Basismodul Biologie Praxis I Molekulare Pflanzenphysiologie

2. Dünnschichtchromatographie:Auf einer DC-Kieselgelplatte wird mit Bleistift vorsichtig und ohne die Kieselgelschicht zuverletzen 2 cm vom unteren Rand entfernt die Startlinie eingezeichnet.Auf Höhe der Startlinie werden einmal 5 µL und einmal insgesamt 30 µl desFarbstoffgemisches (Benzinphase) aufgetragen, indem mit einer 20 µL Pipette sechsmal 5 µLauf einen Punkt aufgetropft werden (auch hierbei die Kieselgelschicht nicht verletzen). Nachjedem Auftrag läßt man die Probe kurz antrocknen.Wenn nach dem Auftragen das Lösemittel vollständig verdampft ist, wird die Platte aufrechtin eine vorbereitete DC-Kammer (Laufmittel: 100 mL Petroleumbenzin, 12 mL Isopropanol,0,25 mL H 2 O) gestellt.Achtung: die Kammern werden von mehreren Gruppen gemeinsam benutzt;sie müssen gleichzeitig bestückt werden und dürfen während des Laufs nicht geöffnet werden.Die Atmosphäre in der Kammer muss mit Laufmittel gesättigt sein, damit dieses gleichmäßigfließen kann, ohne dass die Platten zwischendurch austrocknen.Wenn die Laufmittelfront kurz unterhalb des oberen Randes der Platte angekommen ist, wirddie Platte aus dem Tank herausgenommen, die Front sofort mit Bleistift markiert und diePlatte trocknen gelassen.Auswertung:Umranden Sie die Lagen der Pigmentbanden und berechnen Sie die R f -Werte.Wanderungstrecke der SubstanzR f (Retention factor) = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯Wanderungsstrecke der LaufmittelfrontErklären Sie das Laufverhalten der von Ihnen identifizierten Pigmente in derDünnschichtchromatographie.Welche Unterschiede sehen Sie zwischen den im Dunkeln bzw. im Licht angezogenenErbsenpflanzen?8