Efectos de alicina y enalapril en ratas con hipertensión ...

ALICINA Y ENALAPRIL CON HIPERTENSIÓN, HIPERLIPIDEMIA E HIPERINSULINEMIA 411
Materiales y métodos
La alicina se produjo como sustancia pura por la reacción
de la alinasa de ajo inmovilizada con una preparación de
aliína sintética [(+)S-2-propenil-L-cisteína-S-óxido], idéntica
en propiedades químicas a la aliína natural, según
Mirelman et al. 18 . La pureza y concentración de la alicina
obtenida se determinó por cromatografía líquida de alta
resolución (CLAR), como se había publicado anteriormente
17,19 . En los experimentos descritos en este estudio, la concentración
de alicina usada fue de 1,8-2,0 mg/ml en 50
mmol/l de tampón fosfato a pH 6,5. La solución pura de
alicina, mantenida a 4ºC, fue relativamente estable durante
las semanas del experimento y la concentración se determinó
sistemáticamente.
Ratas macho de la raza Sprague-Dawley (Anilab, Tal
hasahachar, Israel), que pesaban inicialmente 240-250 g,
fueron alimentadas con pienso estándar para ratas (Koffolk,
Tel Aviv) y mantenidas en un ciclo de 14 horas de
luz/10 horas de oscuridad. Tres grupos compuestos de 30
ratas se alimentaron con una dieta enriquecida en fructosa
(Harlan, Teklad, Madison, WI) durante cinco semanas, de
la forma siguiente: grupo 1, 10 animales se alimentaron
sólo con fructosa (grupo control); grupo 2, 10 animales
recibieron 8 mg/kg/día de alicina por intubación oral
durante las dos últimas semanas de la dieta con fructosa;
grupo 3, 10 animales recibieron 20 mg/kg/día de enalapril
en el agua de beber durante las dos últimas semanas de la
dieta con fructosa.
La dieta con fructosa se compuso de un 21% de proteínas,
5% de grasa, 60% de carbohidratos (fructosa), 0,49%
de sodio y 0,49% de potasio. Esta composición fue similar
a la de la dieta del pienso, excepto en que la fructosa sustituyó
al almidón como componente carbohidrato.
La presión arterial sistólica se midió una vez a la semana
y los triglicéridos y la insulina tres veces: inicialmente
antes del alimento con fructosa (x 0
), después de tres semanas
de alimentación con fructosa (x 1
) y después de dos
semanas más (x 2
).
La presión arterial sistólica se midió con las ratas conscientes
por el método indirecto de la anilla en la cola, usando
un esfigmomanómetro y un transductor de pulso neumático
(Narco Biosystems, Houston, Tejas). Se registró
como PAS la media de cinco lecturas consecutivas.
Se recogieron muestras de sangre por punción del seno
retrorbital, bajo anestesia, después de 5 horas de ayuno al
comienzo del experimento y a las 3 y 5 semanas. Las
muestras se centrifugaron, se separaron en alícuotas, se
congelaron y se determinó en ellas la concentración de
insulina (Rat insulin 125 I Ria kit, Incstar, Stillwater, MN)
y de triglicéridos (Equipo GPO-PAP de triglicéridos, Boehringer
Mannheim, Alemania).
Los datos se analizaron usando a cada rata como su propio
control. Se calcularon dos diferencias: 1) ∆1 que es la
diferencia entre tres semanas de alimentación con fructosa
(x 1
) y los valores iniciales (x 0
); y 2) ∆2 que es la diferencia
entre los niveles después de cinco semanas (x 2
) y x 1
.
Las medias de los grupos iniciales (x 0
) se compararon por
análisis de varianza (ANOVA). Se investigaron los cumplimientos
del modelo (distribución normal de residuos,
igualdad de varianza) y, cuando se violaron, se aplicó el
análisis de varianza por rangos de Kruskal-Wallis de una
vía. Se computadorizaron la estadística descriptiva, las
medias y los errores estándar de ∆1 y ∆2 (ajustados para x 0
y x 1
, respectivamente). Debido a las comparaciones múltiples,
sólo los valores de p