Anleitung zum Biochemischen Praktikum für Mediziner Universität zu

GC 4-9
Abbildung 4-2: Schematische Darstellung eines Gaschromatographen
Die Gaschromatographie ist eine Verteilungschromatographie. Verdampfbare
Substanzen verteilen sich zwischen einer flüssigen und einer gasförmigen Phase.
Als flüssige stationäre Phase werden für Fettsäuremethylester Polyester zwischen
Dicarbonsäuren (z.B. Bernsteinsäure) und Glykolen oder Siliconöle und höhere
Kohlenwasserstoffe verwendet. Die Trennphase wird auf ein inertes, feinkörniges
Trägermaterial (z. B. Kieselgur 0,1-0,2 mm Ø) aufgetragen. Trägermaterial mit
aufgezogener Trennphase ist das Füllmaterial der Gaschromatographiesäule. Sie
wird von der gasförmigen Phase, dem Trägergas, durchströmt, wodurch die
Substanzen der zu analysierenden Probe getrennt in den Detektor transportiert
werden. Dort werden elektrische Signale erzeugt, die über einen Verstärker vom
Schreiber aufgezeichnet werden.
Die GC ist in der Lage, die Trennung komplizierter Gemische in µg-Mengen exakt
qualitativ und quantitativ durchzuführen. Jede Verbindung hat eine
charakteristische Retentionszeit (Verweilzeit in der Säule). Der Vergleich mit
Testsubstanzen erlaubt die Identifizierung der Komponenten eines Gemisches, in
unserem Fall der einzelnen Fettsäuremethylester. Das Gaschromatogramm wird
quantitativ nach der Dreiecksmethode ausgewertet:
F = h•b
4-10 Lipide
Den Flächeninhalt berechnet man durch Multiplikation der Peakhöhe (h) und der
Peakbreite (b) auf halber Höhe.
Abbildung 4-3: Gaschromatogramm eines Fettsäuremethylestergemisches