г. Изыскание нового антидотного средства леченияотравлений дихлорэтаном на основе его биотрансформации и природныхмеханизмов обезвреживания / Автореф. дисс. докт. мед. наук. – Л., 1982.-39 с.145. Комиссаренко В.П., Резников А.Г. Ингибиторы функции корынадпочечниковых желез. – Киев, Здоров’я, 1972. - 374 с.146. Конопля А.И., Козлов В.Е., Ивакин В.Е., Прокопенко Л.Г. Изучениеиммуномодулирующего фактора выделяемого клетками селезенки притоксическом поражении печени // Пат. физиол. – 1985. - №6. – С.45-50.147. Конопля Е.Н., Прокопенко Л.Г. Развитие иммунного ответа присочетанном действии на организм гепатотропных ядов и высокой внешнейтемпературы // Пат. физиол. и эксперим. терап. -1994.-N 12.-С. 27-31.148. Константинов Б.А., Винницкий Л.И., Иванов В.А Иммунореабилитация вкардиохирургии на примере больных с инфекционным эндокардитом //International Journal on Immunorehabilitation. – 2000. - Vоl. 2, №1. - Р.146-151.149. Корнева Е. А. Нервная система и иммунитет // Вестн. АМН СССР. -1985.- №11. - С.76-85.150. Корнева Е. А., Лесникова М. П., Яковлева Е. Э. Молекулярнобиологическиеаспекты изучения взаимодействия нервной, эндокринной ииммунной систем / Пробл. и перспект. соврем. иммунол. – Новосибирск. -Изд.: Новосибир. мединститута, 1988. - С.87-100.151. Корнева Е.А. Нарушение нейрогуморальной регуляции функцийиммунной систем // Вест. АМН СССР. - 1990. - №11. - С.36-42.
304152. Коробейникова Э.Н. Фотометрический метод определения малоновогоальдегида // Лаб. дело. - 1989. - №7. - С.8-10.153. Космодамианская Д. М. Влияние атмосферных загрязнений на здоровьенаселения // Гигиена. и сан. - 1968. - №2. - С.100-101.154. Крыжановский Е.Н., Евсеев В.А. Иммунопатология алкоголизма // Пат.физиол. и эксперим. терап. – 1986. - №4. – С.3-8.155. Кузнецов В.П., Беляев Д.Л., Сливинская Ю.Г. Коррекция лейкинферономиммуно-дефицитных состояний при экспериментальных токсических имедикаментозных гепатитах / Тез. докл. I Съезда иммунологов России. -Новосибирск, 1992. - С. 259.156. Кузник Б. И., Васильев Н. В., Цыбиков Н. Н. Иммуногенез, гомеостаз инеспецифическая резистентность организма. – М: Медицина, 1989. – 256 с.157. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. - М.: Высш. шк. - 1985. - 287с.158. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. - М., 1986. - 224 с.159. Кунцевич А.Д., Баулин С.И., Головков В.Ф., Рембовский В.Р., СмирноваЛ.А., Трошкин Н.М. Сравнительный анализ изменений белкового обмена,перекисного окисления липидов и системы гемостаза при действииполихлорированных дибензо-n-диоксинов и радиации / Докл. акад. наук. -1994. - Т.335, №3. - С.378-381.160. Курашов О.В., Троцевич В.А. Применение ацетилцистеина вкомплексном лечении больных с острым отравлением 1,2-дихлорэтаном //Врачебное дело. - 1992. - №10. - С.109-111.161. Курдыбайло Ф.В., Ермаков Е.В., Мурашов Б.Ф. Клиника и лечениеотравлений техническими жидкостями. – Куйбышев: Изд. Куйбышевскогомединститута, 1968. - 61 с.162. Куркин А.В. Надыров Э.А., Джамабаева С.К. Реактивность тимуса приантигенной стимуляции у потомства алкоголизированных крыс / Сб. науч.тр. Алма-Атинского ин-та усоверш. врачей. - Алма-Ата, 1990. - С. 132-134.
305163. Куценко С.А. Основы токсикологии. - СПб.: Изд. «Фолиант», 2004. - 720с.164. Куценко С.А. (ред.). Военная токсикология, радиобиология имедицинская защита. - СПб.: Изд. «Фолиант», 2004. – 528 с.165. Кушнир Е.А., Ловать М.Л., Обухова М.Ф., Шмальгаузен Е.В., ДаниловаР.А., Ашмарин И.П. Использование полиоксидония дляиммунологической коррекции алкогольной мотивации // Иммунология. -2004. - №2. –С.87 - 90.166. Лазарев Н.В., Гадаскина И.Д. Вредные вещества в промышленности. -Л.: Химия, 1977. - 608 с.167. Лазарева Д.Н., Алехин Е. К. Стимуляторы иммунитета. - М.: Медицина,1985. - 256 с.168. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высш. шк., 1980. - 293 с.169. Ларионов В.Г., Кокаровцевa М.Г. Морфологический составпериферической крови при интоксикации дихлорэтаном и егометаболитами // Актуальные вопросы гигиены применения пестицидов вразличных климато-географических зонах. - Ереван, 1976. – С.131-133.170. Лебедев В.В. Имунофан - синтетический пептидный препарат новогопоколения: иммунологические и патогенетические аспекты клиническогоприменения // Иммунология. - 1999. - №1. - С.25-30.171. Лебедев В.В., Покровский В.И. Иммунологические и патогенетическиеаспекты терапии инфекционных болезней регуляторными пептидами //Эпидем. и инфекц. болезни. – 1999а. – № 2. - С.52-56.172. Лебедев В.В., Покровский В.И. Имунофан - синтетический пептидныйпрепарат нового поколения // Вестник Российской АМН.-1999б.- N4.- С.56-61.173. Лебедев В.В., Данилина А.В., Сгибова И.В. Фармакологическаяиммунореабилитация в системе специфической иммунопрофилактики ивакцинотерапии: современные подходы и перспективы развития //
306International Journal on Immunorehabilitation. – 2000. - Vоl.2, № 1. - Р.146-151.174. Ледванов М. Ю., Киричук В. Ф. Введение в клиническую иммунологию.- М: Медицина, 1996. - 141 с.175. Лемус В. Б., Давыдов В. В. Нервные механизмы и кортикостероиды приожогах. - Л.: Медицина, 1974. - 182 с.176. Ленинджер А. Биохимия. Пер. с англ. – М.: Мир, 1974. – 957 с.177. Ливанов Г.А. Клиника, диагностика и лечение острых отравленийалкоголем и его суррогатами - М.: Медицина, 2000. - С.62-106.178. Ливанов Г.А., Бонитено Е.Ю., Васильев С.А. Новые походы к терапииострой алкогольной интоксикации. - СПб., 2001. – С.10-20.179. Лужников Е.А., Лесовик Ж.А., Новиковская Т.В. Метаболизм 1,2-дихлорэтана в организме человека после острых отравлений // Суд.-мед.экспертиза. – 1985. - №2. – С.47-49.180. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. Руководство дляврачей. - М.:Медицина, 1989. – 432 с.181. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. - М.: Медицина, 1999. – 416с.182. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. Руководство дляврачей. - М.:Медицина, 2000. – 434 с.183. Лукомская М.И. Алкоголизм в общемедицинской сети (выявление,типология, лечебно-профилактические программы) / Автореф. дисс. докт.мед. наук. - М., 1992. - 32 с.184. Лукьянова Л.Д., Михайлова Н.Н., Фоменко Д.В., Кизиченко Н.В.,Душина Е.Н. Об особенностях нарушений энергетического обмена притравматическом шоке и возможности их фармакологической коррекции //Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. – Т.132, №9. – С.263-267.185. Мальцева Г.М. Изменения физиологических механизмов регуляциисистемы иммунитета при остром отравлении атропиноподобными
307препаратами (м-холиноблокаторами) / Автореф. дисс. канд. мед. наук. - М.,2002. - 24 с.186. Маркизова Н.Ф., Гребенюк А.Н., Ивницкий Ю.Ю. Токсикология спиртов.Учебное пособие. - СПб.: Изд. «Лань», 2001. - 120 с.187. Маркизова Н.Ф., Гребенюк А.Н., Башарин В.А., Бонитенко Е.Ю. Спирты:Серия «Токсикология для врачей». - СПб.: Изд. «Фолиант», 2004. - 112 с.188. Маркова И.В., Афанасьева В.В., Цыбулькин Э.К., Неженцев М.В.Клиническая токсикология детей и подростков. – СПб: Изд.«Интермедика», 1998. – 304 с.189. Мартынова Т.В., Брызгина Т.М., Павлович С.И., Алексеева И.Н.Изменение активности антигеннеспецифических Т-хелперов и Т-супрессоров у кроликов в условиях поражения печени четыреххлористымуглеродом // Физиол. журн. – 1991. – Т.37, №1. – С.74-80.190. Мартынова Н.А. Особенности заживления кожных ран в условияхалкогольно-суррогатной интоксикации в сочетании с холодовымвоздействием / Автореф. канд. мед. наук. – СПб., 1992. - 23 с.191. Матлина Э.Ш. Флюорометрический метод определения катехоламинов втканях организма. - М.: Медицина, 1965. - С.84-87.192. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Ч.2. – 12-е изд., перераб. идоп. - М.: Медицина, 2000. - 197 с.193. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, 1983. - 254 с.194. Маянский Д.Н. Система фагоцитов: методические проблемы // Патол.физиол. и эксперим. терапия. Вып. 2. - 1986. - С.83-86.195. Медуницин Н.В. Регуляция вакцинального иммунитета // Аллергол. ииммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.137-139.196. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных иишемических повреждений сердца. - М.: Медицина, 1984. - 272 с.
