ANCA KIT/SUBSTRAT SLIDES Anvendes til in-vitro ... - Inova

ANCA KIT/SUBSTRAT SLIDES Danish 

Anvendes til in-vitro diagnostik 

Produkt koder: FK016, .1, FS016._, 

FK017, .1, FS017._, 

FK018 

Producent: 

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, United Kingdom. 

www.bindingsite.co.uk 

Telefon: 0044 (0) 121 436 1000 

Fax: 0044 (0) 430 7061 

e-mail: info@bindingsite.co.uk 

1 ANVENDELSE 

Produktet (kit eller substrat slides) anvendes til screening og titrering af cirkulerende 

antineutrofil cytoplasmatiske antistoffer (ANCA). Disse antistoffer er markører for 

diagnosticering og behandling af Wegener’s granulomatose og andre systemiske 

vaskulitis-former (Ref. 1). 

2 INDHOLD OG REDEGØRELSE 

Nekrotiserende vaskulitis-former, inklusive Wegener’s granulomatose, polyarteritis 

nodosa, Churg Strauss syndrom, idiopathisk crescentrisk glomerulonephritis og 

vaskulitis ‘overlap’ syndrom er en gruppe af relaterede sygdomme der varierer betydeligt 

i deres kliniske fremstillinger og konsekvent forårsager diagnosticeringsproblemer. 

Wegener’s granulomatose er en alvorlig karsygdom karakteriseret ved åndedrætssystemets 

nekrotiserende granuloma og fokal glomerulonephritis. Tidlig diagnosticering 

er vigtig, da hurtig immunsuppressionsterapi har en betydningsfuld effekt på 

nyrefunktion, men begyndende symptomer ved sygdomsudvikling og histologiske 

undersøgelsesresultater af biopsi, er ofte uspecifikke (Ref. 2). 

I 1982 beskriver Davies et al tilstedeværelsen af antineutrofile cytoplasmatiske 

antistoffer (ANCA) i serum fra patienter med nekrotiserende glomerulonephritis (Ref. 3). 

Dette efterfulgtes i 1985 med en publikation af van de Woude et al som fandt at 25 ud af 

27 patienter med aktiv Wegener’s granulomatose viste det klassiske cytoplasmatiske (c- 

ANCA) farvningsmønster i indirekte immunfluorescens (Ref. 1). Det klassiske c-ANCA 

mønster på ethanol-fikserede neutrofiler viser karakteristisk granulær cytoplasmatisk 

farvning med minimal farvning af de nukleare lapper. Det mest betydningsfulde c-ANCA 

målantigen er proteinase 3, en serinprotease. 

Et andet ANCA farvningsmønster (perinuklear, p-ANCA) beskrives i 1988 af Falk et al 

hos nyrepatienter med systemisk vasculitis (Ref. 4). Det mest betydningsfulde p-ANCA 

målantigen menes at være myeloperoxidase, selv om flere andre antigener (lactoferrin, 

elastase, cathepsin G) også til en mindre grad er forbundne. p-ANCA mønstret på 

ethanol-fikserede neutrofiler viser skarpt aftegnet perinuklear farvning. 

Mange prøver forelagt til ANCA testning vil også være positive for anti-dsDNA, antihiston 

og andre antinukleare (ANA) autoantistoffer der kan efterligne p-ANCA 

farvningsmønstret. Patientprøver der er positive for ANA kan også være positive for p- 

ANCA. Det er tydeligvis afgørende at skelne ægte c-ANCA og p-ANCA 

farvningsmønstre fra andre non-ANCA artefakter. Dette opnås ved at anvende en 

kombination af ethanol-fikserede og formalin-fikserede neutrofile slides. 

