METODOS AUXILIARES DIAGNOSTICOS EN DERMATOLOGIA

METODOS AUXILIARES
DIAGNOSTICOS EN
DERMATOLOGIA
Carrera de Especialista en Dermatología
2008

Métodos auxiliares
Consultorio
Lupa
Fotografía
Diascopía
Dermatoscopía
Capilaroscopía
Luz de Wood
Pruebas del parche
Tzanck
Acarotest
Búsqueda demodex
BIOPSIA
Laboratorio
Rutina y específicos
Perfil hormonal
Inmunológico
Serología
Inmunohistoquímica
Inmunofluorescencia
ELISA
PCR
Micromatrices de ADN
Aparatología
Imagenología
Ecografía
TAC
RMN
PET
Diag Fotodinámico
OCT
M Confocal
Teledermatología

Métodos auxiliares
Consultorio
Lupa
Fotografía
Diascopía
Dermatoscopía
Capilaroscopía
Luz de Wood
Pruebas del parche
Tzanck
Acarotest
Búsqueda demodex
BIOPSIA

LAMPARA DE WOOD
O
LUZ DE WOOD

Lámpara de Wood
Lámpara de Wood produce una luz ultravioleta de longitud de onda de 365 nm (340-
450), a través de un filtro de Wood opaco (óxido de fósforo y níquel).
Cuando las ondas emitidas por la lámpara impactan con la piel, se produce una
fluorescencia visible.
Prof Robert Williams Wood (1868 - 1955)

Lámpara o luz de Wood
• Amarillo oro: Malassezia furfur.
• Amarillo verdoso: Pseudomona .
• Rojo-anaranjado: Propionibacterium acnes.
• Rojo brillante: tumores como el carcinoma espinocelular y en
úlceras no malignas de miembros inferiores.
• Rojo coral: Corynebacterium minutissimum.
• Rosada o anaranjada-rojiza: se aplica la luz a sangre, materia
fecal, orina, fluidos, dientes para visualizar las porfirinas en la
porfiria cutánea tarda, eritropoyética y protoporfiria. Si se
adiciona ácido clorhídrico diluido a la orina, se intensifica la
coloración.
• Verde brillante: M. audouini o M. canis. No debe confundirse
con una coloración azul tenue que puede mostrar la seborrea o
el ácido salicílico.
• Verde pálido: T. schoenleinii.

Lámpara o luz de Wood
• Áreas blanquecinas evidentes: zonas hipomelanóticas o amelanóticas
• Pigmentación dérmica tenue: marrón o negro.
• Pigmentación epidérmica prominente: más aparente bajo la luz de
Wood.
• Drogas: tetraciclinas, fotosensibilizantes, sensibilizantes de contacto
en piel, en cosméticos o en productos industriales por la presencia de
furocumarinas, eosina, alquitrán, salicilanilidas halogenadas, etc.
• Tiempo de circulación sanguínea con fluoresceína endovenosa,
control de agentes terapéuticos tópicos incorporando elementos
fluorescentes, o investigar penetración cutánea y turn-over
epidérmico por este medio.
Todos estos hallazgos diagnósticos se interpretan en función n de
la diferente penetración n de la luz según n las longitudes de onda,
los fenómenos de fluorescencia y la melanina que actúa a como
absorbente

TESTIFICACIONES
EPICUTANEAS
PRUEBA DEL PARCHE
FOTOPATCH-TEST
TEST

PRUEBA DEL PARCHE
• Alta sospecha DC
• Interpretación
• Relevancia
• Educación n al paciente

Prueba del parche o Patch test
Tests epicutáneos
• Consiste en reproducir intencionalmente una respuesta de
hipersensibilidad retardada tipo IV (eczema alérgico de contacto).
• Se coloca una batería estándar de 23 o más alergenos, en
concentración no irritante, se cubre la zona y se efectúa una lectura precoz
a las 48 hs y tardía a las 96 horas. Puede requerir lectura a la semana.
• Lectura: dudosa (+/-), débil (+), positiva (++), positiva fuerte (+++),
irritativa (pústulas, ampollas, costras)
• El paciente debe haber suspendido los antihistamínicos y corticoides
sistémicos o tópicos, al menos una semana antes de realizar la prueba.