308197. Михайлова А.А., Захарова Л.А., Кирилина Е.А., Сарыбаева Д.В.Механизмы снижения иммунного ответа при стрессе и его коррекциямиелопидом / Тез. докл. Всесоюз. конф. – Ростов-на-Дону, 1989. - С.31-32.198. Михайлова А.А. Миелопиды и иммунореабилитация // Internatinal J.Immunorehabilitation. - 1997. - № 5. - С.5.199. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю. Использованиеимунофана для коррекции изменений гематологических показателей,вызванных циклофосфаном // Internatinal J. on Immunorehabilitation.Физиология и патология иммунной системы. - 2003. - Т.5. - №2. - С.230.200. Михальчик Е.В., Иванова А.В., Ануров М.В., Титкова С.М., ПеньковЛ.Ю., Коркина Л.Г. Профилактическое и лечебное действие комплексногоантиоксидантного препарата при ожоговой травме у крыс // Бюл.эксперим. биол. и мед. - 2004. - Т.138, №9. - С.299-301.201. Молотков А.О. Нарушения физиологических механизмов регуляциисистемы иммунитета при остром отравлении фосфорорганическимсоединением карбофосом / Атореф. дисс. канд. мед. наук. – Саратов: Изд.СГМУ, 2002. - 24 с.202. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Характеристика и изучение механизмадействия фактора тимуса (тимарина) / Докл. АН СССР. – 1978.- Т.240, №4. – С.339-346.203. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторовмногоклеточных систем - цитомедины // Успехи совр. биологии. - 1983. -Т. 96, №3. – С.1004-1007.204. Мутускина Е.А., Багдасаров Л.А., Трубина И.Е., Заржецкий Ю.В.Некоторые показатели стресс-реакции организма на разных этапахпостреанимационного периода // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. –Т.133, №1. – С.38-41.205. Надариешвили К.Ш., Месхишвили И.И., Кахиани Д.Д., Ормцадзе Г.Л.,Хведелидзе М.Т., Читанава Е.Г. Действие малых доз алкоголя на
309сердечный ритм кроликов // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2004. - Т.138,№9. -С.306-310.206. Нацюк М.В., Чернуха Ф.С., Басенко Т.А., Федуров В.В. Влияние остройинтоксикации дихлорэтаном на окислительное фосфорилирование вмитохондриях печени крыс // Физиол. и токсикол. – 1974. - №1. – С.92-93.207. Нацюк М.В. Экспериментальное исследование патогенетической терапииЯТЖ (дихлорэтан, 4-х хлористый углерод) / Автореф. дисс. докт. мед.наук. – Л., 1979. - 45 с.208. Невидимова Т.И., Суслов Н.И. Психотропные эффекты тимогена // Бюл.эксперим. биол. и мед. - 1995. - Т.119, №2. - С.199-200.209. Немцов А.В. Алкогольная ситуация в России. - М.:Медицина, 1995. - 134с.210. Нечаев В.И., Крылов В.В., Хованов А.В. Иммуномодуляторы прилечении больных туберкулезом по стратегии DOTS // International J. onImmunorehabilitation. Физиология и патология иммунной системы. – 2003.– Т. 5, №2. – С.204.211. Нестерова И.В. Стратегия и тактика иммунотерапии вторичныхиммунодефицитных состояний с инфекционным синдромом // Аллергол. ииммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.139-140.212. Николаев А. И., Тулякова С. Р., Султанкулов А., Рихсиева С. И.Изменение клеточных и гуморальных факторов иммунитета у морскихсвинок под влиянием нового гербицида тоулина / Докл. АН УзССР. - 1988.- № 12. - С.54-55.213. Новикова Л.В., Лебедева К.М., Яковлева Э.М. Иммунологическиеметоды исследования. – Саранск, 1981. – 92 с.214. Нужный В.П., Прихожан Л.М. Новый взгляд на проблему токсичностиалкогольных напитков // Токсикол. вестн. - 1996. - №5. – С.9-16.
310215. Нужный В.П. Снижение токсичности алкогольных напитков –перспективное направление в современной наркологии и биотехнологии //Токсикол. вестн. - 2001. - №2. – С.6-13.216. Нужный В.П., Савчук С.А., Тюрин И.А., Белов С.К. Проблемаденатурирующих добавок к этиловому спирту в связи с исследованиемобразцов нелегельной алкогольной продукции // Токсикол. вестн. - 2004. -№3. – С.7-13.217. Осипов С.Г., Титов В.Н. Биологические функции системы комплемента //Иммунология. - 1984. - № 6.-С.82-83.218. Осипова Л.О. Исследование влияния иммуномодулятора тимогена нафункцию «активных» розеткообразующих лимфоцитов in vitro у больныхтуберкулезом легких / Докл. 18 науч.-практич. конф. Киевского ин-таусоверш. врачей. - Киев, 1990. - С.3-4.219. Павлов А.В., Борисенко Н.Ф., Гуменный В.С. К проблеме влиянияпестицидов на здоровье (обзор) // Гиг. и сан. – 1991. - №4. – С.60.220. Переверзев А.Е. Кроветворные колониеобразующие клетки и физическиестрес-факторы. - Л.: Наука, 1986. - 172 с.221. Петров Р.В., Хаитов Р. М., Сеславина Л.С. Подавление эндоколонизацииселезенки у сублетально облученных мышей при трансплатацииаллогенных лимфоидных клеток // Радиология. - 1970. - № 4. - С.532-535.222. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Миграция стволовых клеток изэкранированного костного мозга у неравномерно облученных мышей //Радиология. - 1972. - № 1. - С.69-76.223. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Гомеостаз. – М.: Медицина, 1981а. - С.312-365.224. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Манько В. М., Михайлова А. А. Контроль ирегуляция иммунного ответа. – М.: Медицина, 1981б. – 312 с.225. Петров Р. В. Иммунология. – М.; Медицина, 1987. - 416 с.226. Петров Р.В. Синтетические иммуномодуляторы. - М., 1991. – 199 с.
311227. Петров Р.В., Михайлова А.А., Фонина Л.А. Миелопептиды и иммунныйстатус // Аллергол. и иммунол. – 2005. – Т.6, № 2. - С.204.228. Петрусенко Г.П., Тумилович М.К. Активность ферментов углеводноэнергетическогои нуклеинового обмена в иммунокомпетентных клеткахкрыс при аммонийной и свинцовой интоксикации // Медикобиологическиепроблемы противолучевой и противохимической защиты.– СПб.: Изд. «Фолиант», 2004. - С.128-130.229. Плецитый К.Д., Сухих Г.Т. Витамин А стимулирует иммунный ответ ктимусзависимым антигенам и повышает активность естественныхкиллеров / Докл. АН СССР. - 1984. - Т.278, № 4. - С.1017-1019.230. Плецитый К.Д., Сухих Г.Т. Экспериментальный анализиммуностимулирующих свойств витамина А. // Бюл. экспер. биол. и мед. –1985. – Т.100. - №11. - С.600-602.231. Плужников Н.Н., Бакулина Л.С., Легеза В.И. и др. Некоторые аспектыантирадикальной защиты мембран // Актуальные проблемы иперспективы развития военной медицины. Под обшей ред. Н.Н.Плужникова. – СПб., 2003а. - С.123-139.232. Плужников Н.Н., Гайдар Б.В., Чепур С.В. Редокс-регуляция:фундаментальные и прикладные проблемы // Актуальные проблемы иперспективы развития военной медицины. Под обшей ред. Н.Н.Плужникова. – СПб., 2003б. - С.139-173.233. Плужников Н.Н., Легеза В.И., Галеев И.Ш. Комплексное использованиеантиоксидантов с различными механизмами действия – перспективноенаправление повышения эффективности терапии радиационныхпоражений // Актуальные проблемы и перспективы развития военноймедицины. Под обшей ред. Н.Н. Плужникова.– СПб., 2003в. - С.173-189.234. Подосинников И.С., Гурина О.П., Бабаченко И.В. Влияние миелопида нафункциональную активность лейкоцитов периферической крови // Пат.физиол. и эксперим. терап. - 1991. - №4. - С.9-12.
312235. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике.Справочник. - М.: Медицина, 1969. - 651 с.236. Покровский В.И., Лебедев В.В., Шелепова Т.М. Имунофан - пептидныйпрепарат нового поколения в лечении инфекционных и онкологическихзаболеваний: свойства, область применения // Практикующ. врач. - 1997. –№12. - С.14-15.237. Попова Е.А., Лисун И.И., Алимов А.Д. Иммунофармакотерапияимунофаном в лечении больных с гнойными менингитами // Internatinal J.on Immunorehabilitation. Физиология и патология иммунной системы. -2003. - Т.5. - №2. - С.252.238. Прокопенко Л.Г., Конопля А.И. Влияние четыреххлористого углерода навыделение иммуностимулирующего фактора спленоцитами животных //Фармакол. и токсикол. – 1982. - №6. – С.61-65.239. Прокопенко Л.Г., Кедровская Н.Н. Иммунорегуляторные факторысыворотки при токсическом поражении печени // Пат. физиол. и эксперим.терап. – 1983. - №4. – С.56-61.240. Прокопенко Л.Г., Конопля А.И., Кедровская Н.Н. Принципы «плюсминус»взаимодействия в регуляции иммунного ответа при токсическомпоражении печени // Пат. физиол. и эксперим. терап. – 1983. - №5. – С.59-63.241. Прокопенко Л.Г. Изменение функции иммунорегуляторных клеток подвлиянием фактора селезенки животных, отравленных гепатотропным ядом// Пат. физиол. и эксперим. терап. – 1985. - №4. – С.72-76.242. Прокопенко Л.Г., Кедровская Н.Н. Козлов В.Е. Взаимосвязь активностипротеолитических ферментов крови и их ингибиторов с образованиеммедиатора иммунного ответа при токсическом поражении печени / Курск,.Курский мединститут. – 16 с. – Деп. В ВИНИТИ 18.05.88, №3827-В88.243. Ремезов А. И., Башмаков Г. А. Методы определения естественной(неспецифической) резистентности организма. - Л., 1976. - 65 с.
