Anleitung zum Biochemischen Praktikum für Mediziner Universität zu

Enzymkinetik der sauren Phosphatase 3-15
Tabelle 3-2: Wertetabelle für Lineweaver-Burk-Diagramm
[S] 1/[S] (∆E5-∆E1) vo 1/vo
0,5 2,0
1,0 1,0
1,5 0,67
2,0 0,5
2,5 0,4
3) Einfluss steigender Enzymkonzentration:
Vorbereitend pipettiert man in fünf Reagenzgläser je 5 ml einer 10%igen
Na2CO3-Lösung. Dann werden nach Tabelle 3-3 die Reaktionsansätze in fünf
neue Reagenzgläser pipettiert.
Tabelle 3-3: Volumina der Reagenzien in ml
Reagenzglas-Nr.
1
(Nullwert)
Citratpuffer pH 6,0 [ml] 3 3 3 3 3
H 2O dest [ml] 3 2,5 2 1 0
saure Phosphatase [ml] 0 0,5 1 2 3
mischen und 5 min Inkubation im Wasserbad (37°C)
0,25 mM DPP-Lösung [ml] 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
mischen und 10 min Inkubation im Wasserbad (37°C)
Nach der Inkubationszeit wird jeweils 1 ml aus den fünf Reagenzgläser
entnommen und sofort in die vorbereiteten Reagenzgläser mit 5 ml 10%iger
Na2CO3 pipettiert. Nach Zugabe von 1 ml Folin-Reagenz und gutem
Durchmischen wartet man 15 min und misst die Extinktionen bei 623 nm. Dies
entspricht direkt dem Hydrolysegrad in Prozent oder den Molen gebildeten
Phenols. Tragen Sie bitte auf Millimeterpapier die Extinktionen gegen die
Enzymmengen auf.
2
3
4
5
Enzyme 3-16
III. Best. der Serum-Acetylcholinesterase-Aktivität
Synaptische Vesikel
Axon
Synaptischer
Spalt (50 nm)
Präsynaptische
Membran
Richtung des Nervenimpulses
Abbildung 3-6: Schema einer Synapse
Postsynaptische
Membran
Vorbemerkungen:
Breitet sich die Erregung in Form eines Aktionspotenzials über ein Axon - kontinuierlich
bei myelinfreien und saltatorisch über myelinisierte Neuriten - bis hin
zu den terminalen Synapsen aus, so wird dort eine chemische Transmitter-
Substanz, z. B. Acetylcholin, aus synaptischen Vesikeln in den Synapsenspalt
freigesetzt.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
polarisierte
synaptische Membran,
∆ E ca. -75 mV
hohe [K ],
niedrige [Na ]
+
+
Acetylcholin
K +
Na +
depolarisierte postsynaptische
Membran, ∆ E ca. 0 mV
Abbildung 3-7: Depolarisation der postsynaptischen Membran durch Acetylcholin