• También puede prepararse una batería especial, con los
productos de uso habitual del paciente.
• Test abierto o de provocación iterativo: se usa con aquellos
productos que puedan ser irritantes bajo oclusión (perfumes,
spray, cremas para afeitado, etc.).
- retroauricular o en la cara anterior del antebrazo.
- 2 veces por día en la misma zona.

Thin-layer
Rapid
Use
Epicutaneous test
T.R.U.E. TEST

Photopatch test
Testigo
Sin UVA
1 día d a oclusión
Con UVA
2 días d
oclusión
Con UVA
UVA= 5J/cm2
Lectura a los 2 , 4 y 7 díasd
Contact Dermatitis 2006; 54: 75-78

Otros procedimientos (inmunólogos-alergistas)
• Escarificación: ing.: scratch-tests. se escarifica la epidermis con una lanceta sin provocar
hemorragia y se deposita el antígeno sospechoso, el cual debe ser hidrosoluble.
• Scratch chamber-test: se utiliza para testificar mariscos, frutas o vegetales. El
procedimiento es el mismo que el scratch test común pero el contactante se cubre con una
cámara de aluminio, Finn-chamber durante 15 minutos.
• Prueba de puntura: ing.: prick test. Es el método de elección cuando se sospechan
reacciones de mecanismo alérgico. Se aplica el alergeno en solución, en forma de gotas, sobre la
piel del antebrazo o brazo o región superior de la espalda. Posteriormente la piel es perforada
con una lanceta especial, sin provocar hemorragia.
RAST: ing.: Radio AllergoSorbent Test. Permite detectar Ig E específica. Es de utilidad en el
Estudio de niños pequeños y para alergenos riesgosos para ser estudiados por prick-test, como es el
caso de las drogas.(Penicilina V y G, Ampicilina, Amoxicilina, Cefalosporinas) - Meganalizar

RASPADO METÓDICO DE BROCQ
TEST DE TZANCK
ACAROTEST
BÚSQUEDA DE DEMODEX

Métodos auxiliares
Laboratorio
Rutina y específicos
Perfil hormonal
Inmunológico
Inmunohistoquímica
Serología
Inmunofluorescencia
ELISA
PCR
Micromatrices de ADN

Inmunohistoquímica
• Identifica antígenos específicos con el uso de
anticuerpos adecuados, unidos a un complejo
anticuerpo-enzima incubado con un cromógeno, que
permiten una reacción visible al microscopio.
• En infiltrados linfocíticos ayuda a reconocer la
presencia de clonalidad la cual es frecuentemente un
signo de malignidad.
• Marcadores tumorales específicos

Marcador de estirpe
• Epitelial
• Mesenquimal
• Vascular
• Diferenciación neuroectodérmica
• Hematopoyético
• Linfoide

PRUEBAS SEROLÓGICAS

INMUNOFLUORESCENCIA y ELISA
El Ag (sustrato) es colocado en un vidrio (IF) o dispositivo
plástico (ELISA) y se incuba con el (suero del paciente) Ac.
La unión del Ag al Ac se detecta mediante la amplificación a
través de numerosos pasos que permite detectar una
fluorescencia visible (IF) o una tinción coloreada (ELISA) que
se valora por medio de un fotómetro.
Ambos métodos son cuantificables por la dilución del suero.
Dentro de la inmunofluorescencia, pueden utilizarse dos
métodos, la inmunofluorescencia directa y la indirecta.