313244. Решетова Н.В., Мамонов А.В. Косников В.В., МалашеньковаИ.К. / Тр. 2науч. конф. мол. ученых НИИ физ.-хим. мед. - М., 1987. - С.49-54.245. Ройт А. Основы иммунологии. Пер. с англ. - М.: Мир, 1991. - 327 с.246. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. - М.: Мир,2000. – 582 с.247. Романенко О.И., Гребенюк А.Н. Лейкоцитарная защита при острыхотравлениях // Морской мед. журн. – 1997. - Т.4, №4. - С.8-11.248. Ротенберг Ю.С. Токсиколого-гигиенические аспекты биоэнергетики /Тез. докл. Всесоюзн. учред. конф. по токсикологии. - М., 1980. - С.108.249. Ротенберг Ю.С. Классификация ксенобиотиков по локализации ихдействия на ферментные системы митохондрий // Бюл. эксперим. биол. имед. - 1982. - №9. - С.42-45.250. Руднева Т.Б. Осипова Е.Ю., Михайлова А.А., Манько В.М. Коррекциямиелопидпми дифференцировки кроветворных клеток предшественникову мышей с экспериментальным Т-иммунодефицитом // Бюл. экспер. биол.и мед. - 1989. - Т.107, №6. - С.718-720.251. Румянцев А.П., Тиунова Л.В., Остроумова И.А. Метаболизм соединенийжирного ряда // Итоги науки и техники: Серия токсикология. - М.:ВИНИТИ, 1981. – Т.12. – С.65-116.252. Рыбников В.Н., Бровкина И.Л., Утешев Б.С. Влияние лизоцима нафункционально-метаболическую активность полиморфно-ядерныхлейкоцитов в условиях острой кровопотери // Эксперим. и клин. фармакол.-2004. - Т.67, №2. – С.45-48.253. Рыболовлев Ю.Р. Прогнозирование действия ксенобиотиков на человека// Фармакол. и токсикол. – 1982. - №1. - С.110-114.254. Саватеев Н.В., Куценко С.А. Характеристика токсического действиявеществ, представляющих опасность при разрушении промышленныхобъектов. - Л.: ВмедА, 1982. - 44 с.
314255. Саватеев Н.В., Куценко С.А. Ядовитые вещества, выделяющиеся приразрушении промышленных объектов, и мероприятия по оказаниюмедицинской помощи пострадавшим // Воен.-мед. журн. – 1993. - №6. -С.36-40.256. Савлуков А.И., Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А. Влияниетриметил-5-гидроксиурацила и витамина Е на морфологическое состояниепечени крыс при отравлении дихлорэтаном // Медико-биологическиепроблемы противолучевой и противохимической защиты – СПб.: Изд.«Фолиант», 2004. - С.288-289.257. Савченко М. В. Влияние роданистого аммония и тиомочевины наиммунологическую систему организма // Гиг. и сан. -1987. - №11. - С. 29-32.258. Сакаева Д.Д, Лазарева Д.Н. Влияние гентамицина на иммунитет прииммунодефиците и действие иммуномодуляторов // Эксперим. и клин.фармакол. - 1998. - Т.61, №3. - С.50-53.259. Саноцкий И. В. Пути разработки ускоренных методов установленияпредельно допустимых концентраций в воздухе рабочей зоны // Гиг. труда.- 1969. - № 7. - С.4-7.260. Сахаров Г.Ю. Острые отравления этиленгликолем // Cуд.-мед. эксперт. –1983. - Т.26. - №2. – С.48-52.261. Свирид В.Д. Синтез специфических белков в клетках некоторых органовбелых мышей при действии температурного фактора внешней среды //Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2002. – Т.133, №3. – С.331-336.262. Селье Г. На уровне целостного организма. Пер. с англ. - М. - 1972. –С.10-31.263. Семина О.В., Семенец В.И. Замена акцессорных Т-лимфоцитовсинтетическими пептидами в процесе формирования селезеночныхкроветворных колоний // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1993. - №2. - С.298-299.
315264. Семина О.В., Семенец В.И., Дейгин В.И. Стимуляция тимогеном (GWдипептидом)восстановления кроветворения у облученных и подвергнутыхдействию цитостатика мышей // Иммунология. - 1997. - №1. - С.33-35.265. Сепетлиев Д. Н. Статистические методы в научных медицинскихисследованиях. - М.: Медицина, 1975. - 296 с.266. Сидельникова Н. М. Характер и механизмы нарушениянеспецифической резистентности организма и специфической иммуннойзащиты при остром отравлении веществом BZ / Дисс. … канд. мед. наук. –Саратов, СГМУ. - 2004. - 168 с.267. Сидорин Г.И., Луковникова Л.В., Фролова А.Д. Адаптация как основазащиты организма от вредного действия химических веществ // Рос. хим.журн. - 2004. – Т.XLVIII, № 2. – С.44-50.268. Смахтин М.Ю., Горяйнов И.И., Конопля А.И. Иммуномодулирующиефакторы спленоцитов в условиях воздействия этанола и тетрахлорметана /Тез. докл. науч. конф. РАМН. - Москва, 1994. - С.425-426.269. Смахтин М.Ю., Конопля А.И., Чалый Г.А. Влияние тетрахлорметана иэтанола на выделение спленоцитами крыс иммуномодулирующихфакторов. // Эксперим. и клин. фармакол. - 1995. - №4. - С.48-50.270. Смирнов В.С., Петленко С.В., Сосюкин А.Е. Иммунодефицитныесостояния. / Под ред. В.С. Смирнова. - СПб: Изд. «Фолиант», 2000. –С.337-367.271. Сосюкин А.Е., Софронов Г.А., Гребенюк А.Н., Романенко А.И. Влияниексенобиотиков на состояние нейтрофилов // Морской мед. журн. - 1997. -Т.4, №8. - С.26-31.272. Стасий Е.Д., Балаболин И.И., Ботвиньева, Степаненко Р.Н.Иммуномодулирующая терапия при пищевой инфекции у детей //Иммунология. – 1990. - №5. – С.45-48.273. Степаненко Р.Н., Рязанов Н.К., Молдокулов О.А., Власенко Р.Я.Миелопид; иммунокоррегирующая активность при переломах лицевых
316костей и травметическом остеомиелите // Иммунология. - 1991. - № 1. -С.44 -47.274. Стрельникова Л. А., Раткина В. Г. Влияние атмосферных загрязнений наактивность лизоцина слюны и бактерицидность кожи у детей // Тр. Томск.мед. ин-т. – Томск, 1983. - T.31. - С.240-243.275. Судаков К.В. Основы физиологии функциональных систем. - М.:Медицина, 1983. - 272 с.276. Сухих Г.Т., Малайцев В.В. Богданова И.М. Интерлейкин-2 и еговозможная роль в патогенезе стрессорных изменений иммунной системы /Докл. АМ СССР, 1984. - Т.278, № 3. - С.762-765.277. Таранов В.А., Короткова М.Н. Действие Т-активина на макрофаги in vitro// Интерлейкины и другие медиаторы в клинической иммунологии. – М.,1989. – С.56-60.278. Тиунов Л.А. Четыреххлористый углерод. 1,2–дихлорэтан.Хлорпроизводные алканов / Вредные химические вещества.Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов. Справочник под. ред.В.А. Филова – Л.: Химия, 1990а.- С. 337-372.279. Тиунов Л.А. Трихлорэтилен. Хлорпроизводные непредельныхуглеводородов / Вредные химические вещества. Углеводороды.Хлорпроизводные углеводородов. Справочник под. ред. В.А. Филова – Л.:Химия, 1990б. - С.438-454.280. Тихонов В. Н. К оценке изменений массы внутренних органов животныхв токсикологических исследованиях // Гиг. и сан. – 1981. - №7. - С.58-59.281. Тодрия Т.В., Цандер А. Теломеразная активность в клетках 9-суточныхселезеночных колоний, образованных костным мозгом нормальных итимэктомированных мышей // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2004. - Т.138,№11. - С.567-569.
317282. Токмаков А.А., Денисенко В.Ю. Влияние этанола на функциональнуюактивность макрофагов / Tез. докл. Всесоюз. конф. "Стресс и иммунитет(психонейроиммунол.)" Ростов-на-Дону. - Л., 1989. - С.249.283. Турсунов Б.С., Махмудов К.Д., Туйчиев Д.А. Целесообразностьприменения миелопида (В-активина) в комплексном лечении ожоговойболезни // Иммунология. - 1992. - № 6. - С.42 - 43.284. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинскихисследованиях. – М.: Медицина, 1975. - 295 с.285. Утешев Б. С. О некоторых методологических вопросах скринингаиммунотропных средств // Фармакол. и токсикол. - 1984. - №3. - С.5-13.286. Утешев Б.С., Сергеев А.С., Коростелев С.А. Анализ современныхнаправлений в создании иммунотропных средств // Эксперим. и клин.фармакол. - 1995. - Т.58, №3. - С.3-7.287. Филатова Г.Ф., Кузнецова Г.А., Бобков Ю.Г. Изменение содержаниякатехоламиов в тканях крыс после холодового воздействия // Пат. физиол.и эксперим. терапия. – 1987. - №4. – С.48-50.288. Фридман Г.И. Влияние севина, хлорофоса и ДДТ на некоторыеспецифические иммунологические показатели иммунобиологической иобщей реактивности организма (к проблеме токсических воздействиймалой интенсивности) // Вопросы гиг. и токсикол. пестицидов. - М.:Медицина, 1970. - С.139-145.289. Фридман Л.С., Флеминг Н.Ф, Робертс Д.Х., Хайман С.Е. Наркология.Пер. с англ. – М.: Изд. БИНИМ, 1998. - 318 с.290. Фридман К.Б., Лукьянова Ю.А., Ларина О.О. Аспект алкоголизациинаселения Санкт-Петербурга по материалам санитарно-гигиеническогомониторинга / Тез. докл. науч.-практ. Конф. «Медицинская профилактиканаркологических заболеваний». - СПб, 2003. – С.12-14.291. Фримель Х., Брок Й. Основы иммунологии: Пер. с нем. – М.: Мир, 1986.- 254 с.
