Kalibriergerade des Markers

3. Messung der PAL – Enzymaktivität
3.1 Bestimmung der Proteinkonzentration
Die im Photometer ermittelten Extinktionen sind in Tabelle ……….. aufgelistet. Hierbei
entspricht eine Extinktion von 0,22 einer Proteinmenge von 1mg.
Tab.4 : Bestimmung der Proteinmenge
Senfpflanze Extinktion Menge an Protein [mg]
Unbelichtet 0,878 3,991
belichtet 1,280 5,818
In 2g der unbelichteten, etiolierten Senfpflanze waren 3,991mg an Proteinen enthalten.
Dieselbe Menge der belichteten Pflanze wies hingegen 5,818mg an Proteinen auf.
3.2 Photometrische Detektion von Zimtsäure und Bestimmung der PAL-Aktivität
Die im Photometer ermittelten Extinktionen sind in Tabelle ………..erfasst.
Tab. 5: Detektion der Zimtsäure
Zeitpunkt der Messung Extinktion E1 der
unbelichteten Senfpflanze
14
Extinktion E2 der belichteten
Senfpflanze
t0 1,892 2,226
t5 2,015 2,178
t10 2,226 2,226
Aus den obigen Werten lässt sich nun die Enzymaktivität der PAL im belichteten und im
unbelichteten Keimling berechnen. Die Formel für die Berechnung lautet:
A
E =
Zimtsäure[
nmol]
t[min]
* m [ mg]
Pr otein
Für den unbelichteten Keimling ergibt sich nun folgende Enzymaktivität:
- dE = Et10 – Et0 = 2,226 – 1,892 = 0,334
Nach Lambert-Beer ergibt sich also folgende Konzentration der Zimtsäure:
c = ∆E / ε*d = 0,334/(10 7 cm 2 /mol * 1cm) = 33,4 nmol/ml
Da die Probe im Verhältnis 1:6 verdünnt war ergibt sich letztendlich eine Konzentration von
200 nmol/ml.
Die resultierende Enzymaktivität beträgt:
AE = 200nmol/ml / 10 min* 3,991mg = 5 nmol/ (min*mg*ml)