Untersuchungen zu den zytokinartigen Eigenschaften des Hormons ...

2.2 Methoden 2 MATERIAL UND METHODEN
Abbildung 10: Prinzip des EMSA; die freie DNA lagert sich unten ab, die Komplexe aus DNA-
Transkriptionsfaktor-Antikörper als Supershift am weitesten oben; die Komplexe aus Transkriptions-
faktor und DNA befinden sich dazwischen;
Abbildung aus dem Internet entnommen
2.2.7 Dotbloting
Ziel des Dotblotings ist der Nachweis gesuchter Proteine mit Hilfe spezifischer Antikörper.
Das Vorgehen entspricht im Allgemeinen dem beim Western Blot, doch werden beim Dot-
blot die zu untersuchenden Proteingemische nicht elektrophoretisch aufgetrennt, wodurch
die zeitaufwendige Gelelektrophorese und der Umgang mit den giftigen Acrylamidgelen
entfällt.
Die zu untersuchenden Kernextrakte werden beim Dotbloting durch Vakuum direkt auf eine
kleine runde Fläche (Dot) einer Membran aufgebracht. Anschließend wird mit einer Anti-
körperlösung gegen das gesuchte Protein, im zweiten Schritt mit einem gegen den ersten
Antikörper gerichteten enzymverbundenen Antikörper (Alkalische Phosphatase-konjugiert)
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