Ethanol binding af neutrofiler resulterer i positivt ladede cytoplasmatiske 

granulaproteiner vandrende til den negativt ladede nuclei DNA, resulterende i 

perinuklear (p-ANCA) farvning (Ref. 5). Hvis neutrofiler behandles med tværbundet 

fiksering såsom formalin, undgås vandringen og det cytoplasmatiske granulaprotein 

forbliver i cytoplasmaen, og ægte p-ANCA prøver vil vise et granulært cytoplasmatisk c- 

ANCA farvningsmønster på formalin-fikserede slides. ANA positive prøver, vil blive 

negative eller vise yderst reduceret farvningsintensitet når testet på formalin-fikserede 

neutrofiler. Granulocyt specifikke ANA (GS–ANA) prøver dannende en nuklear eller 

perinuklear reaktion på ethanol-fikserede neutrofiler, vil blive negative når testet på 

formalin-fikserede neutrofiler. 

Indirekte immunfluorescens på neutrofile slides er den valgte metode til screening for 

ANCA. Binding Site slides bruger rensede humane neutrofiler, der er præparerede og 

fikserede til opnåelse af optimale farvningsmønstre. Prøver der giver ANCA positive, 

ANA og atypiske farvningsmønstre bør udtitreres. 

3 PRINCIP 

Produktet anvender en indirekte immunfluorescens-teknik (Ref. 6). Patientprøver og 

passende kontroller inkuberes med det neutrofile substrat. De overflødige antistoffer 

vaskes af, derefter påføres et fluoresceinmærket konjugat. Ubundet konjugat vaskes af 

som tidligere. Slides undersøges med et fluorescensmikroskop og positive prøver ses 

som æblegrøn fluorescens der korresponderer med neutrofilområder hvor antistoffet har 

bundet. 

4 REAGENSER 

Insert Code: TCIN016.Dk, Version: 20 th November 2007, Page 1 of 3 

4.1 Ethanol- og formalin-fikserede neutrofil substrat slides (5 eller 10 brønde). 

Kun til kit: 

4.2 To eller flere positive kontrolsera indeholdende 0,099% natriumazid (f.eks. p- 

ANCA, c-ANCA, ANA). Fortyndet og klar til brug. 

4.3 Negative kontrolserum indeholdende 0,099% natriumazid. Fortyndet og klar til 

brug. 

4.4 Affinitetsoprenset fåre anti-human IgG (H+L) fluorescein konjugat med Evans Blue 

indeholdende 0,099% natriumazid. Fortyndet og klar til brug. 

4.5 1% Evans Blue, som tilvalgs komplementærfarvning. 

4.6 Phosphat buffered (PBS), et 20x koncentrat i flydende form. 

4.7 Absorberende papirblottere til aftørring omkring brøndende efter afvaskning. 

4.8 Monteringsmedie, indeholdende en antifading agent (DABCO, 1, 4, diazabicyclo 

[2.2.2] octan). 

4.9 Dækglas (22 x 70mm). 

5 ADVARSEL 

Produktet må kun anvendes af tilstrækkeligt uddannet personale. Det anbefales at følge 

de heri givne anbefalinger. 

Alle donorer der har leveret serum indeholdt i dette kit er serum testet og fundet negativ 

for Hepatitis B overflade antigen og antistoffer til Hepatitis C virus og human 

immunmangelvirus (HIV 1 & 2). Disse tester er dog ingen garanti for manglen på 

smitsomme stoffer. Korrekte håndterings- og bortskaffelsesmetoder bør etableres som 

ved alle potentielt smitsomme materialer. Produktet må kun anvendes af personer med 

egnet uddannelse. 

Nogle af kittets komponenter indeholder 0,099% natriumazid som konserveringsmiddel; 

passende forholdsregler bør observeres. Undgå indtagelse og kontakt med hud eller 

slimhinder. I tilfælde af kontakt vaskes huden med store mængder vand og læge 

opsøges. Der kan dannes eksplosive metalazider ved langvarig kontakt med sanitære 

indretninger af bly og kobber: ved bortskaffelse af reagenser skylles med store mængder 

vand for at undgå ophobning af azid. 

6 OPBEVARING OG STABILITET 

Uåbnede kit eller slides bør opbevares ved 2-8°C og kan anvendes indtil den angivne 

udløbsdato. MÅ IKKE UDSÆTTES FOR FROST. Når først slides er fjernet fra 

folieposen skal de bruges omgående. Fortyndet PBS kan opbevares i op til en måned 

ved 2-8°C. Kittets fluorescein konjugat må ikke udsættes for direkte sollys, fluorescens 

eller ultraviolet lys og skal opbevares ved 2-8°C. Alle andre reagenser opbevares ved 

2-8°C. 

