TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

5.1.4.7 Einfluss der Umgebung der Zellen: Kokultur mit Astrozyten ....................................... 100
5.1.4.8 Überprüfung des Transports durch Pgp ......................................................................... 103
5.1.4.9 Integrität der Zellen anhand des TEERs und der Mannitol-Permeabilität ................. 106
5.1.4.10 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in hCMEC/D3-Zellen ................. 111
5.2 Primärkulturen des Hirnendothels der Ratte (rBCEC) .................................................... 114
5.2.1 Pgp-Expression in rBCEC-Zellen: Western Blot ....................................................................... 114
5.2.2 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Kumulations-Assays ..................................................... 115
5.2.3 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Transport-Assays .......................................................... 119
5.2.3.1 Auswahl des Substrats ..................................................................................................... 119
5.2.3.2 Einfluss des Membranformats und –formats ................................................................. 122
5.2.3.3 Die Kokultivierung der rBCEC-Zellen mit Astrozyten ................................................... 124
5.2.3.4 Geeignete Pgp-Inhibitoren zur Überprüfung des Transports ...................................... 127
5.2.3.5 Integrität primärer Zellen anhand des TEERs und der Mannitol-Permeabilität ........ 130
5.2.2.6 Zusammenfassung des Transports in primären Hirnendothelien der Ratte ............. 134
6 DISKUSSION ................................................................................................................. 137
6.1 Die humane immortalisierte Hirnkapillarendothelzelllinie hCMEC/D3 ......................... 139
6.1.1 Pgp-Expression in hCMEC/D3-Zellen ........................................................................................ 139
6.1.2 Die Modulation der Pgp-Funktionalität ...................................................................................... 139
6.1.2.1 Optimierung der Versuchsbedingungen ......................................................................... 140
6.1.2.2 Bekannte Pgp-Induktoren ................................................................................................. 141
6.1.2.3 Antiepileptika ...................................................................................................................... 144
6.1.2.4 Hydrocortison ..................................................................................................................... 148
6.1.2.5 Zusammenfassung der modulatorischen Effekte auf Pgp ........................................... 149
6.1.3 hCMEC/D3-Zellen als In-vitro-Bluthirnschranken-Modell ........................................................ 150
6.1.3.1 Einflüsse auf den Nachweis von Pgp-spezifischen Transport .................................... 151
6.1.3.2 Die Kokultur mit Astrozyten .............................................................................................. 157
6.1.3.3 Überprüfung eines asymmetrischen Transports ........................................................... 158
6.1.3.4 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in hCMEC/D3-Zellen ................. 159
6.2 Primäre Hirnkapillarendothelien der Ratte (rBCEC) ........................................................ 161
6.2.1 Die Modulation der Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen ......................................................... 162
6.2.2 Transportuntersuchungen in rBCEC-Zellen .............................................................................. 165
6.2.2.1 Versuchsbedingungen ...................................................................................................... 165
6.2.2.2 Die Kokultur mit Astrozyten .............................................................................................. 166
6.2.2.3 Primärkulturen des Hirnkapillarendothels anderer Spezies ........................................ 168
6.2.2.4 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in rBCEC-Zellen ......................... 169
6.3 Schlussbetrachtung .............................................................................................................. 171
ZUSAMMENFASSUNG ............................................................................................................ 173
III