Inmunofluorescencia
Marcador: isotiocianato de fluoresceína
Ac: anti- Ig G, anti- Ig A, anti- Ig M, anti- C3, anti-Fibrinógeno
Paciente con Pénfigo vulgar
Ag: desmogleína 3 en los desmosomas de epidermis
Ac: Ig G

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
(ELISA)
• Ventajas: barato, fácil, menos subjetivo y más sensible y sirve para
screening.
• Desventaja: es menos específico y debe ser interpretado con cuidado.

BIOLOGÍA A MOLECULAR

BIOLOGIA MOLECULAR
Pronóstico - Orientación terapéutica
biopsia
Anatomía
patológica
Otros procedimientos
formol fresco glutaraldehído
H-E tinciones Hibridación
in situ
Cultivo
tisular
Criopreservar
la muestra
ME
ADN
ARN
proteínas
Mutación
PROTO-ONCOGENES
GENES SUPRESORES
DE TUMOR
¿¿GEN??

REACCION EN CADENA
DE LA POLIMERASA
Desnaturalización: por calor se abren
las cadenas de DNA.
Apareamiento: se unen los iniciadores
con sus secuencias complementarias
Extensión: una DNA polimerasa
permite la elongación de los iniciadores
en la región blanco, en ciclos de más
30 veces hasta obtener la cantidad de
DNA deseada.

Reacción en cadena de la polimerasa
• Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR): analiza porciones
de proteínas mediante la identificación de la secuencia de sus
bases.
• Permite la ampliación selectiva y exponencial de un fragmento
seleccionado de DNA.
• Se desarrolla en tres fases: desnaturalización-apareamientoextensión.
Desnaturalización: por calor se abren las cadenas de DNA.
Apareamiento: se unen los iniciadores con sus secuencias
complementarias
Extensión: una DNA polimerasa permite la elongación de los
iniciadores en la región blanco, en ciclos de más de 30 veces
hasta obtener la cantidad de DNA deseada.
• Es muy sensible pero a veces puede llevar a error por
contaminación de la muestra.

PCR
Electroforesis en gel
Southern Blot
Dot Blot

Micromatrices de ADN en dermatología
Permite el estudio de la función de miles de genes al mismo tiempo
llamado genomia funcional
• Las aplicaciones más importantes son la expresión de los genes del
cáncer de piel, especialmente el melanoma, basaliomas y linfomas de
células T.
• Otras aplicaciones potenciales incluyen el perfil de la expresión de genes
de las enfermedades inflamatorias de la piel: dermatitis atópica,
psoriasis, alopecia areata, esclerodermia sistémica y cicatrices, el
análisis mutacional de las genodermatosis, los alcances en fotobiología y
fotocarcinogénesis, además del desarrollo de drogas y predicción
quimosensitiva: retinoides en leucemias y cepas de Mycobacterium
resistentes a rifampicina.
• La aplicación de las micromatrices de ADN con los mejores beneficios
clínicos será la clasificación de lesiones melanocíticas dudosas.
• El perfil de la expresión génica basada en el genoma para identificar a
las personas con alto riesgo de desarrollar melanoma.

Hibridización in situ: es la unión de fragmentos marcados de ADN o ARN de una hebra con
secuencias complementarias de ellas llamadas sondas en condiciones apropiadas para formar
uniones estables. Hay técnicas isotópicas (marcadas con elementos radioactivos) y técnicas no
isotópicas o colorimétricas (usan biotina o digoxigenina).
Se usa para detectar bajo número de copias de virus como agentes infecciosos o carcinógenos
como es el caso de HPV.

Métodos auxiliares
Aparatología
Imagenología
Ecografía
TAC
RMN
PET
Diag Fotodinámico
OCT
M Confocal
Teledermatología

