pivovarství a kvasné technologie 2007 - Vysoká škola chemicko ...

4. seminář – Pivovarství a kvasné technologie 2007, 29.-30.3.2007, ÚKCHB, VŠCHT Praha___________________________________________________________________________Sledování vlivu kultivačních podmínek na fyziologický stav genetickyupravené kvasinky Pichia pastorisBaňarová Michaela, Paulová LeonaÚstav kvasné chemie a bioinženýrství, VŠCHT PrahaPředmětem práce bylo sledování vlivu kultivačních podmínek na fyziologickýstav methylotrofní kvasinky Pichia pastoris; při měření byly použity dvakmeny, a to kmen produkující trypsinogen a kmen produkující β-galaktosidázu.Fyziologický stav byl sledován pomocí moderních optických metod -fluorescenční mikroskopie a průtokové cytometrie a vybrané fyziologicképarametry byly detekovány pomocí značení selektivními fluorescenčnímisondami.V první sérii pokusů byl sledován vliv methanolu na viabilitu kmenů. Z měřeníbylo zjištěno, že ještě při koncentraci methanolu 150 g/l je u pozorovanýchkmenů zachována vysoká viabilita buněkV druhé části experimentální práce byl sledován fyziologický stav kvasinkyPichia pastoris produkující trypsinogen během přítokovaných a kontinuálníchkultivací v laboratorním bioreaktoru o různém složení média. Vzorky prosledování fyziologického stavu byly odebírány v produkční fázi kultivace.Výsledky ukázaly, že významný vliv na viabilitu buněčné populace má zejménazbytková koncentrace methanolu, koncentrace aktivní formy produktu a vysokábuněčná hustota.28