TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ANHANG
8.2 Gewinnung primärer Rattenhirnkapillarendothelien
Medien und Puffer
Phosphat-gepufferte Saline (PBS) pH 7,3
137 mM NaCl
2,7 mM KCl in A. dest. lösen
4,3 mM Na 2 HPO 4 pH-Wert einstellen
1,47 mM KH 2 PO 4
Für die Verwendung in der Zellkultur wurde der Puffer autoklaviert, ansonsten unsteril verwendet.
PBS (pH 7,3) + 1 % (v/v) Penicillin/Streptomycin
Lagerung bei 4 °C
Enzymlösung
Dispase II in DMEM/F-12 lösen (20 mg/ml)
DNAse I in A. dest. lösen (10 mg/ml)
19 ml DMEM/F-12
1 ml Dispase II Lösung alle Lösungen
10 µl DNAse I Lösung mischen und
200 µl Penicillin/Streptomycin (10.000 E/10.000 µg/ml) sterilfiltrieren
Collagenase II (270 U/ml)
20 % (w/v) BSA-Lösung
4 g in 20 ml DMEM/F-12 auf einem Magnetrührer lösen und sterilfiltrieren
cAMP-Ro 20-1724-Lösung
cAMP – Stammlösung: 100 mg/8 ml oder 10 mg/0,8 ml A. bidest.
Ro 20-1724 – Stammlösung: 19,5 mg/2 ml DMSO
Herstellen einer 20:1 Mischung
Medium A (Grundmedium)
EBM-2 Medium
20 % (v/v) Serum
1 % (v/v) Penicillin/Streptomycin (10.000 E/10.000 µg/ml)
1 mM HEPES
1 % (v/v) L-Glutamin (Stocklösung: 200 mM)
500 ng/ml Hydrocortison
Medium B
Medium C
Siehe Grundmedium
Siehe Grundmedium
+ 2 ng/ml bFGF + 1 ng/ml bFGF
Collagen IV-Lösung
Collagen IV in A. bidest. lösen (1 mg/ml)
1:10 Verdünnung der Stocklösung
pro cm 2 Wachstumsfläche 50 µl; 1 h bei 37 °C inkubieren, Collagen-Lösung abnehmen und
Zellkulturgefäße unter der Sterilbank trocknen lassen
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