318292. Фролов Б. А., Афонина С. Н., Меерсон Ф. З. Роль соотношенияцАМФ/гЦМФ в постстрессорной активации первичного иммунного ответа// Пат. физиол. и эксперим. терап. – 1985. - №5. – С.23-26.293. Хабибуллаев Б.Б. Коррекция вторичных иммунодефицитов с помощьюметаллсодержащих соединений хитозана // Аллергол. и иммунол. – 2005. –Т.6, № 2. - С.207.294. Хавинсон В.Х, Морозов В.Г. Серый С.В. Иммунокоррегирующая терапиятимогеном при заболеваниях и травмах / Тез. докл. Всесоюз. симпоз.Ростов- на- Дону. - Л., 1990. - С.163.295. Хаитов Р.М., Пинегин Б. В. Современные подходы к оценке основныхэтапов фагоцитарного процесса // Иммунология. – 1995. - №4. - С.3-8.296. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. -М.: Изд. ВНИРО, 1995. - 219 с.297. Хаитов Р. М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. – М.:Медицина, 2000. - 430 с.298. Ханафиева И.В., Добржанская Р.С., Хусейнова Х.Х. Воздействиетактивина и тималина на лейшманийную инфекцию в эксперименте //Цитология. – 1992. – Т.34, №4. - С.158.299. Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. – М.:Медицина, 1983.- 319 с.300. Холмухамедова Н.М., Николаев А.И., Зиямутдинова З.К. Фосфо- игликолипидный спектр органов иммунной системы приэкспериментальном хроническом токсическом гепатите // Мед. журн.Узбекистана. - 1991. - № 3. - С.56-61.301. Хусинов А.А., Хайдарова Д.С., Гущин Г.В., Лесникова М.П.Нейроэндокринная система и специфические факторы иммунитета приотравлении пестицидами // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1991. - Т.111,№12. - С.623-624.
319302. Чейдо М.А., Идова Г.В., Папсуевич О.С. Участие низкомолекулярныхпептидов и их аналогов в иммуномодуляции // Ин-т. физиол. СО АМНСССР. - Новосибирск, 1990. - 12 c. - Деп. в ВИНИТИ 27.07.9., № 4278-B90.303. Чекнёв С.Б., Бабаева Е.Е. Активность лимфоцитов человека вприсутствии соединений, содержащих углеводные компоненты // Бюл.эксперим. Биол. и мед. - 2004. - Т.138, №11. - С.555-558.304. Черноусов А.Д., Юрин Б.Л. Выделение Т-супрессоров, афинных кантигену и их взаимодействие с эффекторами гиперчувствительностизамедленного типа в различных экспериментальных условиях //Иммунология. – 1982. - №1. – С.13-16.305. Чертков И.Л., Дерюга Е.И., Дризе Н.И. Примитивная стволоваякроветворная клетка // Вест. АМН СССР. – 1990. - №9. - С.35-37.306. Чиркова В.М. Четыреххлористый углерод. Вып. 27. - М., 1983. - 20 с.307. Чугунихина Н.В., Хасанова М.И. Влияние пестицидов нанеспецифическую сопротивляемость организма инфекции. // Гиг. и сан. -1994. - №1. - С.19-21.308. Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю. Биология алкоголизма. - СПб.: Изд.«Лань», 1998. - 272 с.309. Шафеев М.Ш. Влияние хлорофоса на некоторые показателииммунологической реактивности организма / Изучение экстремальныхсостояний. - Казань, 1976. - С.60-63.310. Шафеев М. Ш. Влияние некоторых пестицидов и их комбинаций напоказатели иммунитета и неспецифической реактивности организма /Автореф. дис. канд. мед. наук. - Казань, 1978. - 26 с.311. Шилов Ю.И., Ланин Д.В. Влияние гидрокортизона на функциифагоцитирующих клеток брюшной полости крыс в условиях блокады β-адренорецепторов // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. – Т.131, №10. –С.439-442.
320312. Ширинский В.С., Жук Е.А. Проблемы иммуностимулирующей терапии //Иммунология. - 1991. - № 3. - С.7-10.313. Ширинский В.С., Жук Е.А. Проблемы фармакодинамики ифармакокинетики иммуностимулирующих препаратов // Иммунология. -1994. - № 6. - С.27-29.314. Ширшев С.В. Зависимость внутриклеточного уровня цАМФ интактныхспленоцитов от популяционного состава клеточной суспензии иактивности циклооксигеназы // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1998. - №6. -С.666-669.315. Шляхов Э. Н., Гылка В.В. Т-активин – иммуномодулирующий препараттимуса // Здравоохранение (Кишинев). - 1989. - С.20-23.316. Шмидт Р., Тевс Г. Физиология человека. Пер. с англ. – М.: Мир, 1996. –641 с.317. Шмутер Л.М. Влияние острого и хронического отравления дихлорэтаномна количество антителообразующих клеток и плазмоцитарную реакциюселезенки крыс при иммунизации О-антигеном Sal. Typhi // Фармакол. итоксикол. – 1976. - №1. – С.104-108.318. Шмутер Л.М. Влияние хронического воздействия низких концентрацийхлорированных углеводородов ряда этана на специфическую инеспецифическую резистентность животных in vitro // Гиг. труда и проф.заболев. – 1977. - №8. – С.38-42.319. Шубик В. М. Проблемы экологической иммунологии. - Л., 1976. - 216 с.320. Шуршалина А.В., Верясов В.Н., Сухих Г.Т. Соотношение уровнейцитокинов при генитальном герпесе в различные фазы инфекционногопроцесса // Бюл. эксперим. биол. и мед. – 2001. – Т.132, №7. – С.59-61.321. Шустов В. Я., Довжанский И. С. Анализ адаптивных реакций у рабочих вусловиях производства химических волокон // Гиг. труда и проф. заболев. -1987. - №6. – С.18-21.
321322. Щеглова М.Ю., Макарова Г.А. Клиническая эффективность примененияимунофана у больных бронхиальной астмой // Internatinal J. onImmunorehabilitation. Физиология и патология иммунной системы. – 2003.- Т.5, №2. – С.222.323. Юшков В.В., Хавинсон В.Х. Выявление и анализ противовоспалительнойактивности иммуномодуляторов // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1993. - №2. - С.11-13.324. Яковлев Г.М., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Современные представленияо цитомединах и проблемы биорегулирующей терапии // Воен.-мед. журн.– 1987. - №6. – С.37-40.325. Яковлев Г.М., Хавинсон В.Х. Коррекция тимогеном стрессиндуцированныхдисфункций иммунной системы / Тез. докл. Всесоюз.конф. Ростов на Дону. - Л., 1989. - С.54.326. Яковлев Г.М., Новиков В.С., Хавинсон В.Х. Резистентность, стресс,регуляция. - Л.: Наука, 1990. - 237 с.327. Якушева Е.Н. Баланс электролитов и катехоламинов в тканикровеносных сосудов при экспериментальном токсическом гепатите и егофармакотерапии // Пат. физиол. и эксперим. терапия. – 1994. - №5. – С.27-29.328. Abbas A.K., Murphy K.M., Sher A. Functional diversity of helper T-lymphocytes // Nature. – 1996. – Vol.383. – P.787–793.329. Ademuyiva O., Adesanya O., Ainwon O.R. Vitamin C in CCl4 hepatotoxicity// Hum. and Exp. Toxicol. - 1994. - Vol.13, №2. - P.107-109.330. Ali M.V., Nolan J.P. Alcogol unduced depression of reticuloendothelialfunction in the rat // J. Lab. Clin. Med. - 1967. - Vol.70, №2. - P.295-300.331. Allen A. L., Koller L. D., Pollock I. A. Effecf of foxaphene exposure onimmune responses in mice // J. Toxicol and Environ. Health. - 1983. - Vol.11,№1. - P.61-69.
322332. Antonopoulos C., Cumberbatch M., Dearman R.J., Daniel R.J., Kimber I.,Grover R.W.Functional caspase-1 is required for langerhans cell migration andoptional contact sensitization // J. Immunol.. – 2001. – Vol.166, №1. – P. 3672-3677.333. Andrian U.H., Mackay C.R. T-Cell function and migration. Two sides of thesame coin // New Eng. J. Med. – 2000. – Vol.343, №5. – P.1020-1034.334. Audre F., Gillon., Lafout S., Yourdan G. Pesticide-containing diets augmentsin anti-sheep red blood cell non reaginic antibody responses in mice but viayprolong murine infection with Giardia muris // Environ. Res. - 1983. - Vol.32,№1. - P.145-150.335. Bagasra O., Pomerantz R. J. Human immunodeficiency virus type 1replication in peripheral blood mononuclear cells in the presence of cocaine. // J.Infect. Dis. – 1993. - Vol.168. – P.1157–1164.336. Bagiuski B. Einflub von Blei und Cadmium anf die Vitalitat undPhagozytosefahigkeit humaner polymorphkerniger Zenkoryten // Zbl. Bakteriol.- 1985. - Bd.181, №6. - Р.461-468.337. Barsoum G.S., Saad K. Relative toxicity if certain chlorine derivatives of thealiphatic series // Q. J. Pharm. Pharmacol. – 1934. – Vol.7, №2. – P.205-214.338. Basketter D.A., Dearman R.J., Warbrick E.V., Wright Z.M., Kimber I.Formulation effects on skin sensitizing potency assessed using the local lymphnode assay // The Toxicologist – Toxicol. Sci. – 2001. – 60 (Supp). – Vol. 172,№1. – P.11-14.339. Bautista A. P. Acute alcohol intoxication and endotoxemia desensitize HIV-1gp120-induced CC-chemokine production by Kupffer cells // Life Sci. -2001. -Vol. 68, № 4. - P.1939–1949.340. Becker E.L., Ward P.A. Partia 1. Biochemical characterization of the activatedesterase required in the complement-dependent chemotaxis of rabbitpolymorphonuclear leucocytes // J.Exp.Med. - 1967. - Vol.125, № 6. - P.1021-1030.
