physio-Journal I 2/2016

FÜR DEN PRAXISALLTAG
verdünnte Erythrozytenlösung
Erythrozyten
Abb. 2: Prinzip der Widerstandsmessung
verdünnte Erythrozytenlösung
Erythrozyten
Abb. 3: Prinzip der Durchflusszytometrie
findet, gestrahlt und hinter der Pipette mittels
Photorezeptoren registriert. Die Pipette
hat einen so geringen Durchmesser, dass
nur vereinzelte Erythrozyten den Lichtstrahl
passieren und ihn dabei streuen. Die Abschwächung
des Strahles im Vorwärtsgang
und die Streuung des Lichtes werden von
den Photorezeptoren gemessen. Genau
wie bei der Widerstandsmessung ergibt
auch hier die Anzahl der einzelnen Streuungsereignisse
in einer bestimmten Zeit die
Zahl der roten Blutkörperchen. Da die Abschwächung
des Strahles im Vorwärtsgang
proportional zur Zellgröße ist, kann auch mit
der Durchflusszytometrie parallel der MCV
ermittelt werden. Im Unterschied zur Photometrie,
bei der sich die Flüssigkeit in einer
stehenden Küvette befindet, fließt bei der
Durchflusszytometrie die Lösung in einem
ganz dünnen Strahl an der Lichtquelle vorbei
(R Abb. 3).
Zusätzlich zur RBC wird von vielen Messgeräten
auch die Erythrozytenverteilungsbreite
angegeben. Sie ist ein Maß für die
Größenverteilung der roten Blutkörperchen
und kann als Prozentzahl und/oder grafisch
in Form einer Glockenkurve angegeben
werden. Der Referenzbereich liegt zwischen
Lichtquelle
Photorezeptoren
Messöffnung
elektrisches Feld
Strahlung
11,5 und 14,5 Prozent. Höhere Werte können
auf verschiedene Anämien hindeuten.
Hämoglobinkonzentration
Die Hämoglobinkonzentration (HB) gibt die
Menge des roten Blutfarbstoffes in Gramm
pro Liter (g/l) an. Referenzwerte bei Männern
sind 135–180 g/l und bei Frauen 120–
160 g/l. Die Erniedrigung des HB wird als Anämie
bezeichnet (wobei die Erythrozytenzahl
gleichzeitig oft, aber nicht zwangsläufig,
vermindert ist). Entsprechend der Erhöhung
der Erythrozyten bei verschiedenen Krankheitszuständen
ist auch der HB-Wert erhöht.
Lichtquelle
eintretende
Lichtstrahlung
Intensität I 0
Abb. 4: Prinzip der Photometrie
Die Bestimmung der Hämoglobinkonzentration
erfolgt mittels Photometrie. Ein ähnliches
Verfahren habt Ihr bereits bei der
Bestimmung des CRP-Levels mit Hilfe der
Immunturbidimetrie und Immunnephelometrie
kennengelernt. Hierbei wird die
trübe Lösung mit Licht bestrahlt, durch die
Trübung wird das Licht gestreut und die
Streuung von Photorezeptoren registriert
(siehe Ausgabe 1/2016). Im Unterschied
dazu wird bei der Photometrie der eingestrahlte
Lichtstrahl mit einem bestimmten
Wellenlängenbereich beim Durchtritt durch
die Lösung, welche sich in einer Küvette
befindet, zu einem Teil absorbiert und nur
der nicht-absorbierte Teil des Lichtes wieder
ausgestrahlt. Der Unterschied in der Intensität
I0 des eingestrahlten Lichtes und der
Intensität I des ausgestrahlten Lichtes wird
als Transmission bezeichnet. Je mehr Licht
von der Lösung absorbiert (aufgenommen)
wird, desto höher ist die Konzentration der
gelösten Substanz, dessen Menge bestimmt
werden soll. Die Photometrie (R Abb. 4) ist
also ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung
von Substanzen, in dem Fall die
Menge an Hämoglobin in den Erythrozyten.
Bevor die Hämoglobinkonzentration gemessen
werden kann, muss das Hämoglobin aus
den Erythrozyten gelöst werden. Dafür wird
die Blutprobe verdünnt und die roten Blutkörperchen
lysiert (aufgelöst). Das dadurch
freigesetzte Hämoglobin reagiert mit einer
zugesetzten Substanz z. B. Kaliumferricyanid
oder Sodium Lauryl Sulfate, welche eine
spezifische, bekannte Absorptionsbande
haben. Entsprechend dieses Absorptionsbereiches
wird der Wellenlängenbereich der
Strahlungsquelle gewählt.
e
Lösung mit lysierten
Erythrozyten
austretende
Lichtstrahlung
Intensität I
Photorezeptoren
physio-Journal 35