7 PRØVEUDTAGELSE 

Blodprøver indhentes ved venepunktur. Lad blodcellerne koagulere og separer serumet 

så snart som muligt for at undgå hæmolyse. Serumet kan opbevares ved 2-8°C i op til 7 

dage forud for assays (Ref. 10). Ved opbevaring over længere tid alikvoteres serumet ud 

og opbevares ved -20°C eller derunder. Gentagen nedfrysning og optøning bør undgås. 

Undgå anvendelse af lipæmisk, hæmolyseret eller mikrobielt forurenet sera, da faldende 

titerværdi eller uklare farvningsmønstre kan forekomme. 

8 METODER 

8.1 Leverede materialer 

50T Kit FK016 og 50T Kit FK017 

1. 10 x Neutrophil Slide – 5-well (ethanol-fikseret, 5 brønd, kun FK016) 

2. 10 x Neutrophil Slide – 5-well (formalin-fikseret, 5 brønd, kun FK017) 

3. 1 x 1mL p-ANCA Positive Control for ANCA (p-ANCA positiv kontrol, fortyndet) 

4. 1 x 1mL c-ANCA Positive Control for ANCA (c-ANCA positiv kontrol, fortyndet, 

kun FK016) 

5. 1 x 1mL ANA Positive Control for ANCA (ANA positiv kontrol, fortyndet, kun 

FK017) 

6. 1 x 1mL Negative Control for ANCA (Negativ kontrol, fortyndet) 

7. 1 x 4,5mL anti Human IgG (H&L) AFF Fluorescein with Evans Blue (Affinitetsoprenset 

anti-human IgG (H&L) fluorescein med Evans Blue) 

8. 2 x 60mL PBS concentrate (x20) (PBS koncentrate, x20) 

9. 1 x 3mL 1% Evans Blue Counterstain (1% Evans Blue komplementærfarvning) 

10. 1 x 3mL Mounting Medium (Monteringsmedie) 

11. 20 x Blotters (Filtrerpapir) 

12. 10 x Coverslips (Dækglas, 22 x 70mm) 

13. 1 x Brugsanvisning 

250T Kit FK016.1 

1. 25 x Neutrophil Slide – 10-well (ethanol-fikseret, 10 brønd) 


3. 1 x 1mL c-ANCA Positive Control for ANCA (c-ANCA positiv kontrol, fortyndet) 









11. 1 x brugsanvisning 

250T Kit FK017.1 

1. 25 x Neutrophil Slide – 10-well (formalin-fikseret, 10 brønd) 



4. 1 x 1mL ANA Positive Control for ANCA (ANA positiv kontrol, fortyndet) 

5. 1 x 1mL Negative Control for ANCA (Negativ kontrol, fortyndet)









50T FK018 Kombi Kit 

1. 8 x Neutrophil Slide – 5-well (ethanol-fikseret, 5 brønd) 

2. 2 x Neutrophil Slide – 5-well (formalin-fikseret, 5 brønd) 



5. 1 x 1mL ANA Positive Control for ANCA (ANA positiv kontrol, fortyndet) 


7. 1 x 4,5mL anti Human IgG (H&L) AFF Fluorescein with Evans Blue 

(Affinitetsoprenset anti-human IgG (H&L) fluorescein med Evans Blue) 







Substrat slides 

1. FS016.1 10 x Neutrophil Slide – 5-well (ethanol-fikseret, 5 brønd) 

FS016.2 25 x Neutrophil Slide – 10-well (ethanol-fikseret, 10 brønd) 

FS017.1 10 x Neutrophil Slide – 5-well (formalin -fikseret, 5 brønd) 

FS017.2 25 x Neutrophil Slide – 10-well (formalin -fikseret, 10 brønd) 