323341. Becker E.L., Unanue E.R. The requirement for esterase activation in the antiimmunoglobulin-triggeredmovement of B lymphocytes // J.Immunol. - 1976. -Vol.117, №1. - P.27-32.342. Bermudez L. E., Young L.S. Ethanol augments intracellular survival ofMycobacterium avium complex and impairs macrophage responses to cytokines// J. Infect. Dis. – 1991а. - Vol.163, №7. - P.1286–1292.343. Bermudez L. E., Wu M., Martinelli J., Young L. S. Ethanol affects release ofTNF and GM-CSF and membrane expression of TNF receptors by humanmacrophages // Lymphokine Cytokine Res. – 1991б. - Vol.10, №2. - P.413–419.344. Bhushan V., Cumberbatch M., Dearman R.J., Kimber I., Griffiths C.E.M.Human epidermal langerhans cell migration in response to interleukin-1 andregulation by topical lactoferrin // Brit. J. Dermat. – 2001. – Vol.145 (Supp 59),№1. – Р.96-103.345. Bishayee A., Chatterjee M. Carrot aqueous extract protectijn against hepaticoxidative stress and lipid peroxidation induced by acute carbon tetrachlorideintoxication in mice // Fitoterapia. - 1993. - Vol.64, №3. - P.261-265.346. Blanton R. H., Myers M. J., Bick P. H. Definition of the cellular fargets ofbenzo-(A)-pyrene immunotoxicity // Toxicologist. - 1986. - Vol.6, №1. -P. 166347. Bleavins M. R., Aulerich R. J. Immunotoxicolodic effects of polychlorinatedbiphenyls on the cell-mediuted and humoral immune systems // Residue Rev. -Vol.90, New York. - 1983. - P.57-67.348. Blum K., Trachtenberg M.C. Аlcogolism: Scientific bassis of aneuropsychogenic desease // Int. J. Addict. - 1988. - Vol.23, №8. - P.781-796.349. Boman H.G. Peptid antibiotics and their role in innate immunity // Ann. Rev.Immunol. - 1995. - Vol.13. - P.61-92.350. Bonnet P., Francin J.M., Gradiski D. Determination dela concentration lethale50 des principaux hydrocarbures aliphatigues chlores chez le rat // Arch. Mal.Prof. Med. Trav. Secur. Soc. – 1980. – Vol.41, №1. – P.317-321.
324351. Brzezinski J. The effect of poisoning with phosporus organic insecticides onthe catecholamine level in rat plasma, brain and adrenals // Diss. pharm.etpharmacol. PAN. – 1972. - Vol.24, №2. - P.217-220.352. Carson E.J., Pruett S.B. Development and charactesization of a binge drinkingmodel in mice for evaluation of the immunological effects of ethanol //Alcoholism. - 1996. - Vol.20, №1. - P.132-138.353. Casale G.P., Cohen S.D., DiCapva. R.A. The effects of organophosphateinducedcholinergic stimulation on the antibody response to sheep erythrocytesin inbred mice // Toxicol. and Appl. Pharmacol. - 1983. - Vol.68, №2. - P.198-205.354. Casale G.P., Cohen S.D., DiCapva R.A. Parathion of humoral immunity ininbred mice // Toxicol. Lett. - 1984. -Vol.23, №2. - P.239-247.355. Chen G. J., Huang D. S., Watzl B., Watson R. R. Ethanolmodulation of tumornecrosis factor and gamma interferon production by murine splenocytes andmacrophages // Life Sci. – 1993. - Vol.52, №3. - P.1319–1326.356. Chou S.Y., Richardson K.E. The effect of pyrasole jn ethylen glycol toxicyand metabolism in the rat // Toxicol. and Appl. Pharmacol. - 1978. - Vol.43,№1. - P.33-44.357. Clаman H. N. Corticosteroids and lymphoid cells // New Engl. J. Med. - 1972.- Vol.287. - №8. - P.388-397.358. Claman H.N. Corticosteroids as immunomodulators // Immunomodulationdrugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. – 1983. - Vol.685. – P.288-292.359. Coffey R.G., Hadden J.W. Neurotransmittere, hormones and cyclicnucleotides in lymphosyte regulatojn // Fed. Proc. - 1985. - Vol.44., №1. -P.112-117.360. Daniel F., Robinson M., Olson G. Ten and ninety-day toxicity studies of 1,2-dichloroethane in Sprague-Daw leg rats // Drag and Chem. Toxicol. – 1994. –Vol.17, № 4. – P.463-477.
325361. Delves P.J., Roitt I.M. The immune system (Part 1) // N. Engl. J. Med. -2000. – Vol.343, №2. – P.37-49.362. Denning D. W., Webster A., David B. Detrimental effect of propylene glycolon natural killer cell and neutrophil function // J. Pharm. and Pharmacol. - 1987.- Vol.39, №3. – P.236-238.363. Descotes J. Immunotoxicology of drugs and chemicals. – Amsterdam-N. Y-.Oxford: Elsiver, 1986. - 400 p.364. Descotes J., Mazue G. Immunotoxicology / Adv. Vet. Sci. and Comp. Med.Vol.31. - Orlando e. a., 1987. - P.95-119.365. Desi I., Palotas M., Vetro G. Biological monitoring and health surveillance ofa group of greenhouse pesticide sprayers // Toxicol.Lett. - 1986. - Vol.33,№153. - P.91-105.366. Devens B.H., Grayson H.M, Imammura T., Rodgers K.E. O,O,S-trimethylphosphorothionate effects on immunocompetense // Pestic. Biochem. andPhisiol. - 1985. - Vol.24, №2. - P.251-259.367. Dhabhar F. S., Miller A. H., Mc Even B. S., Spenser R. L. Stress –induced inblood leukocyte distribution: A role of adrenal steroid hormones // J. Immunol. -1996. – Vol.157. - №4. - P.1638-1644.368. Dorndorf W. Dichloroethane poisoning with myoclinic syndrome, epilepticattacks and irreversible cerebral effects // Arch. Psychiatr. Nervenkr. – 1975. –Vol.220, №3. – P.373-379.369. D'Souza N.B., Nelson S., Summez W.R., Deaciuc I.V. Alcohol modulatesalveolar macrophage tumor necrosis factor-d, superoxide anion in the rat //Alcoholism. - 1996. - Vol.20, №1. - P.156-163.370. Dulis B.H., Gordon M.A., Wilson J.B. Identification of muscarinic bindingsites in human neutrophilis by direct binding // Molec. Pharmacol. - 1979. -Vol.15, №1. –P.28-34.
326371. Durant S. In vivo effects of catecholamines and glucocorticoids on mousethymic cAMP content and thymolysis // Cell Immunol. - 1986. - Vol.102, №1. -P.136-143.372. Dwivedi P. D., Mishra A., Gupta G. S. D. Inhalation toxicity studies of methylisocyanate (MIC) in rats. Part IV. Immunolodic response of rats one week afterexposure: effect on boby and organ weights, phagocytic and DTH response //Indian J. Exp. Biol. - 1988. - Vol.26, №3. - P.191-194.373. Ellman G.M., Countney K.D., Anders V. A new and rapid colorimetricdetermination of acetylcholinesterase activity // Biochem. Pharm. - 1961. -Vol.7, №1. – P.88.374. Ellmeier W., Sawada S., Littman D.R. The regulation of CD4 and CD8coreceptor gene expression during T cell development // Ann. Rev. Immunol. –1999. – Vol.17, №3. - P.523-554.375. Elsbach P., Weise J. Oxygendependent and oxygenindependent mechanismeof microbiological activity of neutrophilis // Immunol.- Leet. - 1985. - Vol.11. -№3-4. - P.159-163.376. Ewald S.J., Shao H. Ethanol increases apoptotic cell death ofthymocytes invitro. Alcohol Clin. Exp. Res. - 1993. - Vol.17, №3. - P.359–365.377. Fergula J., Ashercon G. L., Becker E. L. The effect of organophosphorusinhibitors, p-nitrophenol and cytocholasin-B on cytotoxic killing of tumor cellsand the effect of shaking // Immunol. - 1972. - Vol.23. - №4. - P.577-590.378. Ferry F., Donner M. In vitro modulation of murine natural killer cytotoxicityby zinc //Scand. J. Immunol. - 1984. - Vol.19, №5. - P.435-445.379. Ficek W. Changes in biological processes in lymphatic cells and tissues afterloading with by glycocorticoids //Bioche. Arch.- 1997. - Vol.13. - №1. - P.1 – 6.380. Fink P.J., Bevan M.J. Positive selection of thymocytes // Adv. Immunol. –1995. - Vol.59 - №5. - P.99 – 133.381. Fleisher T.A., Oliveira J.B. Functional and molecular evaluation oflymphocytes // J. Allergy Clin. Immunol. – 2004. – Vol.114, №4. – P.227-234.
327382. Foureman G.L., Reed D.J. Evidense for a non-episulfonium ion intermediateduring alkylation by S-(2-chloroethyl) cysteine but not by S-(2-chloroethyl)glutatione // Fed. Proc. Fed. Am. Exp. Biol. – 1985. – Vol.44, №4. – P.517.383. Friedman H., Newton C., Klein T.W. Microbial Infections,Immunomodulation, and drugs of abuse // Clin. Microb. Rev. - 2003. - Vol.16. -№2. - P.209-219.384. Gabon P.A. Organic acids in ethylen glicol intoxication// Annals of InternalMedicine. - 1986. - Vol.105, № 1. - P.16-20.385. Galante P., Ardreana A., Perna P. Decreased phagocytic and bactericidalactivity of the hepatic reticuloendothelial system during chronic ethanoltreatment and its restoration by levamisole // J. Reticuloendoth. Soc. - 1982. -Vol.32, №2. - P.179-186.386. Garoroy M.R., Strom T.B., Kaliner M., Carpenter C.B. Antibody-dependentlymphocyte mediated cytotoxicity mechanism and modulation by cyclicnucleotides // Cell. Immunol. - 1975. - Vol.20, №2. - P.197-204.387. Gennari M., Bouthillier Y., Ibanes O. M. Effect of silica on the geneticregulation of antibody responsiveness //Ann. Inst. Pasteur. Immunol.-1987. -Vol.138, № 3. - P.359-370.388. Georgiev V.St., Albright J.E. Cytokines // Immunomodulation drugs / Ann. ofthe N.-Y. Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. – P.284-602.389. Georgiev V.St., Yamaguchi H. Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y.Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. – 816 p.390. Gilbert R.V., Hoffmann M.K. cAMF is essential signal in the induction ofantibody production by B cells but inhibits helper function of T cells // J.Immunol. - 1985. - Vol.135, №3. - P.2084-2089.391. Gordon M.A., Cohen J.J., Wilson I.B. Muscarinic cholintrgic receptors inmurine lymphosytes: demonstration by direct binding lymphocytes // Proc. Natl.Acad. Sci. USA. - 1975. - Vol.76, №6. - P.2902-2904.
