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einer Küvette mit 1,98 mL Medium B verdünnt (entspricht einer 1:100 Verdünnung), undgemischt. Die Extinktion wird im Photometer bei 600 nm gegen Medium B gemessen.Die Extinktion in der Ausgangssuspension entspricht also dem Hundertfachen desgemessenen Wertes, wenn man von einem linearen Konzentrations- / Extinktions-Verhältnisausgeht.Die Thylakoidsuspension wird nun auf eine Extinktion von 2,0 verdünnt, indem dieentsprechend berechnete Menge der Ausgangssuspension mit Medium B auf ein Volumenvon 5 mL aufgefüllt wird.2. Versuchsansätze:Jetzt werden 8 verschiedene Ansätze in Reagenzgläser pipettiert:Ansatz 1:Ansatz 2:Ansatz 3:erhitzte Probe; durch die Behandlung bei 60°C werden die Proteinkomponentender Elektronentransportkette denaturiert und dadurch inaktiviert.Dunkelprobe; dieses Röhrchen wird dicht mit Aluminiumfolie umwickelt.Ohne Belichtung können keine Elektronen auf DCPiP übertragen werden.LichtprobeAnsatz 4 – 8: Hemmung des Elektronentransports durch steigende Mengen an DCMU.Zunächst wird Ansatz 1 hergestellt (DCPiP noch nicht zugeben!).Während Ansatz 1 10 min bei 60 °C im Wasserbad inkubiert wird, werden die anderenAnsätze vorbereitet.Ansatz 2 wird dicht mit Alufolie umwickelt.Von den fünf DCMU-Stammlösungen A - E (s.o.) werden in die Ansätze 4 – 8 je 200 µLpipettiert.Das DCPiP wird erst unmittelbar vor der Lichtinkubation zu den Ansätzen zugegeben.Ansätze:Ansatz-Nr.1 2 3 4 5 6 7 8erhitzt Dunkel Licht DCMU DCMU DCMU DCMU DCMUThylakoide 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µLH 2 0 300 µL 300 µL 300 µL 100 µL 100 µL 100 µL 100 µL 100 µLMedium B 3,0 mL 3,0 mL 3,0 mL 3,0 mL 3,0 mL 3,0 mL 3.0 mL 3.0 mLDCMU - - -200 µL 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL„A“ „B“ „C“ „D“ „E“DCPiP 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL 200 µLDie Reagenzgläser werden mit Parafilm verschlossen und durch mehrmaliges Invertieren gutgemischt. Dann werden die Proben vor eine Lichtbank gestellt und beobachtet. Wenn dieFärbung von Probe 4 die von Probe 3 erreicht hat, spätestens aber nach 10 min werden dieReagenzgläser noch einmal invertiert.3. Photometrischer Nachweis der DCPiP-Reduktion:Danach werden aus jedem Ansatz 2 mL in ein 2 mL-Eppendorf-Reaktionsgefäß pipettiert undin der Tischzentrifuge 10 min bei 16000 x g zentrifugiert. Der Überstand wird vorsichtig in4
Plastikküvetten pipettiert und die Extinktion [Ε] im Photometer bei 600 nm gegen Medium Bgemessen.4. Auswertung:• Die gemessene Extinktion der Ansätze 3 bis 8 wird auf halblogarithmischem Papierauf der y-Achse gegen die DCMU-Konzentration auf der x-Achse aufgetragen.• Die Extinktionen der Ansätze 1 und 2 werden ebenfalls auf der y-Achse eingezeichnet.• Diskutieren Sie Ihre Ergebnisse.Versuch 2Anatomie des Angiospermen-LaubblattesAllgemeines:Die Blätter der Angiospermen sind seitliche Anhaftungorgane der Sproßachse, welche in ihrerGestalt an ihre jeweilige Funktion angepasst sind. Es gibt Keim-, Laub-, Kelch-, Kron-,Staub- und Fruchtblätter. Laubblätter sind die Orte der Photosynthese und der Transpiration.Blattspreiten können unifazial oder bifazial aufgebaut sein. Bei unifazialen Blättern sind dieOber- und Unterseite aus einer Seite des Blattprimordiums hervorgegangen. Sie sind daran zuerkennen, dass die Leitbündel im Blattquerschnitt als Ring oder auch als Bogen angeordnetsind und deren Phloem nach außen weist. Beispiele für unifaziale Blätter sind die Blätter vonJuncus- oder Iris-Arten. Bei bifazialen Blättern gehen die Blattober- und Unterseite aus denentsprechend orientierten Seiten der Blattprimordien hervor. Sie sind oftmals sowohlmorphologisch als auch anatomisch dorsiventral differenziert, d.h. Blattober- und unterseitesind verschieden: dorsal findet sich Palisadenparenchym, ventral Schwammparenchym. ImRahmen dieses Versuches wird der anatomische Bau eines bifazialen Laubblattes betrachtet.Das Vorgehen wird durch die Kursassistentinnen und –assistenten demonstriert.Kutikulaobere EpidermisPalisadenparenchymLeitbündelInterzellularen„Mesophyll“Schwammparenchym“Atemhöhle”untere EpidermisSpaltöffnungsapparat aus:• Nebenzellen• Spaltöffnung (Stoma)5
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Seite 9 und 10: Versuch 4Induktion der Nitratredukt
Seite 11: Jetzt werden sowohl zu den Enzympro

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