8.2 Andre nødvendige materialer 

8.2.1 Destilleret vand til fortynding af PBS koncentrat. 

8.2.2 Beholder til PBS buffer. 

8.2.3 Mikropipetter og engangspipettespidser til påføring af patientprøver. 

8.2.4 Fugtkammer til inkubation (Magnetisk farvningskammer, kode BD010). 

8.2.5 Fluorescensmikroskop med 495nm exitationsfilter og 515nm emmissionsfilter. 

8.2.6 Sprøjteflaske til forvask i PBS. 

8.2.7 Ved brug kun af substratslides, kan de følgende materialer fås hos (Binding Site 

angiv koder hvor anvendeligt): positiv kontrol; f.eks. c-ANCA (FA136), p-ANCA 

(FA130), negativ kontrol (CON92), anti-human IgG (H&L) FITC konjugat (AF003) 

eller anti-human IgGAM FITC (AF002), PBS (CON 3.3), Evans Blue (CON93, 

optional), Neutrofil monteringsmedie (CON 46.1/.2/.3), blottere, dækglas. 

8.3 Testprocedure 

Kvalitetskontrol 

Positiv og negativkontroller bør anvendes hver gang et prøvebatch er testet. 

8.3.1 Fortynding af PBS koncentrat: Fortynd PBS koncentratet med destilleret vand (1 

del PBS koncentrat + 19 dele destilleret vand) og bland det. PBS anvendes til 

fortynding af patientprøver og som vaskebuffer. NB: Tilbered kun hele kittets PBS 

mængde hvis hele kittet skal anvendes inden for en måned. 

8.3.2 Fortynding af patientprøver. 

Screening: Fortynd patientprøver 1/20 ved tilsætning af 10µL serum til 190µL 

PBS buffer. 

Titrering: Forbered serieortyndinger af positivscreenede prøver med PBS (1/40, 

1/80, 1/160, 1/320 og 1/640 osv.). For eksempel: Tag 100µL af 1/20 fortyndingen, 

bland med 100µL PBS til en 1/40 fortynding. Gentag denne procedure ved 

yderligere fortyndinger. 

8.3.3 Substrat slides: Lad slides opnå sturetemepratur (18-28°C) i ca. 30 minutter 

inden de fjernes fra posen. Mærk slide på passende måde, placer i fugtekammer 

og tilsæt en dråbe af hvert kits positive og negative kontrol til passende brønd. 

Tilsæt 25µL fortyndet patient prøve til øvrige brønde. 

8.3.4 Slide inkubering. Inkuber slides i 30 minutter i et fugtkammer ved stue-temperatur 

(18-28°C). 

8.3.5 PBS vask: Slides tages ud af fugtkammeret og renses kortvarigt med PBS 

sprøjteflasken. Sprøjt ikke direkte på brøndende. Placer slides i et stativ og 

neddyp i PBS omrør i 10 minutter. 

8.3.6 Tilsætning af fluorescerende konjugat: Afryst overskydende PBS og tryk af med 

det medfølgende filtrerpapir omkring brøndende. Slides sættes tilbage i 

fugtkammeret og hver brønd tildækkes omgående med en lille dråbe 

fluorescerende konjugat. LAD IKKE BRØNDENDE STÅ UTILDÆKKET I MERE 

END 15 SEKUNDER. Udtørring af substratet har en alvorlig indvirken på 

resultaterne. 

8.3.7 Slide inkubation: Inkuber slides i 30 minutter i fugtkammer ved stuetemperatur 

(18-28°C) i mørke. 

8.3.8 PBS vask: Vask igen som beskrevet i trin 5. Komplementærfarvning: Tilsæt 2-3 

dråber af 1% Evans Blue per 100mL af PBS før nedsænkning af slide. 

8.3.9 Montering med dækglas: Fjern et slide af gangen fra PBS vask. Tør hurtigt 

omkring brøndende ved hjælp af det absorberende papir og tilsæt en dråbe 

monteringsmedie til hver brønd. Nedsænk forsigtigt slidene i dækglasset uden at 

danne luftbobler. Prøv ikke at fjerne evt. dannede luftbobler. 

