Biochemie Praktikum I
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<strong>Praktikum</strong>sskript <strong>Biochemie</strong> für Biologen-Bachelor SS2012<br />
SDS-Elektrophorese<br />
Das Trennmedium<br />
Durch Polymerisation des monomeren Acrylsäureamids und eines quervernetzenden<br />
bifunktionellen Reagenzes, meist Bis-Acrylsäureamid, wird ein dreidimensionales Netzwerk<br />
aufgebaut.<br />
Stryer, Biochemistry, Fifth Edition, 2002<br />
Die Porengröße ist in einem weiten Bereich variabel: Die Polyacrylamidkonzentration kann in<br />
einem Bereich zwischen 2% und 30% liegen. Bei zu geringer Konzentration zerfließen die Gele,<br />
bei zu hoher Konzentration werden sie brüchig. Ein 7.5%iges Gel entspricht einem<br />
Porendurchmesser von 5 nm, ein 30% iges Gel einem Porendurchmesser von 2nm. Um schärfere<br />
Protein-Banden und damit eine bessere Auflösung zu erzielen, wird eine diskontinuierliche<br />
Elektrophorese durchgeführt (SDS-DISC-PAGE). Dazu wird ein diskontinuierliches Gel,<br />
bestehend aus einem kleinporigen Trenngel und einem großporigen Sammelgel, hergestellt.<br />
Die Polymerisationsreaktion verläuft radikalisch und wird durch Zusetzen eines Radikalbildners<br />
(Ammoniumpersulfat, TEMED) gestartet.<br />
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