328392. Gradiski D., Bonnet P., Raoult G. Toxicite auge comparee par ingalation desprincipaux sol vants aliphatiqes chlores // Arch. Mal. Prof. Med. Trav. Seccur.Soc. – 1978. - Vol.39. - №2. - P.249-251.393. Grandmont M.J., Racine C., Roy A., Lemieux R. Intravenousimmunoglobulins induce the in vitro differentiation of human B lymphocytesand the secretion of IgG // Blood. – 2003. – Vol.101. – P.3065-3073.394. Halaskova M., Jirova D., Sperlirgova I. Immunotoxic effects of carboniumtetrachloride-morphological and functional changes in mice: [Pap.] 34th Congr.Czechosl. Anatom. Soc., olomouc, Sept. 9-12, 1992 // Funct. and Dev. Morphol.- 1993. - Vol.3, №1. - P.37.395. Hallengren B., Forsgren A. Effect of alcohol on chemotaxis adherence andphagocytosis of human polymorphonuclear leukocytes // Acta. Med. Scaud. -1978. - Vol.204, №1. - P.43-48.396. Hausmann S., Wucherpfennig K.W. Activation of autoreactive T cells bypeptides from human pathogens // Curr. Opin. Immunol. - 1997. - Vol.9, №4. -P.831-838.397. Hayakawa K. Positive selection of natural autoreactive B cells // Science. -1999. - Vol.285, №3. - P.113-116.398. Hermanowicz A., Kossman S. Neutrophil function and infectious disease inworkers occupationally expased to phosphoorganic pesticides: role ofmononuclear-derived chemotactic factor for neutrophils // Clin. Immunol. andImmunopathol. - 1984. - Vol.33, №1. - P.13-22.399. Hewett J. A., Roth R. A. Dieldrin activates rat neutrophils in vitro // Toxicol.and Appl. Pharmacol. - 1988. - Vol.96, №2. - P.269-278.400. Heyman B. Feedback regulation by IgG antibodies // Immunol. Lett. – 2003. –Vol.88. – P.157-161.401. Hideaki K., Sham I. K., Yukio. Экспериментальное изучение длительноговлияния полихлорированных дибензфуранов на состояние органов
329дыхания и иммунной систем // Fukuoka acta med. - 1987. - Vol.78, №5. -P.219-222.402. Holte H., Torjeson F., Blomhoff H. Cyclic AMF has the ability to influencemultiple events guring B cess stimulation // Eur. J. Immunol. –1988. - Vol.18,№9. - P.1359-1366.403. Hong R. Immunobiology of the Macrophage //Reticuloendothelial. Syst.: Acompreheasive treatics. - New York. - London, 1984. - Vol.6. - P.1-11.404. House R.V., Lauer L.D., Murray M.J. Immunological studies in BGC3F micefollowing expsure toethylene glycol monoethyl ether and its principalmetabolite methoxyacetic acid // Toxicol. Appl. Pharmacoi. - 1985. - Vol.77, №3. - P.358-367.405. Inskeep P.B., Guengerich F.P. Glutation mediated binging of dibromoalkanesto DNA: specificity of rat glutathione s-transferases and dibromoalkanestructure // Carinogesis. – 1984. – Vol.5, №4. – P.805-808.406. Iokobsen D. Glikolat cauzed the acidosis in the ethylen glicol poisoning //Acta Med. Skand. - 1984. - Vol.216, №3. - P.409-416.407. Jackson I. C., Bloch E. F., Jackson R. T., Chandler J. P., Kim I. L. Cyanide //J. Nat. Med. Assoc. - 1986. - Vol.77. - №10. - P.777-782.408. Janik G., Kopp W.C. Levamisol-induced neopterin synthesis //Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. –P.252-258.409. Jaremin B. The level of some serum proteins and lymphocyte count in personsexposed to the action of lead during work // Bull. Jnst. Marit. and Trop. Med.Cdynia. - 1983. - Vol.34, №3-4. - P.181-188.410. Jerne N. K., Nordin A. A. Plaque formation in agar by single antibodyproducing cells // Sсeince. - 1963. - Vol.140. - №4. - P.405.411. Jerrells T. R., Sibley D. Effects of ethanol on cellular immunity to facultativeintracellular bacteria //Alcohol Clin. Exp. Res.– 1995. - Vol.19. - №2. - P.11-16.
330412. Jeurissen A., Bossuyt X. T cell-dependent and -independent responses // J.Immunol. – 2004. – Vol.172, №5. – P.2728-2729.413. Johnson K. W., Munson A. E., Holsapple M. P. The B lymphocyte as a targetfor dimethylnitrosamine-induced immunosuppression // Toxicologist. - 1986. -Vol.6, №1. - P.16.414. Jordan M., Holt G., Wigzell H. Surface markers on human T and Blymphocytes.I. A large population of lymphocytes forming nonimun // J. Exp.Med. - 1972. - Vol.136, №2. - P.207-215.415. Kaminski N.E., Stevens W.D. The role of metabolism in carbontetrachloridemediated immunosuppression. In vitro studies // Toxicology. -1992. - Vol.75, №2. - P.175-188.416. Kaplan D.R. A novel mechanism of immunosuppression mediated by ethanol// Cell. Immunol. - 1986. - Vol.102, №1. - P.1-9.417. Kaplowitz N. Drug-Induced Liver Injury // Clin. Infect. Dis.- 2004. - Vol. 38(Suppl 2). – P.44–48.418. Khaitov R.M. Vaccines based on synthetic polyions and peptiles //Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. –P.788-802.419. Kimball E.S. Experimental modulatio of IL-1 production and cell surfacemolecule expression by levamisol // Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. – P.259-268.420. Kimber I., Moore M. Mechanism and regulation of natural cytotoxiciti.Minireview on cancer research // Exp. Cell Biol. - 1985. - Vol.53, №2. - P.69-84.421. Kimber I. Chemical – Induced Hypersensitivity // In.: Exper. Immun.- BocaRaton, New York, London, Tokyo. - 1996. - P.391-417.422. Kimber I., Bhushan M., Griffiths C.E.M., Dearman R.J., Cumberbatch M.Regulation by lactoferrin of interleukin-1β-induced Langerhans cell migration
331in humans // Scandinavian Joumal of Immunol. – 2001. – Vol.54 (Supp 1), №4.- P.27-35.423. Kini M.M., Cooper J.R. Biochemistry of methanol poisoning // Biochem. J. -1962. - Vol.82, №1. - P.164-168.424. Koller L. D. Immunotoxicology and risk assessment of drinking watercontaminants // Trace Subst.Environ. Health. 21. Proc. Univ. Mo. 21 st. Annu.Conf., st. Louis, Mo, May 25-28, 1987.-Columbia, Mo. - 1987. - P.247-252.425. Kolls J. K., Xie J., Lei D., Greenberg S., Summer W. R., Nelson S.Differential effects of in vivo ethanol on LPS-induced TNF and nitric oxideproduction in the lung // Am. J. Physiol. - 1995. - Vol.268, №5. - P.991-998.426. Kondo M., Kato H., Yoshikowa T., Sugino S. Immunomodulators and thecomplement system // Meth. and Find. Exp. and Clin. Pharmacol. - 1986. - Vol.,№2. - P.67-72.427. Kossman S., Konieczny B., Panek E. Immunoelektroforogram oraz sterenieimmunoglobulin G, A, M, W surowicy krwi procownikov zatrunionych przyprodukcji pestycydow fosforoorganicznych // Med. pr. - 1985. - Vol.36, №1. -P.27-30.428. Kracker S., Radbruch A. Immunoglobulin class switching: in vitro inductionand analysis // Methods Mol. Biol. – 2004. – Vol. 271, N 4.- P. 149-159.429. Кullenkampff J., Janossy G., Greanes M.F. Acid esterase in human lymphoidcells and leukaemic blasts: a marker for T-lymphocytes // Brit. J. Haemat. -1977. - Vol.36, №2. - P.231-240.430. Kutty K. M., Chandra R. K., Chandra S. Acethylcholinesterase in erytrocytesand lymphocytes: its contribution to cell membrane structure and function//Experientia. - 1976. - Vol.32. - №3. - P.289.431. Lee T.P., Moscati R., Park B.H. Effects of pesticides on human leukocytefunctions // Res. Comm. Chem. Pathol. Pharmacol. - 1979. - Vol.23, №1. -P.597-601.