8.3.10 Analyser slides under fluorescensmikroskop: Færdige slides skal opbevares ved 

2-8°C og skal vurderes hurtigst mulig. 

9 RESULTATER 

9.1 Kvalitetskontrol 

c-ANCA positiv kontrol bør give generelt granuløs farvning af cytoplasmaet og p-ANCA 

positiv kontrol bør give et overvejende perinuklear mønster på ethanol-fikserede 

Insert Code: TCIN016.Dk, Version: 20 th November 2007, Page 2 of 3 

neutrofiler. På formalin-fikserede neutrofiler viser c-ANCA og p-ANCA prøver granuløs 

cytoplasmatisk farvning. ANA positiv kontrol bør give homogen nuklear positivitet på 

ethanol-fikserede neutrofiler, men ingen ANA positivitet bør ses på formalin-fikserede 

neutrofiler. Den negative kontrol bør ikke vise nogen mærkbar fluorescens. Hvis 

kontrollerne ikke fremstår som beskrevet er testen ubrugelig og skal gentages. 

9.2 Fortolkning af resultater 

9.2.1 Negativ 

En prøve anses for negativ hvis specifik neutrofil farvning er lig med eller mindre end 

den negative kontrolbrønd. 

9.2.2 Positiv 

En prøve anses for positiv hvis cytoplasmatisk eller perinuklear farvning observeres. 

N.B: Hvert laboratorium bør fastsætte hvornår et positivt resultat anses som værende 

klinisk signifikant. 

9.3 Fortolkning af mønstre 

c-ANCA (cytoplasmatisk farvning) 

c-ANCA Positive prøver vil vise generaliserede granuløs farvning af cytoplasmaet på 

både ethanol- og formalin-fikserede slides. 

p-ANCA mønster (perinuklear mønster) 

p-ANCA positive prøver vil vise et overvejende perinuklear mønster på ethanol-fikserede 

slides. De samme prøver vil vise generaliseret granuløs farvning af cytoplasma på 

formalin-fikserede slides, som ikke kan skelnes fra det mønster der er opnået med c- 

ANCA positive prøver. 

ANA mønster 

ANA positiv prøver kan vise et perinuklear eller homogent mønster på ethanol-fikserede 

slides, der kan være sammenlignelige med det mønster der opnåedes med p-ANCA 

positive prøver. På formalin-fikserede slides er de fleste nukleare antigener blevet 

ødelagt, hvorfor ANA positive prøver vil vise negative eller yderst reduceret fluorescens 

sammenlignet med den p-ANCA positive kontrol. 

10 BEGRÆNSNINGER 

10.1 Varme inaktiverede eller ufuldstændigt defibrinerede prøver kan forårsage stærk 

baggrundsfarvning og besværliggøre fortolkningen. Friske prøver bør indhentes 

og testen gentages. Problematiske prøver kan fortyndes med 2% albumin eller 

bovinserum i PBS, for at reducere baggrundsfarvningen. 

10.2 Forskellige fluorescensmikroskopers lyskilder, filtre og optik vil have indflydelse på 

kittets følsomhed. Mikroskopets effektivitet er betydeligt påvirket af korrekt 

vedligeholdelse især centrering af kviksølvlampe og udskiftning af lampen efter 

den anbefalede tid. 

10.3 Positive IFA resultater skal bekræftes ved myeloperoxidase (MPO) og proteinase 

3 (PR3) enzym immunoassays (EIA) (ref. 11 og 12). Formalin-fikserede ANCA 

præperater kan også bidrage til bestemmelse af autoantibody specificitet, specielt 

for moderat- til høj titer prøver. 

10.4 ANCA-positive prøver er ikke altid testet positive for myeloperoxidase (MPO) eller 

serine proteinase 3 (PR3) ved brug af EIA, ligesom andre primære 

granulaantigener kan være skyld i klassiske p- eller c-ANCA positive 

farvningsmønstre. Disse inkluderer elastase, lactoferrin, cathepsin G, kationisk 

protein 57 og andre endnu uidentificerede neutrofil antigener. 

