Dissertation F.Grotelüschen - Universität zu Lübeck

3.1.2.2 UV-Bestrahlung
Nach Bestimmung der individuellen minimalen Erythemdosis (MED) mittels einer
vorherigen UV-Exposition („Lichttreppe“) wurden die Nävi jeweils zur Hälfte mit
schwarzem Klebeband abgedeckt und anschließend einmalig mit der vierfachen MED mit
UV-Licht bestrahlt.
Dazu verwendeten wir eine Hochdruck-Quecksilberlampe („bluepoint“ Dr. Hönle,
Deutschland) mit einer Wellenlänge von 295-400 nm und einer Intensität von 3,5 mJ/cm 2
im UVB- und 24 mJ/cm 2 im UVA-Bereich. Die Exzision der Nävi erfolgte zwei (n=3)
bzw. sieben (n=5) Tage nach der Bestrahlung. Unmittelbar vor der Exzision wurde die
Grenze zwischen der bestrahlten und der nicht bestrahlten Hälfte, die an einem scharf
begrenzten Erythem erkennbar war, mit einem sehr oberflächlichen Skalpellschnitt
markiert. Nach der Exzision wurde das Gewebe in Formalin fixiert und in Paraffin
eingebettet.
3.1.3 Gewebeaufarbeitung
Von dem Gewebematerial wurden mit einem Rotationsmikrotom (Reichert-Jung, Berlin,
Deutschland) Schnitte von ca. 5 µm Dicke angefertigt. Diese wurden über ein Wasserbad
auf Poly-Lysin-beschichtete Objektträger (Super Frost Plus, Menzel, Braunschweig,
Deutschland) aufgebracht und bei 37 °C 24 h getrocknet. Vor dem Färbevorgang wurden
die Schnitte 15 min. in Paraclearlösung (Quartett, Berlin, Deutschland) entparaffiniert und
anschließend in Alkohollösungen absteigender Konzentration rehydriert.
3.2 Immunhistologie
3.2.1 Reagenzien und Antikörper
Verwendete Reagenzien:
a) Tris-Puffer (pH 7,6) :
- 60,55 g Trishydroxymethylaminomethan (Merck, Darmstadt, Deutschland) und 85,20 g
Natriumchlorid (Merck, Darmstadt, Deutschland) in 400 ml Aqua dest..
- Mit 1N Salzsäure (Merck, Darmstadt, Deutschland) auf pH 7,6 einstellen.
- Mit Aqua dest. auf 10 l auffüllen.
b) Zitrat-Puffer (pH 6,0):
- Lösung A: 2,101 g Zitronensäure (Merck, Darmstadt, Deutschland) in 100 ml Aqua
dest..
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