Diagnóstico
por imágenes

• Ecografía:
a:
• ultrasonido como fuente de energía
• transductor y un receptor
• onda de presión mecánica atenuándose por reflexión, refracción, dispersión y
absorción a medida que se aleja de la fuente emisora
• el ultrasonido reflejado que vuelve a la fuente emisora y que se llama eco, forma
las imágenes
• inocuo, bien tolerado, asequible, de rápida ejecución y no tiene contraindicaciones
• estudio de partes blandas para descartar tumores, desgarros, hemorragias o
cuerpos extraños, adenopatías, quistes, entre otros. Da buena información acerca
del tejido subcutáneo y cambios de espesor de la epidermis y dermis
• Ecografía doppler-color:
• permite visualizar el desplazamiento de los glóbulos rojos por las venas (azul) y
arterias (rojo)
• se usa para el estudio de la forma y función de estructuras vasculares del
sistema venoso y sistema arterial
• diferencia linfadenopatías benignas de metástasis, analizando patrones de
perfusión de los ganglios

• Resonancia magnética nuclear (RMN):
• Consta de un resonador con un imán en forma de túnel que alinea los
protones de los tejidos expuestos a un campo magnético, emiten
energía que es recogida por bobinas que codifican digitalmente la señal
y la envían a un computador que forma imágenes seccionales y las
imprime en placas radiográficas
• Se usa para visualizar sistema musculoesquelético, tumores benignos
o malignos de partes blandas o hueso
• Sus limitaciones son el costo, tiempo y su sensibilidad a los movimientos
del enfermo
• Esta contraindicada cuando el paciente tiene dispositivos con
activación eléctrica o mecánica como marcapasos, placas metálicas,
embarazo, personas que tengan tatuajes o maquillajes que contengan
partículas de hierro y personas con claustrofobia u obesidad por el
tamaño limitado del cilindro
• Un procedimiento especialmente útil en el estudio de las lesiones
vasculares es la angioresonancia, permitiendo la visualización
de los vasos cerebrales, del cuello, arco aórtico, arterias renales, hígado
y extremidades

• Tomografía a de emisión n de
positrones (PET)
• permite la visualización de la bioquímica de los tejidos, cuantificando
cambios metabólicos en los mismos
• usa trazadores radioactivos de esos procesos para detectar
modificaciones antes de que se produzcan cambios estructurales
macroscópicos
• las drogas o compuestos biológicamente activos, marcados con
radioisótopos emisores de positrones más utilizados son: carbono-11,
flúor-18, nitrógeno-13 y oxígeno-15, siendo la más utilizada en los
estudios clínicos la (18F) fluorodesoxiglucosa (FDG)
• la información emitida se transforma en imágenes bioquímicas, que
permiten evaluar in vivo tasas del metabolismo de la glucosa, transporte
de aminoácidos, síntesis proteica, flujo sanguíneo y consumo de oxígeno
• los tejidos tumorales aumentan la glicólisis en las células neoplásicas,
en comparación con los tejidos normales
• su principal indicación en oncología es en: tumores de cabeza y cuello,
esófago, abdomen y pelvis, colorrectales primarios y recurrentes,
páncreas, linfomas, melanomas, tiroides, mama, tumores cerebrales y
algunos de pulmón.

• Diagnóstico
fotodinámico
mico:
• ácido aminolevulínico al 20%, metil aminolevulinato
o metil aminooxopenoato, oclusivo 3hs
• fuente de luz azul
• fluorescencia de protoporfirinas inducidas
• para detectar y delinear fehacientemente las áreas
neoplásicas cutáneas
• patologías no tumorales: psoriasis, enfermedades
inducidas por virus, acné, etc.
• ventajas de esta aplicación tópica, es su excelente
tolerancia con mínimos efectos secundarios

Acido aminolevulínico
metil aminolevulinato
o metil aminooxopenoato
DIAGNÓSTICO
FOTODINÁMICO
Fluorescencia
de porfirinas inducidas

Patrón reticular
Microscopía a con escaneo
de láser l
confocal
Dermoscopía
In vivo
No invasivo
Microscopía confocal
Histología
British Journal of Dermatology 2008 158, 1000-1007
1007

