TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

DISKUSSION
es nur wenige Verunreinigungen durch andere Zellen oder Infektionen gab. Es
wurden zwei verschiedene Auszucht-Rattenstämme (Wistar und CD ® -IGS, Charles
River, Sulzfeld) verwendet, um einen geeigneten Stamm für die Bearbeitung der
Fragestellung finden zu können. Tatsächlich zeigten die so gewonnenen Zellen eine
unterschiedlich gute Anheftung an Oberflächen der Zellkulturmaterialien sowie
unterschiedlich schnelles Wachstum. Weitere Unterschiede, die z.B. die Effekte
durch Erkrankungen oder Substanzen betreffen, wurden in Tieren bzw. Zellen dieser
beiden Rattenstämme beobachtet (KACEW & FESTING 1996). Es wurde außerdem
beschrieben, dass die Expression des mdr1b-Gens, welches zusammen mit mdr1a
das Pgp in Nagern codiert (SCHINKEL et al. 1995), in Wistar- und Sprague-Dawley-
Ratten (entsprechen den hier verwendeten CD ® -IGS-Ratten von Charles River,
Sulzfeld) unterschiedlich ausgeprägt ist (HILL et al. 1996), was sich auf
Untersuchungen des Pgp-vermittelten Transports auswirken kann.
Ausgehend von einer besseren Anheftung und einem schnelleren Wachstum
schienen die Zellen der CD-Ratten im Vergleich mit Zellen aus Wistar-Ratten besser
geeignet zu sein, um Untersuchungen mit einem geringeren Zeitaufwand und
bezüglich der Ausbeute der Präparationen in einem größeren Umfang durchführen
zu können.
Mit diesen Primärkulturen wurden sowohl Kumulations- als auch
Transportuntersuchungen durchgeführt.
6.2.1 Die Modulation der Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen
Mit dem Kumulations-Assay, der Aufschluss über einen Transporterinduzierten
Efflux einer Substanz gibt, konnte in den primären Hirnendothelzellen
funktionelles Pgp in Zellen beider Rattenstämme nachgewiesen werden. Die
Expression dieses MDTs wurde im Western Blot bestätigt (Abbildung 5.22). Die
Funktion Pgps wurde durch den Pgp-Induktor Puromycin induziert. Tariquidar (0,5
µM) sowie auch die Antiepileptika Carbamazepin und Phenytoin inhibierten in den
Konzentrationen von 100 µM den Efflux (Abbildung 5.24). Eine Induktion durch
Dexamethason konnte nicht nachgewiesen werden, sehr wohl aber für Puromycin.
Diese Daten stehen in Kontrast zu denen der immortalisierten hCMEC/D3-Zellen,
denn in diesen Zellen führte die Behandlung mit Antiepileptika vorrangig zu einer
Induktion des Efflux von Rhodamin 123 (Abbildung 5.8 & 5.9). Allerdings zeigte
Phenytoin in hCMEC/D3-Zellen in den niedrigeren Konzentrationen (10, 30 und 50
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