Diss_Hoehne_Christian.pdf (10777 KB) - OPUS Würzburg

2. Material und Methoden
Minuten Bilder aufgenommen. Nach diesen Vorbeobachtungen und der Selektion
geeigneter Blutgefäße begann nun der Versuchsteil, in dem der M. cremaster mit
verschiedenen Testsubstanzen superfundiert wurde. Die entsprechenden Substanzen,
Konzentrationen und die jeweiligen Superfusionszeiten werden im Ergebnisteil näher
beschrieben.
2.3.6 Software zur Bestimmung des Gefäßdurchmessers
Im Rahmen der vorliegenden Dissertation wurde ein Programm in Java TM entwickelt.
Mit ihm ist es möglich, das während der Versuche gesammelte Bildmaterial auszuwerten,
wobei sowohl einzelne Bilder als auch Filmsequenzen analysiert werden
können.
Zunächst wurde anhand des vorliegenden Bildmaterials von jedem Versuch das
auszuwertende Blutgefäß bestimmt. Die Kriterien zur Auswahl des Blutgefäßes
sind die in Kapitel 2.3.5 beschriebenen. Bei dem Ausgangsbild zum Zeitpunkt
t = 0 wurde die Gefäßwand markiert (Abb. 2.4 A). Durch diese Markierung
wurde automatisch der Winkel berechnet, um den das Bild gedreht werden
musste, um es waagerecht darzustellen. Diese Bildrotation geschah mit dem
Ausgangsbild und allen weiteren folgenden Bildern, die im Abstand von fünf
Minuten aufgenommen wurden. Damit war eine gleichmäßige Grundausrichtung
des Blutgefäßes, dessen Durchmesser bestimmt werden sollte, gewährleistet. Nun
wurde das Blutgefäß so zugeschnitten (Abb. 2.4 B), dass ausschließlich der vom
Mikroskop scharf abgebildete Bereich ausgewertet wurde und somit angrenzende
Bereiche ausgeblendet wurden. Um diesen Gefäßausschnitt auch bei den anderen
Aufnahmen sicher aufzufinden, wurde ein Bezugspunkt gewählt. Durch diesen
Bezugspunkt konnten mögliche Bewegungen des Gefäßes ausgeglichen werden. Dies
war nötig, da es im Laufe des Versuchs zu Veränderungen der Positionierung
des Objektivs bzw. der Maus kommen konnte. Der Grund dafür war, dass die
Versuchsanordnung nicht vollkommen starr war. Anhand aufeinander folgender
Aufnahmen wurde durch diesen Punkt immer der gleiche Ausschnitt des Blutgefäßes
ausgewählt. Nach dem Zuschnitt des Bildmaterials (Abb. 2.4 C) konnte durch eine
selektive Kantenerkennung automatisiert die Gefäßwand bestimmt und das Bild
in ein Binärdatei umgewandelt werden (Abb. 2.4 D). Diese Bilddatei wurde nun
spaltenweise analysiert und der Mittelwert der so erhaltenen Werte bestimmt. Dieser
Wert repräsentierte den mittleren Gefäßdurchmesser in Bildpunkten (Pixel), der
nun in das Auflösungsvermögen des Mikroskops umgerechnet werden musste und
0.3215 µm/Pixel betrug.
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