Patrón globular
Patrón homogéneo
Dermoscopía
Microscopía
confocal
Histología

• Microscopía con escaneo de láser l
confocal
(CSLM)
• es un método no invasivo que provee imágenes instantáneas de alta
resolución de detalles nucleares, celulares, arquitecturales y dinámicos
de la piel y sus anexos in vivo
• se ha utilizado en numerosas dermatosis: psoriasis, eczemas: permite
diferenciar las dermatitis alérgicas de las irritativas por contacto, lesiones
pigmentarias benignas y malignas, rosácea, enfermedad de Darier,
foliculitis, dermatofitosis, permite guiar las microcirugías en el cáncer de
piel para ver márgenes quirúrgicos, en queratosis actínicas, carcinoma
baso y espinocelulares, entre otros.
• lesiones pigmentadas permitiendo descubrir diferencias aparentes en las
características de los nevus melanocíticos de la unión, compuestos e
intradérmicos, nevus displásicos y melanomas
• brinda características únicas como son las imágenes in vivo, que no
aparecen en la histopatología de rutina, permitiéndonos por su nula
agresividad, el seguimiento evolutivo y de respuesta terapéutica en
corte longitudinal de una determinada enfermedad

OCT
In vivo
No invasivo
S
L
hemangioma
hemolinfangioma
Skin Research and Technology 2008; 14: 89-92
92

• Tomografía a de coherencia óptica (OCT):
• este método surge por la gran preocupación en utilizar métodos
no invasivos de estudio para la piel
• sirve para visualizar los cambios morfológicos estructurales y
funcionales de las capas superficiales de la piel humana
• permite abordar la capa córnea, epidermis, dermis y anexos,
permitiendo el estudio de enfermedades ampollares (localización
del clivaje), quemaduras, procesos esclerodérmicos, fotodaño,
tumores cutáneos (estadíos precoces de melanoma, lesiones
precancerosas), así como investigaciones farmacológicas in vivo
(atrofia por corticoides, curación de heridas)
• tiene menos resolución que el microscopio confocal.

TELEDERMATOLOGIA
consiste en poder realizar una consulta a través de imágenes digitales sobre
un determinado paciente o caso clínico
puede llevarse a cabo en forma de videoconferencia en tiempo real y con el
paciente presente o en diferido con una frecuencia determinada
Universidad
de Miami
Instituto
Zaldivar
Universidad de Cuyo

Bibliografía sugerida:
• A. Scope, A.A. Marghoob et al. Dermoscopic patterns of naevi in fifth grade
children of the Framingham school system. Br J Dermatol 2008 158, 1041-1049.
• C Salvini, D Massi et al. Application of optical coherence tomography in noninvasive
characterization of skin vascular lesions. Skin Research and Technology
2008; 14: 89-92.
• V. Ahlgrimm-Siess, C. Massone et al. In vivo confocal scanning laser microscopy of
common naevi with globular, homogeneous and reticular pattern in dermoscopy. Br
J Dermatol 2008 158, 1000-1007.
• Prahl P. Principios básicos de la inmunohistoquímica. Dermatología Argentina
2003; vol IX Nº 4: 207-213.
• Sellheyer K., Belbin T.J. AND microarrays: from structural genomics to functional
genomics. The application of gene chips in dermatology and dermatopathology. J
Am Acad Dermatol 2004; 51: 681-692.
• Bassotti de Ahuad A. Métodos auxiliares de diagnóstico. En Driban N, Parra de
Cantú V, Bassotti de Ahuad A. Dermatología semiología sistematizada. EDIUNC.
pag.369-445. Mendoza. 2007.
• Torres Lozada V, Camacho F, Mihm M y col: Dermatología práctica Ibero-
Latinoamericana. Vicente Torres lozada-Nieto Editores, SA de CV. México. 2005.
• J Vogel, C Yee, T Darling. Biología molecular. En J Bolognia, J Jorizzo, R Rapini.
Dermatología. Elsevier. Pag. 49. España. 2004.
• R Elenitsas, CH. Nousari, JT. Seykora. Laboratory Methods. 2000-2007 Ovid
Technologies, Inc.