6. LC/MS Diskussionstreffen, 29. Nov. 2005, Wuppertal ABSTRACTS

Abstracts: 6. LC/MS Diskussionstreffen, 29. Nov. 2005, Wuppertal 8
Quantifizierung von 3-Nitro-4-hydroxyphenylessigsäure in Humanurin
mittels LC-NP-ESI-MS/MS
M. Urban, H.W. Hagedorn, ABF GmbH, München
„Reactiv nitrogen species“ (RNS), wie z.B. Peroxynitrit, sind in der Lage, freies oder
proteingebundenes Tyrosin zu nitrieren. Das entstehende 3-Nitrotyrosin wird metabolisiert
und als 3-Nitro-4-hydroxyphenylessigsäure (NHPA) im Urin ausgeschieden. Diese
Reaktionsprodukte und ihre Metaboliten stellen somit mögliche Biomarker für die in vivo-
Bildung von RNS dar. So kommt NHPA in Humanurin in Konzentrationen bis 7,9 µg/24 h vor.
Allerdings stellt bei einer Vielzahl der bekannten Methoden die artifizielle Bildung der
Analyten während der Probenvorbereitung ein Haupthindernis für eine sichere
Quantifizierung dar. Vorgestellt wird eine neuentwickelte Methode zur artefaktfreien
Bestimmung von NHPA in Humanurin mit LC-MS/MS, die auf einer flüssig/flüssig-Extraktion
und anschließender HPLC-Fraktionierung beruht. Für die LC-MS/MS-Messung erlaubt die
Kombination von Luna Cyanopropyl-Säulen und Normalphasen-HPLC eine spezifische
Abtrennung des Analyten von störenden Matrixkomponenten. Das verwendete
umweltfreundliche, perfluorierte Laufmittel Ethoxynonafluorobutan (ENFB) führt zu einer im
Vergleich zu herkömmlichen Reversed-phase-Trennverfahren für diesen Analyten deutlich
verbesserten Chromatographie. Die spezifische Detektion ist durch ESI(-)-MS/MS-Messung
von je 2 MRM für Analyt und d5-markierten internen Standard gewährleistet. ENFB stellt
somit eine Alternative zu klassischen Normalphasenlaufmitteln wie Hexan dar. Die
Anwendung auf Realproben und erste Methodenkenndaten werden entsprechenden
Ergebnissen unter Reversed-phase-Bedingungen gegenübergestellt.