332432. Li C. G., Lam R. W., Gam L. T. Esterases in human leucocytes // J.Histochem. Cytochem. - 1983. - Vol.21. - №1. - P.1-12.433. Loose L.D. Immunotoxicology-1985 //Year Immunol. - 1985-1986. - Vol.2. -Basel e.a., 1986. - P.365-370.434. Luster M. J., Blank J. A., Dean J. H. Molecular and cellular basis ofchemically induced immunotoxicity // Annu. Rev. Pharmacol. and Toxicol. -Vol.27. - Palo Alto, Calif. - 1987. - P.23-49.435. MacManus J.P., Bounton A.L.,Whitefield J.F. Aceytlcholine-induced initiationof thymic lymphoblast DNA synthesis and proliferation // J. Cell. Physiol. -1975. - Vol.85, №2. - P.321-330.436. Маdden K. S., Livnat S. Catecholamine action and immunologic reactivity //In: Psychoneuroimmunology, Second Edition.- academic Press, Inc. - 1991. –Р.283-310.437. Maekawa Y., Yasutomo K. Antigen-driven T-cell repertoire selection // Crit.Rev. Immunol. – 2005. – Vol.25, №5. – P.59-74.438. Marshak-Rothstein A., Fink P., Gridley T. et al. Properties and application ofmonoclonal antibodies directed against determinants of the Thy-1 locus //J.Immunol. - 1979. - Vol.122. - P.2491-2497.439. Maslinski W., Laskowska –Bozek H., Ruzewski H. Nicotinic receptors of ratlymphocytes during adjuvant polyarsthritis // J. Neurosci. Res. - 1992. - Vol.31,№2. - P.336-340.440. McColister D.D., Hollingsworth R.L., Oyen F., Rowe V.K. Comparativeinhalation toxicity of fumingant mixtures. Individual and joint effects ofethylene dichloride, carbon tetrachloride, and ethylene dibromide // Arch. Ind.Health. – 1956. – Vol.13, №1. – P.1-7.441. Mc Even Bruce S., Biron C. A., Brunson K. W., Bulloch K., Chambers W. H.,Dhabhar F. S., Goldfarb R. N., Kitson R. P., Miller A. H., Spenser R. L., WessJ. M. The role of adrenocorticoids as modulators of immune function in health
333and disease: neural, endocrine and immune interactions // Brain. Res. Rev.-1997 .- Vol.23. - №1-2. - P.179-133.442. McGrath J., Wong S. Immunutoxicology of inhalants and methods ofevaluation / Inhal. Toxicol.: Res. Meth., Appl., and Eval.-New-York, Basel,1987. -P.255-291.443. McMartin К.E., Amre J.J., Tephly T.R. Methanol poisoning in humansubjects. Role of formic acid accumulation in metabolic acidosis // Amer.J.Med.-1980. - Vol.68, №3. - P.414-416.444. Meadows G. G., Blank S. E., Duncan D. D. // Influence of ethanolconsumption on natural killer cell activity in mice.- 1989. - Vol.13, №4. - P.476-479.445. Mikhailova A.A., Fonina L.A. Myelopeptides – immunoregulatopy cytokinesproduces by the bone marrow cells // Eur. Jed. Immunol. Soc.10 th Meet.,Edinburg, 10-12 Sept., 1990: Abstr.- Edinburg, 1990. - P.125.446. Miller K. Immunotoxicology //Clin. and Exp. Immunol. - 1985. - Vol 61, №2.- P.219-223.447. Minich E., Fefer A. Biologocal, response modifiers: subcombite report // Nat.Cancer Inst. Monograf. – 1983. - Vol.63. – P.1-252.448. Mokhlesi B., Leiken J. B., Murray P., Corbridge T.C. Adult toxicology incritical care. Part I: General approach to the intoxicated patient // CHEST.-2003а. - Vol.123, №2. - P.577–592.449. Mokhlesi B., Leiken J. B., Murray P., Corbridge T.C. Adult toxicology incritical care. Part I: Specific poisonings // CHEST. - 2003б. - Vol.123, №3. -P.897–922.450. Moor P., Osinski P., Deckx R. Steeno O. The specificity of fluorometriccorticoid determination // Clin. Chim. acta. - 1962. -Vol.7, №4. - P.475-480.451. Moor P., Steeno O. Raskin M., Hendrikx A. Elnorometric determination offree plasma 11-hydrooxy corticosteroids in man // Acta endocrinol. - 1976. -Vol.33, №2. - P.297-307.
334452. Morland B., Morland I. Effects of longterm ethanol consumption on ratperitoneal macrophages //Acta. Pharmacol. Toxicol. - 1982. - Vol.50, №4. -P.221-227.453. Moszczynsky P., Lisiewicz J. Occupational exposure to benzene, toluene andxylene and the T-lymphocyte functions // Haematologia. - 1984. - Vol.17, №4. -P.449-453.454. Munson A.E., Sanders V.M., Douglas K.A. In vivo assessment ofimmunotoxicity // Environ. Health Perspect. - 1982. - Vol.43, №1. - P.41-52.455. Nelson S.G., Bagby G., Summer W. R. Alcohol suppresseslipopolysaccharideinduced tumor necrosis factor activity in serum and lung //Life Sci. - 1989. - Vol.44, №2. - P.673-676.456. Newcombe D.S. Immune surveillance, organophosphorus exposure, andlymphomagenesis // Lancet. - 1991. - №8792. - P.539-541.457. Nogueira N. Intracellular mechanisms of killing /Immunobiol. Parasit. andParasitic. Infec.-New York-London, 1984. - P.53-69.458. Nouragargh S., Holt J.R.S. Ingibition of human neutrophil degranulation byforskolin in the presence phosfodiesters ingibitors// Eur. J. Pharmacol. - 1986. -Vol.222, №2. - P.205-212.459. Oschshorn-Adelson M., Bodner G., Toraker P. Effects of ethanol on humannatural killer cell activity: In vitro and acute, low-dose in vivo studies //Alcoholism. - 1994. - Vol.18, №6. - P.1361-1367.460. Park B. H. The use and limitations of the nitroblue tetrasolium test as adiagnostic aid // L. Pediatr. - 1971. - Vol.72. - №2. - P.375-378.461. Parker D.C. T cell dependent B cell activation // Annu. Rev. Immunol.- 1993.- Vol.11, №2. - P.331-360.462. Parry M.F., Wallach M.D. Ethylen glycol poisoning // Amer. J. Med.- 1974. -Vol.57, №1. - P.143-150.
335463. Pfeifer C., Murrey J., Madri J., Bottomly K. Selective activation of Th1- andTh2-like cells in vivo: Response to human collagen IV // Immunol. Rev. – 1991.- Vol.123, №2. - P.65-84.464. Rannug U. Genotoxic effects of 1,2-dibromoethane and 1,2-dichloroethane //Mutat. Res. – 1980. – Vol.76, №2. – P.269-295.465. Rey A., Besedovsky H., Sorkin E. Endogenous blood levels of corticosteronecontrol the immunologie cell mass and B cell activity in mice // J. Immunol. -1984. - Vol.133. - №2. - P.572-575.466. Richman D.P., Arnason B.G.W. Nicotinic acetylcholine receptor: evidence fora functionally distinct receptor on human lymphocytes // Proc. Natl. Acad. Sci.USA. - 1979. - Vol.76, №9. - P.4632-4635.467. Rinner I, Felsner P., Falus A. Cholinergic signals to and from the immunesystem//Immunology Letters. - 1995. - Vol.44. - P.217-220.468. Rodgers K.E., Imamura T., Devens D.H. Investigatons into the mechanism ofimmunosuppression caused by acute treatment with O,O,Strimethylphosphorothioate:generation of suppressive macrophages from treatedanimals // Toxicol. and Appl. Pharmacol. - 1987. - Vol.88, №2. - P.270-281.469. Rodica G., Srefania M. Effects of some insecticides on the bursa of Fabriciusin chicken //Arch. Exp. Vetetinarmed. - 1973. - Vol.27, №4. - P.723-728.470. Roselle G.A., Mendenhall C.L. Alteration of the in vitro human lymphocytefunction by ethanol, acetaldehyde and acetate // G. Clin. Lab. Immunol. - 1982.- Vol.9, №3. - P.33-39.471. Saad A. J., Domiati-Saad R., Jerrells T.R. Ethanol ingestion increasessusceptibility of mice to Listeria monocytogenes // Alcohol Clin. Exp. Res. –1993. - Vol.17, №1. - P.75-85.472. Sauders V. M., White K. L., Shopp G. M. Munson A.E. Humoral and cellmediatedimmune status of mice exposed to 1,1,2-trionloaethane // Drug andChem. Toxicol. - 1985. - Vol.8, №5. - P.357-372.
336473. Saxena A. K., Adler W.H. Ethanol and natural killer cell activity / NK cellsand other natural effector cells.-New-York: Academic Press, 1982. - P.651-659.474. Saxena A. K., Singh K. P., Nagle S. L. Effect of exposure to toxic gas on thepopulation of Bhopal. Part IV. Immunological and choromosomal studies //Indian J. Exp. Biol. - 1988. - Vol.26, №3. - P.173-176.475. Schasteen C.S., Reed D.J. The hydrolysis and alkylation activities of S-(2-haloethyl)-L-cysteine analogues-evidence for extended half-life // Toxicol.Appl. Pharmacol. – 1983. - Vol.70, №4. – P.423-432.476. Sejersted O.M. Methanol poisoning // Lancet. - 1981. - Vol.2. - №7891. -P.1426-1431.477. Sepulveda R.T., Jiang S., Besselsen D.G., Watson R.R. Alcohol consumptionduring murine acquired immunodeficiency syndrome accentuates heartpathology due to Coxsackievirus // Alcohol. - 2002. - Vol.37, №2. - P.157-163.478. Shahbazian L. M., Darban H. R., Darban J. R., Stazzone A. M., Watson R. R.Influence of the level of dietary ethanol in mice with murine AIDS on resistanceto Streptococcus pneumoniae // Alcohol. - 1992. - Vol.27. - №3. - P.345-352.479. Shonborn H., Prellwitz W., Baum P. Consumption coagulation pathology of1,2-dichloroethane poisoning // Klin. Wochenschr. – 1970. – Vol.48, №3. –P.822-824.480. Sibley D., Jerrells R. Alcohol consumption by C57BL/6 mice is associatedwith depletion of lymphoid cells from the gut-associated lymphoid tissues andaltered resistance to oral infections with Salmonella typhimurium // J. Infect.Dis. – 2000. – Vol.182, №6. – P.482–489.481. Sinha A.A., Guados C., Loo Kwok-Choy, Diener E. Function of accesser cellsin B cell responses to thymus-independant antigenes // J. Immunol.-1987.-Vol.138, №12. - P.4143-4149.482. Smialowicz R. J., Rogers R. R., Riddle M. M. Stott G., A. Immunologiceffects of nickel. I. Suppression of cellular and humoral immunity // Environ.Res. - 1984. - Vol.33, №2. - P.413-427.