10.5 Glatte musklers antistoffer (actin) kan reagere med ethanol-fikserede human 

neutrofiler såvel som alloantistoffer såsom mart eller NB1 (Ref. 7). Actin eller 

glatmuskel antistoffer reagerer med neutrofil cytoplasma givende et homogent 

fremfor det typiske groftplettede c-ANCA farvningsmønster. Alloantistoffer 

reagerer også med de neutrofile cytoplasma givende et fintplettet 

farvningsmønster. Typisk vil kun 40% af cellerne fluorescere. 

10.6 Prøver kan indeholde mere end et antistof, f.eks. c-ANCA og p-ANCA eller 

c-ANCA og ANA. 

10.7 Neutrofilreaktive antistoffer kan også findes i serum fra patienter med 

inflammatoriske tarmsygdomme eller ulcerøs tyktarmsbetændelse (Ref. 8). Disse 

prøver optræder som p-ANCA mønster med meget fremhævet perinuklear 

farvning på ethanol-fikserede neutrofil slides. På formalin-fikserede neutrofil slides 

optræder disse prøver negative eller viser yderst reduceret fluorescens. 

10.8 Disse tests alene bør ikke anses som diagnosticering. Alle andre faktorer som 

patientens kliniske historie og andre serologi- eller biopsiprøver skal også tages i 

betragtning. 

FDA (USA) Information – se forsiden på den Engelske produktinformation. 

11 FORVENTEDE VÆRDIER OG KARAKTERISTIKA 

11.1 Forventede resultater 

% Positiv 

Patientgrupp Nr p-ANCA c-ANCA 

Raske personer 30 0 0 

Crohn’s sygdom 80 25 0 

Ulcerøs tyktarmsbetændelse 46 46 0 

Primær scleroserende galdegangsbetændelse 

med inflammatoriske tarmsygdomme 

17 58 0 

Primær biliær cirrhose 25 28 0 

Autoimmun hepatitis 15 33 0 

Wegener’s granulomatose 30 0 100 

Polyarteritis nodosum * 5 0 100 

Alle ovenstående informationer er udledt af Seibold et al (Ref. 9), undtagen det med * 

markerede, der indhentedes fra in-house studier hos The Binding Site Ltd. 

11.2 Præcision 

Sera fra 10 patienter (3 p-ANCA-positive, 3 c-ANCA-positive, 2 ANA-positive og 2 

negative) testedes ni gange (tredobbelt på tre forskellige kit lots). Farvningsmønstret for 

hver prøve adskilte sig ikke med mere end en farvningsenhed (baseret på en skala fra 

1+ (svag farvning) til 3+ (kraftig farvning)).

11.3 Sammenligningsstudier 

100 kliniske serumprøver og sera fra 40 normale voksne personer (20 mænd, 20 

kvinder) blev testet på The Binding Site’s ANCA Kombi Kit og et konkurrerende kit. 

Resultaterne var som følger: 

Konkurrent 

The Binding Site 

c-ANCA p-ANCA ANA Neg. p-/c-ANCA 

c-ANCA 60 3 0 0 0 

p-ANCA 3 27 0 0 0 

p-/c-ANCA 0 0 0 0 1 

ANA 0 0 6 0 0 

Neg. 0 0 0 40 0 

134 ud af 140 testede prøver gav identiske resultater ved de to metoder. For c-ANCA 

mønstret var den relative følsomhed 95%, den relative specificitet var 96%, og den 

relative overensstemmelse var 96%. For p-ANCA mønstret var den relative følsomhed 

90%; den relative specificitet var 97% og den relative overensstemmelse var 96%. For 

de seks prøver der gav forskellige mønstre påviste alle meget stærk eller meget svag 

farvning på et eller begge kit, hvilket kan besværliggøre fortolkningen. 

12 REFERENCER 

1. Van der Woude F.J. et al (1985) Autoantibodies against neutrophils and 

monocytes: Tool for diagnosis and marker of disease activity in Wegener’s 

granulomatosis. Lancet I, 425-9. 

2. Goeken J.A., (1991) Antineutrophil cytoplasmic antibody – a useful 

serological marker for vasculitis, J. Clin. Immunol. 11, 161-174. 

3. Davies D.J. et al (1982) Segmental necrotizing glomerulonephritis with 

antineutrophil antibody: possible arbovirus aetiology? Br. Med. J. 285, 606. 

4. Falk R.J. and Jenette J.C. (1988) Antineutrophil cytoplasmic auto antibodies 

with specificity for myeloperoxidase in patients with systemic vasculitis and 

idiopathic neutotizing and crescentic glomerlonephritis N. Engl. J. Med. 318, 

1651-7. 

5. Charles L.A., Falk R.J. and Jenette J.C. (1989) Reactivity of antineutrophil 

cytoplasmic autoantibodies with HL-60 cells. Clin. Immunol. Immunpathol. 

53, 243-253. 

6. Weller T.H. and Coons A.H. (1954) Fluorescent antibody studies with agent 

of Varicella and Herpes Zoster propagated in vitro: Proc. Soc. Exp. Biol. 

Med 86, 789-794. 

7. Stroncek D.F. et al (1993) Neutrophil alloantibodies react with cytoplasmic 

antigens: a possible cause of false – positive indirect immunofluorescence 

assays for antibodies to neutrophil cytoplasmic antigens. Am. J. Kidney Dis. 

21, 368-373. 

8. Hardarson S. et al (1992) Antineutrophil cytoplasmic antibody in 

inflammatory bowel and hepatobiliary diseases. Clinical Microbiology and 

Immunology 99, No. 3. 

9. Seibold, F. et al (1992) Clinical significance of antibodies against neutrophils 

in patients with inflammatory bowel disease and primary sclerosing 

cholangitis. Gut 33, 657-662. 

10. Protein Reference Handbook of Autoimmunity (3 rd Edition) 2004. Ed. A 

Milford Ward, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield. 14. 

11. Savige J, Gillis D, Benson E, Davies D, Esnault V, Falk RJ, Hagen EC, 

Jayne D, Jennette JC, Paspaliaris B, Pollock W, Pusey C, Savage CO, 

Silvestrini R, van der Woude F, Wieslander J, Wiik A. International 

Consensus Statement on Testing and Reporting of Antineutrophil 

Cytoplasmic Antibodies (ANCA) Am J Clin Pathol. 1999 Apr;111(4):507-13. 

Review. 

12. Savige J, Dimech W, Fritzler M, Goeken J, Hagen EC, Jennette JC, McEvoy 

R, Pusey C, Pollock W, Trevisin M, Wiik A, Wong R; International Group for 

Consensus Statement on Testing and Reporting of Antineutrophil 

Cytoplasmic Antibodies (ANCA). Addendum to the International Consensus 

Statement on testing and reporting of antineutrophil cytoplasmic antibodies. 

Quality control guidelines, comments, and recommendations for testing in 

other autoimmune diseases. Am J Clin Pathol. 2003 Sep;120(3):312-8. 

Review. 

13 RESUME AF PROCEDURE 

1. Fortynd PBS med destilleret vand. 

2. Fortynd patientsera 1/20 med PBS. 

3. Slides tages ud af køleskabet og opvarmes til stuetemperatur (18-28°C). 

4. Fjern slide fra folieposen og placer den i fugtkammer. Tilsæt 25µL kontroller 

og patientsera. 

5. Inkuber i 30 minutter ved stuetemperatur (18-28°C). 

6. Rens slides med PBS. 

7. Vask slides i 10 minutter i et stativ. 

8. Absorber med medølgende blotter omkring brønde, anbring slide i 

fugtkammer og tilsæt omgående en dråbe fluorescerende konjugat. 

9. Inkuber slides i 30 minutter. 

10. Vask igen som beskrevet i trin 13.7. 

11. Tør omkring brønde, tilsæt monteringsmedie til hver brønd og monter 

dækglas. 

12. Analyser slides under et fluorescens mikroskop. 

Insert Code: TCIN016.Dk, Version: 20 th November 2007, Page 3 of 3

ANCA KIT/SUBSTRAT SLIDES Anvendes til in-vitro ... - Inova

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?