337483. Smialowicz R.J., Riddle M.M, Luebke R.W. Immunotoxicity of 2-methoxyethanol following oral administration in Fischer 334 rats // Toxicol. andAppl. Pharmacol. - 1991. - Vol.109, №3. - P.494-506.484. Smialowicz R. J., Luebke R.W., Riddle M. M. Assesment of the immunotoxicpotencial of the fungicid dinocap in mice // Toxicoliogy. - 1992. - Vol.75, №5. -P.235-247.485. Solberg C. O. Phagocytic cell in host defence // Acta oto-laryngel. - 1984. -Vol.98. - №407. - P.5-13.486. Sosa M., Sana A. Immunopharmacologic properties of inosine 5’- metthilmonophosphate (MIMP) // Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad.Sci. – 1993. - Vol.685. – P.458-463.487. Spagnuolo P.J., McGregor R.R. Acute ethanol effect on chemotaxis and othercomponents of host defenses // J. Lab. Clin. Med. - 1975. - Vol.86, №2. -P.24-28.488. Spencer H.C., Rowe V.K., Adams E.M. Vapor toxicity of ethylene dichloridedetermined by experiments on laboratory animals // Arch. Ind. Hyg. occup.Med. – 1951. – Vol.4, №3. – P.482-493.489. Stasey N.H. Inhibition of natural killer cell function by ethanol // Austral. andN.Z.J. Med. - 1985. - Vol.15, №1, Suppl. №1. - P.148.490. Stevens G. Immunomodulation drugs: where and whither //Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. – 1993. - Vol.685. –P.430-431.491. Street J.C., Sharma R.P. Alteration of induced cellular and humoral immuneresponses by pesticides and chemicals of environ-mental concern: quantitativestudies of immunosuppression by DDT, aroclor 1254, cirbarul // Toxicol. Appl.Pharmacol. - 1975. - Vol.32, №3. - P.587-602.492. Sullivan J. B. Immunological alterations and chemical exposure // J. Toxicol-Clin. Toxicol. - 1989. - Vol.27, №6. - P.311-343.
338493. Sundheimer D.W., White R.D., Brendel K. The bioactivation of 1,2-diсhloroethane in rat hepatocytes: covalent binding to nucleic acids //Carcinogenesis. – 1984. – Vol.5, №4. – P.805-808.494. Szabo S., Selye H. Adrenal apoplexy and necrosis produced by acrylonitrile//Endocrinol. - 1971. - №57. - P.405-408.495. Szabo S., Selye H. Effect of phenobarbital and steroid on the adrenal apoplexyproduced by acrylonitrile in rats //Endocrinol. - 1972. - №6. - P.141-146.496. Szabo S., Huttner I., Kovacs K., Horvath E., Szabo D., Horner H. C.Pathogenesis of experimental adrenal hemorrhagic necrosis (“appoplexy”).Ultrastructural, biochemical, neuropharmacologic and blood coagulation studieswith acrylonitrile in the rats // Lab. Invest. - 1980. - №42. - P.533-545.497. Szabo G., Verma B. K., Fogarasi M., Catalano D. Induction of transforminggrowth factor-beta and prostaglandin E2 production by ethanol in humanmonocytes // J. Leukoc. Biol. - 1992. - Vol.52, №3. - P.602–610.498. Szabo G., Verma B. K., Catalano D. Selective inhibition of antigenspecific Tlymphocyte proliferation by acute ethanol exposure: the role of impairedmonocyte antigen presentation capacity and mediator production // J. Leukoc.Biol. - 1993. - Vol.54, №4. - P.534–544.499. Szabo G., Mandrekar P., Dolganiuc A., Catalano D., Kodys K. Reducedalloreactive T-cell activation after alcohol intake is due to impaired monocyteaccessory cell function and correlates with elevated IL-10, IL-13, and decreasedIFN levels // Alcohol. Clin. Exp. Res. – 2001. - Vol.25, №3. - P.1766–1772.500. Szelenyi J.G., Bartha E., Hollan S.R. Acetilcholinestrase activity oflymphosytes: an enzyme characteristic of T-cells // Brit. J. Haematol. - 1982. -Vol.50, №2. - P.241-245.501. Szot R.J., Murphy S.D. Phenobarbital and doxamethasone inhibition of theadrenocortical response of rats to toxic chemicals and other stresses // Toxicol.Applied Pharmacol. - 1970. - Vol.17, №3. - P.761-773.
339502. Techima H., Sogawa H., Navagava T. Chenges in T-cell subpopulationsinduced by autonomic neurotrasmitters and hormone// Fufuoka acta med. -1991. - Vol.82, №7. - P.428-436.503. Tephly T.R. The biochemical toxicology of metanol // Toxicol. Lett. - 1983. -Vol.18, №7. - P.34-36.504. Thomas P. T., Ratajczak H. V., Aranvic C. Evaluation of host resistance andimmunefunction in cadmium exposed mice // Toxicol. and Appl. Pharmacol. -1985. - Vol.80, №3. - P.446-456.505. Thomas I.K., Imamura T. Immunosuppressive effect of an impurity ofmalathion: inhibition of murine side effect of an impurity of malathioninhibition of murine T and B lymphocyte responses by O,O,S-trimethylphosphorothioate // Toxicol. and Appl. Pharmacol. - 1986. - Vol.83, №3. -P.456-464.506. Tiefenbach B., Lange P. Studies on the action of dimethoate on the immunesystem // Arch. Toxicol. - 1980. - Suppl. 4. - P.167-170.507. Tiefenbach B., Hennighauzen G., Lange P. Zum Mechanismus der akutenWirkungen phosphororganiscer Pestizide auf Las Immunosystem // Zbl. Pharm.- 1983. - Bd.122, H.2. - S.156.508. Tiefenbach B ., Wichner S. Dosisabhangigkeit und Mechanismus der acutenWirkung von Methamidophos auf das Immunsystem der Maus // Z. gesamteHyg. und Grenzdeb. - 1985. - Bd.31, №4. - S.228-231.509. Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity ofnormal mouse bone marrow cells //Rad. Research. - 1961. -Vol.14, №2. -P. 213-222.510. Trichloroethylen // Environ. Health Criteria. Geneva Word HealthOrganization. - 1985. - №50. – 133 p.511. Trinchievi G., de Marchi M. Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity inhumans III. Effect of protease inhibitors and substrates // J. Immunol. - 1976. -Vol.116, №4. - P.885-891.
340512. Van Loveren. H., Kraine E. I., Kraine-Franken M. A. M., Vos J.G.Immunotoxicity assessment in the rat: a tiered approach // Pharmacol. andToxicol. Suppl. - 1990. - Vol.66, №5. - P.18.513. Vos J.G., Klerk A., Krajnc E.I. Immunotoxity of TBTO. II. Suppression oflymphocyte transformation, activity of macrophages and natural killer cells //Pharm. Weekbl. Sci. Ed. - 1984. - Vol.6, №4. - P.183.514. Wagner F., Fink R., Hart R., Lersch C., Dancygier H., Classen M. Ethanolinhibits interferon-gamma secretion by human peripheral lymphocytes // J. Stud.Alcohol. – 1992. - Vol.53, №2. - P.277–280.515. Waltenbaugh C., Peterson J. D. Ethanol impairs the induction of delayedhypersensitivity in C57BL/6 mice // -1997. - Alcohol. - Vol.14, №4. - P.149–153.516. Waltenbaugh C., Vasquez K., Peterson J. D. Alcohol consumption altersantigen-specific Th1 responses: mechanisms of deficit and repair - 1998. -Alcohol. - Vol. 14, №4. - P.149–153.517. Wang Y., Huang D.S., Giger P.T., Watson R.R.. Ethanolinduced modulationof cytokine production by splenocytes during murine retrovirus infectioncausing murine AIDS // Alcohol Clin. Exp. Res. – 1993. - Vol. 17, №2. –P.1035–1039.518. Wang Y., Huang D.S., Giger P.T., Watson R.R. Influence of chronic dietaryethanol on cytokine production by murine splenocytes and thymocytes //Alcohol Clin. Exp. Res. – 1994а. - Vol.18, №2. - P.64–70.519. Wang Y., Watson R.R. Chronic ethanol consumption before retrovirusinfection is a cofactor in the development of immune dysfunction during murineAIDS // Alcohol Clin. Exp. Res. – 1994б. - Vol.18, №3. - P.976–981.520. Watson R.R. Eskelson C., Hartman B.R. Severe alcogol abuse and cellularimmune functions // Ariz. Med. - 1984. - Vol 41, №10. - P.665-668.521. Weetman A. P., Gunn C., Hall R., McGregor A. Immynosuppression byperchlorate // Lancet. - 1984. - №8382. - P.906.
341522. Welch L.S., Cullen M.R. Effect of exposure to ethylene glycol ethers onshipyard painters.III. Hematologic effects // Amer. J. Ind. Med. - 1988. - Vol.14,№5. - P.527-536.523. Wiltrout R. W., Ercegovich C. D., Ceglowski W. S. Humoral immunity inmice following oral administration of selected pesticides // Bull. Enviroum.Contam. Toxicol. - 1978. - Vol.20, №3. - P.423-431.524. Woodin A.M., Wieneke A.A. The action of phosphonates on the leukocyte inrelation to the mode of action of leucocidin. The properties of the potassiumpump and the inhibition of chemotaxis // Brit. J. Exp. Path. - 1969. - Vol.50,№3. - P.295.-308.525. Woodin A.M., Harris A. The inhibition of locomotion of thepolymorphonuclear leukocyte by organophosporus compounds // Exp. cellResearch. - 1973. - Vol.77, №1-2. - P.41-46.526. Yllner S. Menabolism of 1,2 –Dichloroethane poisoning // Acta. Pharmacol.Toxicol. – 1977а. - Vol.26. - №3. - P.281-284.527. Yllner S. Metabolism of 1,2-dichloroethane – 41 C in the mouse // Acta.Pharmacol. Toxicol. – 1977б. – Vol.30, №3. – P.257-265.528. Yodaiken R.E., Babcock J.R. 1,2-dichloroethane poisoning // Arch. environ.Health. – 1973. – Vol.26, №3. – P.281-284.529. Yoshiyuki M., Kunihiko M., Shigeki I. Antibodiforming function of mice byintroperitoneal injection of beryllium chloride // J. Sci. Labour. - 1984. -Vol.60, №11. - P.507-513.530. Zhang P., Bagby G. J., Boe D. M., Zhong Q., Schwarzenberger P., K.Kolls J., Summer W. R., Nelson S. Acute alcohol intoxication suppresses theCXC chemokine response during endotoxemia // Alcohol. Clin. Exp. Res.-2002. - Vol.26, №6. - P.65-73.
Change language